本发明公开了一种海藻粘多糖的纯化方法。本发明的技术方案是将制得的粘多糖先用活性炭吸附除去色素等物质，然后用超滤除去分子量较大的蛋白质，获得合理的多糖，再用凝胶排阻色谱分离柱将混合物通过多孔的凝胶床而达到更好的分离效果。此方法设备简单，重复性好，得到的海藻粘多糖回收率很高。
背景技术：
海藻生物活性物质大致可分为两种,一种是分子量较小,吸收后能直接或间接影响体内代谢物质,主要包括卤族化合物、萜类化合物、溴酚类化合物、对苯二酚、海藻单宁、昆布氨酸等;另一种是难以被消化吸收的细胞间粘性多糖,主要包括褐藻中的藻酸、褐藻糖胶、硫酸多糖、红藻中的琼胶、卡拉胶等。多糖是所有生命有机体的重要组分,并在控制细胞分裂、调节细胞生长以及维持生命有机体正常代谢等方面具有重要作用。海藻多糖主要来自海带、鹿尾菜(羊栖菜)、巨藻、泡叶藻、墨角藻等海藻。海藻多糖主要包括褐藻胶、褐藻糖胶和褐藻淀粉。从海带中分离得到的褐藻胶、褐藻糖胶和褐藻淀粉粗品均为白色略带黄色的粉末。经纯化得到的褐藻酸钠为白色丝状物；褐藻糖胶为乳白色粉末；二者均溶于水、不溶于乙醇、丙酮、氯仿等有机溶剂。多糖的普遍功效有保湿润肤及润肠减肥。除此之外，海藻多糖还具有增强免疫力、抗病毒、抗菌消炎、抗氧化及抗肿瘤等功效。
近年来采用其他方法纯化海藻粘多糖，虽然可以降低成本，但是产品纯度较低，而采用超滤-凝胶色谱分离法可改善产品纯度，充分发挥膜分离的优势，小分子糖类也可充分通过，提高产品的纯度，是一种合理有效的纯化海藻粘多糖的方法。
技术实现要素：
本发明的目的是生产纯度较高的海藻粘多糖。
本发明的技术方案是：将制得的粘多糖先用活性炭吸附除去色素等物质，然后用超滤除去分子量较大的蛋白质，获得合理的粘多糖，再用凝胶排阻色谱分离柱将混合物通过多孔的凝胶床而达到更好的分离效果。
包括如下步骤：
（1）活性炭吸附脱色过程：将一定量的活性炭加入提取液，在35℃～70℃下搅拌1.0h～3.0h后过滤离心，去除活性炭；
（2）超滤：料液用5kda～2kda的超滤膜于35℃～70℃，0.05mpa～0.25mpa对料液超滤20min～60min；
（3）凝胶排阻色谱分离
1)凝胶层析柱的制备
称取10gsephadex(葡聚糖)lh-20用250ml洗脱液在沸水浴中加热搅拌3h，加热过程中需不断补充洗脱液，静置过夜，充分溶涨，得到凝胶悬浮液。先在层析柱内加入约1／3柱高的洗脱液，关闭出口，在搅拌下将凝胶悬浮液lh-20缓慢注入柱子中，待自然沉降1-2cm后，打开出口，继续加入凝胶悬浮液加到所需高度为止，并在胶面上加一片有机膜以保护胶面，最终柱体积为2*30cm；
2)上柱：将一定体积的海藻粘多糖提取液以3.0ml／min速度通过交联葡萄糖凝胶柱sephadexlh-20，用二次水洗脱，合并流出液；
（4）粘多糖的真空冷冻干燥：在真空度10～20mbar，制冷温度-35～-60℃下，分别对凝胶层析柱分离得到的多糖，进行真空冷冻约20～30h，便可得到海藻粘多糖。
本发明的优点在于此方法设备简单，重复性好，得到的海藻粘多糖回收率很高，采用超滤-凝胶色谱分离法可改善产品纯度，充分发挥膜分离的优势，小分子糖类也可充分通过，提高产品的纯度，是一种合理有效的纯化海藻粘多糖的方法。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。
实施例1
将制得的粘多糖先用活性炭吸附除去色素等物质，然后用超滤除去分子量较大的蛋白质，获得合理的粘多糖，再用凝胶排阻色谱分离柱将混合物通过多孔的凝胶床而达到更好的分离效果。此方法设备简单，重复性好，得到的海藻粘多糖回收率很高。
包括如下步骤：
（1）活性炭吸附脱色过程：将一定量的活性炭加入提取液，在40℃下搅拌1.5h后过滤离心，去除活性炭；
（2）超滤：料液用4kda的超滤膜于40℃，0.lmpa对料液超滤30min；
（3）凝胶排阻色谱分离
1)凝胶层析柱的制备
称取10gsephadex(葡聚糖)lh-20用250ml洗脱液在沸水浴中加热搅拌3h，加热过程中需不断补充洗脱液，静置过夜，充分溶涨，得到凝胶悬浮液。先在层析柱内加入约1／3柱高的洗脱液，关闭出口，在搅拌下将凝胶悬浮液lh-20缓慢注入柱子中，待自然沉降1-2cm后，打开出口，继续加入凝胶悬浮液加到所需高度为止，并在胶面上加一片有机膜以保护胶面，最终柱体积为2*30cm；
2)上柱：将一定体积的多糖提取液以3.0ml／min速度通过交联葡萄糖凝胶柱sephadexlh-20，用二次水洗脱，合并流出液；
（4）粘多糖的真空冷冻干燥：在真空度10mbar，制冷温度-40℃下，分别对凝胶层析柱分离得到的多糖进行真空冷冻约20h，便可得到海藻粘多糖。
实施例2
将制得的粘多糖先用活性炭吸附除去色素等物质，然后用超滤除去分子量较大的蛋白质，获得合理的粘多糖，再用凝胶排阻色谱分离柱将混合物通过多孔的凝胶床而达到更好的分离效果。此方法设备简单，重复性好，得到的海藻粘多糖回收率很高。
包括如下步骤：
（5）活性炭吸附脱色过程：将一定量的活性炭加入提取液，在45℃下搅拌2h后过滤离心，去除活性炭；
（6）超滤：料液用3.5kda的超滤膜于45℃，0.l5mpa对料液超滤40min；
（7）凝胶排阻色谱分离
3)凝胶层析柱的制备
称取10gsephadex(葡聚糖)lh-20用250ml洗脱液在沸水浴中加热搅拌3h，加热过程中需不断补充洗脱液，静置过夜，充分溶涨，得到凝胶悬浮液。先在层析柱内加入约1／3柱高的洗脱液，关闭出口，在搅拌下将凝胶悬浮液lh-20缓慢注入柱子中，待自然沉降1-2cm后，打开出口，继续加入凝胶悬浮液加到所需高度为止，并在胶面上加一片有机膜以保护胶面，最终柱体积为2*30cm；
4)上柱：将一定体积的多糖提取液以3.0ml／min速度通过交联葡萄糖凝胶柱sephadexlh-20，用二次水洗脱，合并流出液；
（8）粘多糖的真空冷冻干燥：在真空度15mbar，制冷温度-45℃下，分别对凝胶层析柱分离得到的多糖进行真空冷冻约25h，便可得到海藻粘多糖。
实施例3
（1）活性炭吸附脱色过程：将一定量的活性炭加入提取液，在60℃下搅拌2.5h后过滤离心，去除活性炭；
（2）超滤：料液用2kda的超滤膜于60℃，0.2mpa对料液超滤50min；
（3）凝胶排阻色谱分离
1)凝胶层析柱的制备
称取10gsephadex(葡聚糖)lh-20用250ml洗脱液在沸水浴中加热搅拌3h，加热过程中需不断补充洗脱液，静置过夜，充分溶涨，得到凝胶悬浮液。先在层析柱内加入约1／3柱高的洗脱液，关闭出口，在搅拌下将凝胶悬浮液lh-20缓慢注入柱子中，待自然沉降1-2cm后，打开出口，继续加入凝胶悬浮液加到所需高度为止，并在胶面上加一片有机膜以保护胶面，最终柱体积为2*30cm；
2)上柱：将一定体积的多糖提取液以3.0ml／min速度通过交联葡萄糖凝胶柱sephadexlh-20，用二次水洗脱，合并流出液；
（4）粘多糖的真空冷冻干燥：在真空度20mbar，制冷温度-50℃下，分别对凝胶层析柱分离得到的多糖进行真空冷冻约30h，便可得到海藻粘多糖。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其它形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。