一种细菌的检测方法
【专利说明】一种细菌的检测方法
[0001]
技术领域
[0002]本发明涉及检测领域，具体涉及一种细菌的检测方法。
【背景技术】
[0003]细菌广泛分布于土壤和水中，或著与其他生物共生。人体身上也带有相当多的细菌。据估计，人体内及表皮上的细菌细胞总数约是人体细胞总数的十倍。然而，细菌的种类是如此之多，科学家研究过并命名的种类只占其中的小部份。微生物检验是医疗器械、生物药品等生产制造行业产品质量控制的重要内容，其内容主要包括以培养方法检测是否有细菌、支原体等微生物的污染;其中菌检是微生物检测的最基本也是最重要的组成部分，纯菌实验检测诸如减毒活菌苗自身菌体的活菌量、总菌量以及是否有其他杂菌的存在。
【发明内容】
[0004]本发明的目的是提供一种细菌的检测方法，可以快速的实现细菌的检测，同时结果更加准确，方便试验人员采用。
[0005]—种细菌的检测方法，包括如下步骤:
(1)样品处理:无菌条件下从样本中分离细菌，划线接种于营养琼脂平板、血液琼脂平板和麦康凯平板上，置恒温培养箱中，培养，获得单菌落;单菌落用单菌落接种液体培养基培养;收集菌液，在液氮和35_40°C下，分别反复冻融裂解细菌或超声波破碎细菌，之后消化处理；
(2)将目标细菌的抗体连接到磁性纳米球和荧光纳米球表面，并用牛血清白蛋白对偶联了抗体的磁性纳米球和荧光纳米球进行封闭，得到免疫磁球和免疫荧光球；
(3)将免疫磁球和免疫荧光球加入到待测溶液中，孵育使免疫磁球、免疫荧光球和目标细菌充分结合，然后磁分离并洗涤，最后加入生理盐水并重悬均匀，得到磁球-细菌-荧光球复合物；
(4)利用荧光显微镜或者荧光光谱仪对磁球-细菌-荧光球复合物进行检测。
[0006]进一步的，所述步骤(1)中恒温培养箱的温度为38-42°C，培养时间为25—36h。
[0007]进一步的，所述步骤(1)中消化处理过程为lml的细菌中分别加入6μ1的核糖核酸酶，及10Χ缓冲液，38°C消化1小时后，85°C、3min终止消化。
[0008]本发明的有益效果是:
本发明的细菌通检测方法，可快速鉴别不同细菌，敏感性、准确性优于传统检测方法；具有良好的特异性和较高的敏感性，同时为细菌快速诊断试剂盒研发奠定了技术基础。具有普适性，便于推广。
【具体实施方式】
[0009]实施例1
一种细菌的检测方法，其特征在于，包括如下步骤:
(1)样品处理:无菌条件下从样本中分离细菌，划线接种于营养琼脂平板、血液琼脂平板和麦康凯平板上，置恒温培养箱中，培养，获得单菌落;单菌落用单菌落接种液体培养基培养;收集菌液，在液氮和35°c下，分别反复冻融裂解细菌或超声波破碎细菌，之后消化处理；
(2)将目标细菌的抗体连接到磁性纳米球和荧光纳米球表面，并用牛血清白蛋白对偶联了抗体的磁性纳米球和荧光纳米球进行封闭，得到免疫磁球和免疫荧光球；
(3)将免疫磁球和免疫荧光球加入到待测溶液中，孵育使免疫磁球、免疫荧光球和目标细菌充分结合，然后磁分离并洗涤，最后加入生理盐水并重悬均匀，得到磁球-细菌-荧光球复合物；
(4)利用荧光显微镜或者荧光光谱仪对磁球-细菌-荧光球复合物进行检测。
[0010]优选的，所述步骤1)中恒温培养箱的温度为38°C，培养时间为25h。
[0011]优选的，所述步骤1)中消化处理过程为lml的细菌中分别加入6μ1的核糖核酸酶，及10Χ缓冲液，38°C消化1小时后，85°C、3min终止消化。
[0012]实施例2
一种细菌的检测方法，其特征在于，包括如下步骤:
(1)样品处理:无菌条件下从样本中分离细菌，划线接种于营养琼脂平板、血液琼脂平板和麦康凯平板上，置恒温培养箱中，培养，获得单菌落;单菌落用单菌落接种液体培养基培养;收集菌液，在液氮和38°C下，分别反复冻融裂解细菌或超声波破碎细菌，之后消化处理；
(2)将目标细菌的抗体连接到磁性纳米球和荧光纳米球表面，并用牛血清白蛋白对偶联了抗体的磁性纳米球和荧光纳米球进行封闭，得到免疫磁球和免疫荧光球；
(3)将免疫磁球和免疫荧光球加入到待测溶液中，孵育使免疫磁球、免疫荧光球和目标细菌充分结合，然后磁分离并洗涤，最后加入生理盐水并重悬均匀，得到磁球-细菌-荧光球复合物；
(4)利用荧光显微镜或者荧光光谱仪对磁球-细菌-荧光球复合物进行检测。
[0013]优选的，所述步骤1)中恒温培养箱的温度为40°C，培养时间为30h。
[0014]优选的，所述步骤1)中消化处理过程为lml的细菌中分别加入6μ1的核糖核酸酶，及10Χ缓冲液，38°C消化1小时后，85°C、3min终止消化。
[0015]实施例3
一种细菌的检测方法，其特征在于，包括如下步骤:
(1)样品处理:无菌条件下从样本中分离细菌，划线接种于营养琼脂平板、血液琼脂平板和麦康凯平板上，置恒温培养箱中，培养，获得单菌落;单菌落用单菌落接种液体培养基培养;收集菌液，在液氮和40°C下，分别反复冻融裂解细菌或超声波破碎细菌，之后消化处理；
(2)将目标细菌的抗体连接到磁性纳米球和荧光纳米球表面，并用牛血清白蛋白对偶联了抗体的磁性纳米球和荧光纳米球进行封闭，得到免疫磁球和免疫荧光球；
(3)将免疫磁球和免疫荧光球加入到待测溶液中，孵育使免疫磁球、免疫荧光球和目标细菌充分结合，然后磁分离并洗涤，最后加入生理盐水并重悬均匀，得到磁球-细菌-荧光球复合物；
(4)利用荧光显微镜或者荧光光谱仪对磁球-细菌-荧光球复合物进行检测。
[0016]优选的，所述步骤1)中恒温培养箱的温度为42°C，培养时间为36h。
[0017]优选的，所述步骤1)中消化处理过程为lml的细菌中分别加入6μ1的核糖核酸酶，及10Χ缓冲液，38°C消化1小时后，85°C、3min终止消化。
[0018]上述说明并非是对本发明的限制，本发明也并不仅限于上述举例，本技术领域的技术人员在本发明的实质范围内所做出的变化、改型、添加或替换，也应属于本发明的保护范围。
【主权项】
1.一种细菌的检测方法，其特征在于，包括如下步骤: (1)样品处理:无菌条件下从样本中分离细菌，划线接种于营养琼脂平板、血液琼脂平板和麦康凯平板上，置恒温培养箱中，培养，获得单菌落;单菌落用单菌落接种液体培养基培养;收集菌液，在液氮和35-40°C下，分别反复冻融裂解细菌或超声波破碎细菌，之后消化处理； (2)将目标细菌的抗体连接到磁性纳米球和荧光纳米球表面，并用牛血清白蛋白对偶联了抗体的磁性纳米球和荧光纳米球进行封闭，得到免疫磁球和免疫荧光球； (3)将免疫磁球和免疫荧光球加入到待测溶液中，孵育使免疫磁球、免疫荧光球和目标细菌充分结合，然后磁分离并洗涤，最后加入生理盐水并重悬均匀，得到磁球-细菌-荧光球复合物； (4)利用荧光显微镜或者荧光光谱仪对磁球-细菌-荧光球复合物进行检测。2.根据权利要求1所诉一种细菌的检测方法，其特征在于，所述步骤1)中恒温培养箱的温度为38-42°C，培养时间为25—36h。3.根据权利要求1所诉一种细菌的检测方法，其特征在于，所述步骤1)中消化处理过程为lml的细菌中分别加入6μ1的核糖核酸酶，及10Χ缓冲液，38°C消化1小时后，85°C、3min终止消化。
【专利摘要】本发明公开了一种细菌的检测方法，包括如下步骤：（1）样品处理：无菌条件下从样本中分离细菌，置恒温培养箱中，培养，获得单菌落；收集菌液，在液氮和35-40℃下，分别反复冻融裂解细菌或超声波破碎细菌，之后消化处理；（2）将目标细菌的抗体连接到磁性纳米球和荧光纳米球表面，得到免疫磁球和免疫荧光球；（3）将免疫磁球和免疫荧光球加入到待测溶液中，得到磁球-细菌-荧光球复合物；（4）利用荧光显微镜磁球-细菌-荧光球复合物进行检测。本发明的细菌通检测方法，可快速鉴别不同细菌，敏感性、准确性优于传统检测方法；具有良好的特异性和较高的敏感性，同时为细菌快速诊断试剂盒研发奠定了技术基础。具有普适性，便于推广。
【IPC分类】G01N33/569, G01N33/543
【公开号】CN105486862
【申请号】CN201510837667
【发明人】毕兆顺
【申请人】青岛爱华高科仪器有限公司
【公开日】2016年4月13日
【申请日】2015年11月26日