用于治疗眼咽肌营养不良症(OPMD)的试剂及其用途的制作方法

本申请要求2016年12月14日提交的美国临时第62/434,312号的优先权，其全部内容通过引用整体并入本文。

本公开涉及用于治疗眼咽肌营养不良症(opmd)的rna干扰(rnai)试剂、包含其的组合物及其用于治疗患有opmd或对opmd易患的个体的用途。

背景技术：

opmd是一种常染色体显性遗传、缓慢进展、迟发性变性肌肉病症。该疾病的主要特征在于进行性眼睑下垂(上睑下垂)和吞咽困难(吞咽困难(dysphagia))。咽肌和环咽肌是opmd中的特异性靶标。近端肢体无力倾向于在疾病进展的后期发展。引起疾病的突变是多聚腺苷酸结合蛋白核1(pabpn1)基因的编码区中(gcn)n三核苷酸重复的异常扩增。这种扩增在pabpn1蛋白的n-末端处导致扩增的聚丙氨酸链：10个丙氨酸存在于正常蛋白质中，在突变形式(exppabpn1)中扩增至11至18个丙氨酸。该疾病的主要病理标志是exppabpn1的核聚集体。扩增的pabpn1的错误折叠导致不溶性聚合物纤维状聚集体在受累细胞的细胞核内积累。pabpn1是易聚集的蛋白质，并且opmd中突变的丙氨酸扩增的pabpn1具有比野生型正常蛋白质的聚集率更高的聚集率。然而，尚不清楚opmd中的核聚集体是否具有病理功能或作为细胞防御机制的结果的保护作用。

目前opmd没有药理学或其他方面的治疗。症状性手术干预可以部分纠正上睑下垂并改善中度至重度受累个体的吞咽。例如，环咽肌切开术目前是可用于改善这些患者的吞咽的唯一可能的治疗。然而，这并不能纠正咽部肌肉组织的进行性退化，这通常会导致吞咽困难和窒息后死亡。

因此，仍然需要治疗剂来治疗患有opmd的患者和/或易患其的患者的opmd。

对本说明书中包括的文件、法案、材料、装置、物品等的任何讨论不应被视为承认任何或所有这些事项构成现有技术基础的一部分或者是与每个所附权利要求的优先权日之前存在的本公开相关的领域中的公知常识。

技术实现要素：

本公开部分基于发明人的认识：目前不存在用于治疗opmd的治疗剂。因此，本公开提供了靶向pabpn1mrna转录物(其为opmd的病因)的区域的rnai试剂。本发明人已证明这些rnai试剂对pabpn1mrna转录物的转录后抑制是有效的，所述转录物包括否则将被翻译成导致opmd的突变型pabpn1蛋白(即包含扩增的聚丙氨酸链的那些pabpn1蛋白)的转录物变体。例如，已显示本公开的示例性rnai试剂在体外抑制或减少pabpn1蛋白的表达。此外，本公开提供了用于表达野生型人pabpn1蛋白的试剂(下文称为“pabpn1替代试剂”)，其具有不被本公开的rnai试剂靶向的mrna转录物。本发明人已显示，当与本公开的rnai试剂结合表达时，pabpn1替代试剂能够产生pabpn1转录物，所述pabpn1转录物对所述rnai试剂具有抗性并且能够被翻译成功能性pabpn1蛋白。本发明人的这些发现提供了可在opmd的治疗中具有治疗性应用的试剂。

因此，本公开提供了包含编码短发夹微rna(shmir)的dna序列的核酸，所述shmir包含：

长度为至少17个核苷酸的效应序列(effectorsequence)；

效应互补序列(effectorcomplementsequence)；

茎环序列；和

一级微rna(pri-mirna)主链；

其中所述效应序列与seqidno:1-13中的任一个中所示的rna转录物中相应长度的区域基本上互补。优选地，效应序列的长度少于30个核苷酸。例如，合适的效应序列的长度可在17至29个核苷酸的范围内。优选地，效应序列的长度为20个核苷酸。更优选地，效应序列的长度为21个核苷酸，并且效应互补序列的长度为20个核苷酸。

效应序列相对于与所述效应序列基本上互补的seqidno:1-13中的任一个中所示的rna转录物中相应长度的区域可包含4个碱基对错配。在另一个实例中，效应序列相对于与所述效应序列基本上互补的seqidno:1-13中的任一个中所示的rna转录物中相应长度的区域可包含3个碱基对错配。在另一个实例中，效应序列相对于与所述效应序列基本上互补的seqidno:1-13中的任一个中所示的rna转录物中相应长度的区域可包含2个碱基对错配。在另一个实例中，效应序列相对于与所述效应序列基本上互补的seqidno:1-13中的任一个中所示的rna转录物中相应长度的区域可包含1个碱基对错配。在另一个实例中，效应序列与seqidno:1-13中的任一个中所示的rna转录物中相应长度的区域100％互补。当存在错配时，优选地它们不位于对应于shmir的种子区域(seedregion)的区域(即效应序列的核苷酸2-8)内。

本文中描述了包含与seqidno:1中所示的rna转录物中相应长度的区域基本上互补的效应序列的示例性shmir(在下文中称为“shmir2”)。

本文中描述了包含与seqidno:2中所示的rna转录物中相应长度的区域基本上互补的效应序列的示例性shmir(在下文中称为“shmir3”)。

本文中描述了包含与seqidno:3中所示的rna转录物中相应长度的区域基本上互补的效应序列的示例性shmir(在下文中称为“shmir4”)。

本文中描述了包含与seqidno:4中所示的rna转录物中相应长度的区域基本上互补的效应序列的示例性shmir(在下文中称为“shmir5”)。

本文中描述了包含与seqidno:5中所示的rna转录物中相应长度的区域基本上互补的效应序列的示例性shmir(在下文中称为“shmir6”)。

本文中描述了包含与seqidno:6中所示的rna转录物中相应长度的区域基本上互补的效应序列的示例性shmir(在下文中称为“shmir7”)。

本文中描述了包含与seqidno:7中所示的rna转录物中相应长度的区域基本上互补的效应序列的示例性shmir(在下文中称为“shmir9”)。

本文中描述了包含与seqidno:8中所示的rna转录物中相应长度的区域基本上互补的效应序列的示例性shmir(在下文中称为“shmir11”)。

本文中描述了包含与seqidno:9中所示的rna转录物中相应长度的区域基本上互补的效应序列的示例性shmir(在下文中称为“shmir13”)。

本文中描述了包含与seqidno:10中所示的rna转录物中相应长度的区域基本上互补的效应序列的示例性shmir(在下文中称为“shmir14”)。

本文中描述了包含与seqidno:11中所示的rna转录物中相应长度的区域基本上互补的效应序列的示例性shmir(在下文中称为“shmir15”)。

本文中描述了包含与seqidno:12中所示的rna转录物中相应长度的区域基本上互补的效应序列的示例性shmir(在下文中称为“shmir16”)。

本文中描述了包含与seqidno:13中所示的rna转录物中相应长度的区域基本上互补的效应序列的示例性shmir(在下文中称为“shmir17”)。

在一个实例中，本文所述的核酸可包含编码shmir的dna序列，所述shmir选自：

包含以下序列的shmir：(i)除了1个、2个、3个或4个碱基错配外与seqidno:14中所示的序列基本上互补的效应序列，条件是所述效应序列能够与seqidno:14中所示的序列形成双链体；以及(ii)包含与所述效应序列(shmir2)基本上互补的序列的效应互补序列；

包含以下序列的shmir：(i)除了1个、2个、3个或4个碱基错配外与seqidno:16中所示的序列基本上互补的效应序列，条件是所述效应序列能够与seqidno:16中所示的序列形成双链体；以及(ii)包含与所述效应序列(shmir3)基本上互补的序列的效应互补序列；

包含以下序列的shmir：(i)除了1个、2个、3个或4个碱基错配外与seqidno:18中所示的序列基本上互补的效应序列，条件是所述效应序列能够与seqidno:18中所示的序列形成双链体；以及(ii)包含与所述效应序列(shmir4)基本上互补的序列的效应互补序列；

包含以下序列的shmir：(i)除了1个、2个、3个或4个碱基错配外与seqidno:20中所示的序列基本上互补的效应序列，条件是所述效应序列能够与seqidno:20中所示的序列形成双链体；以及(ii)包含与所述效应序列(shmir5)基本上互补的序列的效应互补序列；

包含以下序列的shmir：(i)除了1个、2个、3个或4个碱基错配外与seqidno:22中所示的序列基本上互补的效应序列，条件是所述效应序列能够与seqidno:22中所示的序列形成双链体；以及(ii)包含与所述效应序列(shmir6)基本上互补的序列的效应互补序列；

包含以下序列的shmir：(i)除了1个、2个、3个或4个碱基错配外与seqidno:24中所示的序列基本上互补的效应序列，条件是所述效应序列能够与seqidno:24中所示的序列形成双链体；以及(ii)包含与所述效应序列(shmir7)基本上互补的序列的效应互补序列；

包含以下序列的shmir：(i)除了1个、2个、3个或4个碱基错配外与seqidno:26中所示的序列基本上互补的效应序列，条件是所述效应序列能够与seqidno:26中所示的序列形成双链体；以及(ii)包含与所述效应序列(shmir9)基本上互补的序列的效应互补序列；

包含以下序列的shmir：(i)除了1个、2个、3个或4个碱基错配外与seqidno:28中所示的序列基本上互补的效应序列，条件是所述效应序列能够与seqidno:28中所示的序列形成双链体；以及(ii)包含与所述效应序列(shmir11)基本上互补的序列的效应互补序列；

包含以下序列的shmir：(i)除了1个、2个、3个或4个碱基错配外与seqidno:30中所示的序列基本上互补的效应序列，条件是所述效应序列能够与seqidno:30中所示的序列形成双链体；以及(ii)包含与所述效应序列(shmir13)基本上互补的序列的效应互补序列；

包含以下序列的shmir：(i)除了1个、2个、3个或4个碱基错配外与seqidno:32中所示的序列基本上互补的效应序列，条件是所述效应序列能够与seqidno:32中所示的序列形成双链体；以及(ii)包含与所述效应序列(shmir14)基本上互补的序列的效应互补序列；

包含以下序列的shmir：(i)除了1个、2个、3个或4个碱基错配外与seqidno:34中所示的序列基本上互补的效应序列，条件是所述效应序列能够与seqidno:34中所示的序列形成双链体；以及(ii)包含与所述效应序列(shmir15)基本上互补的序列的效应互补序列；

包含以下序列的shmir：(i)除了1个、2个、3个或4个碱基错配外与seqidno:36中所示的序列基本上互补的效应序列，条件是所述效应序列能够与seqidno:36中所示的序列形成双链体；以及(ii)包含与所述效应序列(shmir16)基本上互补的序列的效应互补序列；和

包含以下序列的shmir：(i)除了1个、2个、3个或4个碱基错配外与seqidno:38中所示的序列基本上互补的效应序列，条件是所述效应序列能够与seqidno:38中所示的序列形成双链体；以及(ii)包含与所述效应序列(shmir17)基本上互补的序列的效应互补序列；

在另一个实例中，本文所述的核酸可包含编码shmir的dna序列，所述shmir选自由以下组成的组：

包含seqidno:15中所示的效应序列和与seqidno:15中所示的序列基本上互补并能够与其形成双链体的效应互补序列的shmir(shmir2)；

包含seqidno:17中所示的效应序列和与seqidno:17中所示的序列基本上互补并能够与其形成双链体的效应互补序列的shmir(shmir3)；

包含seqidno:19中所示的效应序列和与seqidno:19中所示的序列基本上互补并能够与其形成双链体的效应互补序列的shmir(shmir4)；

包含seqidno:21中所示的效应序列和与seqidno:21中所示的序列基本上互补并能够与其形成双链体的效应互补序列的shmir(shmir5)；

包含seqidno:23中所示的效应序列和与seqidno:23中所示的序列基本上互补并能够与其形成双链体的效应互补序列的shmir(shmir6)；

包含seqidno:25中所示的效应序列和与seqidno:25中所示的序列基本上互补并能够与其形成双链体的效应互补序列的shmir(shmir7)；

包含seqidno:27中所示的效应序列和与seqidno:27中所示的序列基本上互补并能够与其形成双链体的效应互补序列的shmir(shmir9)；

包含seqidno:29中所示的效应序列和与seqidno:29中所示的序列基本上互补并能够与其形成双链体的效应互补序列的shmir(shmir11)；

包含seqidno:31中所示的效应序列和与seqidno:31中所示的序列基本上互补并能够与其形成双链体的效应互补序列的shmir(shmir13)；

包含seqidno:33中所示的效应序列和与seqidno:33中所示的序列基本上互补并能够与其形成双链体的效应互补序列的shmir(shmir14)；

包含seqidno:35中所示的效应序列和与seqidno:35中所示的序列基本上互补并能够与其形成双链体的效应互补序列的shmir(shmir15)；

包含seqidno:37中所示的效应序列和与seqidno:37中所示的序列基本上互补并能够与其形成双链体的效应互补序列的shmir(shmir16)；和

包含seqidno:39中所示的效应序列和与seqidno:39中所示的序列基本上互补并能够与其形成双链体的效应互补序列的shmir(shmir17)；

例如，由本文所述核酸编码的shmir可包含相对于相应的效应序列包含1个、2个、3个或4个错配的效应互补序列，条件是同源效应序列和效应互补序列能够形成双链体区域。

在另一个实例中，本文所述的核酸可包含编码shmir的dna序列，所述shmir选自由以下组成的组：

包含seqidno:15中所示的效应序列和seqidno:14(shmir2)中所示的效应互补序列的shmir；

包含seqidno:17中所示的效应序列和seqidno:16(shmir3)中所示的效应互补序列的shmir；

包含seqidno:19中所示的效应序列和seqidno:18(shmir4)中所示的效应互补序列的shmir；

包含seqidno:21中所示的效应序列和seqidno:20(shmir5)中所示的效应互补序列的shmir；

包含seqidno:23中所示的效应序列和seqidno:22(shmir6)中所示的效应互补序列的shmir；

包含seqidno:25中所示的效应序列和seqidno:24(shmir7)中所示的效应互补序列的shmir；

包含seqidno:27中所示的效应序列和seqidno:26(shmir9)中所示的效应互补序列的shmir；

包含seqidno:29中所示的效应序列和seqidno:28(shmir11)中所示的效应互补序列的shmir；

包含seqidno:31中所示的效应序列和seqidno:30(shmir13)中所示的效应互补序列的shmir；

包含seqidno:33中所示的效应序列和seqidno:32(shmir14)中所示的效应互补序列的shmir；

包含seqidno:35中所示的效应序列和seqidno:34(shmir15)中所示的效应互补序列的shmir；

包含seqidno:37中所示的效应序列和seqidno:36(shmir16)中所示的效应互补序列的shmir；和

包含seqidno:39中所示的效应序列和seqidno:38(shmir17)中所示的效应互补序列的shmir；

由本公开的核酸编码的shmir可以在5’至3’方向上包含：

一级mirna主链的5’侧翼序列；

效应互补序列；

茎环序列；

效应序列；和

pri-mirna主链的3’侧翼序列；

由本公开的核酸编码的shmir可以在5’至3’方向上包含：

pri-mirna主链的5’侧翼序列；

效应序列；

茎环序列；

效应互补序列；和

pri-mirna主链的3’侧翼序列。

合适的环序列可选自本领域已知的那些环序列。然而，示例性茎环序列示于seqidno:40中。

用于本公开的核酸的合适的一级微rna(pri-mirna或pri-r)主链可选自本领域已知的那些。例如，pri-mirna主链可以选自pri-mir-30a主链、pri-mir-155主链、pri-mir-21主链和pri-mir-136主链。然而，优选地，pri-mirna主链为pri-mir-30a主链。根据其中pri-mirna主链为pri-mir-30a主链的实例，pri-mirna主链的5'侧翼序列示于seqidno:41中，并且pri-mirna主链的3'侧翼序列示于seqidno:42中。

在一个实例中，本文所述的核酸包含选自seqidno:56-68中的任一个中所示的序列的dna序列。根据该实例，由本公开的核酸编码的shmir可包含seqidno:43-55中的任一个中所示的序列。

本领域技术人员将理解，可将根据本公开的核酸与用于治疗opmd的其它治疗剂(例如，诸如靶向对应于导致opmd的pabpn1蛋白的rna转录物的其它rnai剂)组合或与其结合使用。因此，本公开提供了如下核酸，其包含编码如本文所述的shmir的dna序列与一种或多种用于治疗opmd的其它rnai剂的组合。在一个实例中，提供了多种核酸，其包括：

(a)至少一种如本文所述的核酸；和

(b)至少一种选自以下的另外的核酸：

(i)根据本文所述核酸的核酸；或

(ii)包含编码shmir或短发夹rna(shrna)的dna序列的核酸，所述shmir或短发夹rna包含长度为至少17个核苷酸的效应序列和效应互补序列，其中所述效应序列与对应于导致眼咽肌营养不良症(opmd)的pabpn1蛋白的rna转录物基本上互补；

其中由(a)的核酸编码的shmir和由(b)的核酸编码的shmir或shrna包含不同的效应序列。

在一个实例中，(b)(ii)的shmir或shrna的效应序列与seqidno:1-13中的任一个中所示的rna转录物中相应长度的区域基本上互补。优选地，与seqidno:1-13中的任一个中所示的rna转录物中相应长度的区域基本上互补的(b)(ii)的shmir或shrna的效应序列的长度少于30个核苷酸。例如，shmir或shrna的合适的效应序列的长度可在17至29个核苷酸的范围内。

在一个实例中，多种核酸中的至少一种核酸包含编码如本文所述的shmir2的dna序列。

在一个实例中，多种核酸中的至少一种核酸包含编码如本文所述的shmir3的dna序列。

在一个实例中，多种核酸中的至少一种核酸包含编码如本文所述的shmir4的dna序列。

在一个实例中，多种核酸中的至少一种核酸包含编码如本文所述的shmir5的dna序列。

在一个实例中，多种核酸中的至少一种核酸包含编码如本文所述的shmir6的dna序列。

在一个实例中，多种核酸中的至少一种核酸包含编码如本文所述的shmir7的dna序列。

在一个实例中，多种核酸中的至少一种核酸包含编码如本文所述的shmir9的dna序列。

在一个实例中，多种核酸中的至少一种核酸包含编码如本文所述的shmir11的dna序列。

在一个实例中，多种核酸中的至少一种核酸包含编码如本文所述的shmir13的dna序列。

在一个实例中，多种核酸中的至少一种核酸包含编码如本文所述的shmir14的dna序列。

在一个实例中，多种核酸中的至少一种核酸包含编码如本文所述的shmir15的dna序列。

在一个实例中，多种核酸中的至少一种核酸包含编码如本文所述的shmir16的dna序列。

在一个实例中，多种核酸中的至少一种核酸包含编码如本文所述的shmir17的dna序列。

根据本公开的多种核酸可包括最多10种核酸，每种核酸编码如本文所述的shmir，即shmir2-7、shmir9、shmir11和shmir13-17，诸如2种核酸或3种核酸或4种核酸或5种核酸或6种核酸或7种核酸或8种核酸或9种核酸或10种核酸。在一个实例中，多种核酸包括2种本公开的核酸，每种核酸编码如本文所述的shmir。在一个实例中，多种核酸包括3种本公开的核酸，每种核酸编码如本文所述的shmir。在一个实例中，多种核酸包括4种本公开的核酸，每种核酸编码如本文所述的shmir。在一个实例中，多种核酸包括5种本公开的核酸，每种核酸编码如本文所述的shmir。在一个实例中，多种核酸包括6种本公开的核酸，每种核酸编码如本文所述的shmir。在一个实例中，多种核酸包括7种本公开的核酸，每种核酸编码如本文所述的shmir。在一个实例中，多种核酸包括8种本公开的核酸，每种核酸编码如本文所述的shmir。在一个实例中，多种核酸包括9种本公开的核酸，每种核酸编码如本文所述的shmir。在一个实例中，多种rna包括10种本公开的核酸，每种核酸编码如本文所述的shmir。根据本文所述的任何实例，多种核酸中的一种或多种可编码如本文所述的shrna。

在一个实例中，本公开的多种核酸包括至少两种核酸，每种核酸包含编码选自由如本文所述的shmir2、shmir3、shmir5、shmir9、shmir13、shmir14和shmir17组成的组的shmir的dna序列。

本公开的一个示例性多种核酸包括一种核酸，其包含编码如本文所述的shmir13的dna序列，和另一种核酸，其包含编码如本文所述的shmir17的dna序列。

本公开的另一个示例性多种核酸包括一种核酸，其包含编码如本文所述的shmir3的dna序列，和另一种核酸，其包含编码如本文所述的shmir14的dna序列。

根据其中提供多种核酸的实例，两种或更多种核酸可以形成同一多核苷酸的单独部分。在另一个实例中，多种核酸中的两种或更多种核酸分别形成不同多核苷酸的部分。

根据本公开的核酸或每种所述核酸可包含一个或多个转录终止子序列，或与其可操作地连接。例如，所述核酸或每种所述核酸可在编码shmir的序列的3'末端包含转录终止子序列。此类序列将取决于启动子的选择，并且是本领域技术人员已知的。然而，本文描述了根据本公开的核酸或其多种核酸使用的启动子和转录终止子序列的合适选择。

或者，或另外地，根据本公开的核酸或每种所述核酸可包含转录起始序列，或与其可操作地连接。例如，所述核酸或每种所述核酸可在编码shmir的序列的5'末端包含转录起始序列。此类序列将是本领域技术人员已知的。

可选地或另外地，根据本公开的核酸或每种所述核酸可包含一个或多个限制性位点，例如，以有利于将一种或多种核酸克隆到克隆载体或表达载体中。例如，本文描述的核酸可以在编码本公开的shmir的序列的上游和/或下游包含限制性位点。合适的限制性酶识别序列将是本领域技术人员已知的。

根据本公开的核酸，或如本文所述的多种核酸，也可以以dna介导的rna干扰(ddrnai)构建体的形式提供，或者包含在所述构建体中，所述构建体能够表达由本公开的一种或多种核酸编码的一种或多种shmir。

在一个实例中，ddrnai构建体包含至少两种本公开的核酸，使得ddrnai构建体编码至少两种靶向对应于导致opmd的pabpn1蛋白的rna转录物的shmir，所述shmir的每一种彼此不同。

在一个实例中，ddrnai构建体中的至少两种核酸中的每一种编码shmir，所述shmir包含与seqidno:1、2、4、7、9、10和13中的一个中所示的rna转录物中相应长度的区域基本上互补的效应序列。因此，根据该实例的ddrnai构建体编码选自如本文所述的shmir2、shmir3、shmir5、shmir9、shmir13、shmir14和shmir17的两种shmir。

本公开的ddrnai构建体的一个实例包含选自由以下组成的组的至少两种核酸：

包含编码shmir的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，所述shmir包含seqidno:15中所示的效应序列和与seqidno:15基本上互补并且能够与其形成双链体的效应互补序列，例如，seqidno:14(shmir2)中所示的效应互补序列；

包含编码shmir的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，所述shmir包含seqidno:17中所示的效应序列和与seqidno:17基本上互补并且能够与其形成双链体的效应互补序列，例如，seqidno:16(shmir3)中所示的效应互补序列；

包含编码shmir的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，所述shmir包含seqidno:21中所示的效应序列和与seqidno:21基本上互补并且能够与其形成双链体的效应互补序列，例如，seqidno:20(shmir5)中所示的效应互补序列；

包含编码shmir的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，所述shmir包含seqidno:27中所示的效应序列和与seqidno:27基本上互补并且能够与其形成双链体的效应互补序列，例如，seqidno:26(shmir9)中所示的效应互补序列；

包含编码shmir的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，所述shmir包含seqidno:31中所示的效应序列和与seqidno:31基本上互补并且能够与其形成双链体的效应互补序列，例如，seqidno:30(shmir13)中所示的效应互补序列；

包含编码shmir的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，所述shmir包含seqidno:33中所示的效应序列和与seqidno:33基本上互补并且能够与其形成双链体的效应互补序列，例如，seqidno:32(shmir14)中所示的效应互补序列；和

包含编码shmir的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，所述shmir包含seqidno:39中所示的效应序列和与seqidno:39基本上互补并且能够与其形成双链体的效应互补序列，例如，seqidno:38(shmir17)中所示的效应互补序列。

在一个实例中，ddrnai构建体包含至少两种选自由以下组成的组的核酸：

包含seqidno:56(shmir2)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸；

包含seqidno:57(shmir3)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸；

包含seqidno:59(shmir5)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸；

包含seqidno:62(shmir9)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸；

包含seqidno:64(shmir13)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸；

包含seqidno:65(shmir14)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸；以及

包含seqidno:68(shmir17)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。

在一个实例中，ddrnai构建体中的至少两种核酸中的每一种编码shmir，所述shmir包含与seqidno:2、9、10和13中的一个中所示的rna转录物中相应长度的区域基本上互补的效应序列。因此，根据该实例的ddrnai构建体编码选自如本文所述的shmir3、shmir13、shmir14和shmir17的两种shmir。

本公开的ddrnai构建体的一个实例包含选自由以下组成的组的至少两种核酸：

包含编码shmir的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，所述shmir包含seqidno:17中所示的效应序列和与seqidno:17基本上互补并且能够与其形成双链体的效应互补序列，例如，seqidno:16(shmir3)中所示的效应互补序列；

包含编码shmir的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，所述shmir包含seqidno:31中所示的效应序列和与seqidno:31基本上互补并且能够与其形成双链体的效应互补序列，例如，seqidno:30(shmir13)中所示的效应互补序列；

包含编码shmir的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，所述shmir包含seqidno:33中所示的效应序列和与seqidno:33基本上互补并且能够与其形成双链体的效应互补序列，例如，seqidno:32(shmir14)中所示的效应互补序列；以及

包含编码shmir的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，所述shmir包含seqidno:39中所示的效应序列和与seqidno:39基本上互补并且能够与其形成双链体的效应互补序列，例如，seqidno:38(shmir17)中所示的效应互补序列。

在一个实例中，ddrnai构建体包含选自由以下组成的组的至少两种核酸：

包含seqidno:57(shmir3)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸；

包含seqidno:64(shmir13)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸；

包含seqidno:65(shmir14)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸；以及

包含seqidno:68(shmir17)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。

本公开的一个示例性ddrnai构建体包含：

(a)包含编码shmir的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，所述shmir包含seqidno:31中所示的效应序列和seqidno:30(shmir13)中所示的效应互补序列；以及

(b)包含编码shmir的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，所述shmir包含seqidno:39中所示的效应序列和seqidno:38(shmir17)中所示的效应互补序列。

根据本实例的ddrnai构建体可包含：

(a)包含seqidno:64(shmir13)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸；以及

(b)包含seqidno:68(shmir17)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。

本公开的一个示例性ddrnai构建体包含：

(a)包含编码shmir的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，所述shmir包含seqidno:17中所示的效应序列和seqidno:16(shmir3)中所示的效应互补序列；以及

(b)包含编码shmir的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，所述shmir包含seqidno:33中所示的效应序列和seqidno:32(shmir14)中所示的效应互补序列。

根据本实例的ddrnai构建体可包含：

(a)包含seqidno:57(shmir3)中所示的序列或由所述序列组成的核酸；以及

(b)包含seqidno:65(shmir14)中所示的序列或由所述序列组成的核酸。

在一个实例中，如本文所述的ddrnai构建体包含单个启动子，其与编码本公开的shmir的核酸或每个所述核酸可操作地连接。在另一个实例中，编码本公开的shmir的每种核酸与单独的启动子可操作地连接。例如，一个或多个启动子位于编码一种或多种shmir的一种或多种相应核酸的上游。

根据其中ddrnai构建体包含多个启动子的实例，启动子可以相同或不同。可使用的示例性启动子是肌肉特异性启动子，诸如例如spc512和ck8。可使用的其它示例性启动子是rnapoliii启动子，诸如例如u6和h1启动子。示例性u6启动子是u6-1、u6-8和u6-9启动子。

如本文所述的多种核酸，也可以以多种ddrnai构建体的形式提供，或者包含在所述构建体中，每一种ddrnai构建体能够表达由本公开的一种或多种核酸编码的一种或多种shmir。例如，多种核酸中的每种核酸可以以单独的ddrnai构建体的形式提供，或者包含在单独的ddrnai构建体中。

在一个实例中，多种ddrnai构建体包括至少两种ddrnai构建体，每种ddrnai构建体包含本文所述的多种核酸中的核酸，使得ddrnai构建体共同编码至少两种靶向对应于导致opmd的pabpn1蛋白的rna转录物的shmir，所述shmir的每一种都是彼此不同的。

在一个实例中，至少两种ddrnai构建体中的每一种编码shmir，所述shmir包含与seqidno:1、2、4、7、9、10和13中的一个中所示的rna转录物中相应长度的区域基本上互补的效应序列。因此，根据该实例的多种ddrnai构建体共同编码选自如本文所述的shmir2、shmir3、shmir5、shmir9、shmir13、shmir14和shmir17的两种shmir。

本公开的多种ddrnai构建体的一个实例包括选自由以下组成的组的至少两种ddrnai构建体：

包含含有编码shmir的dna序列或由所述dna序列组成的核酸的ddrnai构建体，所述shmir包含seqidno:15中所示的效应序列和与seqidno:15基本上互补并且能够与其形成双链体的效应互补序列，例如，seqidno:14(shmir2)中所示的效应互补序列；

包含含有编码shmir的dna序列或由所述dna序列组成的核酸的ddrnai构建体，所述shmir包含seqidno:17中所示的效应序列和与seqidno:17基本上互补并且能够与其形成双链体的效应互补序列，例如，seqidno:16(shmir3)中所示的效应互补序列；

包含含有编码shmir的dna序列或由所述dna序列组成的核酸的ddrnai构建体，所述shmir包含seqidno:21中所示的效应序列和与seqidno:21基本上互补并且能够与其形成双链体的效应互补序列，例如，seqidno:20(shmir5)中所示的效应互补序列；

包含含有编码shmir的dna序列或由所述dna序列组成的核酸的ddrnai构建体，所述shmir包含seqidno:27中所示的效应序列和与seqidno:27基本上互补并且能够与其形成双链体的效应互补序列，例如，seqidno:26(shmir9)中所示的效应互补序列；

包含含有编码shmir的dna序列或由所述dna序列组成的核酸的ddrnai构建体，所述shmir包含seqidno:31中所示的效应序列和与seqidno:31基本上互补并且能够与其形成双链体的效应互补序列，例如，seqidno:30(shmir13)中所示的效应互补序列；

包含含有编码shmir的dna序列或由所述dna序列组成的核酸的ddrnai构建体，所述shmir包含seqidno:33中所示的效应序列和与seqidno:33基本上互补并且能够与其形成双链体的效应互补序列，例如，seqidno:32(shmir14)中所示的效应互补序列；以及

包含含有编码shmir的dna序列或由所述dna序列组成的核酸的ddrnai构建体，所述shmir包含seqidno:39中所示的效应序列和与seqidno:39基本上互补并且能够与其形成双链体的效应互补序列，例如，seqidno:38(shmir17)中所示的效应互补序列。

在一个实例中，所述多种ddrnai构建体包括至少选自由以下组成的组的ddrnai构建体：

包含含有seqidno:56(shmir2)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸的ddrnai构建体；

包含含有seqidno:57(shmir3)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸的ddrnai构建体；

包含含有seqidno:59(shmir5)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸的ddrnai构建体；

包含含有seqidno:62(shmir9)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸的ddrnai构建体；

包含含有seqidno:64(shmir13)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸的ddrnai构建体；

包含含有seqidno:65(shmir14)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸的ddrnai构建体；以及

包含含有seqidno:68(shmir17)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸的ddrnai构建体。

在一个实例中，至少两种ddrnai构建体中的每一种编码shmir，所述shmir包含与seqidno:2、9、10和13中的一个中所示的rna转录物中相应长度的区域基本上互补的效应序列。因此，根据该实例的多种ddrnai构建体共同编码选自如本文所述的shmir3、shmir13、shmir14和shmir17的两种shmir。

本公开的多种ddrnai构建体的一个实例包括选自由以下组成的组的至少两种ddrnai构建体：

包含含有编码shmir的dna序列或由所述dna序列组成的核酸的ddrnai构建体，所述shmir包含seqidno:17中所示的效应序列和与seqidno:17基本上互补并且能够与其形成双链体的效应互补序列，例如，seqidno:16(shmir3)中所示的效应互补序列；

包含含有编码shmir的dna序列或由所述dna序列组成的核酸的ddrnai构建体，所述shmir包含seqidno:31中所示的效应序列和与seqidno:31基本上互补并且能够与其形成双链体的效应互补序列，例如，seqidno:30(shmir13)中所示的效应互补序列；

包含含有编码shmir的dna序列或由所述dna序列组成的核酸的ddrnai构建体，所述shmir包含seqidno:33中所示的效应序列和与seqidno:33基本上互补并且能够与其形成双链体的效应互补序列，例如，seqidno:32(shmir14)中所示的效应互补序列；以及

包含含有编码shmir的dna序列或由所述dna序列组成的核酸的ddrnai构建体，所述shmir包含seqidno:39中所示的效应序列和与seqidno:39基本上互补并且能够与其形成双链体的效应互补序列，例如，seqidno:38(shmir17)中所示的效应互补序列。

在一个实例中，所述至少两种ddrnai构建体选自由以下组成的组：

包含含有seqidno:57(shmir3)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸的ddrnai构建体；

包含含有seqidno:64(shmir13)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸的ddrnai构建体；

包含含有seqidno:65(shmir14)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸的ddrnai构建体；以及

包含含有seqidno:68(shmir17)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸的ddrnai构建体。

本公开的一个示例性多种ddrnai构建体包括：

(a)包含含有编码shmir的dna序列或由所述dna序列组成的核酸的ddrnai构建体，所述shmir包含seqidno:31中所示的效应序列和seqidno:30(shmir13)中所示的效应互补序列；以及

(b)包含含有编码shmir的dna序列或由所述dna序列组成的核酸的ddrnai构建体，所述shmir包含seqidno:39中所示的效应序列和seqidno:38(shmir17)中所示的效应互补序列。

根据本实例的多种ddrnai构建体可包括：

(a)包含含有seqidno:64(shmir13)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸的ddrnai构建体；以及

(b)包含含有seqidno:68(shmir17)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸的ddrnai构建体。

本公开的另一个示例性多种ddrnai构建体包括：

(a)包含含有编码shmir的dna序列或由所述dna序列组成的核酸的ddrnai构建体，所述shmir包含seqidno:17中所示的效应序列和seqidno:16(shmir3)中所示的效应互补序列；以及

(b)包含含有编码shmir的dna序列或由所述dna序列组成的核酸的ddrnai构建体，所述shmir包含seqidno:33中所示的效应序列和seqidno:32(shmir14)中所示的效应互补序列。

根据本实例的多种ddrnai构建体可包括：

(a)包含含有seqidno:57(shmir3)中所示的序列或由所述序列组成的核酸的ddrnai构建体；以及

(b)包含含有seqidno:65(shmir14)中所示的序列或由所述序列组成的核酸的ddrnai构建体。

如本文所述的多种ddrnai构建体中的每一种ddrnai构建体包含单个启动子，其与编码其中包含的shmir的核酸或每种所述核酸可操作地连接。当多种ddrnai构建体中的ddrnai构建体包含不止一种编码shmir的核酸时，每种核酸可以与同一启动子可操作地连接或与单独的启动子可操作地连接。在描述多种ddrnai构建体的前述实例中的每个实例中，一个或多个启动子位于编码一种或多种shmir的一种或多种相应核酸的上游。

可使用的示例性启动子是肌肉特异性启动子，诸如例如spc512和ck8。可使用的其它示例性启动子是rnapoliii启动子，诸如例如u6和h1启动子。示例性u6启动子是u6-1、u6-8和u6-9启动子。包含在多种ddrnai构建体的各个ddrnai构建体中的启动子可以相同或不同。

本公开还提供了dna构建体，其包含：

(a)如本文所述的ddrnai构建体；和

(b)pabpn1构建体，其包含编码具有mrna转录物的功能性pabpn1蛋白的dna序列，所述mrna转录物不被ddrnai构建体编码的一种或多种shmir靶向。优选地，对编码功能性pabpn1蛋白的dna序列进行密码子优化，使得其mrna转录物不被ddrnai构建体的shmir靶向。在一个实例中，功能性pabpn1蛋白是野生型人pabpn1蛋白，例如具有seqidno:74中所示的序列。在一个实例中，编码功能性pabpn1蛋白的经密码子优化的dna序列示于seqidno:73中。

dna构建体可包含一个或多个启动子。用于本公开的dna构建体的示例性启动子是肌肉特异性启动子，诸如例如spc512和ck8。

根据一个实例，dna构建体包含与pabpn1构建体和ddrnai构建体可操作地连接的启动子，其中启动子位于pabpn1构建体和ddrnai构建体的上游。

在一个实例中，dna构建体在5'至3'方向上包含：

(a)肌肉特异性启动子，例如spc512；

(b)如本文所述的pabpn1构建体，其包含编码具有mrna转录物的功能性pabpn1蛋白的dna序列，所述mrna转录物不被ddrnai构建体编码的shmir靶向；以及

(c)本公开的ddrnai构建体，其包含含有编码如本文所述的shmir13的dna序列的核酸和含有编码如本文所述的shmir17的dna序列的核酸。

在另一个实例中，dna构建体包含：

(a)肌肉特异性启动子，例如spc512；

(b)如本文所述的pabpn1构建体，其包含编码具有mrna转录物的功能性pabpn1蛋白的dna序列，所述mrna转录物不被ddrnai构建体编码的shmir靶向；以及

(c)本公开的ddrnai构建体，其包含含有编码如本文所述的shmir3的dna序列的核酸和含有编码如本文所述的shmir14的dna序列的核酸。

在另一个实例中，pabpn1构建体和ddrnai构建体各自与dna构建体内的单独的启动子可操作地连接。例如，与pabpn1构建体可操作连接的启动子将与编码其中包含的功能性pabpn1蛋白的dna序列可操作地连接。与ddrnai构建体可操作地连接的所述启动子或每个所述启动子将与ddrnai构建体中包含的编码本公开的shmir的一种或多种核酸可操作地连接。用于本公开的dna构建体的示例性启动子是肌肉特异性启动子，诸如例如spc512和ck8。

根据该实例的一种dna构建体在5'至3'方向上包含：

(a)肌肉特异性启动子例如ck8启动子，其位于本公开的ddrnai构建体的上游，所述构建体包含含有编码如本文所述的shmir13的dna序列的核酸和含有编码如本文所述的shmir17的dna序列的核酸；以及

(b)肌肉特异性启动子例如spc512启动子，其位于如本文所述的pabpn1构建体的上游，所述构建体包含编码具有mrna转录物的功能性pabpn1蛋白的dna序列，所述mrna转录物不被ddrnai构建体编码的shmir靶向。

根据该实例的另一种dna构建体在5'至3'方向上包含：

(a)肌肉特异性启动子例如ck8启动子，其位于本公开的ddrnai构建体的上游，所述构建体包含含有编码如本文所述的shmir3的dna序列的核酸和含有编码如本文所述的shmir14的dna序列的核酸；以及

(b)肌肉特异性启动子例如spc512启动子，其位于如本文所述的pabpn1构建体的上游，所述构建体包含编码具有mrna转录物的功能性pabpn1蛋白的dna序列，所述mrna转录物不被ddrnai构建体编码的shmir靶向。

包含在本公开的dna构建体中的编码shmir13和shmir17的示例性ddrnai构建体可包含含有编码shmir(所述shmir包含seqidno:31中所示的效应序列和与seqidno:31中所示的序列基本上互补的效应互补序列,例如，seqidno:30(shmir13)中所示的效应互补序列)的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，以及含有编码shmir(所述shmir包含seqidno:39中所示的效应序列和与seqidno:39中所示的序列基本上互补的效应互补序列,例如，seqidno:38(shmir17)中所示的效应互补序列)的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。例如，根据dna构建体的该实例的ddrnai构建体可包含含有seqidno:64(shmir13)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，以及含有seqidno:68(shmir17)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。

包含在本公开的dna构建体中的编码shmir3和shmir14的示例性ddrnai构建体可包含含有编码shmir(所述shmir包含seqidno:17中所示的效应序列和与seqidno:17中所示的序列基本上互补的效应互补序列，例如，seqidno:16(shmir3)中所示的效应互补序列)的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，以及含有编码shmir(所述shmir包含seqidno:33中所示的效应序列和与seqidno:33中所示的序列基本上互补的效应互补序列,例如，seqidno:34(shmir14)中所示的效应互补序列)的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。例如，根据dna构建体的该实例的ddrnai构建体可包含含有seqidno:57(shmir3)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，以及含有seqidno:65(shmir14)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。

本公开还提供了表达载体，其包含本公开的ddrnai构建体，或本公开的多种ddrnai构建体或本公开的dna构建体。

本公开还提供了多种表达载体，其每种包含本公开的ddrnai构建体。例如，多种表达载体中的一种或多种包含多种如本文公开的多种ddrnai构建体。在另一个实例中，多种表达载体中的每种表达载体包含多种如本文公开的多种ddrnai构建体。在另外的实例中，多种表达载体中的每种表达载体包含单种如本文公开的单一ddrnai构建体。在本段落中的任何前述方式中，根据本公开，多种表达载体可共同表达多种shmir。

本公开还提供了多种表达载体，其包括：

(a)包含一种或多种本公开的ddrnai构建体的表达载体；和

(b)包含pabpn1构建体的表达载体，所述pabpn1构建体包含编码具有mrna转录物的功能性pabpn1蛋白的dna序列，所述mrna转录物不被ddrnai构建体编码的一种或多种shmir靶向。

优选地，对编码功能性pabpn1蛋白的dna序列进行密码子优化，使得其mrna转录物不被ddrnai构建体的shmir靶向。在一个实例中，功能性pabpn1蛋白是野生型人pabpn1蛋白，例如具有seqidno:74中所示的序列。在一个实例中，编码功能性pabpn1蛋白的经密码子优化的dna序列示于seqidno:73中。

在一个实例中，编码功能性pabpn1蛋白的dna序列可以与包含在pabpn1构建体内并位于编码功能性pabpn1蛋白的dna序列的上游的启动子可操作地连接。在另一个实例中，包含papbn1构建体的表达载体包含位于pabpn1构建体的上游并且与编码功能性pabpn1蛋白的dna序列可操作地连接的启动子。用于本公开的一种或多种表达载体的示例性启动子是肌肉特异性启动子，诸如例如spc512和ck8。

在一个实例中，所述表达载体或每种表达载体为质粒或微环(minicircle)。

在一个实例中，质粒或微环或表达载体或ddrnai构建体与阳离子dna结合聚合物例如聚乙烯亚胺复合。

在另一个实例中，所述表达载体或每种表达载体是病毒载体。例如，病毒载体选自由以下组成的组：腺相关病毒(aav)载体、逆转录病毒载体、腺病毒载体(adv)和慢病毒(lv)载体。

本公开还提供了包含如本文所述的ddrnai构建体和/或多种ddrnai构建体和/或表达载体和/或多种表达载体的组合物。在一个实例中，组合物还可包含一种或多种药学上可接受的载剂和/或稀释剂。

本公开还提供了抑制导致受试者的opmd的pabpn1蛋白的表达的方法，所述方法包括向所述受试者施用核酸、多种核酸、ddrnai构建体、多种ddrnai构建体、dna构建体、表达载体、多种表达载体或本文所述的组合物。

本公开还提供了治疗患有opmd的受试者的opmd的方法，该方法包括向受试者施用本文所述的核酸、多种核酸、ddrnai构建体、多种ddrnai构建体、dna构建体、表达载体、多种表达载体或组合物。该方法可包括向受试者一起、同时或连续地施用多种表达载体。

本公开还提供了试剂盒，其包含：

(a)一种或多种用于抑制导致opmd的pabpn1蛋白表达的剂，所述一种或多种剂选自如本文所述的核酸、多种核酸、ddrnai构建体、多种ddrnai构建体、dna构建体、表达载体、多种表达载体或组合物；和

(b)表达载体，其包含编码具有mrna转录物的功能性pabpn1蛋白的dna序列，所述mrna转录物不被(a)中的剂表达的shmir靶向。

优选地，对编码功能性pabpn1蛋白的dna序列进行密码子优化，使得其mrna转录物不被(a)中的剂编码的shmir靶向。在一个实例中，功能性pabpn1蛋白是野生型人pabpn1蛋白，例如具有seqidno:74中所示的序列。在一个实例中，编码功能性pabpn1蛋白的经密码子优化的dna序列示于seqidno:73中。

编码功能性pabpn1蛋白的dna序列可以与包含在(b)中的表达载体内并位于编码功能性pabpn1蛋白的dna序列的上游的启动子可操作地连接。用于(b)中的表达载体的示例性启动子是肌肉特异性启动子，诸如例如spc512或ck8启动子。

本公开还提供了试剂盒，其包含作为单独的组分包装的本文所述的多种表达载体。

本公开还提供了试剂盒，其包含与本公开方法的使用说明书包装在一起的如本文所述的核酸、多种核酸，ddrnai构建体、多种ddrnai构建体、dna构建体、表达载体、多种表达载体或组合物。

在一个实例中，如本文所述的试剂盒用于根据本文所述的方法治疗opmd。

本公开还提供了如本文所述的核酸、多种核酸、ddrnai构建体、多种ddrnai构建体、dna构建体、表达载体、多种表达载体和/或组合物用于制备药物(例如用于治疗受试者的opmd)和/或本文公开的方法的用途。

本公开还提供了用于疗法的如本文所述的核酸、多种核酸，ddrnai构建体、多种ddrnai构建体、dna构建体、表达载体、多种表达载体和/或组合物。例如，核酸、多种核酸、ddrnai构建体、多种ddrnai构建体、dna构建体、表达载体、多种表达载体和/或组合物可用于治疗患有opmd或对opmd易感的受试者的opmd和/或用于本文公开的方法。

附图简述

图1举例说明代表性shmir构建体的预测的二级结构，所述构建体包含5’侧翼区、sirna有义链；茎/环连接序列、sirna反义链和3’侧翼区。

图2举例说明具有称为shmir2-17的shmir的反义序列和有义序列的shmir相对于psilencer对照在hek293细胞中的wtpabpn1抑制活性。该图举例说明除shmir11外的所有shmir均下调自wtpabpn1萤光素酶报告基因的萤光素酶表达水平。

图3举例说明具有称为shmir2-17的shmir的反义序列和有义序列的shmir相对于psilencer对照在hek293细胞中的optpabpn1抑制活性。该图举例说明自optpabpbn1萤光素酶报告基因的表达没有下调。

图4(a)是蛋白质印迹，其显示用编码shmir2、shmir3、shmir5、shmir9、shmir13、shmir14、shmir16或shmir17的质粒转染的hek293t细胞中表达的flag标记的wtpabpn1蛋白相对于表达的hsp90蛋白的水平。这表明所有选择的shmir都敲低了wtpabpn1的表达。

图4(b)举例说明hek293细胞中flag标记的wtpabpn1蛋白相对于psilencer对照的抑制百分比。该图举例说明所有选择的shmir敲低wtpabpn1的表达，其中如通过图4(a)的蛋白质印迹的密度计量分析所测定的，抑制百分比>90％。

图5(a)是蛋白质印迹，其显示用编码shmir2、shmir3、shmir5、shmir9、shmir13、shmir14、shmir16或shmir17的shmir质粒转染的hek293t细胞中表达的flag标记的密码子优化的pabpn1蛋白相对于表达的hsp90蛋白的水平。这表明shmir均不导致对密码子优化的pabpn1构建体的表达产物的抑制。

图5(b)举例说明hek293细胞中flag标记的密码子优化的pabpn1蛋白相对于psilencer对照的抑制百分比。该图举例说明，如通过图5(a)的蛋白质印迹的密度计量分析所测定的，shmir均不导致密码子优化的pabpn1构建体的表达产物的抑制。

图6举例说明如通过qpcr分析所测定的，shmir2、shmir3、shmir5、shmir9、shmir13、shmir14、shmir16或shmir17在hek293t细胞中对内源性wtpabpn1表达的抑制百分比。该图举例说明shmir下调wtpabpn1的表达，其中抑制百分比在16.4％至49.1％(平均35.5％)的范围内。

图7举例说明如通过qpcr分析所测定的，c2c12细胞中响应于shmir2、shmir3、shmir5、shmir9、shmir13、shmir14、shmir16或shmir17产生的抑制的内源性pabpn1表达的抑制百分比。该图举例说明除shmir16(约43％的抑制百分比)外，所有单独的shmir相对于psilencer对照在c2c12细胞中下调pabpn1的表达，其中平均抑制百分比为约80％。

图8举例说明如通过qpcr分析所测定的，单独的shmir即shmir13、shmir17、shmir3和shmir14、shmir13与shmir17的组合(shmir13/17)以及shmir3与shmir14的组合(shmir3/14)在c2c12细胞中对pabpn1表达的抑制百分比；该图举例说明shmir13/17共转染导致pabpn1表达的抑制百分比为84.4％，而单独的shmir13和shmir17分别为92.5％和76.7％，以及shmir3/14共转染导致79.0％的抑制百分比，而单独的shmir3和shmir14分别为76.2％和80.4％。

图9举例说明如通过qpcr分析所测定的，单独的shmir13、shmir17、shmir3和shmir14、shmir13与shmir17的组合(shmir13/17)以及shmir3与shmir14的组合(shmir3/14)在arpe-19中对pabpn1表达的抑制百分比。该图举例说明在arpe-19细胞中在48小时与72小时之间pabpn1表达的抑制百分比增加了1.14倍。

图10(a)显示通过qpcr测定在用shmir13、shmir14和shmir17转染的c2c12细胞中表达的shmir的总数而获得的标准曲线。

图10(b)显示通过qpcr测定在用shmir3转染的c2c12细胞中表达的shmir的总数而获得的非线性标准曲线。

图11举例说明用表达所述shmir的shmir载体转导的c2c12细胞中shmir3、shmir13、shmir14和shmir17的表达水平。

图12(a)是举例说明用于同时实现内源性pabpn1的基因沉默和利用密码子优化的pabpn1的替换的构建体的示意图，所述密码子优化的pabpn1是通过将靶向wtpabpn1的两种shmir亚克隆到paav2载体主链中密码子优化的pabpn1转录物的3'非翻译区而产生的。

图12(b)是举例说明用于同时实现内源性pabpn1的基因沉默和利用密码子优化的pabpn1的替换的构建体的示意图，所述密码子优化的pabpn1是通过将靶向wtpabpn1的两种shmir亚克隆到optpabpn1的序列上游而产生的。

图13显示注射aav9-egfp后小鼠肢体内的体内荧光。

图14是举例说明被设计用于同时实现内源性pabpn1的基因沉默和利用密码子优化的pabpn1的替换的sr构建体的示意图，所述密码子优化的pabpn1是通过将靶向wtpabpn1的两种shmir(shmir17和shmir13)亚克隆到paav2载体主链中密码子优化的pabpn1转录物的3'非翻译区而产生的。

图15举例说明用沉默和替换构建体(下文称为“sr构建体”)处理的a17小鼠中pabpn1的抑制百分比，并显示在高剂量和低剂量下均实现对pabpn1的强烈抑制。

图16举例说明利用高剂量和低剂量的sr构建体处理的a17小鼠中经密码子优化的pabpn1相对于野生型pabpn1(包括突变体形式)的表达水平。

图17显示用于来自(i)用盐水处理的a17小鼠、(ii)用盐水处理的fvb小鼠、(iii)利用高剂量和低剂量的sr-构建体处理的a17小鼠的胫骨前肌(ta)肌肉的切片中pabpn1和层粘连蛋白检测的免疫荧光组织化学。利用高剂量和低剂量的sr构建体处理的小鼠的肌肉中pabpn1阳性核内包涵体(ini)的数量均显著减少。

图18举例说明用于来自(i)用盐水处理的a17小鼠、(ii)用盐水处理的fvb小鼠、(iii)利用高剂量和低剂量的sr-构建体处理的a17小鼠的胫骨前肌(ta)肌肉的切片中含ini的细胞核的水平(以百分比表示)。该图举例说明与注射盐水的a17肌肉相比，利用高剂量和低剂量的sr构建体的处理使ini的量降至约10％。

图19显示从(i)用盐水处理的a17小鼠、(ii)用盐水处理的fvb小鼠、(iii)用高剂量和低剂量的sr构建体处理的a17小鼠切取的胫骨前肌(ta)肌肉的重量。该图显示利用高剂量和低剂量的sr构建体的处理使肌肉重量恢复到接近fvb动物的野生型水平。所有肌肉测量均在处死当天、注射后14周或20周时进行。

图20显示了从(i)用盐水处理的a17小鼠、(ii)用盐水处理的fvb小鼠、(iii)利用高剂量和低剂量的sr构建体处理的a17小鼠切取的胫骨前肌(ta)肌肉的等距最大力(isometricmaximalforce)。该图显示利用高剂量和低剂量的sr构建体的处理使在a17小鼠中记录的相对于fvb野生型动物的减小的力量差异恢复大约66％。在处死当天、注射后14周或20周时进行所有肌肉测量。统计显示为相对于a17盐水小鼠的非配对t检验。*p<0.05,**p<0.01。

序列表的注释

seqidno:1:称为pabpn1mrna区域2的对应于pabpn1蛋白的mrna转录物内的区域的rna序列。

seqidno:2:称为pabpn1mrna区域3的对应于pabpn1蛋白的mrna转录物内的区域的rna序列。

seqidno:3:称为pabpn1mrna区域4的对应于pabpn1蛋白的mrna转录物内的区域的rna序列。

seqidno:4:称为pabpn1mrna区域5的对应于pabpn1蛋白的mrna转录物内的区域的rna序列。

seqidno:5:称为pabpn1mrna区域6的对应于pabpn1蛋白的mrna转录物内的区域的rna序列。

seqidno:6:称为pabpn1mrna区域7的对应于pabpn1蛋白的mrna转录物内的区域的rna序列。

seqidno:7:称为pabpn1mrna区域9的对应于pabpn1蛋白的mrna转录物内的区域的rna序列。

seqidno:8:称为pabpn1mrna区域11的对应于pabpn1蛋白的mrna转录物内的区域的rna序列。

seqidno:9:称为pabpn1mrna区域13的对应于pabpn1蛋白的mrna转录物内的区域的rna序列。

seqidno:10:称为pabpn1mrna区域14的对应于pabpn1蛋白的mrna转录物内的区域的rna序列。

seqidno:11:称为pabpn1mrna区域15的对应于pabpn1蛋白的mrna转录物内的区域的rna序列。

seqidno:12:称为pabpn1mrna区域16的对应于pabpn1蛋白的mrna转录物内的区域的rna序列。

seqidno:13:称为pabpn1mrna区域17的对应于pabpn1蛋白的mrna转录物内的区域的rna序列。

seqidno:14:称为shmir2的shmir的rna效应互补序列。

seqidno:15:称为shmir2的shmir的rna效应序列。

seqidno:16:称为shmir3的shmir的rna效应互补序列。

seqidno:17:称为shmir3的shmir的rna效应序列。

seqidno:18:称为shmir4的shmir的rna效应互补序列。

seqidno:19:称为shmir4的shmir的rna效应序列。

seqidno:20:称为shmir5的shmir的rna效应互补序列。

seqidno:21:称为shmir5的shmir的rna效应序列。

seqidno:22:称为shmir6的shmir的rna效应互补序列。

seqidno:23:称为shmir6的shmir的rna效应序列。

seqidno:24:称为shmir7的shmir的rna效应互补序列。

seqidno:25:称为shmir7的shmir的rna效应序列。

seqidno:26:称为shmir9的shmir的rna效应互补序列。

seqidno:27:称为shmir9的shmir的rna效应序列。

seqidno:28:称为shmir11的shmir的rna效应互补序列。

seqidno:29:称为shmir11的shmir的rna效应序列。

seqidno:30:称为shmir13的shmir的rna效应互补序列。

seqidno:31:称为shmir13的shmir的rna效应序列。

seqidno:32:称为shmir14的shmir的rna效应互补序列。

seqidno:33:称为shmir14的shmir的rna效应序列。

seqidno:34:称为shmir15的shmir的rna效应互补序列。

seqidno:35:称为shmir15的shmir的rna效应序列。

seqidno:36:称为shmir16的shmir的rna效应互补序列。

seqidno:37:称为shmir16的shmir的rna效应序列。

seqidno:38:称为shmir17的shmir的rna效应互补序列。

seqidno:39:称为shmir17的shmir的rna效应序列。

seqidno:40:shmir的rna茎环序列

seqidno:41:pri-mirna主链的5’侧翼序列。

seqidno:42:pri-mirna主链的3’侧翼序列。

seqidno:43:称为shmir2的shmir的rna序列。

seqidno:44:称为shmir3的shmir的rna序列。

seqidno:45:称为shmir4的shmir的rna序列。

seqidno:46:称为shmir5的shmir的rna序列。

seqidno:47:称为shmir6的shmir的rna序列。

seqidno:48:称为shmir7的shmir的rna序列。

seqidno:49:称为shmir9的shmir的rna序列。

seqidno:50:称为shmir11的shmir的rna序列。

seqidno:51:称为shmir13的shmir的rna序列。

seqidno:52:称为shmir14的shmir的rna序列。

seqidno:53:称为shmir15的shmir的rna序列。

seqidno:54:称为shmir16的shmir的rna序列。

seqidno:55:称为shmir17的shmir的rna序列。

seqidno:56:编码称为shmir2的shmir的dna序列。

seqidno:57:编码称为shmir3的shmir的dna序列。

seqidno:58:编码称为shmir4的shmir的dna序列。

seqidno:59:编码称为shmir5的shmir的dna序列。

seqidno:60:编码称为shmir6的shmir的dna序列。

seqidno:61:编码称为shmir7的shmir的dna序列。

seqidno:62:编码称为shmir9的shmir的dna序列。

seqidno:63:编码称为shmir11的shmir的dna序列。

seqidno:64:编码称为shmir13的shmir的dna序列。

seqidno:65:编码称为shmir14的shmir的dna序列。

seqidno:66:编码称为shmir15的shmir的dna序列。

seqidno:67:编码称为shmir16的shmir的dna序列。

seqidno:68:编码称为shmir17的shmir的dna序列。

seqidno:69:编码在肌肉特异性ck8启动子控制下的shmir3和shmir14以及在spc512控制下的密码子优化的pabpn1的双重构建体形式1的dna序列

seqidno:70:编码在肌肉特异性ck8启动子控制下的shmir17和shmir13以及在spc512控制下的密码子优化的pabpn1的双重构建体形式1的dna序列

seqidno:71:编码在spc512控制下的copabpn1以及称为shmir3和shmir14的shmir的双重构建体形式2的dna序列。

seqidno:72:编码在spc512控制下的copabpn1以及称为shmir17和shmir13的shmir的双重构建体形式2的dna序列。

seqidno:73人密码子优化的pabpn1cdna序列的dna序列。

seqidno:74密码子优化的人pabpn1蛋白的氨基酸序列。

seqidno:75具有flag标签的野生型人pabpn1蛋白的氨基酸序列。

seqidno:76具有flag标签的密码子优化的人pabpn1蛋白的氨基酸序列。

seqidno:77称为wtpabpn1-fwd的引物的dna序列

seqidno:78称为wtpabpn1-rev的引物的dna序列

seqidno:79称为wtpabpn1-探针的探针的dna序列

seqidno:80称optpabpn1-fwd的引物的dna序列

seqidno:81称为optpabpn1-rev的引物的dna序列

seqidno:82称为optpabpn1-探针的探针的dna序列

seqidno:83称为shmir3-fwd的引物的dna序列

seqidno:84称为shmir13-fwd的引物的dna序列

seqidno:85称为shmir14-fwd的引物的dna序列

seqidno:86称为shmir17-fwd的引物的dna序列

具体实施方式

概述

在整个说明书中，除非另外特别说明或上下文另有要求，否则提及单个步骤、特征、物质组成、步骤的组或特征的组或物质的组成应被视为包括一个和多个(即一个或更多)这些步骤、特征、物质的组成、步骤的组或特征的组或物质的组成。

本领域技术人员将理解，除了具体描述的那些外，本公开易于进行变化和修改。应理解，本公开包括所有此类变化和修改。本公开还包括本说明书中单独或共同地提及或指出的所有步骤、特征、组合物和化合物，以及所述步骤或特征的任何和所有组合或任何两个或更多个。

本公开不限于本文描述的具体实施例限定的范围，所述实施例仅用于举例说明的目的。功能等同的产品、组合物和方法显然在本公开的范围内。

除非另外特别说明，否则本公开中的任何实施例加上必要的变更应当适用于本公开的任何其它实施例。

除非另外特别定义，否则本文使用的所有技术和科学术语应被视为具有与本领域中(例如，在细胞培养、分子遗传学、免疫学、免疫组织化学、蛋白质化学和生物化学中)普通技术人员通常理解的含义相同的含义。

除非另有说明，否则本公开中使用的重组dna、重组蛋白、细胞培养和免疫学技术是本领域技术人员熟知的标准方法。在诸如以下文献的来源中的整个文献中描述并解释了此类技术：j.perbal,apracticalguidetomolecularcloning,johnwiley和sons(1984),j.sambrook等molecularcloning:alaboratorymanual,coldspringharborlaboratorypress(1989),t.a.brown(编辑),essentialmolecularbiology:apracticalapproach，第1和第2卷，irlpress(1991),d.m.glover和b.d.hames(编辑),dnacloning:apracticalapproach，第1-4卷，irlpress(1995和1996)，和f.m.ausubel等(编辑),currentprotocolsinmolecularbiology,greenepub.associatesandwiley-interscience(1988，包括直至目前的所有更新),edharlowanddavidlane(editors)antibodies:alaboratorymanual,coldspringharborlaboratory,(1988)，以及j.e.coligan等(编辑)currentprotocolsinimmunology,johnwiley&sons(包括直至目前的所有更新)。

在整个说明书中，除非上下文另有要求，否则词语“包括(comprise)”或诸如“包含(comprises)”或“包含(comprising)”的变化形式被理解为暗示包括所述步骤或元素或整数或步骤或元素或整数的组，但不排除任何其它步骤或元素或整数或元素或整数的组。

术语“和/或”，例如“x和/或y”应理解为表示“x和y”或“x或y”，并且应被视为对这两种含义或对任一含义提供明确的支持。

选择的定义

“rna”是指包含至少一个核糖核苷酸残基的分子。“核糖核苷酸”是指在β-d-核糖-呋喃糖部分的2'位具有羟基的核苷酸。这些术语包括双链rna、单链rna、分离的rna诸如部分纯化的rna、基本上纯的rna、合成rna、重组产生的rna以及通过一个或多个核苷酸和添加、缺失、取代和/或改变而不同于天然存在的rna的改变的rna。此类改变可包括非核苷酸材料诸如至sina的一个或两个末端或内部(例如在rna的一个或多个核苷酸处)的添加。本公开的rna分子中的核苷酸还可包含非标准核苷酸，诸如非天然存在的核苷酸或化学合成的核苷酸或脱氧核苷酸。这些改变的rna可以称为天然存在的rna的一种或多种类似物。

术语“rna干扰”或“rnai”通常是指由细胞的细胞质中的双链rna(dsrna)分子引发的基因表达的rna依赖性沉默。dsrna分子减少或抑制靶核酸序列的转录产物，从而使基因沉默或减少该基因的表达。

如本文中所用，术语“双链rna”或“dsrna”是指具有双链体结构并且包含彼此具有相似长度的效应序列和效应互补序列的rna分子。效应序列和效应互补序列可以在单个rna链中或在单独的rna链中。“效应序列”(通常称为“引导链”)与靶序列互补基本上，在本情况下，所述靶序列是pabpn1mrna转录物的区域。“效应序列”也可以称为“反义序列”。“效应互补序列”将与效应序列充分互补，使得它可以与效应序列退火以形成双链体。在这方面，效应互补序列将与靶序列的区域基本同源。对于技术人员显而易见的是，术语“效应互补序列”也可以称为“效应序列的互补序列”或有义序列。

如本文中所用，术语“双链体”是指两个互补或基本上互补的核酸(例如，rna)中或单链核酸(例如，rna)的两个互补或基本上互补的区域中的彼此形成(通过watson-crick碱基配对或允许在互补或基本互补的核苷酸序列之间形成稳定的双链体的任何其它方式)碱基配对的区域。本领域技术人员将理解，在双链体区域内，不需要100％的互补性；实质互补性是可容许的。实质互补性可包括79％或更高的互补性。例如，由19个碱基对组成的双链体区域中的单个错配(即，18个碱基对和一个错配)产生94.7％的互补性，使得双链体区域基本上互补。在另一个实例中，由19个碱基对组成的双链体区域中的两个错配(即，17个碱基对和2个错配)产生89.5％的互补性，使得双链体区域基本上互补。在另一个实例中，由19个碱基对组成的双链体区域中的三个错配(即，16个碱基对和3个错配)产生84.2％的互补性，使得双链体区域基本上互补，等等。

dsrna可以发夹或茎环结构提供，其中双链体区域由通过称为茎环的至少2个核苷酸序列连接的效应序列和效应互补序列组成。当dsrna作为发夹或茎环结构提供时，其可被称为“发夹rna”或“短发夹rnai剂”或“shrna”。发夹或茎环结构中提供的或产生发夹或茎环结构的其它dsrna分子包括一级mirna转录物(pri-mirna)和前体微rna(pre-mirna)。pre-mirnashrna可以通过酶drosha和pasha的作用从pri-mirna天然产生，所述酶识别并释放形成茎-环结构的一级mirna转录物的区域。或者，可对pri-mirna转录物进行工程改造以用人工/重组茎-环结构代替天然茎-环结构。也就是说，可以将人工/重组茎-环结构插入或克隆到缺乏其天然茎-环结构的pri-mirna主链序列中。在经工程改造以作为pri-mirna分子的一部分表达的茎环序列的情况下，drosha和pasha识别并释放人工shrna。使用该方法产生的dsrna分子被称为“shmirna”、“shmir”或“微rna框架shrna”。

如本文中所用，关于序列的术语“互补的”是指通过watson-crick碱基配对的序列的互补序列，其中鸟嘌呤(g)与胞嘧啶(c)配对、腺嘌呤(a)与尿嘧啶(u)或胸腺嘧啶(t)配对。序列可以与另一序列的整个长度互补，或者其可以与另一序列的指定部分或长度互补。本领域技术人员将认识到u可以存在于rna中，并且t可以存在于dna中。因此，rna或dna序列内的a可以与rna序列中的u或dna序列中的t配对。

如本文中所用，术语“基本上互补的”用于表示足够程度的互补性或精确配对，使得在核酸序列之间(例如在效应序列与效应互补序列之间或在效应序列与靶序列之间)发生稳定和特异性结合。应理解，核酸的序列不需要与其靶标或互补序列的序列100％互补。该术语包括除悬突外与另一个序列互补的序列。在一些情况下，除1-2个错配外，序列与另一序列互补。在一些情况下，除1个错配外，序列是互补的。在一些情况下，除2个错配外，序列是互补的。在一些情况下，除3个错配外，序列是互补的。在一些情况下，除4个错配外，序列是互补的。

如在本公开的shrna或shmir的上下文中所用，术语“编码的”应理解为意指能够从dna模板转录的shrna或shmir。因此，编码或编码本公开的shrna或shmir的核酸将包含dna序列，其用作各自shrna或shmir的转录模板。

术语“dna介导的rnai构建体”或“ddrnai构建体”是指包含dna序列的核酸，所述dna序列在转录时产生引发rnai的shrna或shmir分子(优选shmir)。ddrnai构建体可包含核酸，所述核酸被转录为能够自我退火成具有通过至少2个核苷酸的茎环连接的双链体区域的发夹结构的单个rna(即shrna或shmir)，或者转录为具有多个shrna或shmir的单个rna，或者转录为多个rna转录物，每个转录物都能够分别折叠为单个shrna或shmir。可在包含一个或多个另外的dna序列的较大“dna构建体”内提供ddrnai构建体。例如，可以在dna构建体中提供ddrnai构建体，所述dna构建体包含编码功能性pabpn1蛋白的另外的dna序列，所述功能性pabpn1蛋白已被密码子优化，使得其mrna转录物不被ddrnai构建体的shmir靶向。ddrnai构建体和/或包含其的dna构建体可以在表达载体内，例如，与启动子可操作地连接。

如本文中所用，术语“可操作地连接的”或“可操作的连接”(或类似术语)意指编码核酸序列以有利于编码序列表达的方式与调控序列(例如启动子)连接或缔合。调控序列包括启动子、增强子和本领域公认的并被选择来指导编码序列的表达的其它表达控制元件。

“载体”应理解为意指用于将核酸引入细胞的媒介物。载体包括但不限于质粒、噬菌粒、病毒、细菌和源自病毒或细菌来源的媒介物。“质粒”是环状双链dna分子。根据本公容使用的有用类型的载体是病毒载体，其中将异源dna序列插入可被修饰以缺失一个或多个病毒基因或其部分的病毒基因组中。某些载体能够在宿主细胞中自主复制(例如，具有在宿主细胞中起作用的复制起点的载体)。其它载体可被稳定地整合到宿主细胞的基因组中，从而与宿主基因组一起复制。如本文中所用，术语“表达载体”应理解为意指能够表达本公开的rna分子的载体。

“功能性pabpn1蛋白”应理解为意指具有野生型pabpn1蛋白功能特性(例如控制哺乳动物细胞中mrna多聚腺苷酸化和/或内含子剪接的能力)的pabpn1蛋白。因此，“功能性pabpn1蛋白”应被理解为当在受试者中表达或存在时不导致opmd的pabpn1蛋白。在一个实例中，本文提及的“功能性pabpn1蛋白”是指人野生型pabpn1蛋白。人野生型pabpn1蛋白的序列示于ncbirefseqnp_004634中。因此，功能性人pabpn1蛋白可具有ncbirefseqnp_004634中所示的人pabpn1蛋白的体内功能特性。

如本文中所用，术语“治疗(treating)”、“治疗(treat)”或“治疗(treatment)”及其变化形式是指被设计来改变临床病理学过程中所治疗的个体或细胞的自然进程的临床干预。理想的治疗效果包括降低疾病进展速度，改善或缓解疾病状态，以及缓解或改善预后。因此，opmd的治疗包括减少或抑制导致受试者的opmd的pabpn1蛋白的表达和/或在受试者中表达具有正常长度的聚丙氨酸残基的pabpn1蛋白。优选地，opmd的治疗包括减少或抑制导致受试者的opmd的pabpn1蛋白的表达以及在受试者中表达具有正常长度的聚丙氨酸残基的pabpn1蛋白。例如，如果实现上述治疗结果中的一种或多种，则成功地“治疗”了个体。

“治疗有效量”至少是实现opmd疾患的可测量改善(诸如opmd的一种或多种症状(例如包括但不限于受试者的上睑下垂、吞咽困难和肌无力)的可测量的改善)所需的最低浓度或量。本文中的治疗有效量可根据因素诸如疾病状态、患者的年龄、性别和体重以及shmir、编码其的核酸、ddrnai构建体、dna构建体、表达载体或包含所述核酸、ddrnai构建体、dna构建体、表达载体的组合物在个体中引发所需反应的能力和/或表达载体在受试者中表达功能性pabpn1蛋白的能力而变化。治疗有效量也是其中shmir、编码其的核酸、ddrnai构建体、dna构建体、表达载体或包含所述shmir、编码其的核酸、ddrnai构建体、dna构建体、表达载体的组合物抑制、压制或减少导致opmd的pabpn1蛋白表达的治疗有益效果(单独考虑的或与功能性pabpn1蛋白在受试者中表达的治疗有益效果一起考虑的)超过shmir、编码其的核酸、ddrnai构建体、dna构建体、表达载体或包含所述shmir、编码其的核酸、ddrnai构建体、dna构建体、表达载体的组合物的任何毒性或有害作用的量。

如本文中所用，“受试者”或“患者”可以是患有opmd或在遗传上对opmd易感的人或非人动物，即具有导致opmd的pabpn1基因变体。“非人类动物”可以是灵长类动物、牲畜(例如绵羊、马、牛、猪、驴)、伴侣动物(例如宠物，诸如狗和猫)、实验室试验动物(例如小鼠、兔、大鼠、豚鼠、果蝇、秀丽隐杆线虫、斑马鱼)、表演动物(例如赛马、骆驼、灰狗)或圈养野生动物。在一个实例中，受试者或患者是哺乳动物。在一个实例中，受试者或患者是人。

术语“减少的表达”、“表达的减少”或类似术语是指来自靶基因(例如pabpn1基因)的蛋白质和/或mrna产物的不存在或可观察到的水平降低。减少不一定是绝对的，但可以是足以使因通过本公开的shmir、编码其的核酸、ddrnai构建体、dna构建体、表达载体或包含所述shmir、编码其的核酸、ddrnai构建体、dna构建体、表达载体的组合物实现的rnai而导致的变化为可检测或可观察的部分减少。可通过测定来自靶核酸的mrna和/或蛋白质产物的水平相对于缺乏shmir、编码其的核酸、ddrnai构建体、dna构建体、表达载体或包含shmir、编码其的核酸、ddrnai构建体、dna构建体、表达载体的组合物的细胞的降低来测量减少，并且所述减少可小至1％、5％或10％，或者可以是绝对的，即100％抑制。减少的效果可通过检查外部特性，即细胞或生物体的定量和/或定性表型来确定，并且还可包括在施用本公开的shmir、编码其的核酸、ddrnai构建体、dna构建体、表达载体或包含shmir、编码其的核酸、ddrnai构建体、dna构建体、表达载体的组合物后检测细胞或生物体中exppabpn1的核聚集体的存在或量的变化。

用于rnai的剂

在一个实例中，本公开提供了包含编码短发夹微rna(shmir)的dna序列的核酸，所述shmir包含：

长度至少为17个核苷酸的效应序列；

效应互补序列；

茎环序列；以及

一级微rna(pri-mirna)主链；

其中所述效应序列与seqidno:1-13中的任一个中所示的rna转录物中相应长度的区域基本上互补。优选地，效应序列的长度少于30个核苷酸。例如，合适的效应序列的长度可在17至29个核苷酸的范围内。在特别优选的实例中，效应序列的长度为21个核苷酸。更优选地，效应序列的长度为21个核苷酸，并且效应互补序列的长度为20个核苷酸。

在一个实例中，shmir包含与rna转录物中相应长度的区域基本上互补的效应序列，所述rna转录物包含seqidno:1中所示的序列或由所述序列组成。例如，效应序列可以与rna转录物中相应长度的区域基本上互补并且相对于其包含4个错配碱基，所述rna转录物包含seqidno:1中所示的序列或由所述序列组成。例如，效应序列可以与rna转录物中相应长度的区域基本上互补并且相对于其包含3个错配碱基，所述rna转录物包含seqidno:1中所示的序列或由所述序列组成。例如，效应序列可以与rna转录物中相应长度的区域基本上互补并且相对于其包含2个错配碱基，所述rna转录物包含seqidno:1中所示的序列或由所述序列组成。例如，效应序列可以与rna转录物中相应长度的区域基本上互补并且相对于其包含1个错配碱基，所述rna转录物包含seqidno:1中所示的序列或由所述序列组成。例如，效应序列可以与rna转录物中相应长度的区域100％互补，所述rna转录物包含seqidno:1中所示的序列或由所述序列组成。

在一个实例中，shmir包含与rna转录物中相应长度的区域基本上互补的效应序列，所述rna转录物包含seqidno:2中所示的序列或由所述序列组成。例如，效应序列可以与rna转录物中相应长度的区域基本上互补并且相对于其包含4个错配碱基，所述rna转录物包含seqidno:2中所示的序列或由所述序列组成。例如，效应序列可以与rna转录物中相应长度的区域基本上互补并且相对于其包含3个错配碱基，所述rna转录物包含seqidno:2中所示的序列或由所述序列组成。例如，效应序列可以与rna转录物中相应长度的区域基本上互补并且相对于其包含2个错配碱基，所述rna转录物包含seqidno:2中所示的序列或由所述序列组成。例如，效应序列可以与rna转录物中相应长度的区域基本上互补并且相对于其包含1个错配碱基，所述rna转录物包含seqidno:2中所示的序列或由所述序列组成。例如，效应序列可以与rna转录物中相应长度的区域100％互补，所述rna转录物包含seqidno:2中所示的序列或由所述序列组成。

在一个实例中，shmir包含与rna转录物中相应长度的区域基本上互补的效应序列，所述rna转录物包含seqidno:3中所示的序列或由所述序列组成。例如，效应序列可以与rna转录物中相应长度的区域基本上互补并且相对于其包含4个错配碱基，所述rna转录物包含seqidno:3中所示的序列或由所述序列组成。例如，效应序列可以与rna转录物中相应长度的区域基本上互补并且相对于其包含3个错配碱基，所述rna转录物包含seqidno:3中所示的序列或由所述序列组成。例如，效应序列可以与rna转录物中相应长度的区域基本上互补并且相对于其包含2个错配碱基，所述rna转录物包含seqidno:3中所示的序列或由所述序列组成。例如，效应序列可以与rna转录物中相应长度的区域基本上互补并且相对于其包含1个错配碱基，所述rna转录物包含seqidno:3中所示的序列或由所述序列组成。例如，效应序列可以与rna转录物中相应长度的区域100％互补，所述rna转录物包含seqidno:3中所示的序列或由所述序列组成。

在一个实例中，shmir包含与rna转录物中相应长度的区域基本上互补的效应序列，所述rna转录物包含seqidno:4中所示的序列或由所述序列组成。例如，效应序列可以与rna转录物中相应长度的区域基本上互补并且相对于其包含4个错配碱基，所述rna转录物包含seqidno:4中所示的序列或由所述序列组成。例如，效应序列可以与rna转录物中相应长度的区域基本上互补并且相对于其包含3个错配碱基，所述rna转录物包含seqidno:4中所示的序列或由所述序列组成。例如，效应序列可以与rna转录物中相应长度的区域基本上互补并且相对于其包含2个错配碱基，所述rna转录物包含seqidno:4中所示的序列或由所述序列组成。例如，效应序列可以与rna转录物中相应长度的区域基本上互补并且相对于其包含1个错配碱基，所述rna转录物包含seqidno:4中所示的序列或由所述序列组成。例如，效应序列可以与rna转录物中相应长度的区域100％互补，所述rna转录物包含seqidno:4中所示的序列或由所述序列组成。

在一个实例中，shmir包含与rna转录物中相应长度的区域基本上互补的效应序列，所述rna转录物包含seqidno:5中所示的序列或由所述序列组成。例如，效应序列可以与rna转录物中相应长度的区域基本上互补并且相对于其包含4个错配碱基，所述rna转录物包含seqidno:5中所示的序列或由所述序列组成。例如，效应序列可以与rna转录物中相应长度的区域基本上互补并且相对于其包含3个错配碱基，所述rna转录物包含seqidno:5中所示的序列或由所述序列组成。例如，效应序列可以与rna转录物中相应长度的区域基本上互补并且相对于其包含2个错配碱基，所述rna转录物包含seqidno:5中所示的序列或由所述序列组成。例如，效应序列可以与rna转录物中相应长度的区域基本上互补并且相对于其包含1个错配碱基，所述rna转录物包含seqidno:5中所示的序列或由所述序列组成。例如，效应序列可以与rna转录物中相应长度的区域100％互补，所述rna转录物包含seqidno:5中所示的序列或由所述序列组成。

在一个实例中，shmir包含与rna转录物中相应长度的区域基本上互补的效应序列，所述rna转录物包含seqidno:6中所示的序列或由所述序列组成。例如，效应序列可以与rna转录物中相应长度的区域基本上互补并且相对于其包含4个错配碱基，所述rna转录物包含seqidno:6中所示的序列或由所述序列组成。例如，效应序列可以与rna转录物中相应长度的区域基本上互补并且相对于其包含3个错配碱基，所述rna转录物包含seqidno:6中所示的序列或由所述序列组成。例如，效应序列可以与rna转录物中相应长度的区域基本上互补并且相对于其包含2个错配碱基，所述rna转录物包含seqidno:6中所示的序列或由所述序列组成。例如，效应序列可以与rna转录物中相应长度的区域基本上互补并且相对于其包含1个错配碱基，所述rna转录物包含seqidno:6中所示的序列或由所述序列组成。例如，效应序列可以与rna转录物中相应长度的区域100％互补，所述rna转录物包含seqidno:6中所示的序列或由所述序列组成。

在一个实例中，shmir包含效应序列，其与包含seqidno:7中所示的序列或由所述序列组成的rna转录物中相应长度的区域基本上互补。例如，效应序列可以与rna转录物中相应长度的区域基本上互补并且相对于其包含4个错配碱基，所述rna转录物包含seqidno:7中所示的序列或由所述序列组成。例如，效应序列可以与rna转录物中相应长度的区域基本上互补并且相对于其包含3个错配碱基，所述rna转录物包含seqidno:7中所示的序列或由所述序列组成。例如，效应序列可以与rna转录物中相应长度的区域基本上互补并且相对于其包含2个错配碱基，所述rna转录物包含seqidno:7中所示的序列或由所述序列组成。例如，效应序列可以与rna转录物中相应长度的区域基本上互补并且相对于其包含1个错配碱基，所述rna转录物包含seqidno:7中所示的序列或由所述序列组成。例如，效应序列可以与rna转录物中相应长度的区域100％互补，所述rna转录物包含seqidno:7中所示的序列或由所述序列组成。

在一个实例中，shmir包含与rna转录物中相应长度的区域基本上互补的效应序列，所述rna转录物包含seqidno:8中所示的序列或由所述序列组成。例如，效应序列可以与rna转录物中相应长度的区域基本上互补并且相对于其包含4个错配碱基，所述rna转录物包含seqidno:8中所示的序列或由所述序列组成。例如，效应序列可以与rna转录物中相应长度的区域基本上互补并且相对于其包含3个错配碱基，所述rna转录物包含seqidno:8中所示的序列或由所述序列组成。例如，效应序列可以与rna转录物中相应长度的区域基本上互补并且相对于其包含2个错配碱基，所述rna转录物包含seqidno:8中所示的序列或由所述序列组成。例如，效应序列可以与rna转录物中相应长度的区域基本上互补并且相对于其包含1个错配碱基，所述rna转录物包含seqidno:8中所示的序列或由所述序列组成。例如，效应序列可以与rna转录物中相应长度的区域100％互补，所述rna转录物包含seqidno:8中所示的序列或由所述序列组成。

在一个实例中，shmir包含与rna转录物中相应长度的区域基本上互补的效应序列，所述rna转录物包含seqidno:9中所示的序列或由所述序列组成。例如，效应序列可以与rna转录物中相应长度的区域基本上互补并且相对于其包含4个错配碱基，所述rna转录物包含seqidno:9中所示的序列或由所述序列组成。例如，效应序列可以与rna转录物中相应长度的区域基本上互补并且相对于其包含3个错配碱基，所述rna转录物包含seqidno:9中所示的序列或由所述序列组成。例如，效应序列可以与rna转录物中相应长度的区域基本上互补并且相对于其包含2个错配碱基，所述rna转录物包含seqidno:9中所示的序列或由所述序列组成。例如，效应序列可以与rna转录物中相应长度的区域基本上互补并且相对于其包含1个错配碱基，所述rna转录物包含seqidno:9中所示的序列或由所述序列组成。例如，效应序列可以与rna转录物中相应长度的区域100％互补，所述rna转录物包含seqidno:9中所示的序列或由所述序列组成。

在一个实例中，shmir包含与rna转录物中相应长度的区域基本上互补的效应序列，所述rna转录物包含seqidno:10中所示的序列或由所述序列组成。例如，效应序列可以与rna转录物中相应长度的区域基本上互补并且相对于其包含4个错配碱基，所述rna转录物包含seqidno:10中所示的序列或由所述序列组成。例如，效应序列可以与rna转录物中相应长度的区域基本上互补并且相对于其包含3个错配碱基，所述rna转录物包含seqidno:10中所示的序列或由所述序列组成。例如，效应序列可以与rna转录物中相应长度的区域基本上互补并且相对于其包含2个错配碱基，所述rna转录物包含seqidno:10中所示的序列或由所述序列组成。例如，效应序列可以与rna转录物中相应长度的区域基本上互补并且相对于其包含1个错配碱基，所述rna转录物包含seqidno:10中所示的序列或由所述序列组成。例如，效应序列可以与rna转录物中相应长度的区域100％互补，所述rna转录物包含seqidno:10中所示的序列或由所述序列组成。

在一个实例中，shmir包含与rna转录物中相应长度的区域基本上互补的效应序列，所述rna转录物包含seqidno:11中所示的序列或由所述序列组成。例如，效应序列可以与rna转录物中相应长度的区域基本上互补并且相对于其包含4个错配碱基，所述rna转录物包含seqidno:11中所示的序列或由所述序列组成。例如，效应序列可以与rna转录物中相应长度的区域基本上互补并且相对于其包含3个错配碱基，所述rna转录物包含seqidno:11中所示的序列或由所述序列组成。例如，效应序列可以与rna转录物中相应长度的区域基本上互补并且相对于其包含2个错配碱基，所述rna转录物包含seqidno:11中所示的序列或由所述序列组成。例如，效应序列可以与rna转录物中相应长度的区域基本上互补并且相对于其包含1个错配碱基，所述rna转录物包含seqidno:11中所示的序列或由所述序列组成。例如，效应序列可以与rna转录物中相应长度的区域100％互补，所述rna转录物包含seqidno:11中所示的序列或由所述序列组成。

在一个实例中，shmir包含与rna转录物中相应长度的区域基本上互补的效应序列，所述rna转录物包含seqidno:12中所示的序列或由所述序列组成。例如，效应序列可以与rna转录物中相应长度的区域基本上互补并且相对于其包含4个错配碱基，所述rna转录物包含seqidno:12中所示的序列或由所述序列组成。例如，效应序列可以与rna转录物中相应长度的区域基本上互补并且相对于其包含3个错配碱基，所述rna转录物包含seqidno:12中所示的序列或由所述序列组成。例如，效应序列可以与rna转录物中相应长度的区域基本上互补并且相对于其包含2个错配碱基，所述rna转录物包含seqidno:12中所示的序列或由所述序列组成。例如，效应序列可以与rna转录物中相应长度的区域基本上互补并且相对于其包含1个错配碱基，所述rna转录物包含seqidno:12中所示的序列或由所述序列组成。例如，效应序列可以与rna转录物中相应长度的区域100％互补，所述rna转录物包含seqidno:12中所示的序列或由所述序列组成。

在一个实例中，shmir包含与rna转录物中相应长度的区域基本上互补的效应序列，所述rna转录物包含seqidno:13中所示的序列或由所述序列组成。例如，效应序列可以与rna转录物中相应长度的区域基本上互补并且相对于其包含4个错配碱基，所述rna转录物包含seqidno:13中所示的序列或由所述序列组成。例如，效应序列可以与rna转录物中相应长度的区域基本上互补并且相对于其包含3个错配碱基，所述rna转录物包含seqidno:13中所示的序列或由所述序列组成。例如，效应序列可以与rna转录物中相应长度的区域基本上互补并且相对于其包含2个错配碱基，所述rna转录物包含seqidno:13中所示的序列或由所述序列组成。例如，效应序列可以与rna转录物中相应长度的区域基本上互补并且相对于其包含1个错配碱基，所述rna转录物包含seqidno:13中所示的序列或由所述序列组成。例如，效应序列可以与rna转录物中相应长度的区域100％互补，所述rna转录物包含seqidno:13中所示的序列或由所述序列组成。

根据其中本公开的shmir的效应序列与本文所述的pabpn1mirna转录物中的相应长度的区域基本上互补并且相对于其包含1个、2个、3个或4个错配碱基的实例，优选的是，所述一个或多个错配不位于对应于shmir的种子区域的区域(即效应序列的核苷酸2-8)内。

在一个实例中，本文所述的核酸可包含编码shmir的dna序列，所述shmir包含：(i)除了1个、2个、3个或4个碱基错配外与seqidno:14中所示的序列基本上互补的效应序列，条件是所述效应序列能够与seqidno:14中所示的序列形成双链体；以及(ii)包含与所述效应序列基本上互补的序列的效应互补序列。例如，由核酸编码的shmir可包含seqidno:15中所示的效应序列和与seqidno:15中所示的序列基本上互补并能够与其形成双链体的效应互补序列。与seqidno:15中所示序列基本上互补的效应互补序列可以是seqidno:14中所示的序列。根据该实例的shmir在下文中被称为“shmir2”。

在一个实例中，本文所述的核酸可包含编码shmir的dna序列，所述shmir包含：(i)除了1个、2个、3个或4个碱基错配外与seqidno:16中所示的序列基本上互补的效应序列，条件是所述效应序列能够与seqidno:16中所示的序列形成双链体；以及(ii)包含与所述效应序列基本上互补的序列的效应互补序列。例如，由核酸编码的shmir可包含seqidno:17中所示的效应序列和与seqidno:17中所示的序列基本上互补并能够与其形成双链体的效应互补序列。与seqidno:17中所示的序列基本上互补的效应互补序列可以是seqidno:16中所示的序列。根据本实例的shmir在下文中称为“shmir3”。

在一个实例中，本文所述的核酸可包含编码shmir的dna序列，所述shmir包含：(i)除了1个、2个、3个或4个碱基错配外与seqidno:18中所示的序列基本上互补的效应序列，条件是所述效应序列能够与seqidno:18中所示的序列形成双链体；以及(ii)包含与所述效应序列基本上互补的序列的效应互补序列。例如，由核酸编码的shmir可包含seqidno:19中所示的效应序列和与seqidno:19中所示的序列基本上互补并能够与其形成双链体的效应互补序列。与seqidno:19中所示的序列基本上互补的效应互补序列可以是seqidno:18中所示的序列。根据该实例的shmir在下文中被称为“shmir4”。

在一个实例中，本文所述的核酸可包含编码shmir的dna序列，所述shmir包含：(i)除了1个、2个、3个或4个碱基错配外与seqidno:20中所示的序列基本上互补的效应序列，条件是所述效应序列能够与seqidno:20中所示的序列形成双链体；以及(ii)包含与所述效应序列基本上互补的序列的效应互补序列。例如，由核酸编码的shmir可包含seqidno:21中所示的效应序列和与seqidno:21中所示的序列基本上互补并能够与其形成双链体的效应互补序列。与seqidno:21中所示的序列基本上互补的效应互补序列可以是seqidno:20中所示的序列。根据该实例的shmir在下文中被称为“shmir5”。

在一个实例中，本文所述的核酸可包含编码shmir的dna序列，所述shmir包含：(i)除了1个、2个、3个或4个碱基错配外与seqidno:22中所示的序列基本上互补的效应序列，条件是所述效应序列能够与seqidno:22中所示的序列形成双链体；以及(ii)包含与所述效应序列基本上互补的序列的效应互补序列。例如，由核酸编码的shmir可包含seqidno:23中所示的效应序列和与seqidno:23中所示的序列基本上互补并能够与其形成双链体的效应互补序列。与seqidno:23中所示的序列基本上互补的效应互补序列可以是seqidno:22中所示的序列。根据该实例的shmir在下文中被称为“shmir6”。

在一个实例中，本文所述的核酸可包含编码shmir的dna序列，所述shmir包含：(i)除了1个、2个、3个或4个碱基错配外与seqidno:24中所示的序列基本上互补的效应序列，条件是所述效应序列能够与seqidno:24中所示的序列形成双链体；以及(ii)包含与所述效应序列基本上互补的序列的效应互补序列。例如，由核酸编码的shmir可包含seqidno:25中所示的效应序列和与seqidno:25中所示的序列基本上互补并能够与其形成双链体的效应互补序列。与seqidno:25中所示的序列基本上互补的效应互补序列可以是seqidno:24中所示的序列。根据该实例的shmir在下文中被称为“shmir7”。

在一个实例中，本文所述的核酸可包含编码shmir的dna序列，所述shmir包含：(i)除了1个、2个、3个或4个碱基错配外与seqidno:26中所示的序列基本上互补的效应序列，条件是所述效应序列能够与seqidno:26中所示的序列形成双链体；以及(ii)包含与所述效应序列基本上互补的序列的效应互补序列。例如，由核酸编码的shmir可包含seqidno:27中所示的效应序列和与seqidno:27中所示的序列基本上互补并能够与其形成双链体的效应互补序列。与seqidno:27中所示的序列基本上互补的效应互补序列可以是seqidno:26中所示的序列。根据该实例的shmir在下文中被称为“shmir9”。

在一个实例中，本文所述的核酸可包含编码shmir的dna序列，所述shmir包含：(i)除了1个、2个、3个或4个碱基错配外与seqidno:28中所示的序列基本上互补的效应序列，条件是所述效应序列能够与seqidno:28中所示的序列形成双链体；以及(ii)包含与所述效应序列基本上互补的序列的效应互补序列。例如，由核酸编码的shmir可包含seqidno:29中所示的效应序列和与seqidno:29中所示的序列基本上互补并能够与其形成双链体的效应互补序列。与seqidno:29中所示的序列基本上互补的效应互补序列可以是seqidno:28中所示的序列。根据该实例的shmir在下文中称为“shmir11”。

在一个实例中，本文所述的核酸可包含编码shmir的dna序列，所述shmir包含：(i)除了1个、2个、3个或4个碱基错配外与seqidno:30中所示的序列基本上互补的效应序列，条件是所述效应序列能够与seqidno:30中所示的序列形成双链体；以及(ii)包含与所述效应序列基本上互补的序列的效应互补序列。例如，由核酸编码的shmir可包含seqidno:31中所示的效应序列和与seqidno:31中所示的序列基本上互补并能够与其形成双链体的效应互补序列。与seqidno:31中所示的序列基本上互补的效应互补序列可以是seqidno:30中所示的序列。根据该实例的shmir在下文中被称为“shmir13”。

在一个实例中，本文所述的核酸可包含编码shmir的dna序列，所述shmir包含：(i)除了1个、2个、3个或4个碱基错配外与seqidno:32中所示的序列基本上互补的效应序列，条件是所述效应序列能够与seqidno:32中所示的序列形成双链体；以及(ii)包含与所述效应序列基本上互补的序列的效应互补序列。例如，由核酸编码的shmir可包含seqidno:33中所示的效应序列和与seqidno:33中所示的序列基本上互补并能够与其形成双链体的效应互补序列。与seqidno:33中所示的序列基本上互补的效应互补序列可以是seqidno:32中所示的序列。根据该实例的shmir在下文中被称为“shmir14”。

在一个实例中，本文所述的核酸可包含编码shmir的dna序列，所述shmir包含：(i)除了1个、2个、3个或4个碱基错配外与seqidno:34中所示的序列基本上互补的效应序列，条件是所述效应序列能够与seqidno:34中所示的序列形成双链体；以及(ii)包含与所述效应序列基本上互补的序列的效应互补序列。例如，由核酸编码的shmir可包含seqidno:35中所示的效应序列和与seqidno:35中所示的序列基本上互补并能够与其形成双链体的效应互补序列。与seqidno:35中所示的序列基本上互补的效应互补序列可以是seqidno:34中所示的序列。根据该实例的shmir在下文中被称为“shmir15”。

在一个实例中，本文所述的核酸可包含编码shmir的dna序列，所述shmir包含：(i)除了1个、2个、3个或4个碱基错配外与seqidno:36中所示的序列基本上互补的效应序列，条件是所述效应序列能够与seqidno:36中所示的序列形成双链体；以及(ii)包含与所述效应序列基本上互补的序列的效应互补序列。例如，由核酸编码的shmir可包含seqidno:37中所示的效应序列和与seqidno:37中所示的序列基本上互补并能够与其形成双链体的效应互补序列。与seqidno:37中所示的序列基本上互补的效应互补序列可以是seqidno:36中所示的序列。根据该实例的shmir在下文中被称为“shmir16”。

在一个实例中，本文所述的核酸可包含编码shmir的dna序列，所述shmir包含：(i)除了1个、2个、3个或4个碱基错配外与seqidno:38中所示的序列基本上互补的效应序列，条件是所述效应序列能够与seqidno:38中所示的序列形成双链体；以及(ii)包含与所述效应序列基本上互补的序列的效应互补序列。例如，由核酸编码的shmir可包含seqidno:39中所示的效应序列和与seqidno:39中所示的序列基本上互补并能够与其形成双链体的效应互补序列。与seqidno:39中所示的序列基本上互补的效应互补序列可以是seqidno:38中所示的序列。根据该实例的shmir在下文中被称为“shmir17”。

在任何本文所述的实例中，由本公开的核酸编码的shmir可以在5’至3’方向上包含：

pri-mirna主链的5’侧翼序列；

效应互补序列；

茎环序列；

效应序列；以及

pri-mirna主链的3’侧翼序列。

在任何本文所述的实例中，由本公开的核酸编码的shmir可以在5’至3’方向上包含：

pri-mirna主链的5’侧翼序列；

效应序列；

茎环序列；

效应互补序列；以及

pri-mirna主链的3’侧翼序列。

合适的环序列可选自本领域已知的那些环序列。然而，示例性茎环序列示于seqidno:40中。

用于本公开的核酸的合适的一级微rna(pri-mirna或pri-r)主链可选自本领域已知的那些一级微rna主链。例如，pri-mirna主链可以选自pri-mir-30a主链、pri-mir-155主链、pri-mir-21主链和pri-mir-136主链。然而，优选地，pri-mirna主链为pri-mir-30a主链。根据其中pri-mirna主链为pri-mir-30a主链的实例，pri-mirna主链的5'侧翼序列示于seqidno:41中，并且pri-mirna主链的3'侧翼序列示于seqidno:42中。因此，编码本公开的shmir(例如，本文所述的shmir-1至shmir-16)的核酸可包含编码seqidno:41中所示的序列的dna序列和编码seqidno:42中所示的序列的dna序列。

在一个实例中，本文所述的核酸可包含选自seqidno:56-68中的任一个中所示的序列的dna序列。

在一个实例中，本文所述的核酸包含seqidno:56中所示的dna序列或由所述dna序列组成，并且编码包含seqidno:43中所示的序列或由所述序列组成的shmir(shmir2)。

在一个实例中，本文所述的核酸包含seqidno:57中所示的dna序列或由所述dna序列组成，并且编码包含seqidno:44中所示的序列或由所述序列组成的shmir(shmir3)。

在一个实例中，本文所述的核酸包含seqidno:58中所示的dna序列或由所述dna序列组成，并且编码包含seqidno:45中所示的序列或由所述序列组成的shmir(shmir4)。

在一个实例中，本文所述的核酸包含seqidno:59中所示的dna序列或由所述dna序列组成，并且编码包含seqidno:46中所示的序列或由所述序列组成的shmir(shmir5)。

在一个实例中，本文所述的核酸包含seqidno:60中所示的dna序列或由所述dna序列组成，并且编码包含seqidno:47中所示的序列或由所述序列组成的shmir(shmir6)。

在一个实例中，本文所述的核酸包含seqidno:61中所示的dna序列或由所述dna序列组成，并且编码包含seqidno:48中所示的序列或由所述序列组成的shmir(shmir7)。

在一个实例中，本文所述的核酸包含seqidno:62中所示的dna序列或由所述dna序列组成，并且编码包含seqidno:49中所示的序列或由所述序列组成的shmir(shmir9)。

在一个实例中，本文所述的核酸包含seqidno:63中所示的dna序列或由所述dna序列组成，并且编码包含seqidno:50中所示的序列或由所述序列组成的shmir(shmir11)。

在一个实例中，本文所述的核酸包含seqidno:64中所示的dna序列或由所述dna序列组成，并且编码包含seqidno:51中所示的序列或由所述序列组成的shmir(shmir13)。

在一个实例中，本文所述的核酸包含seqidno:65中所示的dna序列或由所述dna序列组成，并且编码包含seqidno:52中所示的序列或由所述序列组成的shmir(shmir14)。

在一个实例中，本文所述的核酸包含seqidno:66中所示的dna序列或由所述dna序列组成，并且编码包含seqidno:53中所示的序列或由所述序列组成的shmir(shmir15)。

在一个实例中，本文所述的核酸包含seqidno:67中所示的dna序列或由所述dna序列组成，并且编码包含seqidno:54中所示的序列或由所述序列组成的shmir(shmir16)。

在一个实例中，本文所述的核酸包含seqidno:68中所示的dna序列或由所述dna序列组成，并且编码包含seqidno:55中所示的序列或由所述序列组成的shmir(shmir17)。

本公开的示例性核酸编码选自如本文所述的shmir2、shmir3、shmir5、shmir9、shmir13、shmir14和shmir17的shmir。编码选自如本文所述的shmir3、shmir13、shmir14和shmir17的shmir的本公开的核酸是特别优选的。

本领域技术人员将理解，可将根据本公开的核酸与包含编码shrna或shmir的dna序列的一种或多种其它核酸组合或结合使用，所述shrna或shmir包含至少17个连续核苷酸的效应序列，所述效应序列与对应于导致opmd的pabpn1蛋白的rna转录物的区域基本上互补。在一个实例中，提供了多种核酸，其包含：

(a)至少一种如本文所述的核酸；以及

(b)至少一种选自以下的另外的核酸：

(i)包含编码如本文所述的shmir的dna序列的核酸；或

(ii)包含编码短发夹rna(shrna)的dna序列的核酸，所述短发夹rna包含如本文所述的shmir的同源效应序列和效应互补序列；

其中由(a)的核酸编码的shmir和由(b)的核酸编码的shmir或shrna包含不同的效应序列。

因此，在一个实例中，本公开的多种核酸可包含两种或更多种编码如本文所述的shmir的核酸，诸如2种，或3种，或4种，或5种，或6种，或7种，或8种，或9种或10种编码如本文所述的shmir的核酸。

在另一个实例中，本公开的多个核酸包含至少一种编码如本文所述的shmir的核酸和至少一种包含编码shrna的dna序列的核酸，所述shrna包含如本文所述的shmir的同源效应序列和效应互补序列。例如，包含shmir2的效应序列和效应互补序列的shrna在下文中称为“shrna2”。例如，包含shmir3的效应序列和效应互补序列的shrna在下文中称为“shrna3”。例如，包含shmir4的效应序列和效应互补序列的shrna在下文中称为“shrna4”。例如，包含shmir5的效应序列和效应互补序列的shrna在下文中称为“shrna5”。例如，包含shmir6的效应序列和效应互补序列的shrna在下文中称为“shrna6”。例如，包含shmir7的效应序列和效应互补序列的shrna在下文中称为“shrna7”。例如，包含shmir9的效应序列和效应互补序列的shrna在下文中称为“shrna9”。例如，包含shmir11的效应序列和效应互补序列的shrna在下文中称为“shrna11”。例如，包含shmir13的效应序列和效应互补序列的shrna在下文中称为“shrna13”。例如，包含shmir14的效应序列和效应互补序列的shrna在下文中称为“shrna14”。例如，包含shmir15的效应序列和效应互补序列的shrna在下文中称为“shrna15”。例如，包含shmir16的效应序列和效应互补序列的shrna在下文中称为“shrna16”。例如，包含shmir17的效应序列和效应互补序列的shrna在下文中称为“shrna17”。

根据其中本文所述的多种核酸中的一种或多种核酸编码shrna的任何实例，shrna可包含位于同源效应序列与效应互补序列之间的环或茎环序列。合适的环序列可选自本领域已知的那些环序列。或者，可从头产生合适的茎环。在一个实例中，编码shrna的本文所述的多种核酸可分别包含编码位于编码效应序列与效应互补序列的dna序列之间的茎环的dna序列。

在一个实例中，本文所述的多种核酸包含含有编码shmir2的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，和至少一种编码靶向pabpn1mrna转录物的区域的shmir或shrna的本公开的其它核酸。本文描述了编码shmir2的示例性核酸，并且应当将其作必要的修正后应用于本公开的该实例。在一个实例中，本文所述的多种核酸包含含有seqidno:56中所示的dna序列或由所述dna序列组成并且编码shmir(其包含seqidno:43中所示的序列或由所述序列组成)的核酸，以及至少一种编码靶向pabpn1mrna转录物的区域的shmir或shrna的本公开的其它核酸。例如，本文所述的多种核酸可包含(i)含有seqidno:56(shmir2)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，以及(ii)含有编码shmir3-shmir7、shmir9、shmir11或shmir13-shmir17之一或其任一个的相应shrna的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。

在一个实例中，本文所述的多种核酸包含含有编码shmir3的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，和至少一种本公开的其它核酸，所述核酸编码靶向pabpn1mrna转录物的区域的shmir或shrna。本文描述了编码shmir3的示例性核酸，并且应当将其作必要的修正后应用于本公开的该实例。在一个实例中，本文所述的多种核酸包含包含seqidno:57中所示的dna序列或由所述dna序列组成并且编码包含seqidno:44中所示的序列或由所述序列组成的shmir的核酸，以及至少一种编码靶向pabpn1mrna转录物的区域的shmir或shrna的本公开的其它核酸。例如，本文所述的多种核酸可包括(i)含有seqidno:57(shmir3)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，以及(ii)含有编码shmir2、shmir4-shmir7、shmir9、shmir11或shmir13-shmir17之一或其任一个的相应shrna的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。

在一个实例中，本文所述的多种核酸包含含有编码shmir4的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，和至少一种编码靶向pabpn1mrna转录物的区域的shmir或shrna的本公开的其它核酸。本文描述了编码shmir4的示例性核酸，并且应当将其作必要的修正后应用于本公开的该实例。在一个实例中，本文所述的多种核酸包括含有seqidno:58中所示的dna序列或由所述dna序列组成并且编码包含seqidno:45中所示的序列或由所述序列组成的shmir的核酸，以及至少一种编码靶向pabpn1mrna转录物的区域的shmir或shrna的本公开的其它核酸。例如，本文所述的多种核酸可包括(i)含有seqidno:58(shmir4)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，以及(ii)含有编码shmir2、shmir3、shmir5-shmir7、shmir9、shmir11或shmir13-shmir17之一或其任一个的相应shrna的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。

在一个实例中，本文所述的多种核酸包括含有编码shmir5的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，和至少一种编码靶向pabpn1mrna转录物的区域的shmir或shrna的本公开的其它核酸。本文描述了编码shmir5的示例性核酸，并且应当将其作必要的修正后应用于本公开的该实例。在一个实例中，本文所述的多种核酸包括含有seqidno:59中所示的dna序列或由所述dna序列组成并且编码包含seqidno:46中所示的序列或由所述序列组成的shmir的核酸，以及至少一种编码靶向pabpn1mrna转录物的区域的shmir或shrna的本公开的其它核酸。例如，本文所述的多种核酸可包含(i)含有seqidno:59(shmir5)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，以及(ii)含有编码shmir2-shmir4、shmir6-shmir7、shmir9、shmir11或shmir13-shmir17之一或其任一个的相应shrna的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。

在一个实例中，本文所述的多种核酸包括含有编码shmir6的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，和至少一种编码靶向pabpn1mrna转录物的区域的shmir或shrna的本公开的其它核酸。本文描述了编码shmir6的示例性核酸，并且应当将其作必要的修正后应用于本公开的该实例。在一个实例中，本文所述的多种核酸包含含有seqidno:60中所示的dna序列或由所述dna序列组成并且编码包含seqidno:47中所示的序列或由所述序列组成的shmir的核酸，以及至少一种编码靶向pabpn1mrna转录物的区域的shmir或shrna的本公开的其它核酸。例如，本文所述的多种核酸可包括(i)含有seqidno:60(shmir6)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，以及(ii)含有编码shmir2-shmir5、shmir7、shmir9、shmir11或shmir13-shmir17之一或其任一个的相应shrna的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。

在一个实例中，本文所述的多种核酸包括含有编码shmir7的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，和至少一种编码靶向pabpn1mrna转录物的区域的shmir或shrna的本公开的其它核酸。本文描述了编码shmir7的示例性核酸，并且应当将其作必要的修正后应用于本公开的该实例。在一个实例中，本文所述的多种核酸包括含有seqidno:61中所示的dna序列或由所述dna序列组成并且编码包含seqidno:48中所示的序列或由所述序列组成的shmir的核酸，以及至少一种编码靶向pabpn1mrna转录物的区域的shmir或shrna的本公开的其它核酸。例如，本文所述的多种核酸可包括(i)含有seqidno:61(shmir7)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，以及(ii)含有编码shmir2-shmir6、shmir9、shmir11或shmir13-shmir17之一或其任一个的相应shrna的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。

在一个实例中，本文所述的多种核酸包括含有编码shmir9的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，和至少一种编码靶向pabpn1mrna转录物的区域的shmir或shrna的本公开的其它核酸。本文描述了编码shmir9的示例性核酸，并且应当将其作必要的修正后应用于本公开的该实例。在一个实例中，本文所述的多种核酸包括含有seqidno:62中所示的dna序列或由所述dna序列组成并且编码包含seqidno:49中所示的序列或由所述序列组成的shmir的核酸，以及至少一种编码靶向pabpn1mrna转录物的区域的shmir或shrna的本公开的其它核酸。例如，本文所述的多种核酸可包含(i)含有seqidno:62(shmir9)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，以及(ii)含有编码shmir2-shmir7、shmir11或shmir13-shmir17之一或其任一个的相应shrna的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。

在一个实例中，本文所述的多种核酸包括含有编码shmir11的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，和至少一种编码靶向pabpn1mrna转录物的区域的shmir或shrna的本公开的其它核酸。本文描述了编码shmir11的示例性核酸，并且应当将其作必要的修正后应用于本公开的该实例。在一个实例中，本文所述的多种核酸包括包含seqidno:63中所示的dna序列或由所述dna序列组成并且编码包含seqidno:50中所示的序列或由所述序列组成的shmir的核酸，以及至少一种编码靶向pabpn1mrna转录物的区域的shmir或shrna的本公开的其它核酸。例如，本文所述的多种核酸可包括(i)含有seqidno:63(shmir11)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，以及(ii)含有编码shmir2-shmir7、shmir9或shmir13-shmir17之一或其任一个的相应shrna的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。

在一个实例中，本文所述的多种核酸包括含有编码shmir13的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，和至少一种编码靶向pabpn1mrna转录物的区域的shmir或shrna的本公开的其它核酸。本文描述了编码shmir13的示例性核酸，并且应当将其作必要的修正后应用于本公开的该实例。在一个实例中，本文所述的多种核酸包括含有seqidno:64中所示的dna序列或由所述dna序列组成并且编码包含seqidno:51中所示的序列或由所述序列组成的shmir的核酸，以及至少一种编码靶向pabpn1mrna转录物的区域的shmir或shrna的本公开的其它核酸。例如，本文所述的多种核酸可包括(i)含有seqidno:64(shmir13)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，以及(ii)含有编码shmir2-shmir7、shmir9、shmir11或shmir14-shmir17之一或其任一个的相应shrna的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。

在一个实例中，本文所述的多种核酸包括含有编码shmir14的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，和至少一种编码靶向pabpn1mrna转录物的区域的shmir或shrna的本公开的其它核酸。本文描述了编码shmir14的示例性核酸，并且应当将其作必要的修正后应用于本公开的该实例。在一个实例中，本文所述的多种核酸包括含有seqidno:65中所示的dna序列或由所述dna序列组成并且编码包含seqidno:52中所示的序列或由所述序列组成的shmir的核酸，以及至少一种编码靶向pabpn1mrna转录物的区域的shmir或shrna的本公开的其它核酸。例如，本文所述的多种核酸可包括(i)含有seqidno:65(shmir14)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，以及(ii)含有编码shmir2-shmir7、shmir9、shmir11或shmir13、shmir15-shmir17之一或其任一个的相应shrna的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。

在一个实例中，本文所述的多种核酸包括含有编码shmir15的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，和至少一种编码靶向pabpn1mrna转录物的区域的shmir或shrna的本公开的其它核酸。本文描述了编码shmir15的示例性核酸，并且应当将其作必要的修正后应用于本公开的该实例。在一个实例中，本文所述的多种核酸包括含有seqidno:66中所示的dna序列或由所述dna序列组成并且编码包含seqidno:53中所示的序列或由所述序列组成的shmir的核酸，以及至少一种编码靶向pabpn1mrna转录物的区域的shmir或shrna的本公开的其它核酸。例如，本文所述的多种核酸可包括(i)含有seqidno:66(shmir15)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，以及(ii)含有编码shmir2-shmir7、shmir9、shmir11、shmir13-shmir14或shmir16-shmir17之一或其任一个的相应shrna的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。

在一个实例中，本文所述的多种核酸包括含有编码shmir16的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，和至少一种编码靶向pabpn1mrna转录物的区域的shmir或shrna的本公开的其它核酸。本文描述了编码shmir16的示例性核酸，并且应当将其作必要的修正后应用于本公开的该实例。在一个实例中，本文所述的多种核酸包括含有seqidno:67中所示的dna序列或由所述dna序列组成并且编码包含seqidno:54中所示的序列或由所述序列组成的shmir的核酸，以及至少一种编码靶向pabpn1mrna转录物的区域的shmir或shrna的本公开的其它核酸。例如，本文所述的多种核酸可包括(i)含有seqidno:67(shmir16)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，以及(ii)含有编码shmir2-shmir7、shmir9、shmir11或shmir13-shmir15或shmir17之一或其任一个的相应shrna的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。

在一个实例中，本文所述的多种核酸包括含有编码shmir17的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，和至少一种编码靶向pabpn1mrna转录物的区域的shmir或shrna本公开的其它核酸。本文描述了编码shmir17的示例性核酸，并且应当将其作必要的修正后应用于本公开的该实例。在一个实例中，本文所述的多种核酸包括包含seqidno:68中所示的dna序列或由所述dna序列组成，并且编码包含seqidno:55中所示的序列或由所述序列组成的shmir的核酸，以及至少一种编码靶向pabpn1mrna转录物的区域的shmir或shrna的本公开的其它核酸。例如，本文所述的多种核酸可包括(i)含有seqidno:68(shmir17)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸以及(ii)包含编码shmir2-shmir7、shmir9、shmir11或shmir13-shmir16或其任一个的相应shrna的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。

根据如本文所述的多种核酸的任何实例，所述多种核酸可包括两种或更多种编码如本文所述的shmir或shrna的核酸，诸如两种，或三种，或四种，或五种，或六种，或七种，或八种，或九种或十种编码如本文所述的shmir的核酸，条件是所述核酸中的至少一种编码本文所述的shmir。

在一个实例中，所述多种核酸包括两种编码本文所述的shmir或shrna的核酸，条件是所述核酸中的至少一种编码如本文所述的shmir。在一个实例中，所述多种核酸包括三种编码本文所述的shmir或shrna的核酸，条件是所述核酸中的至少一种编码如本文所述的shmir。在一个实例中，所述多种核酸包括四种编码本文所述的shmir或shrna的核酸，条件是所述核酸中的至少一种编码如本文所述的shmir。在一个实例中，所述多种核酸包括五种编码本文所述的shmir或shrna的核酸，条件是所述核酸中的至少一种编码如本文所述的shmir。在一个实例中，所述多种核酸包括六种编码本文所述的shmir或shrna的核酸，条件是所述核酸中的至少一种编码如本文所述的shmir。在一个实例中，所述多种核酸包括七种编码本文所述的shmir或shrna的核酸，条件是所述核酸中的至少一种编码如本文所述的shmir。在一个实例中，所述多种核酸包括八种编码本文所述的shmir或shrna的核酸，条件是所述核酸中的至少一种编码如本文所述的shmir。在一个实例中，所述多种核酸包括九种编码本文所述的shmir或shrna的核酸，条件是所述核酸中的至少一种编码如本文所述的shmir。在一个实例中，所述多种核酸包括十种编码本文所述的shmir或shrna的核酸，条件是所述核酸中的至少一种编码如本文所述的shmir。

在本文所述的多种核酸的一个实例中，所述核酸之一包含编码shmir的dna序列，所述shmir具有与rna转录物中相应长度的区域基本上互补的效应序列，所述rna转录物包含seqidno:1中所示的序列或由所述序列组成。本文中描述了编码shmir的合适核酸(例如，对于shmir2)，所述shmir具有与rna转录物中相应长度的区域基本上互补的效应序列，所述rna转录物包含seqidno:1中所示的序列或由所述序列组成。

在本文所述的多种核酸的一个实例中，所述核酸之一包含编码shmir的dna序列，所述shmir具有与rna转录物中相应长度的区域基本上互补的效应序列，所述rna转录物包含seqidno:2中所示的序列或由所述序列组成。本文中描述了编码shmir的合适核酸(例如，对于shmir3)，所述shmir包含与rna转录物中相应长度的区域基本上互补的效应序列，所述rna转录物包含seqidno:2中所示的序列或由所述序列组成。

在本文所述的多种核酸的一个实例中，所述核酸之一包含编码shmir的dna序列，所述shmir具有与rna转录物中相应长度的区域基本上互补的效应序列，所述rna转录物包含seqidno:4中所示的序列或由所述序列组成。本文中描述了编码shmir的合适核酸(例如，对于shmir5)，所述shmir具有与rna转录物中相应长度的区域基本上互补的效应序列，所述rna转录物包含seqidno:4中所示的序列或由所述序列组成。

在本文所述的多种核酸的一个实例中，所述核酸之一包含编码shmir的dna序列，所述shmir具有与rna转录物中相应长度的区域基本上互补的效应序列，所述rna转录物包含seqidno:7中所示的序列或由所述序列组成。本文中描述了编码shmir的合适核酸(例如，对于shmir9)，所述shmir具有与rna转录物中相应长度的区域基本上互补的效应序列，所述rna转录物包含seqidno:7中所示的序列或由所述序列组成。

在本文所述的多种核酸的一个实例中，所述核酸之一包含编码shimr的dna序列，所述shimr具有与rna转录物中相应长度的区域基本上互补的效应序列，所述rna转录物包含seqidno:9中所示的序列或由所述序列组成。本文中描述了编码shmir的合适核酸(例如，对于shmir13)，所述shmir具有与rna转录物中相应长度的区域基本上互补的效应序列，所述rna转录物包含seqidno:9中所示的序列或由所述序列组成。

在本文所述的多种核酸的一个实例中，所述核酸之一包含编码shmir的dna序列，所述shmir具有与rna转录物中相应长度的区域基本上互补的效应序列，所述rna转录物包含seqidno:10中所示的序列或由所述序列组成。本文中描述了编码shmir的合适核酸(例如，对于shmir14)，所述shmir具有与rna转录物中相应长度的区域基本上互补的效应序列，所述rna转录物包含seqidno:10中所示的序列或由所述序列组成。

在本文所述的多种核酸的一个实例中，所述核酸之一包含编码shmir的dna序列，所述shmir具有与rna转录物中相应长度的区域基本上互补的效应序列，所述rna转录物包含seqidno:13中所示的序列或由所述序列组成。本文中描述了编码shmir的合适核酸(例如，对于shmir17)，所述shmir具有与rna转录物中相应长度的区域基本上互补的效应序列，所述rna转录物包含seqidno:13中所示的序列或由所述序列组成。

本公开的示例性多种核酸包括至少两种核酸，每种核酸包含编码本公开的shmir的dna序列，其中每种shmir包含不同的效应序列。

在一个实例中，所述至少两种核酸中的每一种编码shmir，所述shmir包含与seqidno:1、2、4、7、9、10和13中的一个中所示的rna转录物中相应长度的区域基本上互补的效应序列。本文中描述了编码shmir(其包含与seqidno:1、2、4、7、9、10和13中所示的rna转录物中相应长度的区域基本上互补的效应序列)的本公开的示例性核酸，并且应当将其作必要的修正后应用于本公开的该实例。

在一个实例中，所述至少两种核酸选自由以下组成的组：

包含编码shmir的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，所述shmir包含seqidno:15中所示的效应序列和seqidno:14中所示的效应互补序列，例如，包含seqidno:56(shmir2)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸；

包含编码shmir的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，所述shmir包含seqidno:17中所示的效应序列和seqidno:16中所示的效应互补序列，例如，包含seqidno:57(shmir3)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸；

包含编码shmir的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，所述shmir包含seqidno:21中所示的效应序列和seqidno:20中所示的效应互补序列，例如，包含seqidno:59(shmir5)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸；

包含编码shmir的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，所述shmir包含seqidno:27中所示的效应序列和seqidno:26中所示的效应互补序列，例如，包含seqidno:62(shmir9)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸；

包含编码shmir的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，所述shmir包含seqidno:31中所示的效应序列和seqidno:30中所示的效应互补序列，例如，包含seqidno:64(shmir13)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸；

包含编码shmir的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，所述shmir包含seqidno:33中所示的效应序列和seqidno:32中所示的效应互补序列，例如，包含seqidno:65(shmir14)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸；以及

包含编码shmir的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，所述shmir包含seqidno:39中所示的效应序列和seqidno:38中所示的效应互补序列，例如，包含seqidno:68(shmir17)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。

在一个实例中，所述至少两种核酸中的每一种编码shmir，所述shmir包含与seqidno:2、9、10和13中的一个中所示的rna转录物中相应长度的区域基本上互补的效应序列。本文中描述了编码shmir(其包含与seqidno:2、9、10和13中所示的rna转录物中相应长度的区域基本上互补的效应序列)的本公开的示例性核酸，并且应当将其作必要的修正后应用于本公开的该实例。

在一个实例中，所述至少两种核酸选自由以下组成的组：

包含编码shmir的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，所述shmir包含seqidno:17中所示的效应序列和seqidno:16中所示的效应互补序列，例如，包含seqidno:57(shmir3)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸；

包含编码shmir的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，所述shmir包含seqidno:31中所示的效应序列和seqidno:30中所示的效应互补序列，例如，包含seqidno:64(shmir13)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸；

包含编码shmir的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，所述shmir包含seqidno:33中所示的效应序列和seqidno:32中所示的效应互补序列，例如，包含seqidno:65(shmir14)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸；以及

包含编码shmir的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，所述shmir包含seqidno:39中所示的效应序列和seqidno:38中所示的效应互补序列，例如，包含seqidno:68(shmir17)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。

在一个实例中，所述多种核酸包括编码包含与seqidno:10中所示的rna转录物中相应长度的区域基本上互补的效应序列的shmir的核酸，和编码包含与seqidno:13中所示的rna转录物中相应长度的区域基本上互补的效应序列的shmir的核酸。例如，所述多种核酸可包括：

(a)包含编码shmir的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，所述shmir包含seqidno:31中所示的效应序列和seqidno:30中所示的效应互补序列，例如，包含seqidno:64(shmir13)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸；以及

(b)包含编码shmir的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，所述shmir包含seqidno:39中所示的效应序列和seqidno:38中所示的效应互补序列，例如，包含seqidno:68(shmir17)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。

本公开的示例性多种核酸包括含有seqidno:64(shmir13)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，以及含有seqidno:68(shmir17)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。

在一个实例中，所述多种核酸包括编码包含与seqidno:2中所示的rna转录物中相应长度的区域基本上互补的效应序列的shmir的核酸，和编码包含与seqidno:9中所示的rna转录物中相应长度的区域基本上互补的效应序列的shmir的核酸。例如，所述多种核酸可包括：

(a)包含编码shmir的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，所述shmir包含seqidno:17中所示的效应序列和seqidno:16中所示的效应互补序列，例如，包含seqidno:57(shmir3)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸；以及

(b)包含编码shmir的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，所述shmir包含seqidno:33中所示的效应序列和seqidno:32中所示的效应互补序列，例如，包含seqidno:65(shmir14)中所示的序列或由所述序列组成的核酸。

本公开的示例性多种核酸包括含有seqidno:64(shmir13)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，以及含有seqidno:68(shmir17)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。

根据其中提供多种核酸的实例，两种或更多种核酸可以形成同一多核苷酸的单独部分。在另一个实例中，多种核酸中的两种或更多种核酸分别形成不同多核苷酸的部分。在另一个实例中，本文所述的多种核酸作为多种组分(例如多种组合物)提供。例如，可以分别提供多种核酸中的每一种。或者，在其中提供本公开的三种或更多种核酸的实例中，可以单独提供所述核酸中的至少一种，并将多种核酸中的两种或更多种一起提供。

在一些实例中，根据本公开的核酸或每种所述核酸可包含另外的元件，或与另外的元件处于可操作的连接中，例如以有利于shmir或shrna的转录。例如，所述核酸或每种核酸可包含与编码本文所述的shmir或shrna的序列可操作地连接的启动子。其它元件，例如转录终止子和起始子，是本领域已知的和/或本文所述的。

可选地/另外地，根据本公开的核酸或每种所述核酸可包含一个或多个限制性位点，例如，以有利于将一种或多种核酸克隆到克隆载体或表达载体中。例如，本文描述的核酸可以在编码本公开的shmir或shrna的序列的上游和/或下游包含限制性位点。合适的限制性酶识别序列将是本领域技术人员已知的。然而，在一个实例中，本公开的一种或多种核酸可在编码shmir或shrna的序列5'末端(即上游)包含bamh1限制性位点(ggatcc)，以及在编码shmir或shrna的序列3'末端(即下游)包含ecor1限制性位点(gaattc)。

ddrnai构建体

在一个实例中，本公开的核酸或每种核酸以dna介导的rnai(ddrnai)构建体的形式提供或包含在其中。因此，在一个实例中，本公开提供了包含如本文所述的核酸的ddrnai构建体。在一个实例中，本公开提供了包含多种如本文所述的核酸的ddrnai构建体。在另一个实例中，本公开提供了多种ddrnai构建体，每种构建体包含如本文所述的多种核酸的核酸(即，使得多种核酸中的所有核酸都在多种ddrnai构建体中表示)。本文描述了编码包含靶向导致opmd的pabpn1的mrna转录物的效应序列的shmir或shrna的示例性核酸，并且应当将其作必要的修正后应用于本公开的该实例。

在一个实例中，ddrnai构建体包含与启动子可操作地连接的本公开的核酸。

根据其中ddrnai构建体包含多种本文所述核酸的实例，每种核酸可与启动子可操作地连接。在一个实例中，ddrnai构建体中的核酸可与同一启动子可操作地连接。在一个实例中，ddrnai构建体中的核酸可与不同启动子可操作地连接。

在一个实例中，本公开的ddrnai构建体包含含有编码shmir2的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。例如，所述ddrnai构建体可包含含有编码shmir的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，所述shmir具有与rna转录物中相应长度的区域基本上互补的效应序列，所述rna转录物包含seqidno:1中所示的序列或由所述序列组成。本文描述了编码shmir2的示例性核酸，并且应当将其作必要的修正后应用于本公开的该实例。在一个实例中，ddrnai构建体包含核酸，所述核酸包含seqidno:56中所示的dna序列或由所述dna序列组成并且编码shmir，所述shmir包含seqidno:43中所示的序列或由所述序列组成。ddrnai构建体可包含本公开的一种或多种另外的核酸(其包含编码靶向pabpn1mrna转录物的区域的shmir或shrna的dna序列)，诸如包含编码如本文所述的shmir3-shmir7、shmir9、shmir11或shmir13-shmir17之一或其任一个的相应shrna的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。例如，本文所述的ddrnai构建体可包含(i)含有seqidno:56(shmir2)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，以及(ii)含有编码shmir3-shmir7、shmir9、shmir11或shmir13-shmir17之一或其任一个的相应shrna的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。本文描述了编码称为shmir3-shmir7、shmir9、shmir11和shmir13-shmir17的shmir的示例性核酸，并且应当将其作必要的修正后应用于本公开的该实例。

在一个实例中，本公开的ddrnai构建体包含含有编码shmir3的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。例如，所述ddrnai构建体可包含含有编码shmir的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，所述shmir具有与rna转录物中相应长度的区域基本上互补的效应序列，所述rna转录物包含seqidno:2中所示的序列或由所述序列组成。本文描述了编码shmir3的示例性核酸，并且应当将其作必要的修正后应用于本公开的该实例。在一个实例中，ddrnai构建体包含如下核酸，所述核酸包括seqidno:57中所示的dna序列或由所述dna序列组成，并且编码包含seqidno:44中所示的序列或由所述序列组成的shmir。ddrnai构建体可包含本公开的一种或多种另外的核酸(其包含编码靶向pabpn1mrna转录物的区域的shmir或shrna的dna序列)，诸如包含编码如本文所述的shmir2、shmir4-shmir7、shmir9、shmir11或shmir13-shmir17之一或其任一个的相应shrna的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。例如，本文所述的ddrnai构建体可包含(i)含有seqidno:57(shmir3)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，以及(ii)含有编码shmir2、shmir4-shmir7、shmir9、shmir11或shmir13-shmir17之一或其任一个的相应shrna的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。本文描述了编码称为shmir2、shmir4-shmir7、shmir9、shmir11或shmir13-shmir17的shmir的示例性核酸，并且应当将其作必要的修正后应用于本公开的该实例。

在一个实例中，本公开的ddrnai构建体包含含有编码shmir4的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。例如，所述ddrnai构建体可包含含有编码shmir的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，所述shmir具有与rna转录物中相应长度的区域基本上互补的效应序列，所述rna转录物包含seqidno:3中所示的序列或由所述序列组成。本文描述了编码shmir4的示例性核酸，并且应当将其作必要的修正后应用于本公开的该实例。在一个实例中，ddrnai构建体包含如下核酸，所述核酸包含seqidno:58中所示的dna序列或由所述dna序列组成，并且编码包含seqidno:45中所示的序列或由所述序列组成的shmir。ddrnai构建体可包含本公开的一种或多种另外的核酸(其包含编码靶向pabpn1mrna转录物的区域的shmir或shrna的dna序列)，诸如包含编码如本文所述的shmir2、shmir3、shmir5-shmir7、shmir9、shmir11或shmir13-shmir17之一或其任一个的相应shrna的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。例如，本文所述的ddrnai构建体可包含(i)含有seqidno:58(shmir4)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，以及(ii)含有编码shmir2、shmir3、shmir5-shmir7、shmir9、shmir11或shmir13-shmir17之一或其任一个的相应shrna的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。本文描述了编码称为shmir2、shmir3、shmir5-shmir7、shmir9、shmir11或shmir13-shmir17的shmir的示例性核酸，并且应当将其作必要的修正后应用于本公开的该实例。

在一个实例中，本公开的ddrnai构建体包含含有编码shmir5的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。例如，所述ddrnai构建体可包含含有编码shmir的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，所述shmir具有与rna转录物中相应长度的区域基本上互补的效应序列，所述rna转录物包含seqidno:4中所示的序列或由所述序列组成。本文描述了编码shmir5的示例性核酸，并且应当将其作必要的修正后应用于本公开的该实例。在一个实例中，ddrnai构建体包含核酸，所述核酸包含seqidno:59中所示的dna序列或由所述dna序列组成，并且编码包含seqidno:46中所示的序列或由所述序列组成的shmir。ddrnai构建体可包含本公开的一种或多种另外的核酸(其包含编码靶向pabpn1mrna转录物的区域的shmir或shrna的dna序列)，诸如包含编码如本文所述的shmir2-shmir4、shmir6-shmir7、shmir9、shmir11或shmir13-shmir17之一或其任一个的相应shrna的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。例如，本文所述的ddrnai构建体可包含(i)含有seqidno:59(shmir5)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，以及(ii)含有编码shmir2-shmir4、shmir6-shmir7、shmir9、shmir11或shmir13-shmir17之一或其任一个的相应shrna的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。本文描述了编码称为shmir2-shmir4、shmir6-shmir7、shmir9、shmir11或shmir13-shmir17的shmir的示例性核酸，并且应当将其作必要的修正后应用于本公开的该实例。

在一个实例中，本公开的ddrnai构建体包含含有编码shmir6的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。例如，所述ddrnai构建体可包含含有编码shmir的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，所述shmir具有与rna转录物中相应长度的区域基本上互补的效应序列，所述rna转录物包含seqidno:5中所示的序列或由所述序列组成。本文描述了编码shmir6的示例性核酸，并且应当将其作必要的修正后应用于本公开的该实例。在一个实例中，ddrnai构建体包含如下核酸，所述核酸包含seqidno:60中所示的dna序列或由所述dna序列组成，并且编码包含seqidno:47中所示的序列或由所述序列组成的shmir。ddrnai构建体可包含本公开的一种或多种另外的核酸(其包含编码靶向pabpn1mrna转录物的区域的shmir或shrna的dna序列)，诸如包含编码如本文所述的shmir2-shmir5、shmir7、shmir9、shmir11或shmir13-shmir17之一或其任一个的相应shrna的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。例如，本文所述的ddrnai构建体可包含(i)含有seqidno:60(shmir6)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，以及(ii)含有编码shmir2-shmir5、shmir7、shmir9、shmir11或shmir13-shmir17之一或其任一个的相应shrna的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。本文描述了编码称为shmir2-shmir5、shmir7、shmir9、shmir11或shmir13-shmir17的shmir的示例性核酸，并且应当将其作必要的修正后应用于本公开的该实例。

在一个实例中，本公开的ddrnai构建体包含含有编码shmir7的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。例如，ddrnai构建体可包含含有编码shmir的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，所述shimr具有与rna转录物中相应长度的区域基本上互补的效应序列，所述rna转录物包含seqidno:6中所示的序列或由所述序列组成。本文描述了编码shmir7的示例性核酸，并且应当将其作必要的修正后应用于本公开的该实例。在一个实例中，ddrnai构建体包含如下核酸，所述核酸包含seqidno:61中所示的dna序列或由所述dna序列组成，并且编码包含seqidno:48中所示的序列或由所述序列组成的shmir。ddrnai构建体可包含本公开的一种或多种另外的核酸(其包含编码靶向pabpn1mrna转录物的区域的shmir或shrna的dna序列)，诸如包含编码如本文所述的shmir2-shmir6、shmir9、shmir11或shmir13-shmir17之一或其任一个的相应shrna的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。例如，本文所述的ddrnai构建体可包含(i)含有seqidno:61(shmir7)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，以及(ii)含有编码shmir2-shmir6、shmir9、shmir11或shmir13-shmir17之一或其任一个的相应shrna的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。本文描述了编码称为shmir2-shmir6、shmir9、shmir11或shmir13-shmir17的shmir的示例性核酸，并且应当将其作必要的修正后应用于本公开的该实例。

在一个实例中，本公开的ddrnai构建体包含含有编码shmir9的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。例如，所述ddrnai构建体可包含含有编码shmir的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，所述shmir具有与rna转录物中相应长度的区域基本上互补的效应序列，所述rna转录物包含seqidno:7中所示的序列或由所述序列组成。本文描述了编码shmir9的示例性核酸，并且应当将其作必要的修正后应用于本公开的该实例。在一个实例中，ddrnai构建体包含如下核酸，所述核酸包含seqidno:62中所示的dna序列或由所述dna序列组成，并且编码包含seqidno:49中所示的序列或由所述序列组成的shmir。ddrnai构建体可包含本公开的一种或多种另外的核酸(其包含编码靶向pabpn1mrna转录物的区域的shmir或shrna的dna序列)，诸如包含编码如本文所述的shmir2-shmir7、shmir11或shmir13-shmir17之一或其任一个的相应shrna的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。例如，本文所述的ddrnai构建体可包含(i)含有seqidno:62(shmir9)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，以及(ii)含有编码shmir2-shmir7、shmir11或shmir13-shmir17之一或其任一个的相应shrna的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。本文描述了编码称为shmir2-shmir7、shmir11或shmir13-shmir17的shmir的示例性核酸，并且应当将其作必要的修正后应用于本公开的该实例。

在一个实例中，本公开的ddrnai构建体包含含有编码shmir11的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。例如，所述ddrnai构建体可包含含有编码shmir的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，所述shmir具有与rna转录物中相应长度的区域基本上互补的效应序列，所述rna转录物包含seqidno:8中所示的序列或由所述序列组成。本文描述了编码shmir11的示例性核酸，并且应当将其作必要的修正后应用于本公开的该实例。在一个实例中，ddrnai构建体包含如下核酸，所述核酸包含seqidno:63中所示的dna序列或由所述dna序列组成，并且编码包含seqidno:50中所示的序列或由所述序列组成的shmir。ddrnai构建体可包含本公开的一种或多种另外的核酸(其包含编码靶向pabpn1mrna转录物的区域的shmir或shrna的dna序列)，诸如包含编码如本文所述的shmir2-shmir7、shmir9或shmir13-shmir17之一或其任一个的相应shrna的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。例如，本文所述的ddrnai构建体可包含(i)含有seqidno:63(shmir11)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，以及(ii)含有编码shmir2-shmir7、shmir9或shmir13-shmir17之一或其任一个的相应shrna的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。本文描述了编码称为shmir2-shmir7、shmir9或shmir13-shmir17的shmir的示例性核酸，并且应当将其作必要的修正后应用于本公开的该实例。

在一个实例中，本公开的ddrnai构建体包含含有编码shmir13的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。例如，所述ddrnai构建体可包含含有编码shmir的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，所述shmir具有与rna转录物中相应长度的区域基本上互补的效应序列，所述rna转录物包含seqidno:9中所示的序列或由所述序列组成。本文描述了编码shmir13的示例性核酸，并且应当将其作必要的修正后应用于本公开的该实例。在一个实例中，ddrnai构建体包含如下核酸，所述核酸包含seqidno:64中所示的dna序列或由所述dna序列组成，并且编码包含seqidno:51中所示的序列或由所述序列组成的shmir。ddrnai构建体可包含本公开的一种或多种另外的核酸(其包含编码靶向pabpn1mrna转录物的区域的shmir或shrna的dna序列)，诸如包含编码如本文所述的shmir2-shmir7、shmir9、shmir11或shmir14-shmir17之一或其任一个的相应shrna的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。例如，本文所述的ddrnai构建体可包含(i)含有seqidno:64(shmir13)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，以及(ii)含有编码shmir2-shmir7、shmir9、shmir11或shmir14-shmir17之一或其任一个的相应shrna的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。本文描述了编码称为shmir2-shmir7、shmir9、shmir11或shmir14-shmir17的shmir的示例性核酸，并且应当将其作必要的修正后应用于本公开的该实例。

在一个实例中，本公开的ddrnai构建体包含含有编码shmir14的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。例如，所述ddrnai构建体可包含含有编码shmir的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，所述shmir具有与rna转录物中相应长度的区域基本上互补的效应序列，所述rna转录物包含seqidno:10中所示的序列或由所述序列组成。本文描述了编码shmir14的示例性核酸，并且应当将其作必要的修正后应用于本公开的该实例。在一个实例中，ddrnai构建体包含如下核酸，所述核酸包含seqidno:65中所示的dna序列或由所述dna序列组成，并且编码包含seqidno:52中所示的序列或由所述序列组成的shmir。ddrnai构建体可包含本公开的一种或多种另外的核酸(其包含编码靶向pabpn1mrna转录物的区域的shmir或shrna的dna序列)，诸如包含编码如本文所述的shmir2-shmir7、shmir9、shmir11或shmir13、shmir15-shmir17之一或其任一个的相应shrna的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。例如，本文所述的ddrnai构建体可包含(i)含有seqidno:65(shmir14)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，以及(ii)含有编码shmir2-shmir7、shmir9、shmir11或shmir13、shmir15-shmir17之一或其任一个的相应shrna的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。本文描述了编码称为shmir2-shmir7、shmir9、shmir11或shmir13、shmir15-shmir17的shmir的示例性核酸，并且应当将其作必要的修正后应用于本公开的该实例。

在一个实例中，本公开的ddrnai构建体包含含有编码shmir15的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。例如，所述ddrnai构建体可包含含有编码shmir的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，所述shmir具有与rna转录物中相应长度的区域基本上互补的效应序列，所述rna转录物包含seqidno:11中所示的序列或由所述序列组成。本文描述了编码shmir15的示例性核酸，并且应当将其作必要的修正后应用于本公开的该实例。在一个实例中，ddrnai构建体包含如下核酸，所述核酸包含seqidno:66中所示的dna序列或由所述dna序列组成，并且编码包含seqidno:53中所示的序列或由所述序列组成的shmir。ddrnai构建体可包含本公开的一种或多种另外的核酸(其包含编码靶向pabpn1mrna转录物的区域的shmir或shrna的dna序列)，诸如包含编码如本文所述的shmir2-shmir7、shmir9、shmir11或shmir13-shmir14或shmir16-shmir17之一或其任一个的相应shrna的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。例如，本文所述的ddrnai构建体可包含(i)含有seqidno:66(shmir15)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，以及(ii)含有编码shmir2-shmir7、shmir9、shmir11或shmir13-shmir14或shmir16-shmir17之一或其任一个的相应shrna的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。本文描述了编码称为shmir2-shmir7、shmir9、shmir11或shmir13-shmir14或shmir16-shmir17的shmir的示例性核酸，并且应当将其作必要的修正后应用于本公开的该实例。

在一个实例中，本公开的ddrnai构建体包含含有编码shmir16的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。例如，所述ddrnai构建体可包含含有编码shmir的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，所述shmir具有与rna转录物中相应长度的区域基本上互补的效应序列，所述rna转录物包含seqidno:12中所示的序列或由所述序列组成。本文描述了编码shmir16的示例性核酸，并且应当将其作必要的修正后应用于本公开的该实例。在一个实例中，ddrnai构建体包含如下核酸，所述核酸包含seqidno:67中所示的dna序列或由所述dna序列组成，并且编码包含seqidno:54中所示的序列或由所述序列组成的shmir。ddrnai构建体可包含本公开的一种或多种另外的核酸(其包含编码靶向pabpn1mrna转录物的区域的shmir或shrna的dna序列)，诸如包含编码如本文所述的shmir2-shmir7、shmir9、shmir11或shmir13-shmir15或shmir17之一或其任一个的相应shrna的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。例如，本文所述的ddrnai构建体可包含(i)含有seqidno:67(shmir16)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，以及(ii)含有编码shmir2-shmir7、shmir9、shmir11或shmir13-shmir15或shmir17之一或其任一个的相应shrna的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。本文描述了编码称为shmir2-shmir7、shmir9、shmir11或shmir13-shmir15或shmir17的shmir的示例性核酸，并且应当将其作必要的修正后应用于本公开的该实例。

在一个实例中，本公开的ddrnai构建体包含含有编码shmir17的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。例如，所述ddrnai构建体可包含含有编码shmir的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，所述shmir具有与rna转录物中相应长度的区域基本上互补的效应序列，所述rna转录物包含seqidno:13中所示的序列或由所述序列组成。本文描述了编码shmir17的示例性核酸，并且应当将其作必要的修正后应用于本公开的该实例。在一个实例中，ddrnai构建体包含如下核酸，所述核酸包含seqidno:68中所示的dna序列或由所述dna序列组成，并且编码包含seqidno:55中所示的序列或由所述序列组成的shmir。ddrnai构建体可包含本公开的一种或多种另外的核酸(其包含编码靶向pabpn1mrna转录物的区域的shmir或shrna的dna序列)，诸如包含编码如本文所述的shmir2-shmir7、shmir9、shmir11或shmir13-shmir16之一或其任一个的相应shrna的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。例如，本文所述的ddrnai构建体可包含(i)含有seqidno:68(shmir17)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，以及(ii)含有编码shmir2-shmir7、shmir9、shmir11或shmir13-shmir16之一或其任一个的相应shrna的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。本文描述了编码称为shmir2-shmir7、shmir9、shmir11或shmir13-shmir16的shmir的示例性核酸，并且应当将其作必要的修正后应用于本公开的该实例。

根据包含如本文所述的多种核酸的ddrnai构建体的任何实例，所述ddrnai构建体可包含两种或更多种编码如本文所述的shmir或shrna的核酸，诸如两种，或三种，或四种，或五种，或六种，或七种，或八种，或九种或十种编码如本文所述的shmir或shrna的核酸，条件是所述核酸中的至少一种编码本文所述的shmir。

在一个实例中，ddrnai构建体包含两种编码本文所述的shmir或shrna的核酸，条件是所述核酸中的至少一种编码如本文所述的shmir。在一个实例中，ddrnai构建体包含三种编码本文所述的shmir或shrna的核酸，条件是所述核酸中的至少一种编码如本文所述的shmir。在一个实例中，ddrnai构建体包含四种编码本文所述的shmir或shrna的核酸，条件是所述核酸中的至少一种编码如本文所述的shmir。在一个实例中，ddrnai构建体包含五种编码本文所述的shmir或shrna的核酸，条件是所述核酸中的至少一种编码如本文所述的shmir。在一个实例中，ddrnai构建体包含六种编码本文所述的shmir或shrna的核酸，条件是所述核酸中的至少一种编码如本文所述的shmir。在一个实例中，ddrnai构建体包含七种编码本文所述的shmir或shrna的核酸，条件是所述核酸中的至少一种编码如本文所述的shmir。在一个实例中，ddrnai构建体包含八种编码本文所述的shmir或shrna的核酸，条件是所述核酸中的至少一种编码如本文所述的shmir。在一个实例中，ddrnai构建体包含九种编码本文所述的shmir或shrna的核酸，条件是所述核酸中的至少一种编码如本文所述的shmir。在一个实例中，ddrnai构建体包含十种编码本文所述的shmir或shrna的核酸，条件是所述核酸中的至少一种编码如本文所述的shmir。

本公开的示例性ddrnai构建体包含至少两种核酸，每种核酸包含编码本公开的shmir的dna序列，其中每种shmir包含不同的效应序列。在一个实例中，ddrnai构建体中的至少两种核酸中的每一种编码shmir，所述shmir包含与seqidno:1、2、4、7、9、10和13中的一个中所示的rna转录物中相应长度的区域基本上互补的效应序列。本文中描述了编码shmir(其包含与seqidno:1、2、4、7、9、10和13中所示的rna转录物中相应长度的区域基本上互补的效应序列)的本公开的示例性核酸，并且应当将其作必要的修正后应用于描述ddrnai构建体的本公开的该实例。

在一个实例中，ddrnai构建体包含选自由以下组成的组的至少两种核酸：

包含编码shmir的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，所述shmir包含seqidno:15中所示的效应序列和seqidno:14中所示的效应互补序列，例如，包含seqidno:56(shmir2)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸；

包含编码shmir的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，所述shmir包含seqidno:17中所示的效应序列和seqidno:16中所示的效应互补序列，例如，包含seqidno:57(shmir3)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸；

包含编码shmir的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，所述shmir包含seqidno:21中所示的效应序列和seqidno:20中所示的效应互补序列，例如，包含seqidno:59(shmir5)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸；

包含编码shmir的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，所述shmir包含seqidno:27中所示的效应序列和seqidno:26中所示的效应互补序列，例如，包含seqidno:62(shmir9)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸；

包含编码shmir的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，所述shmir包含seqidno:31中所示的效应序列和seqidno:30中所示的效应互补序列，例如，包含seqidno:64(shmir13)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸；

包含编码shmir的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，所述shmir包含seqidno:33中所示的效应序列和seqidno:32中所示的效应互补序列，例如，包含seqidno:65(shmir14)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸；以及

包含编码shmir的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，所述shmir包含seqidno:39中所示的效应序列和seqidno:38中所示的效应互补序列，例如，包含seqidno:68(shmir17)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。

在一个实例中，ddrnai构建体中的至少两种核酸中的每一种编码shmir，所述shmir包含与seqidno:2、9、10和13中的一个中所示的rna转录物中相应长度的区域基本上互补的效应序列。本文中描述了编码shmir(其包含与seqidno:2、9、10和13中所示的rna转录物中相应长度的区域基本上互补的效应序列)的本公开的示例性核酸，并且应当将其作必要的修正后应用于描述ddrnai构建体的本公开的该实例。

在一个实例中，ddrnai构建体包含选自由以下组成的组的至少两种核酸：

包含编码shmir的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，所述shmir包含seqidno:17中所示的效应序列和seqidno:16中所示的效应互补序列，例如，包含seqidno:57(shmir3)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸；

包含编码shmir的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，所述shmir包含seqidno:31中所示的效应序列和seqidno:30中所示的效应互补序列，例如，包含seqidno:64(shmir13)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸；

包含编码shmir的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，所述shmir包含seqidno:33中所示的效应序列和seqidno:32中所示的效应互补序列，例如，包含seqidno:65(shmir14)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸；以及

包含编码shmir的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，所述shmir包含seqidno:39中所示的效应序列和seqidno:38中所示的效应互补序列，例如，包含seqidno:68(shmir17)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。

在一个实例中，本公开的ddrnai构建体包含编码包含与seqidno:10中所示的rna转录物中相应长度的区域基本上互补的效应序列的shmir的核酸，和编码包含与seqidno:13中所示的rna转录物中相应长度的区域基本上互补的效应序列的shmir的核酸。例如，ddrnai构建体可包含：

(a)包含编码shmir的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，所述shmir包含seqidno:31中所示的效应序列和seqidno:30中所示的效应互补序列，例如，包含seqidno:64(shmir13)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸；以及

(b)包含编码shmir的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，所述shmir包含seqidno:39中所示的效应序列和seqidno:38中所示的效应互补序列，例如，包含seqidno:68(shmir17)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。

本公开的示例性ddrnai构建体包含含有seqidno:64(shmir13)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，以及含有seqidno:68(shmir17)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。

在一个实例中，ddrnai构建体包含编码包含与seqidno:2中所示的rna转录物中相应长度的区域基本上互补的效应序列的shmir的核酸，和编码包含与seqidno:9中所示的rna转录物中相应长度的区域基本上互补的效应序列的shmir的核酸。例如，ddrnai构建体可包含：

(a)包含编码shmir的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，所述shmir包含seqidno:17中所示的效应序列和seqidno:16中所示的效应互补序列，例如，包含seqidno:57(shmir3)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸；以及

(b)包含编码shmir的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，所述shmir包含seqidno:33中所示的效应序列和seqidno:32中所示的效应序列，例如，包含seqidno:65(shmir14)中所示的序列或由所述序列组成的核酸。

本公开的示例性ddrnai构建体包含含有seqidno:64(shmir13)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，以及含有seqidno:68(shmir17)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。

在描述本公开的ddrnai构建体的每个前述实例中，其中包含的核酸或每种核酸可以与启动子可操作地连接。例如，如本文所述的ddrnai构建体可包含单个启动子，其与其中包含的核酸或每个核酸可操作地连接，例如，以驱动来自ddrnai构建体的一种或多种shmir和/或shrna的表达。

在另一个实例中，包含在ddrnai构建体中的编码本公开的shmir或shrna的每种核酸与单独的启动子可操作地连接。

根据其中存在多个启动子的实例，启动子可以相同或不同。例如，构建体可包含多个拷贝的相同启动子，其中每个拷贝与本公开的不同核酸可操作地连接。在另一个实例中，与本公开的核酸可操作地连接的每个启动子是不同的。例如，在编码两种shmir的ddrnai构建体中，两种编码shmir的核酸各自与不同的启动子可操作地连接。同样地，在其中ddrnai构建体编码一种shmir和一种shrna的实例中，编码shmir和shrna的相应核酸各自与不同的启动子可操作地连接。

例如，启动子是组成型启动子。当提及启动子时，术语“组成型”意指启动子能够在特定刺激(例如，热激、化学物质、光等)不存在的情况下指导可操作地连接的核酸序列的转录。通常，组成型启动子能够指导编码序列在基本上任何细胞和任何组织中的表达。用于从本公开的一种或多种核酸转录shmir或shrna的启动子包括由rna聚合酶ii控制的遍在蛋白、cmv、β-肌动蛋白、组蛋白h4、ef-1α或pgk基因的启动子，或由rna聚合酶i控制的启动子元件。

在一个实例中，使用polii启动子诸如cmv、sv40、u1、β-肌动蛋白或杂合polii启动子。其它合适的polii启动子是本领域已知的，并且可以根据本公开的该实例使用。例如，polii启动子系统在本公开的ddrnai构建体中可以是优选的，所述的ddrnai构建体表达pri-mirna，所述pri-mirna通过酶drosha和pasha的作用被加工成一种或多种shmir。polii启动子系统在本公开的ddrnai构建体中也可以是优选的，所述ddrnai构建体包含编码在单个启动子控制下的多个shrna或shmir的序列。在需要组织特异性的情况下，polii启动子系统也可以是优选的。

在另一个实例中，使用由rna聚合酶iii控制的启动子，诸如u6启动子(u6-1、u6-8、u6-9)、h1启动子、7sl启动子、人y启动子(hy1、hy3、hy4(参见maraia等，nucleicacidsres22(15):3045-52(1994))和hy5启动子(参见maraia等，nucleicacidsres24(18):3552-59(1994))、人mrp-7-2启动子、腺病毒va1启动子、人trna启动子或5s核糖体rna启动子。

用于本公开的ddrnai构建体的合适启动子描述于美国专利第8,008,468号和美国专利第8,129,510号中。

在一个实例中，启动子是rnapoliii启动子。例如，启动子是u6启动子(例如，u6-1、u6-8或u6-9启动子)。在另一个实例中，启动子是h1启动子。

在本公开的ddrnai构建体编码多种shmir或编码一种或多种shmir和shrna的情况下，如本文所述，ddrnai构建体中的每种核酸与u6启动子(例如，单独的u6启动子)可操作地连接。

例如，构建体中的启动子是u6启动子。例如，启动子是u6-1启动子。例如，启动子是u6-8启动子。例如，启动子是u6-9启动子。

在一些实例中，使用具有可变强度的启动子。例如，两种或更多种强启动子(诸如poliii型启动子)可通过例如耗尽可用核苷酸库或转录所需的其它细胞组分来对削弱细胞。另外，或可选地，几种强启动子的使用可导致rnai试剂(例如shmir或shrna)在细胞中的毒性水平的表达。因此，在一些实例中，多启动子ddrnai构建体中的一个或多个启动子比构建体中的其它启动子弱，或者构建体中的所有启动子可以小于最大速率表达shmir或shrna。还可使用各种分子技术，或者以其它方式，例如通过修饰各种调控元件来修饰启动子，以获得较弱的转录水平或较强的转录水平。实现减少的转录的一种方法是修饰已知控制启动子活性的启动子内的序列元件。例如，已知近端序列元件(pse)影响人u6启动子的活性(参见domitrovich，例如，nucleicacidsres31:2344-2352(2003)。用来自弱启动子(诸如人u6-7启动子)的元件替换强启动子(诸如人u6-1、u6-8或u6-9启动子)中存在的pse元件会降低杂交u6-1、u6-8或u6-9启动子的活性。该方法已用于本申请中描述的实例中，但实现该结果的其它方法在本领域中是已知的。

可用于本公开的一些实例的启动子可以是组织特异性的或细胞特异性的。当其应用于启动子时，术语“组织特异性”是指能够指导目标核酸在特定类型的组织(例如，眼或肌肉的组织)中选择性转录，而在不同类型的组织(例如，肝)中同一目标核苷酸序列的表达相对不存在的启动子。当其应用于启动子时，术语“细胞特异性”是指能够指导目标核酸在特定类型的细胞中选择性转录，而在同一组织内的不同类型的细胞中同一目标核苷酸序列的表达相对不存在的启动子。根据一个实例，使用肌肉特异性启动子，诸如spc512或ck8。然而，其它肌肉特异性启动子是本领域已知的并且预期用于本公开的ddrnai构建体。

在一个实例中，本公开的ddrnai构建体可另外包含一种或多种增强子，以增加由本文所述的核酸编码的shmir或shrna的表达。适用于本公开的实例的增强子包括apoehcr增强子、cmv增强子(xia等，nucleicacidsres31-17(2003))，以及本领域技术人员已知的其它增强子。用于本公开的ddrnai构建体的合适的启动子描述于美国专利第8,008,468号中。

在另外的实例中，本公开的ddrnai构建体可包含与编码本公开的shmir或shrna的核酸连接的转录终止子。在ddrnai构建体包含多种本文所述的核酸(即，编码多种shmir/和或shrna)的情况下，与每一种核酸连接的终止子可同相同或不同。例如，在其中使用rnapoliii启动子的本公开的ddrnai构建体中，终止子可以是4个或更多个或5个或更多个或6个或更多个t残基的连续区段。然而，在使用不同启动子的情况下，终止子可以是不同的并且与来自终止子所源自的基因的启动子匹配。此类终止子包括但不限于sv40多聚腺苷酸、advva1基因、5s核糖体rna基因和人t-rna的终止子。其它启动子和终止子组合在本领域是已知的，并且预期用于本公开的ddrnai构建体。

另外，可将启动子和终止子混合和匹配，如对rnapolii启动子和终止子通常所进行的那样。

在一个实例中，用于包含多种核酸的ddrnai构建体中的每种核酸的启动子和终止子组合是不同的，以降低组分之间dna重组事件的可能性。

本公开的一个示例性ddrnai构建体包含与启动子可操作地连接的含有编码如本文所述的shmir13的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，以及与启动子可操作地连接的含有编码如本文所述的shmir17的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。例如，本公开的示例性ddrnai构建体包含与启动子可操作地连接的含有seqidno:64中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，以及与启动子可操作地连接的含有seqidno:68中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。在一个实例中，编码shmir的ddrnai构建体中的每种核酸可以与单独的启动子可操作地连接。在一个实例中，编码shmir的ddrnai构建体中的每种核酸可以与同一启动子可操作地连接。例如，启动子或每个启动子是u6启动子(例如，u6-1、u6-8或u6-9启动子)。例如，启动子或每个启动子可以是肌肉特异性启动子，例如spc512或ck8启动子。

根据其中编码shmir13和shmir17的ddrnai构建体中的核酸与同一spc512启动子可操作地连接的实例，ddrnai构建体包含seqidno:72中所示的dna序列或由所述dna序列组成。根据其中编码shmir13和shmir17的ddrnai构建体中的核酸与同一ck8启动子可操作地连接的实例，ddrnai构建体包含seqidno:70中所示的dna序列或由所述dna序列组成。

本公开的另一个示例性ddrnai构建体包含与启动子可操作地连接的含有编码如本文所述的shmir3的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，以及与启动子可操作地连接的含有编码如本文所述的shmir14的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。例如，本公开的示例性ddrnai构建体包含与启动子可操作地连接的含有seqidno:57中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，以及与启动子可操作地连接的含有seqidno:65中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。在一个实例中，编码shmir的ddrnai构建体中的每种核酸可以与单独的启动子可操作地连接。在另一个实例中，编码shmir的ddrnai构建体中的每种核酸可以与同一启动子可操作地连接。例如，启动子或每个启动子是u6启动子(例如，u6-1、u6-8或u6-9启动子)。例如，启动子或每个启动子可以是肌肉特异性启动子，例如spc512或ck8启动子。

根据其中编码shmir3和shmir14的ddrnai构建体中的核酸与同一spc512启动子可操作地连接的实例，ddrnai构建体包含seqidno:71中所示的dna序列或由所述dna序列组成。根据其中编码shmir3和shmir14的ddrnai构建体中的核酸与同一ck8启动子可操作地连接的实例，ddrnai构建体包含seqidno:69中所示的dna序列或由所述dna序列组成。

还提供了多种ddrnai构建体。例如，可在多种ddrnai构建体内提供编码如本文所述的shmir的多种核酸，其中每种ddrnai构建体包含本文所述的多种核酸中的一种或多种。描述了编码shmir的核酸的组合，并且应当将其作必要的修正后应用于本公开的该实例。在一个实例中，本文所述的多种核酸中的每种核酸在其自身的ddrnai构建体内提供。

根据其中提供多种ddrnai构建体的任何实例，每种ddrnai构建体还可包含与编码其中包含的一种或多种shmir的一种或多种核酸可操作地连接的一个或多个启动子。在一个实例中，每种ddrnai构建体包含编码shmir的单个核酸和与其可操作地连接的启动子。根据其中多种ddrnai构建体中的一种或多种包含两种或更多种编码shmir的核酸的实例，一种或多种ddrnai构建体中的每种核酸与单独的启动子可操作地连接。在其中多种ddrnai构建体中的一种或多种包含两种或更多种编码shmir的核酸的另一个实例中，两种或更多种核酸与ddrnai构建体中的同一启动子可操作地连接。

本公开的一个示例性多种ddrnai构建体包括ddrnai构建体，所述构建体包含与启动子可操作地连接的包含编码如本文所述的shmir13的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，以及ddrnai构建体，所述构建体包含与启动子可操作地连接的包含编码如本文所述的shmir17的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。例如，本公开的示例性多种ddrnai构建体包括含有与启动子可操作地连接的包含seqidno:64中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸的ddrnai构建体，以及含有与启动子可操作地连接的包含seqidno:68中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸的ddrnai构建体。在一个实例中，启动子是例如选自u6-1、u6-8或u6-9启动子的u6启动子。在另一个实例中，启动子是肌肉特异性启动子，例如spc512或ck8启动子。

本公开的另一个示例性多种ddrnai构建体包括ddrnai构建体，所述构建体包含与启动子可操作地连接的包含编码如本文所述的shmir3的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，以及ddrnai构建体，所述构建体包含与启动子可操作地连接的包含编码如本文所述的shmir14的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。例如，本公开的示例性多种ddrnai构建体包括ddrnai构建体，所述构建体包含与启动子可操作地连接的包含seqidno:57中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，以及ddrnai构建体，所述构建体包含与启动子可操作地连接的包含seqidno:65中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。在一个实例中，启动子是例如选自u6-1、u6-8或u6-9启动子的u6启动子。在另一个实例中，启动子是肌肉特异性启动子，例如spc512或ck8启动子。

另外，所述ddrnai构建体或每种ddrnai构建体可包含一个或多个策略性定位的多克隆位点和/或独特的限制性位点，使得启动子、编码shmir或shrna的核酸和/或其它调控元件易于去除或替换。可使用策略性定位的限制性位点和/或互补的粘性末端从较小的寡核苷酸组分组装所述ddrnai构建体或每种ddrnai构建体。根据本公开的一种方法的基础载体包含具有多接头的质粒，其中所有位点都是独特的(尽管这不是绝对要求)。顺序地，将每个启动子插入其指定的独特位点之间，产生具有一个或多个启动子的基础盒，所有所述启动子都可具有可变的取向。顺序地，再次将退火的引物对插入每个单独启动子下游的独特位点，产生单表达盒构建体、双表达盒构建体或多表达盒构建体。可使用位于单表达盒插入物、双表达盒插入物或多表达盒插入物两侧的两个独特的限制性内切酶位点(相同或不同的位点)将插入物移入例如adv主链或aav主链中。

可使用本领域已知的任何合适的遗传工程技术，包括但不限于pcr、寡核苷酸合成、限制性内切核酸酶消化、连接、转化、质粒纯化和dna测序的标准技术来实现该ddrnai构建体或每种ddrnai构建体的产生。如果该构建体或每种构建体是病毒构建体，则所述构建体包含例如将ddrnai构建体包装至病毒颗粒中所必需的序列和/或允许将ddrnai构建体整合到靶细胞基因组中的序列。在一些实例中，该病毒构建体或每种病毒构建体另外含有允许病毒复制和繁殖的基因，然而此类基因将以反式提供。另外，该病毒构建体或每种病毒构建体可包含以天然形式或修饰形式并入的来自任何已知生物体的基因组的基因或基因序列。例如，病毒构建体可包含用于在细菌中复制构建体的序列。

该构建体或每个构建体还可含有另外的遗传元件。可包括在构建体中的元件的类型不受任何方式的限制，并且可由本领域技术人员选择。例如，另外的遗传元件可包括报告基因，诸如荧光标记蛋白，诸如gfp或rfp的一个或多个基因；易于测定的酶，诸如β-半乳糖苷酶、荧光素酶、β-葡萄糖醛酸酶、氯霉素乙酰基转移酶或分泌的胚胎碱性磷酸酶；或容易用于免疫测定的蛋白质诸如激素或细胞因子。

可用于本公开的实施方案的其它遗传元件包括编码赋予细胞选择性生长优势的蛋白质(诸如腺苷脱氨酶、氨基糖苷磷酸转移酶、二氢叶酸还原酶、潮霉素-b-磷酸转移酶、抗药性)的那些元件，或编码提供从营养缺陷型缺失的生物合成能力的蛋白质的那些基因。如果将报告基因与该构建体或每个构建体一起包括，则可以包括内部核糖体进入位点(ires)序列。在一个实例中，另外的遗传元件与独立的启动子/增强子可操作地连接并受其控制。另外，可使用用于在细菌中繁殖构建体的合适的复制起始点。通常将复制起始点的序列与ddrnai构建体和其它遗传序列隔开。此类复制起始点是本领域已知的，并且包括puc、cole1、2-微米或sv40的复制起始点。

表达载体

在一个实例中，本公开的ddrnai构建体包含在表达载体内。

在一个实例中，表达载体是质粒，例如，如本领域已知的。在一个实例中，合适的质粒表达载体是paav载体，例如自身互补的paav(pscaav)质粒载体或单链paav(pssaav)质粒载体。如本文中所述，质粒可包含一个或多个启动子(描述了其合适的实例)以驱动本公开的一种或多种shmir的表达。

在一个实例中，表达载体为微环dna(mini-circledna)。微环dna描述于美国专利公开第2004/0214329号中。微环dna可用于持续高水平的核酸转录。环状载体的特征在于缺乏表达沉默细菌序列。例如，微环载体与细菌质粒载体的不同之处在于它们缺乏复制起始点，并且缺少通常存在于细菌质粒中的药物选择标记，例如β-内酰胺酶，tet等。因此，微环dna的大小变得更小，允许更高效的递送。

在一个实例中，表达载体为病毒载体。

基于任何合适的病毒的病毒载体可用于递送本公开的ddrnai。另外，可以使用杂合病毒系统。病毒递送系统的选择将取决于各种参数，诸如被靶向递送的组织、系统的转导效率、致病性、免疫学和毒性问题等。

基因疗法中使用的常用病毒系统种类可根据它们的基因组是整合到宿主细胞染色质(致癌逆转录病毒和慢病毒)还是主要作为染色体外附加体存在于细胞核中(腺相关病毒、腺病毒和疱疹病毒)而分为两组。在一个实例中，本公开的病毒载体整合到宿主细胞的染色质中。在另一个实例中，本公开的病毒载体作为染色体外附加体保持在宿主细胞的细胞核中。

在一个实例中，病毒载体为腺病毒(adv)载体。腺病毒为具有26kbp至48kbp的线性基因组的中等大小的双链无包膜dna病毒。腺病毒通过受体介导的结合和内化进入靶细胞，在非分裂和分裂细胞中穿透细胞核。腺病毒严重依赖宿主细胞进行存活和复制，并且能够使用宿主的复制机制在脊椎动物细胞的细胞核中复制。

在一个实例中，病毒载体来自细小病毒科。细小病毒科是一种小的单链无包膜dna病毒家族，其基因组长约5000个核苷酸。家族成员中包括腺相关病毒(aav)。在一个实例中，本公开的病毒载体为aav。aav是通常需要与另一种病毒(通常是腺病毒或疱疹病毒)共感染以启动和维持生产性感染周期的依赖性细小病毒。在这种辅助病毒不存在的情况下，aav仍然能够通过受体介导的结合和内化感染或转导靶细胞，穿透非分裂和分裂细胞中的细胞核。因为在辅助病毒不存在的情况下不能从aav感染产生子代病毒，所以转导的程度仅限于感染病毒的初始细胞。正是这一特征使aav成为用于本公开的理想载体。此外，与逆转录病毒、腺病毒和单纯疱疹病毒不同，aav似乎缺乏人致病性和毒性(kay等，nature.424:251(2003))。由于基因组通常仅编码两个基因，因此作为递送媒介物，aav受限于4.5个单链千碱基(kb)的包装容量并不令人惊讶。然而，尽管这种大小限制可限制可被递送用于替代基因疗法的基因，但其不会对诸如shmir和shrna的较短序列的包装和表达产生不利影响。

与本公开的ddrnai构建体一起使用的另一种病毒递送系统是基于来自逆转录病毒科的病毒的系统。逆转录病毒包含单链rna动物病毒，其特征在于两个独特的特性。首先，逆转录病毒的基因组是二倍体，由两个拷贝的rna组成。其次，该rna由病毒体相关酶逆转录酶转录成双链dna。该双链dna或原病毒因而可整合到宿主基因组中，并作为宿主基因组的稳定整合组分从亲代细胞传递到子代细胞。

在一些实例中，病毒载体为慢病毒。慢病毒载体通常用水疱性口炎病毒糖蛋白(vsv-g)假型化，并且源自人免疫缺陷病毒(hiv)；绵羊髓鞘脱落-梅迪病毒(visan-maedi)，其引起绵羊的脑炎(visna)或肺炎；马传染性贫血病毒(eiav)，其引起马的自身免疫性溶血性贫血和脑病；猫免疫缺陷病毒(fiv)，其引起猫的免疫缺陷；牛免疫缺陷病毒(biv)，其引起牛的淋巴结病和淋巴细胞增多症；和猴免疫缺陷病毒(siv)，其引起非人类灵长类动物的免疫缺陷和脑病。基于hiv的载体通常保留<5％的亲本基因组，并且<25％的基因组被整合到包装构建体中，这使恢复具有复制能力的hiv的产生可能性最小化。已通过开发自身失活型载体进一步提高了生物安全性，所述自身失活型载体在下游长末端重复序列中缺失调控元件，从而消除了载体动员所需的包装信号的转录。使用慢病毒载体的主要有利方面之一是基因转移在大多数组织或细胞类型中是持久的，即使在转导细胞的细胞分裂后亦如此。

用于从本公开的核酸和ddrnai构建体表达shmir和/或shrna的基于慢病毒的构建体包含来自慢病毒的5'和3'长末端重复序列(ltr)的序列。在一个实例中，病毒构建体包含来自慢病毒的失活的或自身失活的3'ltr。可通过本领域已知的任何方法使3'ltr自身失活。例如，3'ltr的u3元件含有其增强子序列(例如tata盒、sp1和nf-κb位点)的缺失。作为自身失活的3'ltr的结果，整合到宿主基因组中的原病毒将包含失活的5'ltr。ltr序列可以是来自任何物种的任何慢病毒的ltr序列。基于慢病毒的构建体还可并入mmlv或mscv、rsv或哺乳动物基因的序列。另外，来自慢病毒5'ltr的u3序列可用病毒构建体中的启动子序列替换。这可增加从包装细胞系中回收的病毒滴度。还可以包括增强子序列。

可使用本领域技术人员已知的其它病毒或非病毒系统将本发明的ddrnai或核酸递送至目标细胞，所述病毒或非病毒系统包括但不限于缺失基因的腺病毒-转座子载体(参见yant等,naturebiotech.20:999-1004(2002))；源自辛德毕斯病毒或塞姆利基森林病毒的系统(参见perri等，j.virol.74(20):9802-07(2002))；源自新城疫病毒或仙台病毒的系统。

测试本公开的shmir或ddrnai构建体

细胞培养模型

可用作opmd细胞培养模型的细胞系的实例是已用表达正常ala10-humanpabpn1-flag(ala10)或突变型ala17-humanpabpn1-flag(ala17)(后者为opmd的标志物)的载体转染的hek293t细胞系(hek293t,atcc,manassas,usa)。

可用作opmd的细胞培养模型的细胞系的另外实例是例如如实施例5中所述的c2c12小鼠肌细胞和arpe-19人视网膜细胞。

可用作opmd的细胞培养模型的细胞系的另一个实例是被稳定转染以表达正常ala10-humanpabpn1-flag(ala10)或突变型ala17-humanpabpn1-flag(ala17)的原代小鼠成肌细胞(im2)细胞系。稳定表达突变型ala17-humanpabpn1-flag(ala17)的示例性im2衍生细胞系是h2kb-d7e细胞系。h2kb-d7e细胞系也描述于raz等，(2011)americanjournalofpathology,179(4):1988-2000中。

适用于opmd的细胞培养模型的其它细胞系是本领域已知的，诸如fan等，(2001)humanmoleculargenetics,10:2341–2351,bao等，(2002)thejournalofbiologicalchemistry,277:12263-12269以及abu-baker等，(2003)humanmoleculargenetics,12:2609–2623中所描述的。

如本文所举例说明的，本公开的shmir的活性通过向细胞施用编码shmir的核酸或包含其的ddrnai构建体或表达载体，随后测量由pabpn1编码的rna或蛋白质的表达水平来测定。例如，可使用一种或多种对pabpn1具有特异性的探针或引物，通过rt-pcr、定量pcr、半定量pcr或在严格条件下的原位杂交中的任一种或多种来测定细胞内pabpn1基因表达。还可通过pcr，使用一种或多种对pabpn1具有特异性的探针或引物来测定pabpn1mrna或dna，或者可将elisa用于检测pabpn1蛋白。

可用在用于检测pabpn1表达的rt-pcr、定量pcr或半定量pcr技术中的多核苷酸是已知的并且可商购获得(thermofisher)。然而，可使用本领域已知的方法和/或软件，基于可用于pabpn1的序列信息设计可用于基于pcr的检测方法的多核苷酸。在一个实例中，可使用本领域已知的标准方法使用rt-pcr检测pabpn1mrna的存在或不存在。在一个实例中，可以使用蛋白质印迹、elisa或本领域可获得的其它标准定量或半定量技术中的任何一种或多种或此类技术的组合来检测pabpn1多肽或蛋白质的存在或不存在或相对量。预期了依赖于pabpn1的抗体识别的技术，并且在本文中例如在实施例4中描述了这些技术。在一个实例中，pabpn1多肽的存在或不存在或相对丰度可用包括pabpn1多肽的抗体捕获与捕获的pabpn1多肽的电泳分辨结合的技术，例如使用isonostic^tm测定(targetdiscovery,inc.)来检测。pabpn1蛋白的抗体是商购可得的。

用于对转染或转导效率以及样品回收的差异进行标准化的各种方式在本领域中是已知的。

相对于在本公开的rna不存在的情况下由pabpn1编码的mrna或蛋白质的表达水平或pabpn1蛋白的核聚集体的量，减少由pabpn1编码的mrna或蛋白质的表达或减少pabpn1蛋白的核聚集体的存在的本公开的核酸、ddrnai构建体或表达载体，被认为可用于治疗应用，例如，诸如如本文所述，通过减少内源性pabpn1的表达并且用不导致opmd的pabpn1蛋白替换一些或全部内源性pabpn1来治疗opmd。

动物模型

存在几种可用于研究opmd的小型动物模型，其实例描述于uyama等，(2005)actamyologica,24(2):84-88以及chartier和simonelig(2013)drugdiscoverytoday:technologies,10:e103-107中。示例性动物模型是先前已在下述文献中描述的a17.1转基因小鼠模型：davies等，(2005)naturemedicine,11:672–677和trollet等，(2010)humanmoleculargenetics,19(11):2191-2207。

任何前述动物模型可用于测定本公开的shmir或ddrnai构建体敲低、减少或抑制由pabpn1基因编码的rna或蛋白质的表达的功效。

本文已关于细胞模型描述了用于测定pabpn1基因表达的方法，并且应当将其作必要的修正后应用于本公开的该实例。

用于替代功能性pabpn1的剂

在一个实例中，本公开提供了用于例如对细胞或动物替换功能性pabpn1蛋白的剂。功能性pabpn1蛋白不会导致opmd，也不由被本公开的一种或多种shmir或shrna靶向的mrna转录物编码。

在一个实例中，用于对细胞或动物替换功能性pabpn1蛋白的剂是编码功能性pabpn1蛋白的核酸，例如，诸如dna或cdna。例如，编码功能性pabpn1蛋白的核酸可被密码子优化，例如，相对于野生型pabpn1核酸包含一个或多个简并或摇摆碱基但编码相同的氨基酸，使得编码功能性pabpn1蛋白的相应mrna序列不被本公开的一种或多种shmir或shrna识别。例如，编码功能性pabpn1蛋白的密码子优化的核酸可相对于被本公开的一种或多种shmir或shrna靶向的区域内的野生型pabpn1核酸包含一个或多个简并或摇摆碱基。在一个实例中，所述一个或多个简并或摇摆碱基位于本公开的shmir或shrna的效应序列的种子区域内。

在一个实例中，编码功能性pabpn1蛋白的核酸经密码子优化，使得其相应的mrna序列不被本公开的一种或多种shmir或shrna识别。优选地，由密码子优化的核酸序列编码的功能性pabpn1蛋白包含seqidno:74中所示的氨基酸序列，即野生型人pabpn1蛋白的氨基酸序列。技术人员将理解，存在许多可用于编码功能性pabpn1蛋白的核苷酸序列组合，并且核苷酸序列的选择最终将取决于一种或多种shmir或shrna的效应序列，即，使得密码子优化的核酸不被所述一种或多种shmir或shrna识别。在一个实例中，用于替换功能性pabpn1蛋白的剂是包含seqidno:73中所示的序列的核酸。在一个实例中，编码功能性pabpn1蛋白的核酸还可包含kozak序列。

在一个实例中，编码功能性pabpn1蛋白的密码子优化的核酸与适于表达功能性pabpn1蛋白的启动子可操作地连接。适于在组织或眼睛或肌肉中表达功能性pabpn1蛋白的启动子可以是特别合适的。适合与编码功能性pabpn1蛋白的核酸一起使用的一种示例性启动子是spc512启动子。适合与编码功能性pabpn1蛋白的核酸一起使用的另一种示例性启动子是ck8启动子。然而，可使用本领域已知的任何合适的启动子。例如，与编码功能性pabpn1蛋白的核酸一起使用的其它适合的启动子描述于us20110212529a1中。

如本文中所用，可用于本公开的一些实例的启动子可以是组织特异性的或细胞特异性的。

在一个实例中，编码本公开的功能性pabpn1蛋白的密码子优化的核酸可另外地包含一个或多个增强子以增加功能性pabpn1蛋白及其相应的mrna转录物的表达。适用于本公开的该实例的增强子将是本领域技术人员已知的。

编码功能性pabpn1蛋白的核酸可包含在表达载体中。已在本公开的核酸和ddrnai构建体的背景下描述了示例性表达载体，并且应当将其作必要的修正后应用于该实例。

因此，在一个实例中，用于对细胞或动物替换功能性pabpn1蛋白的剂可以是包含编码功能性pabpn1蛋白的密码子优化的核酸的表达载体。例如，本公开的表达载体可包含编码功能性pabpn1蛋白的密码子优化的核酸和用于其表达的启动子，例如spc512启动子或ck8启动子。在一个实例中，编码功能性pabpn1蛋白的密码子优化的核酸还可包含kozak序列。

在一个实例中，还可将编码如本文所述的功能性pabpn1蛋白的核酸还包含在质粒表达载体内。本文已经描述了合适的质粒表达载体，并且这些载体将是本领域已知的。在一个实例中，合适的质粒表达载体是paav载体，例如pscaav质粒载体或pssaav质粒载体。

在一个实例中，表达载体为微环dna。本文已描述了微环dna载体。

在一个实例中，表达载体为病毒载体。例如，基于任何合适病毒的病毒载体可用于递送编码本公开的功能性pabpn1蛋白的密码子优化的核酸。另外，可以使用杂合病毒系统。病毒递送系统的选择将取决于各种参数，诸如被靶向递送的组织、系统的转导效率、致病性、免疫学和毒性问题等。

已在本公开的rna和ddrnai构建体的背景下描述了用于将遗传物质递送至细胞或动物的示例性病毒系统，并且应当将其作必要的修正后应用于该实例。

在一个实例中，病毒载体为aav。

在一个实例中，病毒载体为adv载体。

在一个实例中，病毒载体为慢病毒。

可使用本领域技术人员已知的其它病毒或非病毒系统将编码本公开的功能性pabpn1蛋白的密码子优化的核酸递送至目标细胞，所述病毒或非病毒系统包括但不限于缺失基因的腺病毒-转座子载体(参见yant等,naturebiotech.20:999-1004(2002))；源自辛德毕斯病毒或塞姆利基森林病毒的系统(参见perri等，j.virol.74(20):9802-07(2002))；源自新城疫病毒或仙台病毒的系统。

根据其中为编码如本文所述的功能性pabpn1蛋白的密码子优化的核酸提供本公开的核酸、ddrnai构建体或表达载体的实例，可将编码功能性pabpn1蛋白的密码子优化的核酸包含在与所述核酸或ddrnai构建体相同的表达载体中。因此，可将编码本公开的功能性pabpn1蛋白和核酸或ddrnai构建体的密码子优化的核酸作为单个dna构建体提供在例如表达载体内。

在其中将一起提供编码本公开的功能性pabpn1蛋白的密码子优化的核酸和本公开的核酸或ddrnai构建体的替代实例中，可将编码功能性pabpn1蛋白的密码子优化的核酸以及核酸或ddrnai构建体包含在不同的表达载体中。当编码功能性pabpn1蛋白的密码子优化的核酸以及核酸或ddrnai构建体包含在不同的表达载体中时，各个表达载体可以是相同类型的载体或是不同类型的载体。

测试功能性pabpn1

细胞培养模型

在本文中(包括在工作实施例(例如，实施例4和5)中)已描述了opmd的示例性细胞培养模型。opmd的此类细胞培养模型可用于评估本公开的剂在编码靶向内源性pabpn1的本公开的shmir的一种或多种核酸的存在的情况下替换功能性pabpn1蛋白的能力。

还已描述了检测pabpn1蛋白的存在或不存在或相对量的示例性方法，并且将其作必要的修正后应用于该实例。例如，可使用蛋白质印迹、elisa或本领域可获得的其它标准定量或半定量技术中的任一种或多种或此类技术的组合来检测pabpn1蛋白质的存在或不存在或相对量。预期了依赖于pabpn1的抗体识别的技术，并且在本文中描述了所述技术。可用适当的蛋白质标签(例如myc或flag标签)表达突变型和功能性pabpn1蛋白，以有利于使用商购可得的适当抗体差异检测突变型pabpn1蛋白和功能性pabpn1蛋白。例如，可用flag标签表达突变型人pabpn1蛋白。这样，在用本公开的一种或多种核酸、一种或多种ddrnai构建体或一种或多种表达载体和本公开的用于替换本功能性pabpn1蛋白的剂(所述核酸、ddrnai构建体或表达载体或替换本功能性pabpn1蛋白的剂可以如本文所述单独提供或一起提供)转染或转导细胞后，可在细胞中独立地检测突变型和功能性pabpn1蛋白两者的存在或不存在或相对量。

在一个实例中，pabpn1多肽的存在或不存在或相对丰度可用包括pabpn1多肽的抗体捕获与捕获的pabpn1多肽的电泳分辨结合的技术，例如使用isonostic^tm测定(targetdiscovery,inc.)检测。pabpn1蛋白的抗体是商购可得的。

在本公开的一种或多种核酸、一种或多种ddrnai构建体或一种或多种表达载体存在(表达本公开的一种或多种shmir)的情况下在细胞中表达不导致opmd的pabpn1蛋白的本公开的剂被认为可用于治疗opmd。

动物模型

已经描述了用于研究opmd的示例性动物模型。

任何前述动物模型可用于测定本公开的剂在本公开的一种或多种核酸、一种或多种ddrnai构建体或一种或多种表达载体存在(表达本公开的一种或多种shmir)的情况下在体内替换功能性pabpn1蛋白的功效。

本文已关于细胞模型描述了用于测定pabpn1表达的方法，并且应当将其作必要的修正后应用于本公开的该实例。

在一个实例中，可将组织学和形态学分析用于测定本公开的剂在本公开的一种或多种核酸、一种或多种ddrnai构建体或一种或多种表达载体存在(表达本公开的一种或多种shmir)的情况下在体内替换功能性pabpn1蛋白的功效。可用于测定本公开的剂在体内替换功能性pabpn1蛋白的功效的其它测定描述于trollet等，(2010)humanmoleculargenetics,19(11):2191-2207中。

用于ddrnai和功能性pabpn1的替换的单个dna构建体

本公开还提供了单个dna构建体，其包含编码如本文所述的功能性pabpn1蛋白的核酸和本公开的一种或多种ddrnai构建体。在实施例7中描述了包含编码本公开的功能性pabpn1蛋白和ddrnai构建体的核酸的示例性dna构建体。在一个实例中，dna构建体可包含与编码功能性pabpn1蛋白的核酸组合的如本文所述的单个ddrnai构建体。在另一个实例中，dna构建体可包含与编码功能性pabpn1蛋白的核酸组合的多种ddrnai构建体。在dna构建体的每个实例中，对编码功能性pabpn1蛋白的dna序列进行密码子优化，使得其mrna转录物不被一种或多种ddrnai构建体的一种或多种shmir靶向。

在一个实例中，功能性pabpn1蛋白是野生型人pabpn1蛋白(例如具有seqidno:74中所示的序列)。应当理解，编码功能性pabpn1蛋白的密码子优化的dna序列可根据ddrnai构建体编码的一种或多种shmir而变化。也就是说，待修饰的pabpn1mrna转录物内的特定密码子可根据ddrnai构建体编码的一种或多种shmir的一种或多种效应序列而变化。在一个实例中，编码功能性pabpn1蛋白的密码子优化的dna序列示于seqidno:73中。

dna构建体还可包含一个或多个启动子，例如，以驱动功能性pabpn1蛋白和/或ddrnai构建体编码的shmir的表达。可用于本公开的一些实例的启动子可以是组织特异性的或细胞特异性的。用于本公开的dna构建体的示例性启动子是肌肉特异性启动子，诸如例如spc512和ck8。然而，预期本领域已知的任何合适的启动子用于本文所述的dna构建体(例如诸如us20110212529a1中描述的那些)中。

dna构建体可以以表达载体的形式提供，或者可将其包含在表达载体中。本文已经描述了合适的表达载体，并且所述载体将是本领域已知的。

在一个实例中，表达载体为病毒载体。例如，基于任何合适的病毒的病毒载体可用于递送本公开的单个dna构建体。另外，可以使用杂合病毒系统。病毒递送系统的选择将取决于各种参数，诸如被靶向递送的组织、系统的转导效率、致病性、免疫学和毒性问题等。

在另一个实例中，合适的质粒表达载体是paav载体，例如pscaav质粒载体或pssaav质粒载体。已在本公开的ddrnai构建体的背景下描述了用于将遗传物质递送至细胞或动物的其它示例性病毒系统，并且应当将其作必要的修正后应用于该实例。

在一个实例中，dna构建体以paav表达载体的形式提供，所述表达载体在5'至3'方向上包含肌肉特异性启动子，例如spc512启动子，如本文所述的ddrnai构建体和本文所述的pabpn1构建体，例如，其中ddrnai构建体位于编码功能性pabpn1蛋白的核酸的3'非翻译区(utr)中。图12a中举例说明了根据该实例的dna构建体。

根据该实例的示例性dna构建体为paav表达载体，其在5'至3'方向上包含：

(a)肌肉特异性启动子，例如spc512；

(b)如本文所述的pabpn1构建体，其包含编码具有mrna转录物的功能性pabpn1蛋白的dna序列，所述mrna转录物不被ddrnai构建体编码的shmir靶向；以及

(c)本公开的ddrnai构建体，其包含含有编码如本文所述的shmir17的dna序列的核酸和含有编码如本文所述的shmir13的dna序列的核酸。

根据该实例，dna构建体可包含seqidno:72中所示的dna序列或由所述dna序列组成。

根据该实例的另一个示例性dna构建体为paav表达载体，其在5'至3'方向上包含：

(a)肌肉特异性启动子，例如spc512；

(b)如本文所述的pabpn1构建体，其包含编码具有mrna转录物的功能性pabpn1蛋白的dna序列，所述mrna转录物不被ddrnai构建体编码的shmir靶向；以及

(c)本公开的ddrnai构建体，其包含含有编码如本文所述的shmir3的dna序列的核酸和含有编码如本文所述的shmir14的dna序列的核酸。

根据该实例，dna构建体可包含seqidno:71中所示的dna序列或由所述dna序列组成。

在另一个实例中，dna构建体以paav表达载体的形式提供，所述paav表达载体在5'至3'方向上包含第一肌肉特异性启动子，例如ck8启动子，如本文所述的pabpn1构建体，第二肌肉特异性启动子，例如spc512启动子和如本文所述的ddrnai构建体，其中第一和第二肌肉特异性启动子分别与pabpn1构建体和ddrnai构建体处于可操作的连接中。图12b中举例说明了根据该实例的dna构建体。例如，与pabpn1构建体处于可操作的连接中的启动子将与编码其中包含的功能性pabpn1蛋白的dna序列可操作地连接，与ddrnai构建体处于可操的连接中的启动子将与一个或多个编码本公开的shmir的核酸可操作地连接。图12a中举例说明了根据该实例的dna构建体。

根据该实例的示例性dna构建体为paav表达载体，其在5'至3'方向上包含：

(a)肌肉特异性启动子例如ck8启动子，其位于本公开的ddrnai构建体的上游，所述构建体包含含有编码如本文所述的shmir17的dna序列的核酸和含有编码如本文所述的shmir13的dna序列的核酸；以及

(b)肌肉特异性启动子例如spc512启动子，其位于如本文所述的pabpn1构建体的上游，所述构建体包含编码具有mrna转录物的功能性pabpn1蛋白的dna序列，所述mrna转录物不被ddrnai构建体编码的shmir靶向。

根据该实例，dna构建体可包含seqidno:70中所示的dna序列或由所述dna序列组成。

根据该实例的另一个示例性dna构建体为paav表达载体，其在5'至3'方向上包含：

(a)肌肉特异性启动子例如ck8启动子，其位于本公开的ddrnai构建体的上游，所述构建体包含含有编码如本文所述的shmir3的dna序列的核酸和含有编码如本文所述的shmir14的dna序列的核酸；以及

(b)肌肉特异性启动子例如spc512启动子，其位于如本文所述的pabpn1构建体的上游，所述构建体包含编码具有mrna转录物的功能性pabpn1蛋白的dna序列，所述mrna转录物不被ddrnai构建体编码的shmir靶向。

根据该实例，dna构建体可包含seqidno:69中所示的dna序列或由所述dna序列组成。

包含在本公开的dna构建体中的编码shmir13和shmir17的示例性ddrnai构建体包含含有编码shmir(所述shmir包含seqidno:31中所示的效应序列和与seqidno:31中所示的序列基本上互补的效应互补序列,例如，seqidno:30(shmir13)中所示的效应互补序列)的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，以及含有编码shmir(所述shmir包含seqidno:39中所示的效应序列和与seqidno:39中所示的序列基本上互补的效应互补序列，例如，seqidno:38(shmir17)中所示的效应互补序列)的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。例如，根据dna构建体的该实例的ddrnai构建体可包含含有seqidno:64(shmir13)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，以及含有seqidno:68(shmir17)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。

包含在本公开的dna构建体中的编码shmir3和shmir14的示例性ddrnai构建体包含含有编码shmir(所述shmir包含seqidno:17中所示的效应序列和与seqidno:17中所示的序列基本上互补的效应互补序列,例如，seqidno:16(shmir3)中所示的效应互补序列)的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，以及含有编码shmir(所述shmir包含seqidno:33中所示的效应序列和与seqidno:33中所示的序列基本上互补的效应互补序列，例如，seqidno:34(shmir14)中所示的效应互补序列)的dna序列或由所述dna序列组成的的核酸。例如，根据dna构建体的该实例的ddrnai构建体可包含含有seqidno:57(shmir3)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸，以及含有seqidno:65(shmir14)中所示的dna序列或由所述dna序列组成的核酸。

虽然已经描述了某些实例，但应理解，根据本公开的dna构建体可包括编码一种或多种shmir的本文所述的任何ddrnai构建体。例如，实施例1至5中描述的编码shmir的ddrnai构建体可以特别适合包含在本公开的dna构建体中。

组合物和载体

在一些实例中，在组合物中提供本公开的一种或多种核酸、一种或多种ddrnai构建体或一种或多种表达载体。在一些实例中，在组合物中提供编码本公开的功能性pabpn1蛋白的核酸。在一些实例中，将本公开的一种或多种核酸、一种或多种ddrnai构建体或一种或多种表达载体与编码本公开的功能性pabpn1蛋白的核酸一起在组合物中提供。在一些实例中，在组合物中的同一表达载体中提供所述一种或多种核酸或一种或多种ddrnai构建体和编码功能性pabpn1蛋白的所述核酸。

如本文中所述，表达载体可以包含单独的或与编码本公开的功能性pabpn1蛋白的密码子优化的核酸组合的本公开的ddrnai构建体。因此，本文提及的表达载体和/或包含其的组合物将被理解为包括：(i)包含本公开ddrnai构建体的表达载体，或包含其的组合物；(ii)包含本公开的ddrnai构建体和编码本公开的功能性pabpn1蛋白的密码子优化的核酸的表达载体，或包含其的组合物；或(iii)包含编码本公开的功能性pabpn1蛋白的密码子优化的核酸的表达载体，或包含其的组合物。

因此，本公开的组合物可包含(i)含有本公开的ddrnai构建体的表达载体，以及(ii)含有编码本公开的功能性pabpn1蛋白的密码子优化的核酸的表达载体。因此，本公开的组合物可包含单个表达载体，其包含本公开的ddrnai构建体和编码本公开的功能性pabpn1蛋白的密码子优化的核酸。

在另一个实例中，可在一种组合物中提供包含本公开的ddrnai构建体的表达载体，并且可在另一种组合物中提供包含编码本公开的功能性pabpn1蛋白的密码子优化的核酸的表达载体，例如，所述表达载体一起包装。

本公开的组合物还可包含一种或多种药学上可接受的载剂和/或稀释剂。例如，组合物可包含载剂，所述载剂适于在向受试者施用后将本公开的一种或多种核酸、一种或多种ddrnai构建体或一种或多种表达载体递送至所述受试者的肌肉。

在一些实例中，载体是基于脂质的载体、阳离子脂质或脂质体核酸复合物、脂质体、胶束、病毒体、脂质纳米颗粒或其混合物。

在一些实例中，载体是可生物降解的基于聚合物的载体，使得形成阳离子聚合物-核酸复合物。例如，载体可以是适合于将本公开的一种或多种核酸、一种或多种ddrnai构建体或一种或多种表达载体递送至肌肉细胞或眼组织的阳离子聚合物微粒。将阳离子聚合物用于向细胞递送组合物的用途是本领域已知的，诸如描述于judge等nature25:457-462(2005)(其内容通过引用并入本文)中。示例性基于阳离子聚合物的载体是阳离子dna结合聚合物，诸如聚乙烯亚胺。适用于与本公开的一种或多种核酸、一种或多种ddrnai构建体或一种或多种表达载体复合和递送本公开的一种或多种核酸、一种或多种ddrnai构建体或一种或多种表达载体的其它阳离子聚合物包括聚(l-赖氨酸)(pll)、壳聚糖、pamam树枝状聚合物和聚甲基丙烯酸(2-二甲基氨基)乙酯(pdmaema)。其它聚合物包括聚β-氨基酯。这些是本领域已知的其它合适的阳离子聚合物，并且描述于mastrobattista和hennink,naturematerials,11:10-12(2012),wo/2003/097107和wo/2006/041617(其全部内容通过引用并入本文)中。此类载体制剂已被开发用于各种递送途径，包括肠胃外皮下注射、静脉内注射和吸入。

在另外的实例中，载体是基于环糊精的载体诸如环糊精聚合物-核酸络合物。

在另外的实例中，载体是基于蛋白质的载体诸如阳离子肽-核酸络合物。

在另一个实例中，载体是脂质纳米颗粒。示例性纳米颗粒描述于例如us7514099中。

在一些实例中，用脂质纳米颗粒组合物配制本公开的一种或多种核酸、一种或多种ddrnai构建体或一种或多种表达载体，所述脂质纳米颗粒组合物包含阳离子脂质/胆固醇/peg-c-dma/dspc(例如，以40/48/2/10的比率)、阳离子脂质/胆固醇/peg-dmg/dspc(例如，以40/48/2/10的比率)或阳离子脂质/胆固醇/peg-dmg(例如，以60/38/2的比率)。在一些实例中，阳离子脂质是dma中的辛基cl、dma中的dl、l-278、kc2dma中的dl或mc3。

在另一个实例中，用wo2010/021865；wo2010/080724；wo2010/042877；wo2010/105209或wo2011/022460中描述的阳离子脂质制剂中的任一种配制本公开的一种或多种核酸、一种或多种ddrnai构建体或一种或多种表达载体。

在另一个实例中，将本公开的一种或多种核酸或一种或多种ddrnai构建体或一种或多种表达载体与另一种化合物缀合或络合，例如，以促进一种或多种核酸、一种或多种ddrnai构建体或一种或多种表达载体的递送。此类缀合物的非限制性实例描述于us2008/0152661和us2004/0162260(例如，cdm-lba、cdm-pip-lba、cdm-peg、cdm-nag等)中。

在另一个实例中，将聚乙二醇(peg)共价连接至本公开的rna或ddrnai或表达载体。连接的peg可以是任何分子量，例如，约100至约50,000道尔顿(da)。

在另一个实例中，将本公开的一种或多种核酸、一种或多种ddrnai构建体或一种或多种表达载体与载体一起配制，所述载体包含含有聚(乙二醇)脂质的表面修饰的脂质体(peg修饰的，或长循环脂质体或隐形脂质体)，诸如在例如wo96/10391；wo96/10390或wo96/10392中公开的。

在一些实例中，还可将本公开的一种或多种核酸、一种或多种ddrnai构建体或一种或多种表达载体与聚乙烯亚胺或其衍生物(诸如聚乙烯亚胺-聚乙二醇-n-乙酰基半乳糖胺(pei-peg-gal)或聚乙烯亚胺-聚乙二醇-三-n-乙酰基半乳糖胺(pei-peg-trigal)衍生物一起配制或络合。

在其它实例中，将本公开的一种或多种核酸、一种或多种ddrnai构建体或一种或多种表达载体与膜破坏剂(诸如美国专利申请公开第2001/0007666号中描述的那些)络合。

其它载体包括环糊精(参见例如，gonzalez等，1999,bioconjugatechem.,10,1068-1074或wo03/46185)、聚乳酸-羟基乙酸共聚物(poly(lactic-co-glycolic)acid)(plga)和plca微球(参见例如，us2002130430)。

组合物将理想地包括增加本公开的一种或多种核酸、一种或多种ddrnai构建体或一种或多种表达载体的生物稳定性的材料和/或增强组合物定位和/或选择性穿透肌肉细胞的能力的材料。可将本公开的治疗性组合物在药学上可接受的载剂(例如，生理盐水)中施用，基于施用方式和途径以及标准药学实践来选择所述载剂。本领域普通技术人员可以容易地配制包含本公开的一种或多种核酸、一种或多种ddrnai构建体或一种或多种表达载体的药物组合物。在一些情况下，使用等渗制剂。通常，用于等渗的添加剂可包括氯化钠、右旋糖、甘露醇、山梨糖醇和乳糖。在一些情况下，等渗溶液诸如磷酸盐缓冲盐水是优选的。稳定剂包括明胶和白蛋白。在一些实例中，将血管收缩剂添加到制剂中。根据本公开的组合物被提供为无菌且无热原的。在remington:thescienceandpracticeofpharmacy(先前为remington'spharmaceuticalsciences),mackpublishingco.(该领域中和usp/nf中的标准参考教科书)中描述了用于药物配制的合适的药物载体以及药物必需品。

可专门定制药物组合物的体积、浓度和制剂以及给药方案以使细胞递送最大化，同时使毒性诸如炎症反应最小化，例如在相应的低浓度活性成分的情况下，相对大的体积(5ml、10ml、20ml、50ml或更多)，以及如果需要，可以使用包含抗炎化合物诸如皮质类固醇。

可以配制本公开的组合物以用于通过任何合适的途径施用。例如，施用途径包括但不限于肌内、腹膜内、皮内、皮下、静脉内、动脉内、眼内和口服以及经皮肤或通过吸入或栓剂。示例性施用途径包括静脉内(iv)、肌内(im)、口服、腹膜内、皮内、动脉内和皮下注射。在一个实例中，配制本发明的组合物用于im施用。此类组合物可用于药物应用，并且可以容易地配制在合适的无菌无热原媒介物中，例如用于注射、用于肠胃外施用(例如，im、静脉内(包括静脉内输注)、sc)和用于腹膜内施用的缓冲盐水。一些施用途径，诸如im、iv注射或输注，可以实现向肌肉组织的有效递送以及ddrnai构建体和/或编码本公开的pabpn1的密码子优化的核酸的转染，以及本文中rna和/或密码子优化的核酸的表达。

治疗方法

在一个实例中，将如本文所述的一种或多种核酸、一种或多种ddrnai构建体、一种或多种表达载体或一种或多种包含所述核酸、ddrnai构建体或表达载体的组合物用于抑制受试者中的内源性pabpn1蛋白(包括导致opmd的pabpn1蛋白)表达。

在一个实例中，可将如本文所述的一种或多种核酸、一种或多种ddrnai构建体、一种或多种表达载体或一种或多种包含所述核酸、ddrnai构建体或表达载体的组合物用于治疗患有opmd的受试者的opmd。类似地，可将如本文所述的一种或多种核酸、一种或多种ddrnai构建体、一种或多种表达载体或一种或多种包含所述核酸、ddrnai构建体或表达载体的组合物用于防止患有opmd或对opmd易感的受试者的opmd的一种或多种症状的发展或进展。

在前述实例中的每个中，本公开的表达载体和/或组合物可包含本公开的ddrnai构建体和编码本公开的功能性pabpn1蛋白的密码子优化的核酸两者。因此，表达载体或组合物的施用可以有效地(i)抑制、减少或敲低内源性pabpn1(包括导致opmd的包含扩增的聚丙氨酸链的pabpn1蛋白)的表达，以及(ii)提供不被shmir或shrna靶向的功能性pabpn1蛋白的表达，所述shmir或shrna抑制、减少或敲低内源性pabpn1的表达。因此，本公开的组合物可在施用了所述组合物的细胞或动物中恢复所述pabpn1蛋白的功能(例如，rna的转录后加工)。

在另一个实例中，opmd的治疗可包括分开地向受试者施用(i)一种或多种抑制导致opmd的pabpn1蛋白表达的剂，以及(ii)包含编码本公开的功能性pabpn1蛋白的密码子优化的核酸的表达载体或包含其的组合物。如本文中所述，用于抑制导致opmd的pabpn1蛋白表达的一种或多种剂可以是如本文所述的核酸、ddrnai构建体、表达载体或包含所述核酸、ddrnai构建体、表达载体的组合物或多种所述核酸、ddrnai构建体、表达载体或组合物中的任一种或多种。可将组分(i)和(ii)一起同时或连续地向受试者施用。

例如，opmd的治疗可包括向受试者施用编码本公开的功能性pabpn1蛋白的密码子优化的核酸，其中所述受试者先前已经施用了一种或多种用于抑制导致opmd的pabpn1蛋白的表达但不抑制所述密码子优化的核酸的表达的剂。例如，受试者可以先前已经施用过如本文所述的核酸、ddrnai构建体、表达载体或包含所述核酸、ddrnai构建体、表达载体的组合物或多种所述核酸、ddrnai构建体、表达载体或组合物中的任何一种或多种。

如上所论述的，施用途径包括但不限于肌内、腹膜内、皮内、皮下、静脉内、动脉内、眼内和口服以及经皮肤或通过吸入或栓剂。示例性施用途径包括静脉内(iv)、肌内(im)、口服、腹膜内、皮内、动脉内和皮下注射。一些施用途径，诸如im、iv注射或输注，可以实现向肌肉组织的有效递送以及ddrnai构建体和/或编码本公开的pabpn1的密码子优化的核酸的转染，以及本文中shmir或shrna和/或密码子优化的核酸的表达。

通过常规实验，本领域技术人员能够确定治疗患有opmd的受试者所需的如本文所述的核酸、ddrnai构建体、表达载体或包含所述核酸、ddrnai构建体、表达载体的组合物或多种所述核酸、ddrnai构建体、表达载体或组合物中的任一种或多种的有效无毒的量。用于任何特定患者的治疗有效剂量水平将取决于多种因素，包括：所用的组合物；患者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食；施用时间；施用途径；如本文所述的核酸、ddrnai构建体、表达载体或包含所述核酸、ddrnai构建体、表达载体的组合物或多种所述核酸、ddrnai构建体、表达载体或组合物中的任一种或多种的隔离速率(rateofsequestration)、治疗持续时间以及医学中熟知的其它相关因素。

本公开的核酸、ddrnai构建体、表达载体或包含所述核酸、ddrnai构建体、表达载体的组合物减少或抑制导致opmd的pabpn1蛋白表达以及以足以恢复pabpn1功能的量表达不导致opmd的功能性pabpn1蛋白的功效，可通过评估所治疗的受试者的肌肉收缩性质和/或吞咽困难来测定。用于测试吞咽能力和肌肉收缩性质的方法是本领域已知的。例如，可使用电视透视检查、ugi内窥镜检查或食道测压法和阻抗测试来评估吞咽困难。评估opmd的临床特征的其它方法描述于rüegg等，(2005)swissmedicalweekly,135:574-586中。

试剂盒

本公开还以试剂盒的形式提供一种或多种本公开的核酸、一种或多种ddrnai构建体、一种或多种表达载体或包含所述核酸、ddrnai构建体、表达载体的组合物。该试剂盒可包括容器。试剂盒通常含有本公开的一种或多种核酸、一种或多种ddrnai构建体、一种或多种表达载体或包含所述核酸、ddrnai构建体、表达载体的组合物，以及其或它们的施用说明书。在一些实例中，试剂盒包含不止一种本公开的核酸、ddrnai构建体、表达载体或包含所述核酸、ddrnai构建体、表达载体的组合物。在一个实例中，试剂盒包含(i)用于减少或抑制导致opmd的pabpn1蛋白表达的第一试剂盒组分，其包括本公开的一种或多种核酸、一种或多种ddrnai构建体、一种或多种表达载体或包含所述核酸、ddrnai构建体、表达载体的组合物，以及(ii)包含编码本公开的功能性pabpn1蛋白的密码子优化的核酸的表达载体或包含其的组合物，作为第二试剂盒组分。可将第一和第二试剂盒组分一起包装在试剂盒中。

表1-pabpn1中的靶向区域

实施例1-靶向pabn1的shmir的设计

使用公开可得的sirna设计算法(包括ambion,promega,invitrogen,origene和mwg)从pabpn1mrna序列鉴定代表用于设计sirna构建体的潜在靶标的序列：所选序列在人、非人灵长类动物、牛和小鼠物种中是保守的。将编码候选sirna的序列掺入pre-mir30a支架中以产生编码包含5'侧翼区域(seqidno:41)、sirna有义链序列(效应互补序列)、茎/环连接序列(seqidno:40)、sirna反义链(效应序列)和3'侧翼区域(seqidno:42)的短发夹微rna(shmir)的序列。代表性shmir的预测的二级结构示于图1中。设计的shmir的pabpn1mrna转录物的靶区域示于表1中，并且相应的shmir效应序列(反义链)示于表2中。

实施例2-shmir在双萤光素酶报告分子测定中的活性

为了测试本公开的shmir敲低pabpn1转录物表达的功效，在hek293细胞中进行双萤光素酶报告基因测定。

构建pgl3萤光素酶报告载体。通过将野生型或密码子优化的pabpn1(wtpabpn1或optpabpn1)的完整编码序列插入pgl3-对照载体(promega,madison,wi)中来产生萤光素酶报告分子。使用fsei和xbai限制性内切酶位点将插入物亚克隆到萤光素酶报告基因的3’utr中。在dna2.0(newark,ca)合成由u6poliii启动子驱动的包含靶向pabpn1的shmir序列(列于表3中)的构建体，并将其亚克隆到psilencer质粒主链中。

hek293细胞系购自atcc(manassas,va)。将hek293细胞在含有10％胎牛血清、2mm谷氨酰胺、青霉素(100u/ml)和链霉素(100μg/ml)的dmem培养基中于37℃，含5％co2的潮湿培养箱中进行培养。简言之，在转染前一天，将hek293细胞以每孔2x10⁴个细胞的密度接种到96孔培养板中。

使用fugene6(promega,madison,wi)，按照制造商的说明将表达pabpn1shmir的构建体及其相应的反义或有义萤光素酶报告基因和海肾对照报告构建体共转染到hek293细胞中。对于每个转染孔，使用0.3ul的fugene6共转染100ng的pabpn1shmir之一、10ng相应的萤光素酶报告构建体和1ng海肾对照报告构建体(用作转染对照)。转染后48小时，收集细胞裂解物并使用双重萤光素酶报告测定系统(dualluciferasereporterassaysystem)(promega,madison,wi)分析。测定每个孔的萤火虫/海肾活性比，并通过针对非靶向sirna，psilencer对照(thermofisher,usa)进行标准化来计算shmir的抑制效率。在图2和图3中举例说明了每种shmir的有义链和反义链相对于psilencer对照在hek293细胞中对wtpabpn1或optpabpn1报告构建体的抑制百分比。

如在图2和图3中显而易见的，除表2中指定的示例性shmir中的一种(shmir11)外，所有shmir下调从wtpabpn1萤光素酶报告载体(图2)表达的萤光素酶的水平，但不下调来自copabpbn1(图3)报告分子的表达。特别地，显示shmir-3、shmir-4、shmir-13、shmir-14、shmir-16和shmir-17对pabpn1靶mrna序列具有强抑制活性(定义为相对于用无关shrna作为阴性对照处理的细胞，大于70％的萤光素酶活性的抑制)，同时对它们的含有被过客链识别的靶序列的同源报告分子具有弱活性(低于35％抑制)。

实施例3-pabpn1蛋白表达的体外下调

基于通过上述萤光素酶活性测定测量的pabpn1表达的下调，选择shmir2、3、5、9、13、14、16和17用于进一步分析。为了检测它们在体外下调pabpn1的能力，将由实施例2中描述的u6启动子驱动的含有shmir的质粒与另外两种表达质粒一起使用。一种质粒编码flag标记的人wtpabpn1(wt-pabpn1-flag；seqidno:75)，另一种质粒包含编码具有flag标签的人pabpn1的密码子优化的序列(co-pabpn1-flag；seqidno:76)。

细胞

使人胚肾细胞(hek293t,atcc,manassas,usa)在含有20mmhepes、2mm谷氨酰胺、10％胎牛血清(fbs)、1xpenstrep的达尔伯克改良伊格尔培养基(dmem)中生长。

处理

简言之，将hek293t细胞以1x10⁶个细胞/孔接种，并且第二天在利用或不利用表达野生型人pabpn1的质粒(wt-pabpn1-flag)(100ng/孔)(seqidno:75)或密码子优化的pabpn1(co-pabpn1-flag)(100ng/孔)(seqidno:76)的质粒的情况下，用上述shmir质粒之一(300ng/孔)转染所述细胞。作为对照，用表达非靶向sirna序列的psilencer对照质粒(thermofisher,usa)转染hek293t细胞。将hek293t细胞在37℃下在完全dmem培养基中孵育72小时，之后收获细胞并通过蛋白质印迹分析细胞裂解物。

蛋白质印迹分析

通过在含有以下物质的ripa缓冲液中孵育细胞来制备细胞裂解物：nacl0.15m、0.1％sds、50mmtris(ph8)、2mmedta和10％triton-x-100以及蛋白酶抑制剂混合物(complete,rochediagnostics)。

在4-12％bis-tris凝胶(invitrogen)上分离蛋白质，然后使用iblot2干印迹系统(lifetechnologies)将其转移到硝酸纤维素膜上。使用ibindwestern系统(invitrogen)封闭印迹并用一抗和二抗探测。将一抗(抗flag(genscript)和抗-hsp90(sigma))以1:500稀释使用，而缀合有ap的二抗(抗小鼠和抗兔，sigma)以1:6000稀释使用。使用ddao染料检测条带并使用fla-3000扫描仪(fuji)显现。

所得印迹和使用imagej进行的相对于对照的pabpn1表达的抑制百分比的定量示于图4和5中。如图4所示，来自实施例3的所有选择的shmir均敲低野生型pabpn1的表达，其中抑制百分比>90％，并且测试的8种shmir中的7种以>95％的水平抑制野生型pabpn1蛋白的表达。相反，shmir不抑制密码子优化的pabpn1构建体的表达(图5)。

实施例4-hek293t细胞中的pabpn1的shmir靶向基因沉默

该实施例证明了pabpn1shmir质粒在体外敲低pabpn1的内源表达的能力。

细胞

使人胚肾细胞(hek293t,atcc,manassas,usa)在含有20mmhepes、2mm谷氨酰胺、10％胎牛血清(fbs)、1xpenstrep的达尔伯克改良伊格尔培养基(dmem)中生长。

处理

简言之，将hek293t细胞以1x10⁶个细胞/孔接种，第二天用实施例2中描述的shmir质粒之一(300ng/孔)转染所述细胞。作为对照，用表达非靶向sirna序列的psilencer质粒(thermofisher,usa)转染hek293t细胞。将hek293t细胞在37℃下在完全dmem培养基中孵育72小时，之后收获细胞并提取rna，将其反转录，并通过qpcr进行分析。

qpcr分析

对提取的rna样品进行qpcr分析，以便定量上述shmir在mrna水平上对pabpn1的抑制水平。

为了区分密码子优化的pabpn1与野生型pabpn1，设计taqman引物和探针来特异性扩增野生型pabpn1或密码子优化的pabpn1。使用genscripttaqman引物设计工具(https://www.genscript.com/ssl-bin/app/primer)设计引物

用于定量rt-pcr的所得引物序列如下：

wtpabpn1-fwd5’-atggtgcaacagcagaagag-3’(seqidno:77)

wtpabpn1-rev5’-ctttgggatggccactaaat-3’(seqidno:78)

wtpabpn1-探针5’-cggttgactgaaccacagccatg-3’(seqidno:79)

optpabpn1-fwd5’-accgacagaggcttcccta-3’(seqidno:80)

optpabpn1-rev5’-ttctgctgctgttgtagttgg-3’(seqidno:81)

optpabpn1-探针5’-tggtccgggctctgtacctagcc-3’(seqidno:82)

按照制造商的说明，使用trizol(invitrogen)从细胞裂解物中提取总rna。使用nd-1000nanodrop分光光度计(nanodroptechnologies)定量rna样品。按照制造商的说明，使用multiscribe逆转录酶(abi)反转录rna(100ng)。在总共10ul的反应体积中使用taqmanqpcr主混物(mastermix)将cdna用于定量pcr反应。pcr反应如下进行：在50℃下2分钟，在95℃下10分钟，然后进行40个循环：在95℃下15秒，在60℃下1分钟。

将每种mrna的表达水平针对gapdh进行标准化。根据如通过标准曲线所测定的总拷贝数计算表达水平，并将其转化为相对于psilencer对照的抑制百分比。

示例性shmir在hek293细胞中对野生型pabpn1表达的所得抑制百分比示于图6中。如图6所示，所述shmir下调pabpn1的表达，其中抑制百分比范围为16.4％至49.1％(平均35.5％)。

实施例5-c2c12小鼠肌肉细胞和arpe-19人视网膜细胞中的pabpn1的shmir靶向基因沉默

为了确定通过qpcr测量的示例性shmir在hek293细胞中对pabpn1表达的低抑制百分比是否是由pabpn1的基因表达中的细胞系变异导致，选择与opmd相关的另外的细胞系(即c2c12小鼠肌肉细胞和arpe-19人视网膜细胞)用于分析。

细胞

使c2c12肌肉细胞在含有20mmhepes、2mm谷氨酰胺、10％胎牛血清(fbs)、1xpenstrep的达尔伯克改良伊格尔培养基(dmem)中生长。

使arpe-19人视网膜细胞在达尔伯克改良伊格尔培养基/汉姆氏营养混合物f-12(dmem/f12),10％胎牛血清(fbs),1xpenstrep中生长。

处理

简言之，使用neon电穿孔系统(脉冲电压：1650，脉冲宽度：10，脉冲数：3)对2x10⁵个c2c12细胞进行电穿孔。分析了上述两种shmir的单独的shmir和其组合(2μg/孔)。作为对照，用表达非靶向sirna序列的psilencer质粒(thermofisher,usa)对c2c12细胞进行电穿孔。将c2c12细胞在37℃下在完全dmem培养基中孵育24小时，之后加入50ug/ml潮霉素以减缓非转染细胞的生长，然后在电穿孔后48小时再加入100ug/ml。在72小时时，收获细胞并提取总rna用于qpcr。

使用以下条件，用neon电穿孔系统对5x10⁶个arpe-19细胞进行电穿孔：脉冲电压：1350，脉冲宽度：20，脉冲次数：2。如上处理细胞(对c2c12细胞，除在24小时时加入50ug/ml潮霉素，不再添加潮霉素)。在48和72小时收获arpe-19细胞用于rna提取和qpcr分析。

qpcr分析

如对实施例4的hek293细胞所述进行逆转录酶qpcr，其中wtpabpn1引物和探针用于测量响应于实施例3中选择的shmir产生的抑制的内源pabpn1的表达。在c2c12细胞中，对于shmir3、13、14、17以一式三份进行qpcr，对于shmir2、5、9、16以一式两份进行qpcr。对于arpe-19细胞，在两个时间点(48和72小时)使用单次测量。

如图7所示，除shmir16(约43％的抑制百分比)外，所有单独的shmir下调c2c12细胞中的pabpn1表达，相对于psilencer对照，平均抑制百分比为约80％。

选择如通过pabpn1的抑制百分比测量的性能最佳的shmir用于分析它们组合抑制pabpn1表达的能力。将shmir13/17的组合和shmir3/14的组合共电穿孔到细胞中，并如上针对单独的shmir所述，通过qpcr测量pabpn1的表达。

图8显示了shmir的这些组合对c2c12细胞中pabpn1表达的作用。shmir13/17共转染导致pabpn1表达的抑制百分比为84.4％，而单独的shmir13和17分别为92.5％和76.7％。shmir3/14共转染导致抑制百分比为79.0％，而单独的shmir3和14分别为76.2％和80.4％。

测试了与上述相同的shmir组合在人细胞系即arpe-19细胞中抑制pabpn1表达的能力。如上所述处理细胞，并且在48小时和72小时时通过qpcr测量的所得pabpn1表达的抑制示于图9中。72小时后，shmir13/17共转染导致pabpn1表达的抑制百分比为87.9％，而单独的shmir13和17分别为83.9％和89.8％。shmir3/14共转染导致87.4％的抑制百分比，而单独的shmir3和14分别为82.2％和81.6％。平均而言，在arpe-19细胞中，pabpn1表达的抑制百分比在48小时与72小时之间增加1.14倍。

实施例6-通过qpcr测量shmir表达

为了测定用如上所述的性能最佳的shmir转染的c2c12细胞中表达的shmir的总数，开发了miscript测定。

使用qiagen的miscriptpcr系统(valencia,ca)测量通过u6shmir表达构建体进行的shmir3、13、14和17的产生。对于每次rt-qpcr分析，使用qiagen的miscriptiirt试剂盒将50ng总rna转化为cdna。然后利用如下所示的定制正向引物，使用qiagenmiscriptsybrgreenpcr试剂盒进行shrna的定量pcr：

shmir3-fwd5’-ttcatctgcttctctacctcg-3’(seqidno:83)

shmir13-fwd5’-aggggaataccatgatgtcgc-3’(seqidno:84)

shmir14-fwd5’-ctcatattcatctgcttctct-3’(seqidno:85)

shmir17-fwd5’-attcatctgcttctctacctc-3’(seqidno:86)

qiagenmiscriptsybrgreenpcr试剂盒中提供了反向引物。使用以下实时pcr条件：在95℃下初始变性15分钟，然后进行40个循环：94℃下15秒，55℃下30秒，以及70℃下30秒。

通过扩增已知量的选择的shmir产生这些测定的标准曲线，并所述标准曲线示于图10中。shmir3(图10b)产生非线性标准曲线并根据所用的qpcr缓冲液而变化。

基于333个c2c12细胞中10ng总rna的估计计算每个细胞的rna拷贝数。当单独表达时，针对shmir3、shmir13、shmir14和shmir17中的每一个测定每个细胞的shmir拷贝数。如图11所示，对于shmir3、13、14和17，用shmir载体转导的c2c12细胞中的单独的shrna表达水平估计分别为51,663个、13,826个、11,576个和14,791个拷贝。

实施例7-用于同时进行内源性pabpn1的基因沉默和利用密码子优化的pabpn1的替换的载体的产生。

为了指导同时进行内源性野生型pabn1(wtpabn1)的基因沉默和利用密码子优化的pabpn1(copabn1)的替换，产生表达一种或多种选择的shmir与optpabpn1序列的组合的单链腺相关病毒2型(ssaav2)质粒。在图12a和12b中呈现了两种替代构建体

通过将靶向wtpabpn1的两种shmir亚克隆到paav2载体主链中的optpabpn1转录物的3'非翻译区中来产生第一个构建体，形式2(图12a)。optpabpn1和两种shmir在单个转录物中的表达由肌肉特异性启动子spc512驱动。通过将靶向wtpabpn1的两种shmir亚克隆到optpabpn1转录物的上游序列中来产生第二个构建体，形式1(图12b)。在该构建体中，表达两种转录物，第一种编码在ck8启动子控制下的两种shmir，第二种编码在spc512启动子下的optpabpn1。

产生重组假型化的aav载体原种。简言之，将hek293t细胞在细胞工厂于补充有10％fbs的达尔伯克改良伊格尔培养基中培养，并在37℃和5％co2下孵育。按照制造商的说明，将如本实施例中所述的paav-shmir病毒质粒以及paavhelper和paavrepcap8质粒或paavhelper和paavrepcap9质粒与磷酸钙复合。然后在hek293t细胞中用paav-shmir质粒中的每种与paavhelper和paavrepcap8或paavrepcap9的组合进行三重转染(triple-transfection)。将hek293t细胞在37℃和5％co2下培养72小时，然后裂解细胞，并通过碘克沙醇(sigma-aldrich)不连续梯度超速离心，随后进行氯化铯超速离心来纯化每种病毒质粒的表达ssaavshmir的颗粒。通过定量聚合酶链式反应(q-pcr)定量载体基因组的数量。

实施例8-opmd的鼠模型中的体内功效研究。

动物

在最常见的opmd鼠模型a17小鼠模型中进行临床前功效研究。通过过表达牛扩增的(17个丙氨酸残基)pabpn1，在fvb背景中产生该小鼠模型。将该突变型pabpn1在骨骼肌中的表达置于人α肌动蛋白肌肉特异性启动子(hsa1)的控制之下。两种内源性鼠pabpn1等位基因都是功能性的并且表达正常的鼠pabpn1。因此，小鼠表型是由突变型pabpn1相对于正常蛋白的过表达而导致的。最重要的是，a17小鼠显示出opmd的许多临床体征，包括核内包涵体(ini)的存在、纤维化和肌肉力量的丧失。体内小鼠功效研究集中在胫骨前肌(ta)肌肉的给药和分析上，这些肌肉属于可被容易地操作和/或从小鼠中分离的最大肌肉，使得更容易观察表型改善。

治疗

选择腺相关病毒血清型9(aav9)衣壳用于通过局部肌内注射施用重组表达构建体。除了aav9以外，还测试了许多不同血清型的aav衣壳，包括aav8、aavrh74。使用重组aav9构建体评估肌肉转导，所述重组aav9构建体在spc512合成肌肉启动子(aav9-egfp)的控制下表达荧光蛋白gfp。以2e11总载体基因组的剂量向来自两种性别的小鼠的每个ta肌肉中注射50μl单链载体。20天后，处死小鼠并通过体内成像检查注射的肢体。

结果

如图13所示，用aav9-egfp构建体直接注射ta肌肉导致在肢体中检测到显著量的局部荧光，表明该载体在转导肌细胞和在直接注射后导致转基因表达方面均是有效的。

实施例9-用于同时进行内源性pabpn1的基因沉默和利用密码子优化的pabpn1的替换的单一“沉默和替换构建体”的产生。

产生了表达shmir17和shmir13(例如，如表3和表4中所述)与optpabpn1序列的组合的单链腺相关病毒2型(ssaav2)质粒。

通过将编码shmir17和shmir13的dna序列(如表4中所述)亚克隆到paav2载体主链中的optpabpn1转录物的3'非翻译区中(paav-shmir病毒质粒)来产生沉默和替换构建体(下文称为“sr构建体”)。optpabpn1和两种shmir在单个转录物中的表达由肌肉特异性启动子spc512驱动。图14中提供了sr构建体的示意图。

然后产生重组假型化的aav载体原种。简言之，将hek293t细胞在细胞工厂于补充有10％fbs的达尔伯克改良伊格尔培养基中培养，并在37℃和5％co2下孵育。按照制造商的说明，将paav-shmir病毒质粒以及paavhelper和paavrepcap8质粒或paavhelper和paavrepcap9或paavhelper和paavrh74质粒与磷酸钙复合。然后在hek293t细胞中用paav-shmir质粒与paavhelper和以下衣壳之一的组合进行三重转染：paavrepcap8、paavrepcap9或paavrh74。然后将hek293t细胞在37℃和5％co2下培养72小时，之后裂解细胞，并通过碘克沙醇(sigma-aldrich)不连续梯度超速离心，随后进行氯化铯超速离心来纯化表达ssaavshmir的颗粒。通过定量聚合酶链式反应(q-pcr)定量载体基因组的数量。

实施例10-使用单一载体“沉默和替换”方法的体内功效研究。

治疗

为了在opmd的相关疾病模型中测试实施例9中描述的sr构建体的体内功效，通过肌内注射将sr构建体单独地以高剂量和低剂量施用到10-12周龄a17小鼠的ta肌肉中。低剂量设定为1x10¹⁰个载体基因组/肌肉。低剂量设定为6x10¹⁰个载体基因组/肌肉。注射盐水的年龄匹配的a17小鼠作为未处理组，而fvb野生型小鼠也被包括作为健康比较者。除了检查不同剂量的sr构建体对疾病的影响以外，在处理后14或20周处死单独的小鼠群组以评估与不同时间点相关的功效。在处死时，收获ta肌肉并提取rna和蛋白质。

qpcr分析

为了验证pabpn1水平的敲低，通过qpcr分析评估从ta肌肉分离的rna。使用的qpcr引物不能区分野生型pabpn1与突变型pabpn1转录物，但不识别或扩增对应于密码子优化的pabpn1种类的序列。对于高剂量和低剂量的sr构建体，均观察到强劲的敲低，分别导致88.3％和68.3％的pabpn1转录物减少(图15)。来自这些组织的额外分析证明了shmir转基因以与不同的施用的载体水平一致的比率存在。

类似地，将使用可选择性扩增密码子优化的pabpn1序列并区分正常野生型与突变型pabpn1序列的一组引物的qpcr分析用于验证密码子优化的pabpn1部分的表达。

这些qpcr分析表明，施用了sr构建体的动物在高剂量和低剂量下分别表达了平均为fvb小鼠中正常pabpn1水平的90.9％和13.7％的密码子优化的pabpn1水平(图16)。

结合起来，所述分析证实单个转录物可以产生功能性shmir，其能够在a17小鼠模型中敲低pabpn1(包括突变形式)水平。同样地，这些载体同时产生足够水平的密码子优化的pabpn1作为替代物以恢复pabpn1功能。

核内包涵体(ini)

在第14周动物中测试了sr构建体对核内包涵体(ini)的持久性的影响。从图17中可以明显看出，a17小鼠中所有ta肌细胞的近35％显示出代表ini的绿色点状染色。将红色层粘连蛋白(肌细胞的细胞外基质中的丰富蛋白质)和蓝色dapi复染色分别用于界定细胞形状和细胞核(图18)。通过一系列连续切片，利用高剂量和低剂量sr构建体的处理显示ini的显著减少。

肌肉重量

在第20周动物中测试了sr构建体对肌肉重量恢复的影响。

来自a17小鼠的ta肌肉细胞比来自它们的fvb野生型对应物的类似肌肉少约25％。在两种测试剂量下，sr构建体显示肌肉重量显著恢复至接近fvb动物的野生型水平(图19)。

肌肉力量

最后，通过最大力测量评估sr构建体对第20周动物的肌肉力量恢复的影响。

使用150mhz频率作为校准点，a17小鼠的最大力在1050nm对比1500nm时比其野生型fvb对应者分别小约30％。利用sr构建体的处理导致最大力的适度增加，使a17小鼠对比fvb野生型动物中记录的减小的力量差异恢复大约66％(图20)。图20中的统计显示为相对于a17盐水小鼠的非配对t检验(*p<0.05,**p<0.01)。

总的来说，本文从该体内研究中呈现的数据表明，在a17模型系统中，利用sr构建体的处理对opmd疾病的生理学标志具有影响。

本领域技术人员将理解，在不脱离本公开的广泛的一般范围的情况下，可以对上述实施方案进行多种变化和/或修改。因此，本实施方案在所有方面都将被视为说明性而非限制性。

序列表

<110>benitecbiopharmalimited

<120>用于治疗眼咽肌营养不良症(opmd)的试剂及其用途

<130>180511

<150>us62/434,312

<151>2016-12-14

<160>86

<170>patentinversion3.5

<210>1

<211>28

<212>rna

<213>智人(homosapiens)

<400>1

gagaagcagaugaauaugaguccaccuc28

<210>2

<211>28

<212>rna

<213>智人(homosapiens)

<400>2

gaacgagguagagaagcagaugaauaug28

<210>3

<211>28

<212>rna

<213>智人(homosapiens)

<400>3

gaagcugagaagcuaaaggagcuacaga28

<210>4

<211>28

<212>rna

<213>智人(homosapiens)

<400>4

gggcuagagcgacaucaugguauucccc28

<210>5

<211>28

<212>rna

<213>智人(homosapiens)

<400>5

cugugugacaaauuuaguggccauccca28

<210>6

<211>28

<212>rna

<213>智人(homosapiens)

<400>6

gacuauggugcaacagcagaagagcugg28

<210>7

<211>28

<212>rna

<213>智人(homosapiens)

<400>7

cgagguagagaagcagaugaauaugagu28

<210>8

<211>28

<212>rna

<213>智人(homosapiens)

<400>8

cagugguuuuaacagcaggccccggggu28

<210>9

<211>28

<212>rna

<213>智人(homosapiens)

<400>9

agagcgacaucaugguauuccccuuacu28

<210>10

<211>28

<212>rna

<213>智人(homosapiens)

<400>10

gguagagaagcagaugaauaugagucca28

<210>11

<211>28

<212>rna

<213>智人(homosapiens)

<400>11

auugaggagaagauggaggcugaugccc28

<210>12

<211>28

<212>rna

<213>智人(homosapiens)

<400>12

ggaggaagaagcugagaagcuaaaggag28

<210>13

<211>28

<212>rna

<213>智人(homosapiens)

<400>13

aacgagguagagaagcagaugaauauga28

<210>14

<211>20

<212>rna

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>shmir2的效应序列

<400>14

agcagaugaauaugagucca20

<210>15

<211>21

<212>rna

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>shmir的效应互补序列2

<400>15

uggacucauauucaucugcuu21

<210>16

<211>20

<212>rna

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>shmir的效应序列3

<400>16

gagguagagaagcagaugaa20

<210>17

<211>21

<212>rna

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>shmir3的效应互补序列

<400>17

uucaucugcuucucuaccucg21

<210>18

<211>20

<212>rna

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>shmir4的效应序列

<400>18

cugagaagcuaaaggagcua20

<210>19

<211>21

<212>rna

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>shmir4的效应互补序列

<400>19

uagcuccuuuagcuucucagc21

<210>20

<211>20

<212>rna

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>shmir5的效应序列

<400>20

uagagcgacaucaugguauu20

<210>21

<211>21

<212>rna

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>shmir5的效应互补序列

<400>21

aauaccaugaugucgcucuag21

<210>22

<211>20

<212>rna

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>shmir6的效应序列

<400>22

gugacaaauuuaguggccau20

<210>23

<211>21

<212>rna

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>shmir6的效应互补序列

<400>23

auggccacuaaauuugucaca21

<210>24

<211>20

<212>rna

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>shmir7的效应序列

<400>24

auggugcaacagcagaagag20

<210>25

<211>21

<212>rna

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>shmir7的效应互补序列

<400>25

cucuucugcuguugcaccaua21

<210>26

<211>20

<212>rna

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>shmir9的效应序列

<400>26

guagagaagcagaugaauau20

<210>27

<211>21

<212>rna

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>shmir9的效应互补序列

<400>27

auauucaucugcuucucuacc21

<210>28

<211>20

<212>rna

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>shmir11的效应序列

<400>28

gguuuuaacagcaggccccg20

<210>29

<211>21

<212>rna

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>shmir11的效应互补序列

<400>29

cggggccugcuguuaaaacca21

<210>30

<211>20

<212>rna

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>shmir13的效应序列

<400>30

cgacaucaugguauuccccu20

<210>31

<211>21

<212>rna

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>shmir13的效应互补序列

<400>31

aggggaauaccaugaugucgc21

<210>32

<211>20

<212>rna

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>shmir14的效应序列

<400>32

gagaagcagaugaauaugag20

<210>33

<211>21

<212>rna

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>shmir14的效应互补序列

<400>33

cucauauucaucugcuucucu21

<210>34

<211>20

<212>rna

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>shmir15的效应序列

<400>34

aggagaagauggaggcugau20

<210>35

<211>21

<212>rna

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>shmir15的效应互补序列

<400>35

aucagccuccaucuucuccuc21

<210>36

<211>20

<212>rna

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>shmir16的效应序列

<400>36

gaagaagcugagaagcuaaa20

<210>37

<211>21

<212>rna

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>shmir16的效应互补序列

<400>37

uuuagcuucucagcuucuucc21

<210>38

<211>20

<212>rna

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>shmir17的效应序列

<400>38

agguagagaagcagaugaau20

<210>39

<211>21

<212>rna

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>shmir17的效应互补序列

<400>39

auucaucugcuucucuaccuc21

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<211>18

<212>rna

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>茎环

<400>40

acugugaagcagaugggu18

<210>41

<211>26

<212>rna

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>pri-mirna主链的5'侧翼序列

<220>

<221>misc_feature

<222>(26)..(26)

<223>n为u或a

<400>41

gguauauugcuguugacagugagcgn26

<210>42

<211>22

<212>rna

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>pri-mirna主链的3'侧翼序列

<400>42

cgccuacugccucggacuucaa22

<210>43

<211>107

<212>rna

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>编码shmir2的rna序列

<400>43

gguauauugcuguugacagugagcguagcagaugaauaugaguccaacugugaagcagau60

ggguuggacucauauucaucugcuucgccuacugccucggacuucaa107

<210>44

<211>107

<212>rna

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>编码shmir3的rna序列

<400>44

gguauauugcuguugacagugagcgagagguagagaagcagaugaaacugugaagcagau60

ggguuucaucugcuucucuaccucgcgccuacugccucggacuucaa107

<210>45

<211>107

<212>rna

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>编码shmir4的rna序列

<400>45

gguauauugcuguugacagugagcgacugagaagcuaaaggagcuaacugugaagcagau60

ggguuagcuccuuuagcuucucagccgccuacugccucggacuucaa107

<210>46

<211>107

<212>rna

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>编码shmir5的rna序列

<400>46

gguauauugcuguugacagugagcgauagagcgacaucaugguauuacugugaagcagau60

ggguaauaccaugaugucgcucuagcgccuacugccucggacuucaa107

<210>47

<211>107

<212>rna

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>编码shmir6的rna序列

<400>47

gguauauugcuguugacagugagcgagugacaaauuuaguggccauacugugaagcagau60

ggguauggccacuaaauuugucacacgccuacugccucggacuucaa107

<210>48

<211>107

<212>rna

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>编码shmir7的rna序列

<400>48

gguauauugcuguugacagugagcgaauggugcaacagcagaagagacugugaagcagau60

gggucucuucugcuguugcaccauacgccuacugccucggacuucaa107

<210>49

<211>107

<212>rna

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>编码shmir9的rna序列

<400>49

gguauauugcuguugacagugagcgaguagagaagcagaugaauauacugugaagcagau60

ggguauauucaucugcuucucuacccgccuacugccucggacuucaa107

<210>50

<211>107

<212>rna

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>编码shmir11的rna序列

<400>50

gguauauugcuguugacagugagcgagguuuuaacagcaggccccgacugugaagcagau60

gggucggggccugcuguuaaaaccacgccuacugccucggacuucaa107

<210>51

<211>107

<212>rna

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>编码shmir13的rna序列

<400>51

gguauauugcuguugacagugagcgacgacaucaugguauuccccuacugugaagcagau60

ggguaggggaauaccaugaugucgccgccuacugccucggacuucaa107

<210>52

<211>107

<212>rna

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>编码shmir14的rna序列

<400>52

gguauauugcuguugacagugagcgugagaagcagaugaauaugagacugugaagcagau60

gggucucauauucaucugcuucucucgccuacugccucggacuucaa107

<210>53

<211>107

<212>rna

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>编码shmir15的rna序列

<400>53

gguauauugcuguugacagugagcgaaggagaagauggaggcugauacugugaagcagau60

ggguaucagccuccaucuucuccuccgccuacugccucggacuucaa107

<210>54

<211>107

<212>rna

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>编码shmir16的rna序列

<400>54

gguauauugcuguugacagugagcgagaagaagcugagaagcuaaaacugugaagcagau60

ggguuuuagcuucucagcuucuucccgccuacugccucggacuucaa107

<210>55

<211>107

<212>rna

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>编码shmir17的rna序列

<400>55

gguauauugcuguugacagugagcgaagguagagaagcagaugaauacugugaagcagau60

ggguauucaucugcuucucuaccuccgccuacugccucggacuucaa107

<210>56

<211>107

<212>dna

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>编码shmir2的dna序列

<400>56

ggtatattgctgttgacagtgagcgtagcagatgaatatgagtccaactgtgaagcagat60

gggttggactcatattcatctgcttcgcctactgcctcggacttcaa107

<210>57

<211>107

<212>dna

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>编码shmir3的dna序列

<400>57

ggtatattgctgttgacagtgagcgagaggtagagaagcagatgaaactgtgaagcagat60

gggtttcatctgcttctctacctcgcgcctactgcctcggacttcaa107

<210>58

<211>107

<212>dna

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>编码shmir4的dna序列

<400>58

ggtatattgctgttgacagtgagcgactgagaagctaaaggagctaactgtgaagcagat60

gggttagctcctttagcttctcagccgcctactgcctcggacttcaa107

<210>59

<211>107

<212>dna

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>编码shmir5的dna序列

<400>59

ggtatattgctgttgacagtgagcgatagagcgacatcatggtattactgtgaagcagat60

gggtaataccatgatgtcgctctagcgcctactgcctcggacttcaa107

<210>60

<211>107

<212>dna

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>编码shmir6的dna序列

<400>60

ggtatattgctgttgacagtgagcgagtgacaaatttagtggccatactgtgaagcagat60

gggtatggccactaaatttgtcacacgcctactgcctcggacttcaa107

<210>61

<211>107

<212>dna

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>编码shmir7的dna序列

<400>61

ggtatattgctgttgacagtgagcgaatggtgcaacagcagaagagactgtgaagcagat60

gggtctcttctgctgttgcaccatacgcctactgcctcggacttcaa107

<210>62

<211>107

<212>dna

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>编码shmir9的dna序列

<400>62

ggtatattgctgttgacagtgagcgagtagagaagcagatgaatatactgtgaagcagat60

gggtatattcatctgcttctctacccgcctactgcctcggacttcaa107

<210>63

<211>107

<212>dna

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>编码shmir11的dna序列

<400>63

ggtatattgctgttgacagtgagcgaggttttaacagcaggccccgactgtgaagcagat60

gggtcggggcctgctgttaaaaccacgcctactgcctcggacttcaa107

<210>64

<211>107

<212>dna

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>编码shmir13的dna序列

<400>64

ggtatattgctgttgacagtgagcgacgacatcatggtattcccctactgtgaagcagat60

gggtaggggaataccatgatgtcgccgcctactgcctcggacttcaa107

<210>65

<211>107

<212>dna

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>编码shmir14的dna序列

<400>65

ggtatattgctgttgacagtgagcgtgagaagcagatgaatatgagactgtgaagcagat60

gggtctcatattcatctgcttctctcgcctactgcctcggacttcaa107

<210>66

<211>107

<212>dna

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>编码shmir15的dna序列

<400>66

ggtatattgctgttgacagtgagcgaaggagaagatggaggctgatactgtgaagcagat60

gggtatcagcctccatcttctcctccgcctactgcctcggacttcaa107

<210>67

<211>107

<212>dna

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>编码shmir16的dna序列

<400>67

ggtatattgctgttgacagtgagcgagaagaagctgagaagctaaaactgtgaagcagat60

gggttttagcttctcagcttcttcccgcctactgcctcggacttcaa107

<210>68

<211>107

<212>dna

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>编码shmir17的dna序列

<400>68

ggtatattgctgttgacagtgagcgaaggtagagaagcagatgaatactgtgaagcagat60

gggtattcatctgcttctctacctccgcctactgcctcggacttcaa107

<210>69

<211>2532

<212>dna

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>编码shmir3、shmir14和密码子优化的pabpn1的双重表达构建体形式1

<400>69

cgatcgcgcgcagatctgtcatgatgatcctagcatgctgcccatgtaaggaggcaaggc60

ctggggacacccgagatgcctggttataattaacccagacatgtggctgccccccccccc120

ccaacacctgctgcctctaaaaataaccctgcatgccatgttcccggcgaagggccagct180

gtcccccgccagctagactcagcacttagtttaggaaccagtgagcaagtcagcccttgg240

ggcagcccatacaaggccatggggctgggcaagctgcacgcctgggtccggggtgggcac300

ggtgcccgggcaacgagctgaaagctcatctgctctcaggggcccctccctggggacagc360

ccctcctggctagtcacaccctgtaggctcctctatataacccaggggcacaggggctgc420

cctcattctaccaccacctccacagcacagacagacactcaggagccagccagcgtcgat480

cattgaagttactattccgaagttcctattctctagaattcgccaccacgcgtggtatat540

tgctgttgacagtgagcgagaggtagagaagcagatgaaactgtgaagcagatgggtttc600

atctgcttctctacctcgcgcctactgcctcggacttcaaatcatctactccatggccct660

ctgcgtttgctgaagacagaaccgcaaagcaggacccgacaggattctccccgcctcttc720

agagactatgtttacaagatatcggtatattgctgttgacagtgagcgtgagaagcagat780

gaatatgagactgtgaagcagatgggtctcatattcatctgcttctctcgcctactgcct840

cggacttcaagtcgacgctagcaataaaggatcctttattttcattggatccgtgtgttg900

gttttttgtgtgcggttaattaaggtacccgagctccaccgcggtggcggccgtccgccc960

tcggcaccatcctcacgacacccaaatatggcgacgggtgaggaatggtggggagttatt1020

tttagagcggtgaggaaggtgggcaggcagcaggtgttggcgctctaaaaataactcccg1080

ggagttatttttagagcggaggaatggtggacacccaaatatggcgacggttcctcaccc1140

gtcgccatatttgggtgtccgccctcggccggggccgcattcctgggggccgggcggtgc1200

tcccgcccgcctcgataaaaggctccggggccggcggcggcccacgagctacccggagga1260

gcgggaggcgccaagctctagaactagtggatcccccgggctgcaggaattcgatgccac1320

catggccgctgccgccgctgctgctgccgcagccggcgctgccggcggaagaggcagcgg1380

ccctggcagacggcggcatctggtccctggcgccggaggggaggccggcgaaggcgcccc1440

tggcggagccggcgactacggcaacggcctggaaagcgaggaactggaacccgaggaact1500

gctgctggaacctgagcccgagccagagcccgaggaagagccccctaggccaagagcccc1560

ccctggcgccccaggaccaggaccaggctctggggcaccaggctctcaggaagaggaaga1620

agagcccggcctcgtcgagggagacccaggcgatggcgctatcgaagatcccgagctgga1680

agccatcaaggccagagtgcgggagatggaagaggaggccgaaaaattgaaagagctgca1740

gaacgaagtcgaaaaacaaatgaacatgtccccccctcctggaaatgctggccctgtgat1800

catgagcatcgaggaaaagatggaagccgacgcccggtctatctacgtgggcaacgtgga1860

ctacggcgccaccgccgaagaactggaagcccactttcacggctgtggcagcgtgaaccg1920

ggtgaccatcctgtgcgacaagttcagcggccaccccaagggcttcgcctacatcgagtt1980

cagcgacaaagaaagcgtgcggacctctctggctctcgacgagtctctgttcaggggaag2040

gcagatcaaggtcatccccaagcggaccaacaggcccggcatcagcaccaccgacagagg2100

cttccctagggctaggtacagagcccggaccaccaactacaacagcagcagaagccggtt2160

ctacagcggcttcaattctcggcctagaggcagagtgtaccggggcagggccagggccac2220

ctcctggtacagcccctacgaacagaagctgatcagcgaggaagatctgtgatgagatat2280

ctgatgacatatgacgcgtttaattaactgtgccttctagttgccagccatctgttgttt2340

gcccctcccccgtgccttccttgaccctggaaggtgccactcccactgtcctttcctaat2400

aaaatgaggaaattgcatcgcattgtctgagtaggtgtcattctattctggggggtgggg2460

tggggcaggacagcaagggggaggattgggaagacaatagcaggcatgctggggatgcgg2520

tgggctctatgg2532

<210>70

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<212>dna

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>编码shmir17、shmir13和密码子优化的pabpn1的双重表达构建体形式1

<400>70

cgatcgcgcgcagatctgtcatgatgatcctagcatgctgcccatgtaaggaggcaaggc60

ctggggacacccgagatgcctggttataattaacccagacatgtggctgccccccccccc120

ccaacacctgctgcctctaaaaataaccctgcatgccatgttcccggcgaagggccagct180

gtcccccgccagctagactcagcacttagtttaggaaccagtgagcaagtcagcccttgg240

ggcagcccatacaaggccatggggctgggcaagctgcacgcctgggtccggggtgggcac300

ggtgcccgggcaacgagctgaaagctcatctgctctcaggggcccctccctggggacagc360

ccctcctggctagtcacaccctgtaggctcctctatataacccaggggcacaggggctgc420

cctcattctaccaccacctccacagcacagacagacactcaggagccagccagcgtcgat480

cattgaagttactattccgaagttcctattctctagaattcgccaccacgcgtggtatat540

tgctgttgacagtgagcgaaggtagagaagcagatgaatactgtgaagcagatgggtatt600

catctgcttctctacctccgcctactgcctcggacttcaaatcatctactccatggccct660

ctgcgtttgctgaagacagaaccgcaaagcaggacccgacaggattctccccgcctcttc720

agagactatgtttacaagatatcggtatattgctgttgacagtgagcgacgacatcatgg780

tattcccctactgtgaagcagatgggtaggggaataccatgatgtcgccgcctactgcct840

cggacttcaagtcgacgctagcaataaaggatcctttattttcattggatccgtgtgttg900

gttttttgtgtgcggttaattaaggtacccgagctccaccgcggtggcggccgtccgccc960

tcggcaccatcctcacgacacccaaatatggcgacgggtgaggaatggtggggagttatt1020

tttagagcggtgaggaaggtgggcaggcagcaggtgttggcgctctaaaaataactcccg1080

ggagttatttttagagcggaggaatggtggacacccaaatatggcgacggttcctcaccc1140

gtcgccatatttgggtgtccgccctcggccggggccgcattcctgggggccgggcggtgc1200

tcccgcccgcctcgataaaaggctccggggccggcggcggcccacgagctacccggagga1260

gcgggaggcgccaagctctagaactagtggatcccccgggctgcaggaattcgatgccac1320

catggccgctgccgccgctgctgctgccgcagccggcgctgccggcggaagaggcagcgg1380

ccctggcagacggcggcatctggtccctggcgccggaggggaggccggcgaaggcgcccc1440

tggcggagccggcgactacggcaacggcctggaaagcgaggaactggaacccgaggaact1500

gctgctggaacctgagcccgagccagagcccgaggaagagccccctaggccaagagcccc1560

ccctggcgccccaggaccaggaccaggctctggggcaccaggctctcaggaagaggaaga1620

agagcccggcctcgtcgagggagacccaggcgatggcgctatcgaagatcccgagctgga1680

agccatcaaggccagagtgcgggagatggaagaggaggccgaaaaattgaaagagctgca1740

gaacgaagtcgaaaaacaaatgaacatgtccccccctcctggaaatgctggccctgtgat1800

catgagcatcgaggaaaagatggaagccgacgcccggtctatctacgtgggcaacgtgga1860

ctacggcgccaccgccgaagaactggaagcccactttcacggctgtggcagcgtgaaccg1920

ggtgaccatcctgtgcgacaagttcagcggccaccccaagggcttcgcctacatcgagtt1980

cagcgacaaagaaagcgtgcggacctctctggctctcgacgagtctctgttcaggggaag2040

gcagatcaaggtcatccccaagcggaccaacaggcccggcatcagcaccaccgacagagg2100

cttccctagggctaggtacagagcccggaccaccaactacaacagcagcagaagccggtt2160

ctacagcggcttcaattctcggcctagaggcagagtgtaccggggcagggccagggccac2220

ctcctggtacagcccctacgaacagaagctgatcagcgaggaagatctgtgatgagatat2280

ctgatgacatatgacgcgtttaattaactgtgccttctagttgccagccatctgttgttt2340

gcccctcccccgtgccttccttgaccctggaaggtgccactcccactgtcctttcctaat2400

aaaatgaggaaattgcatcgcattgtctgagtaggtgtcattctattctggggggtgggg2460

tggggcaggacagcaagggggaggattgggaagacaatagcaggcatgctggggatgcgg2520

tgggctctatgg2532

<210>71

<211>1943

<212>dna

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>编码shmir3、shmir14和密码子优化的pabpn1的双重表达构建体形式2

<400>71

cgagctccaccgcggtggcggccgtccgccctcggcaccatcctcacgacacccaaatat60

ggcgacgggtgaggaatggtggggagttatttttagagcggtgaggaaggtgggcaggca120

gcaggtgttggcgctctaaaaataactcccgggagttatttttagagcggaggaatggtg180

gacacccaaatatggcgacggttcctcacccgtcgccatatttgggtgtccgccctcggc240

cggggccgcattcctgggggccgggcggtgctcccgcccgcctcgataaaaggctccggg300

gccggcggcggcccacgagctacccggaggagcgggaggcgccaagctctagaactagtg360

gatcccccgggctgcaggaattcgatgccaccatggccgctgccgccgctgctgctgccg420

cagccggcgctgccggcggaagaggcagcggccctggcagacggcggcatctggtccctg480

gcgccggaggggaggccggcgaaggcgcccctggcggagccggcgactacggcaacggcc540

tggaaagcgaggaactggaacccgaggaactgctgctggaacctgagcccgagccagagc600

ccgaggaagagccccctaggccaagagccccccctggcgccccaggaccaggaccaggct660

ctggggcaccaggctctcaggaagaggaagaagagcccggcctcgtcgagggagacccag720

gcgatggcgctatcgaagatcccgagctggaagccatcaaggccagagtgcgggagatgg780

aagaggaggccgaaaaattgaaagagctgcagaacgaagtcgaaaaacaaatgaacatgt840

ccccccctcctggaaatgctggccctgtgatcatgagcatcgaggaaaagatggaagccg900

acgcccggtctatctacgtgggcaacgtggactacggcgccaccgccgaagaactggaag960

cccactttcacggctgtggcagcgtgaaccgggtgaccatcctgtgcgacaagttcagcg1020

gccaccccaagggcttcgcctacatcgagttcagcgacaaagaaagcgtgcggacctctc1080

tggctctcgacgagtctctgttcaggggaaggcagatcaaggtcatccccaagcggacca1140

acaggcccggcatcagcaccaccgacagaggcttccctagggctaggtacagagcccgga1200

ccaccaactacaacagcagcagaagccggttctacagcggcttcaattctcggcctagag1260

gcagagtgtaccggggcagggccagggccacctcctggtacagcccctactgatgacata1320

tgacgcgtggtatattgctgttgacagtgagcgagaggtagagaagcagatgaaactgtg1380

aagcagatgggtttcatctgcttctctacctcgcgcctactgcctcggacttcaaatcat1440

ctactccatggccctctgcgtttgctgaagacagaaccgcaaagcaggacccgacaggat1500

tctccccgcctcttcagagactatgtttacaagatatcggtatattgctgttgacagtga1560

gcgtgagaagcagatgaatatgagactgtgaagcagatgggtctcatattcatctgcttc1620

tctcgcctactgcctcggacttcaagtcgacgctagcaataaaggatcctttattttcat1680

tggatccgtgtgttggttttttgtgtgcggttaattaactgtgccttctagttgccagcc1740

atctgttgtttgcccctcccccgtgccttccttgaccctggaaggtgccactcccactgt1800

cctttcctaataaaatgaggaaattgcatcgcattgtctgagtaggtgtcattctattct1860

ggggggtggggtggggcaggacagcaagggggaggattgggaagacaatagcaggcatgc1920

tggggatgcggtgggctctatgg1943

<210>72

<211>1943

<212>dna

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>编码shmir17、shmir13和密码子优化的pabpn1的双重表达构建体形式2

<400>72

cgagctccaccgcggtggcggccgtccgccctcggcaccatcctcacgacacccaaatat60

ggcgacgggtgaggaatggtggggagttatttttagagcggtgaggaaggtgggcaggca120

gcaggtgttggcgctctaaaaataactcccgggagttatttttagagcggaggaatggtg180

gacacccaaatatggcgacggttcctcacccgtcgccatatttgggtgtccgccctcggc240

cggggccgcattcctgggggccgggcggtgctcccgcccgcctcgataaaaggctccggg300

gccggcggcggcccacgagctacccggaggagcgggaggcgccaagctctagaactagtg360

gatcccccgggctgcaggaattcgatgccaccatggccgctgccgccgctgctgctgccg420

cagccggcgctgccggcggaagaggcagcggccctggcagacggcggcatctggtccctg480

gcgccggaggggaggccggcgaaggcgcccctggcggagccggcgactacggcaacggcc540

tggaaagcgaggaactggaacccgaggaactgctgctggaacctgagcccgagccagagc600

ccgaggaagagccccctaggccaagagccccccctggcgccccaggaccaggaccaggct660

ctggggcaccaggctctcaggaagaggaagaagagcccggcctcgtcgagggagacccag720

gcgatggcgctatcgaagatcccgagctggaagccatcaaggccagagtgcgggagatgg780

aagaggaggccgaaaaattgaaagagctgcagaacgaagtcgaaaaacaaatgaacatgt840

ccccccctcctggaaatgctggccctgtgatcatgagcatcgaggaaaagatggaagccg900

acgcccggtctatctacgtgggcaacgtggactacggcgccaccgccgaagaactggaag960

cccactttcacggctgtggcagcgtgaaccgggtgaccatcctgtgcgacaagttcagcg1020

gccaccccaagggcttcgcctacatcgagttcagcgacaaagaaagcgtgcggacctctc1080

tggctctcgacgagtctctgttcaggggaaggcagatcaaggtcatccccaagcggacca1140

acaggcccggcatcagcaccaccgacagaggcttccctagggctaggtacagagcccgga1200

ccaccaactacaacagcagcagaagccggttctacagcggcttcaattctcggcctagag1260

gcagagtgtaccggggcagggccagggccacctcctggtacagcccctactgatgacata1320

tgacgcgtggtatattgctgttgacagtgagcgaaggtagagaagcagatgaatactgtg1380

aagcagatgggtattcatctgcttctctacctccgcctactgcctcggacttcaaatcat1440

ctactccatggccctctgcgtttgctgaagacagaaccgcaaagcaggacccgacaggat1500

tctccccgcctcttcagagactatgtttacaagatatcggtatattgctgttgacagtga1560

gcgacgacatcatggtattcccctactgtgaagcagatgggtaggggaataccatgatgt1620

cgccgcctactgcctcggacttcaagtcgacgctagcaataaaggatcctttattttcat1680

tggatccgtgtgttggttttttgtgtgcggttaattaactgtgccttctagttgccagcc1740

atctgttgtttgcccctcccccgtgccttccttgaccctggaaggtgccactcccactgt1800

cctttcctaataaaatgaggaaattgcatcgcattgtctgagtaggtgtcattctattct1860

ggggggtggggtggggcaggacagcaagggggaggattgggaagacaatagcaggcatgc1920

tggggatgcggtgggctctatgg1943

<210>73

<211>921

<212>dna

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>人密码子优化的pabpn1cdna序列

<400>73

atggccgctgccgccgctgctgctgccgcagccggcgctgccggcggaagaggcagcggc60

cctggcagacggcggcatctggtccctggcgccggaggggaggccggcgaaggcgcccct120

ggcggagccggcgactacggcaacggcctggaaagcgaggaactggaacccgaggaactg180

ctgctggaacctgagcccgagccagagcccgaggaagagccccctaggccaagagccccc240

cctggcgccccaggaccaggaccaggctctggggcaccaggctctcaggaagaggaagaa300

gagcccggcctcgtcgagggagacccaggcgatggcgctatcgaagatcccgagctggaa360

gccatcaaggccagagtgcgggagatggaagaggaggccgaaaaattgaaagagctgcag420

aacgaagtcgaaaaacaaatgaacatgtccccccctcctggaaatgctggccctgtgatc480

atgagcatcgaggaaaagatggaagccgacgcccggtctatctacgtgggcaacgtggac540

tacggcgccaccgccgaagaactggaagcccactttcacggctgtggcagcgtgaaccgg600

gtgaccatcctgtgcgacaagttcagcggccaccccaagggcttcgcctacatcgagttc660

agcgacaaagaaagcgtgcggacctctctggctctcgacgagtctctgttcaggggaagg720

cagatcaaggtcatccccaagcggaccaacaggcccggcatcagcaccaccgacagaggc780

ttccctagggctaggtacagagcccggaccaccaactacaacagcagcagaagccggttc840

tacagcggcttcaattctcggcctagaggcagagtgtaccggggcagggccagggccacc900

tcctggtacagcccctactga921

<210>74

<211>306

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>人野生型pabpn1氨基酸序列

<400>74

metalaalaalaalaalaalaalaalaalaalaglyalaalaglygly

151015

argglyserglyproglyargargarghisleuvalproglyalagly

202530

glyglualaglygluglyalaproglyglyalaglyasptyrglyasn

354045

glyleugluserglugluleugluproglugluleuleuleuglupro

505560

gluprogluprogluprogluglugluproproargproargalapro

65707580

proglyalaproglyproglyproglyserglyalaproglysergln

859095

gluglugluglugluproglyleuvalgluglyaspproglyaspgly

100105110

alailegluaspprogluleuglualailelysalaargvalargglu

115120125

metglugluglualaglulysleulysgluleuglnasngluvalglu

130135140

lysglnmetasnmetserproproproglyasnalaglyprovalile

145150155160

metserilegluglulysmetglualaaspalaargseriletyrval

165170175

glyasnvalasptyrglyalathralaglugluleuglualahisphe

180185190

hisglycysglyservalasnargvalthrileleucysasplysphe

195200205

serglyhisprolysglyphealatyrileglupheserasplysglu

210215220

servalargthrserleualaleuaspgluserleupheargglyarg

225230235240

glnilelysvalileprolysargthrasnargproglyileserthr

245250255

thraspargglypheproargalaargtyrargalaargthrthrasn

260265270

tyrasnserserargserargphetyrserglypheasnserargpro

275280285

argglyargvaltyrargglyargalaargalathrsertrptyrser

290295300

protyr

305

<210>75

<211>314

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>人野生型pabpn1氨基酸序列(具有flag标签)

<400>75

metalaalaalaalaalaalaalaalaalaalaglyalaalaglygly

151015

argglyserglyproglyargargarghisleuvalproglyalagly

202530

glyglualaglygluglyalaproglyglyalaglyasptyrglyasn

354045

glyleugluserglugluleugluproglugluleuleuleuglupro

505560

gluprogluprogluprogluglugluproproargproargalapro

65707580

proglyalaproglyproglyproglyserglyalaproglysergln

859095

gluglugluglugluproglyleuvalgluglyaspproglyaspgly

100105110

alailegluaspprogluleuglualailelysalaargvalargglu

115120125

metglugluglualaglulysleulysgluleuglnasngluvalglu

130135140

lysglnmetasnmetserproproproglyasnalaglyprovalile

145150155160

metserilegluglulysmetglualaaspalaargseriletyrval

165170175

glyasnvalasptyrglyalathralaglugluleuglualahisphe

180185190

hisglycysglyservalasnargvalthrileleucysasplysphe

195200205

serglyhisprolysglyphealatyrileglupheserasplysglu

210215220

servalargthrserleualaleuaspgluserleupheargglyarg

225230235240

glnilelysvalileprolysargthrasnargproglyileserthr

245250255

thraspargglypheproargalaargtyrargalaargthrthrasn

260265270

tyrasnserserargserargphetyrserglypheasnserargpro

275280285

argglyargvaltyrargglyargalaargalathrsertrptyrser

290295300

protyrasptyrlysaspaspaspasplys

305310

<210>76

<211>314

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>人密码子优化的pabpn1氨基酸序列(具有flag-标签)

<400>76

metalaalaalaalaalaalaalaalaalaalaglyalaalaglygly

151015

argglyserglyproglyargargarghisleuvalproglyalagly

202530

glyglualaglygluglyalaproglyglyalaglyasptyrglyasn

354045

glyleugluserglugluleugluproglugluleuleuleuglupro

505560

gluprogluprogluprogluglugluproproargproargalapro

65707580

proglyalaproglyproglyproglyserglyalaproglysergln

859095

gluglugluglugluproglyleuvalgluglyaspproglyaspgly

100105110

alailegluaspprogluleuglualailelysalaargvalargglu

115120125

metglugluglualaglulysleulysgluleuglnasngluvalglu

130135140

lysglnmetasnmetserproproproglyasnalaglyprovalile

145150155160

metserilegluglulysmetglualaaspalaargseriletyrval

165170175

glyasnvalasptyrglyalathralaglugluleuglualahisphe

180185190

hisglycysglyservalasnargvalthrileleucysasplysphe

195200205

serglyhisprolysglyphealatyrileglupheserasplysglu

210215220

servalargthrserleualaleuaspgluserleupheargglyarg

225230235240

glnilelysvalileprolysargthrasnargproglyileserthr

245250255

thraspargglypheproargalaargtyrargalaargthrthrasn

260265270

tyrasnserserargserargphetyrserglypheasnserargpro

275280285

argglyargvaltyrargglyargalaargalathrsertrptyrser

290295300

protyrasptyrlysaspaspaspasplys

305310

<210>77

<211>20

<212>dna

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>wtpabpn1-fwd引物

<400>77

atggtgcaacagcagaagag20

<210>78

<211>20

<212>dna

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>wtpabpn1-rev引物

<400>78

ctttgggatggccactaaat20

<210>79

<211>23

<212>dna

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>wtpabpn1-探针

<400>79

cggttgactgaaccacagccatg23

<210>80

<211>19

<212>dna

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>optpabpn1-for引物

<400>80

accgacagaggcttcccta19

<210>81

<211>21

<212>dna

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>optpabpn1-rev引物

<400>81

ttctgctgctgttgtagttgg21

<210>82

<211>23

<212>dna

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>optpabpn1-探针

<400>82

tggtccgggctctgtacctagcc23

<210>83

<211>21

<212>dna

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>shmir3-fwd引物

<400>83

ttcatctgcttctctacctcg21

<210>84

<211>21

<212>dna

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>shmir13-fwd引物

<400>84

aggggaataccatgatgtcgc21

<210>85

<211>21

<212>dna

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>shmir14-fwd引物

<400>85

ctcatattcatctgcttctct21

<210>86

<211>21

<212>dna

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>shmir17-fwd引物

<400>86

attcatctgcttctctacctc21