本发明属于细菌检测领域，尤其涉及一种新型细菌检测方法。
背景技术：
依据《血液透析及相关治疗用水》yy0572-2015标准记载，通常采用平皿法、薄膜过滤法检测血液透析及相关治疗用水中的微生物数量。平皿法包括倾注平皿法、涂布平皿法，该方法步骤繁琐且过程中容易染菌并影响准确计数，在实验过程中还需要对培养基条件参数进行控制，否则容易影响实验结果精确性，传统的薄膜过滤法操作更繁琐，对供试品的要求较高。并且不论是平皿法还是薄膜过滤法均需要在超净台上进行实验，制作培养基或添加检测样品，对检验环境、人员的专业水平和设备要求比较高。
技术实现要素：
为解决现有技术的不足，本发明提供一种新型细菌检测方法，此方法无需在超净台上制作培养基或者添加检测样品，操作简便。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：一种新型细菌检测方法，包括以下步骤：
（1）供试液的制备：根据实际情况可以用原液或无菌水将供试品制成浓度适当的供试液；
（2）量取步骤（1）制备的供试液1ml注入培养皿中，摇匀；
（3）利用一次性无菌注射器吸取1ml培养基注入步骤（2）中的培养皿内，密封摇匀；
（4）将步骤（3）制备好的培养皿置于温度为17℃-23℃，相对湿度为40%-47%的培养箱内培养168小时；
（5）记录细菌数目。
作为优选方案，本发明所述的培养皿采用本申请人于2017年06月09日申请的发明专利《一种用于透析液或透析用水检测的一次性无菌微生物培养皿》（公开号：cn107177485a）公开的微生物培养皿。
优选地，所述的步骤（3）中培养基的ph值为6.8-7.2。
优选地，所述的步骤（3）中的培养基盛放在一次性无菌灌装的西林瓶中。
优选地，所述的步骤（3）中的培养基采用胰蛋白胨葡萄糖培养基。
本发明的有益效果如下：1）本发明采用的培养皿和培养基都是无菌的，打开后可以直接使用，可在常温的普通环境下添加检测样品和液体培养基，对环境和人员的要求很低；2）提高了原始检测方法的灵敏度，加强了细菌的有效分离和肉眼的准确计数；3）原始薄膜过滤法需要在无菌环境下操作，并且操作过程中需要取出过滤膜，有染菌的可能，而本发明直接加样，避免过滤膜感染细菌。
附图说明
附图1是本发明所述的培养皿的结构示意图。附图标记：1-培养盒，2-培养腔，3-上透液孔，4-下透液孔，5-细菌培养纸，6-密封帽，7-上盖，8-进液通道，9-培养箱（未示出）。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整的描述，显然，所描述的实施例是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
以天津市某医院提供的供试品为研究对象，分别采用薄膜过滤法、平板倾注法以及新型细菌检测方法做了对比实验：
薄膜过滤法、平板倾注法依据《血液透析及相关治疗用水》yy0572-2015规定的的检测方法，检测细菌数量。
而本发明一种新型细菌检测方法，包括以下步骤：
（1）供试液的制备：根据实际情况可以用原液或无菌水将供试品制成浓度适当的供试液；
（2）量取步骤（1）制备的供试液1ml分别注入培养皿中，摇匀；
（3）利用一次性无菌注射器从一次性无菌灌装的西林瓶中吸取1mlph值为6.8的培养基注入步骤（2）中的培养皿内，密封摇匀；
（4）将步骤（3）制备好的培养皿置于温度为17℃，相对湿度为40%的培养箱内培养168小时；
（5）按照同样步骤平行做2个对照实验。
（6）做1组空白实验：利用一次性无菌注射器从一次性无菌灌装的西林瓶中吸取1mlph值为7.0的培养基注入未接种的培养皿内，密封摇匀，然后放置于温度为17℃，相对湿度为40%的培养箱内培养168小时；
（7）记录实验组、空白实验的细菌数目。
如附图1所示，作为优选方案，本发明所述的培养皿采用本申请人于2017年06月09日申请的发明专利《一种用于透析液或透析用水检测的一次性无菌微生物培养皿》（公开号：cn107177485a）公开的微生物培养皿。该培养皿外观透明，上下端盖分别设有带有密封帽的进液孔和带有密封帽的出液孔，内设有两层孔径为0.45μm的滤膜。
优选地，所述的步骤（3）中的培养基采用胰蛋白胨葡萄糖培养基。
实验结果如表1所示：
表1天津市某医院提供的供试液细菌检测结果
根据实验结果可知，本发明公开的一种新型细菌检测方法依据胰蛋白胨葡萄糖培养基的技术要求，其检测结果优于原始的两种检测方法，提高了原始检测方法的灵敏度，加强了细菌的有效分离和肉眼的准确计数。
实施例2
以天津某医院提供的供试品为研究对象，分别采用薄膜过滤法、平板倾注法以及新型细菌检测方法做了对比实验：
薄膜过滤法、平板倾注法依据《血液透析及相关治疗用水》yy0572-2015规定的的检测方法，检测细菌数量。
而本发明一种新型细菌检测方法，包括以下步骤：
（1）供试液的制备：根据实际情况可以用原液或无菌水将供试品制成浓度适当的供试液；
（2）量取步骤（1）制备的供试液1ml分别注入培养皿中，摇匀；
（3）利用一次性无菌注射器从一次性无菌灌装的西林瓶中吸取1mlph值为7.2的培养基注入步骤（2）中的培养皿内，密封摇匀；
（4）将步骤（3）制备好的培养皿置于温度为23℃，相对湿度为47%的培养箱内培养168小时；
（5）按照同样步骤平行做2个对照实验；
（6）做1组空白实验：利用一次性无菌注射器从一次性无菌灌装的西林瓶中吸取1mlph值为7.0的培养基注入未接种的培养皿内，密封摇匀，然后放置于温度为23℃，相对湿度为47%的培养箱内培养168小时；
（7）记录实验组、空白实验的细菌数目。
如附图1所示，作为优选方案，本发明所述的培养皿采用本申请人于2017年06月09日申请的发明专利《一种用于透析液或透析用水检测的一次性无菌微生物培养皿》（公开号：cn107177485a）公开的微生物培养皿。该培养皿外观透明，上下端盖分别设有带有密封帽的进液孔和带有密封帽的出液孔，内设有两层孔径为0.45μm的滤膜。
优选地，所述的步骤（3）中的培养基采用胰蛋白胨葡萄糖培养基。
实验结果如表2所示：
表2天津某医院提供的供试液细菌检测结果
根据实验结果可知，本发明公开的一种新型细菌检测方法依据胰蛋白胨葡萄糖培养基的技术要求，其检测结果优于原始的两种检测方法，提高了原始检测方法的灵敏度，加强了细菌的有效分离和肉眼的准确计数。