背景技术：
靛红是广泛存在于动植物以及人体的活性物质，本身具有抗菌作用，也是我国自行研制开发的ⅰ类抗癌新药靛红化学二聚体的前体。目前有大量研究对以靛红为原料进行结构修饰得到的吲哚醌衍生物的抗菌活性进行研究。苗延青等人通过靛红与4-氨基安替吡啉的缩合反应获得一种对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和绿脓杆菌等具有抗性的化合物，合成路线如下式所示。
冷海军等人对5种靛红衍生物的体外抗菌活性研究，发现部分靛红衍生物（化合物1-4）存在良好的抗革兰氏阳性菌的活性，但对革兰氏阴性菌的抗菌活性则弱于靛红，推断其结构中3位羰基是靛红类化合物发挥抗菌作用的关键位点，通过对该位点进行改造获得其他全新的靛红衍生物，对发展新型抗菌药物具有重要的意义。
螺环化合物已经广泛应用于医药和农药方面，而杂螺环化合物在螺环化合物中占举足轻重的地位，目前氮杂螺环化合物已经被用于治疗尿毒症、帕金森、抑制胃酸分泌以及镇痛消炎等疾病。由于螺环化合物存在螺共轭和异头效应，使得某些化学性质不稳定的化合物（取代基在α-键上）变得较为稳定，这一特点可能是其药物活性高的原因之一。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一类具有抗菌活性的靛红母核螺环化合物。
本发明实现过程如下：
结构通式（i）所示化合物，
r1选自氢、卤素或c1-c3的烷基；
r2选自c1-c3的烷基、苄基；
r3、r3’选自氢、苯基。
具体来说，化合物结构式为：
结构通式（i）所示化合物的制备方法，
r1选自氢、卤素或c1-c3的烷基；r2选自c1-c3的烷基、苄基；r3选自氢、苯基。
反应原料靛红衍生物a、脂肪醇b和双羰基化合物c的摩尔比为1：（1~1.5）：（1~1.5），加入有机溶剂，在强酸型阳离子树脂、二茂铁和醋酸钯催化下，在60~110℃充分反应，反应完成后，经减压浓缩、过滤、柱层析分离提纯，干燥得到目标产物。
反应原料靛红衍生物a、脂肪醇b和双羰基化合物c的摩尔比优选为1：（1~1.2）：（1~1.2）。
所述有机溶剂选自苯、四氯化碳、甲苯、thf，优选为甲苯。
所述强酸型阳离子交换树脂（交联为7%的苯乙烯·二乙烯共聚体上带有磺酸基(-so3h)的阳离子交换树脂）选自007×7、001×7fc或001×7mb，优选为007×7。
本发明的优点在于：采用“一锅煮”的方法制备靛红母核螺环化合物，减少了实验步骤，操作简单，转化率高。操作安全性高，反应条件温和，可实现反应原料的充分利用，适用于工业化生产。经初步抗菌活性测试表明该类型化合物有较好的抑菌作用，具有很好的医药开发价值。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步阐述，这些实施例仅是出于解释说明的目的，而不限制本发明的范围和实质。
实施例1
化合物(r)-5-bromo-1-methyl-2-oxospiro[indoline-3,2'-oxete]-3'-carbaldehyde(1)的制备
于100ml圆底烧瓶中，按投料比（5-溴代靛红:甲醇(1:1.5);5-溴代靛红:丙二醛(1:1.2)）分别加入5-溴代靛红100mg（0.44mmol）、甲醇21mg（0.66mmol）和丙二醛41mg（0.53mmol），加入催化量（5-溴代靛红的0.1倍当量）的001×7fc、二茂铁和醋酸钯，溶剂四氯化碳50ml，加热至80℃反应6小时，用薄层色谱监控反应，反应完全后，停止加热，撤去冷凝装置，将混合体系减压浓缩溶剂，通过柱层析分离提纯，干燥得到目标化合物(1)92.8mg，收率为72%。
1h-nmr(300mhz,dmso-d6)δ(ppm):12.32(1h,s),8.33(1h,s),8.21(1h,d,j=7.5hz),8.17(1h,d,j=7.5hz),8.01(1h,s),3.78(3h,s);13c-nmr(75mhz,dmso-d6)δ(ppm):167.2,154.2,143.7,122.8,118.8,109.2,106.1,30.5;ms(esi)for(m+h)+:293.9。
实施例2
化合物(r)-7-bromo-1-methyl-2-oxospiro[indoline-3,2'-oxete]-3'-carbaldehyde(2)的制备
于100ml圆底烧瓶中，按投料比（7-溴代靛红:甲醇(1:1.5);7-溴代靛红:丙二醛(1:1.2)）分别加入7-溴代靛红80mg（0.36mmol）、甲醇17mg（0.54mmol）和丙二醛31mg（0.43mmol），加入催化量（7-溴代靛红的0.1倍当量）的001×7mb、二茂铁和醋酸钯，溶剂四氯化碳50ml，加热至80℃，加热反应6小时，用薄层色谱监控反应，反应完全后，停止加热，撤去冷凝装置，将混合体系减压浓缩溶剂，通过柱层析分离提纯，干燥得到目标化合物(2)72.9mg，收率为70%。
1h-nmr(300mhz,dmso-d6)δ(ppm):12.21(1h,s),8.43(1h,d),8.21(1h,m,j=7.5hz,j=10.5hz),8.13(1h,d,j=10.5hz),8.03(1h,s),3.44(3h,s);13c-nmr(75mhz,dmso-d6)δ(ppm):171.2,144.3,139.0,125.4,110.2,101.4,98.3,32.1;ms(esi)for(m+na)+:315.9。
实施例3
化合物(r)-5-chloro-1-methyl-2-oxospiro[indoline-3,2'-oxete]-3'-carbaldehyde(3)的制备
于100ml圆底烧瓶中，按投料比（5-氯代靛红:甲醇(1:1.5);5-氯代靛红:丙二醛(1:1.2)）分别加入5-氯代靛红100mg（0.56mmol）、甲醇27mg（0.84mmol）和丙二醛48mg（0.67mmol），加入催化量（5-氯代靛红的0.1倍当量）的001×7fc、二茂铁和醋酸钯，溶剂四氢呋喃50ml，加热至80℃，加热反应6小时，用薄层色谱监控反应，反应完全后，停止加热，撤去冷凝装置，将混合体系减压浓缩溶剂，通过柱层析分离提纯，干燥得到目标化合物(3)107.4mg，收率为77%。
1h-nmr(300mhz,dmso-d6)δ(ppm):11.7(1h,s),8.51(1h,s),8.32(1h,d,j=7.5hz),8.21(1h,d,j=7.5hz),8.10(1h,s),3.04(3h,s);13c-nmr(75mhz,dmso-d6)δ(ppm):172.9,146.7,139.0,123.0,110.4,109.2,107.9,103.5,95.9,31.4;ms(esi)for(m+h)+:250.1。
实施例4
化合物(r)-7-chloro-1-methyl-2-oxospiro[indoline-3,2'-oxete]-3'-carbaldehyde(4)的制备
于100ml圆底烧瓶中，按投料比（7-氯代靛红:甲醇(1:1.5);7-氯代靛红:丙二醛(1:1.2)）分别加入7-氯代靛红80mg（0.44mmol）、甲醇21.1mg（0.66mmol）和丙二醛38.2mg（0.53mmol），加入催化量（7-氯代靛红的0.1倍当量）的001×7mb、二茂铁和醋酸钯，溶剂四氯化碳25ml，加热至80℃，加热反应6小时，用薄层色谱监控反应，反应完全后，停止加热，撤去冷凝装置，将混合体系减压浓缩溶剂，通过柱层析分离提纯，干燥得到目标化合物(4)81.1mg，收率为74%。
1h-nmr(300mhz,dmso-d6)δ(ppm):12.44(1h,s),8.61(1h,d),8.47(1h,dd,j=7.5hz,j=10.0hz),8.38(1h,d,j=7.5hz),8.21(1h,s),3.69(3h,s);13c-nmr(75mhz,dmso-d6)δ(ppm):178.2,151.3,146.2,132.8,117.1,108.5,105.1,96.4,29.9;ms(esi)for(m+na)+:272.0。
实施例5
化合物(r)-3'-benzoyl-5-bromo-1-methyl-4'-phenylspiro[indoline-3,2'-oxet]-2-one(5)的制备
于100ml圆底烧瓶中，按投料比（5-溴代靛红:甲醇(1:1.5);5-溴代靛红:1，3-二苯基丙二酮(1:1.2)）分别加入5-溴代靛红100mg（0.45mmol）、甲醇21.8mg（0.68mmol）和1，3-二苯基丙二酮121mg（0.54mmol），加入催化量（5-溴代靛红的0.1倍当量）的001×7mb、二茂铁和醋酸钯，溶剂苯50ml，加热至80℃，加热反应6小时，用薄层色谱监控反应，反应完全后，停止加热，撤去冷凝装置，将混合体系减压浓缩溶剂，通过柱层析分离提纯，干燥得到目标化合物(5)142.2mg，收率为71%。
1h-nmr(300mhz,dmso-d6)δ(ppm):8.40-8.67(4h,m,j=7.5hz,j=10.5hz),8.02-8.21(6h,m,j=10.5hz,j=7.5hz),7.92-7.99(2h,m),7.88(1h,d),3.62(3h,s);13c-nmr(75mhz,dmso-d6)δ(ppm):165.5,141.7,139.0,118.9,114.5,109.8,105.0,104.2,103.5,94.2,73.2,67.5,25.5;ms(esi)for(m+h)+:469.1。
实施例6
化合物(r)-3'-benzoyl-7-bromo-1-methyl-4'-phenylspiro[indoline-3,2'-oxet]-2-one(6)的制备
于100ml圆底烧瓶中，按投料比（7-溴代靛红:甲醇(1:1.5);7-溴代靛红:1，3-二苯基丙二酮(1:1.2)）分别加入7-溴代靛红80mg（0.36mmol）、甲醇17.3mg（0.54mmol）和1，3-二苯基丙二酮96.3mg（0.43mmol），加入催化量（7-溴代靛红的0.1倍当量）的001×7fc、二茂铁和醋酸钯，溶剂苯25ml，加热至80℃，加热反应6小时，用薄层色谱监控反应，反应完全后，停止加热，撤去冷凝装置，将混合体系减压浓缩溶剂，通过柱层析分离提纯，干燥得到目标化合物(6)112.1mg，收率为70%。
1h-nmr(300mhz,dmso-d6)δ(ppm):8.24-8.33(4h,m),8.22(1h,d),6.96-8.07(6h,m),7.75-7.77(2h,dd,j=7.25hz,j=7.25hz),3.92(3h,s);13c-nmr(75mhz,dmso-d6)δ(ppm):180.3,162.7,160.0,139.5,137.8,132.3,127.0,123.4,121.2,116.3,109.2,94.8,85.2,30.5;ms(esi)for(m+na)+:468.0。
实施例7
化合物(r)-3'-benzoyl-5-chloro-1-methyl-4'-phenylspiro[indoline-3,2'-oxet]-2-one(7)的制备
于100ml圆底烧瓶中，按投料比（5-氯代靛红:甲醇(1:1.5);5-氯代靛红:1，3-二苯基丙二酮(1:1.2)）分别加入5-氯代靛红100mg（0.55mmol）、甲醇26.4mg（0.83mmol）和1，3-二苯基丙二酮147.8mg（0.66mmol），加入催化量（5-氯代靛红的0.1倍当量）的001×7mb、二茂铁和醋酸钯，溶剂四氯化碳30ml，加热至90℃，加热反应6小时，用薄层色谱监控反应，反应完全后，停止加热，撤去冷凝装置，将混合体系减压浓缩溶剂，通过柱层析分离提纯，干燥得到目标化合物(7)178.7mg，收率为73%。
1h-nmr(300mhz,dmso-d6)δ(ppm):8.41-8.63(4h,m),8.24(1h,s),7.85-7.93(6h,m),7.71(1h,m),7.64(1h,d),3.55(3h,s);13c-nmr(75mhz,dmso-d6)δ(ppm):170.5,145.6,144.0,121.3,117.9,114.3,110.4,107.8,104.4,102.7,100.3,82.5,33.4;ms(esi)for(m+h)+:402.1。
实施例8
化合物(r)-3'-benzoyl-7-chloro-1-methyl-4'-phenylspiro[indoline-3,2'-oxet]-2-one(8)的制备
于100ml圆底烧瓶中，按投料比（7-氯代靛红:甲醇(1:1.5);7-氯代靛红:1，3-二苯基丙二酮(1:1.2)）分别加入7-氯代靛红80mg（0.44mmol）、甲醇21.1mg（0.66mmol）和1，3-二苯基丙二酮118.7mg（0.53mmol），加入催化量（7-氯代靛红的0.1倍当量）的001×7fc、二茂铁和醋酸钯，溶剂四氢呋喃25ml，加热至90℃，加热反应6小时，用薄层色谱监控反应，反应完全后，停止加热，撤去冷凝装置，将混合体系减压浓缩溶剂，通过柱层析分离提纯，干燥得到目标化合物(8)83.3mg，收率为76%。
1h-nmr(300mhz,dmso-d6)δ(ppm):8.31-8.59(4h,m),8.27(1h,d),7.92-8.13(6h,m),7.74(1h,t),7.53(1h,d),3.41(3h,s);13c-nmr(75mhz,dmso-d6)δ(ppm):173.2,152.6,150.2,133.1,129.4,125.3,121.0,113.9,111.3,107.5,88.6,31.2;ms(esi)for(m+na)+:424.1。
实施例9
化合物(r)-3'-benzoyl-5-bromo-1-ethylspiro[indoline-3,2'-oxet]-2-one(9)的制备
于100ml圆底烧瓶中，按投料比（5-溴代靛红:乙醇(1:1.5);5-溴代靛红:1-苯基丙二醛(1:1.2)）分别加入5-溴代靛红100mg（0.44mmol）、乙醇30.4mg（0.66mmol）和1-苯基丙二醛78.5mg（0.53mmol），加入催化量（5-溴代靛红的0.1倍当量）的001×7mb、二茂铁和醋酸钯，溶剂苯30ml，加热至80℃，加热反应6小时，用薄层色谱监控反应，反应完全后，停止加热，撤去冷凝装置，将混合体系减压浓缩溶剂，通过柱层析分离提纯，干燥得到目标化合物(9)121.3mg，收率为72%。
1h-nmr(300mhz,dmso-d6)δ(ppm):8.84-9.09(5h,m),8.78(1h,d),8.76(1h,s),8.62(1h,s),8.29(1h,d),4.62(2h,m),3.51(3h,t);13c-nmr(75mhz,dmso-d6)δ(ppm):187.5,153.4,138.5,130.9,126.5,121.8,117.0,116.2,115.5,106.2,104.3,95.4,44.5,13.7;ms(esi)for(m+h)+:384.0。
实施例10
化合物(r)-7-bromo-2-oxo-4'-phenyl-1-propylspiro[indoline-3,2'-oxete]-3'-carbaldehyde(10)的制备
于100ml圆底烧瓶中，按投料比（7-溴代靛红:丙醇(1:1.5);7-溴代靛红:1-苯基丙二醛(1:1.2)）分别加入7-溴代靛红80mg（0.36mmol）、丙醇32.4mg（0.54mmol）和1-苯基丙二醛63.7mg（0.43mmol），加入催化量（7-溴代靛红的0.1倍当量）的007×7、二茂铁和醋酸钯，溶剂四氯化碳25ml，加热至100℃，加热反应6小时，用薄层色谱监控反应，反应完全后，停止加热，撤去冷凝装置，将混合体系减压浓缩溶剂，通过柱层析分离提纯，干燥得到目标化合物(10)118.6mg，收率为83%。
1h-nmr(300mhz,dmso-d6)δ(ppm):9.79(1h,s),8.43-8.87(5h,m),8.45(1h,d),8.35(1h,t),8.21(1h,d),4.48(2h,t),3.71(2h,m),2.94(3h,t);13c-nmr(75mhz,dmso-d6)δ(ppm):180.9,159.5,152.4,133.4,122.4,118.7,116.8,116.6,115.9,113.6,111.1,92.9,44.9,22.6，12.0;ms(esi)for(m+na)+:420.1。
实施例11
化合物(r)-3'-benzoyl-5-chloro-1-propylspiro[indoline-3,2'-oxet]-2-one(11)的制备
于100ml圆底烧瓶中，按投料比（5-氯代靛红:丙醇(1:1.5);5-氯代靛红:1-苯基丙二醛(1:1.2)）分别加入5-氯代靛红100mg（0.55mmol）、丙醇49.8mg（0.83mmol）和1-苯基丙二醛97.7mg（0.43mmol），加入催化量（5-氯代靛红的0.1倍当量）的007×7、二茂铁和醋酸钯，溶剂甲苯30ml，加热至110℃，加热反应6小时，用薄层色谱监控反应，反应完全后，停止加热，撤去冷凝装置，将混合体系减压浓缩溶剂，通过柱层析分离提纯，干燥得到目标化合物(11)167mg，收率为86%。
1h-nmr(300mhz,dmso-d6)δ(ppm):8.64-8.89(5h,m),8.61(1h,s),8.47(1h,d),8.42(1h,s),8.14(1h,d),4.38(2h,t),2.96(2h,m),1.98(3h,t);13c-nmr(75mhz,dmso-d6)δ(ppm):179.5,155.4,140.5,132.0,123.5,119.4,118.6,118.2,117.5,116.9,112.5,82.6,44.3,22.8，12.2;ms(esi)for(m+h)+:354.1。
实施例12
化合物(r)-7-chloro-1-ethyl-2-oxo-4'-phenylspiro[indoline-3,2'-oxete]-3'-carbaldehyde(12)的制备
于100ml圆底烧瓶中，按投料比（7-氯代靛红:乙醇(1:1.5);7-氯代靛红:1-苯基丙二醛(1:1.2)）分别加入7-氯代靛红80mg（0.44mmol）、乙醇30.4mg（0.66mmol）和1-苯基丙二醛78.4mg（0.53mmol），加入催化量（7-氯代靛红或其衍生物的0.1倍当量）的007×7、二茂铁和醋酸钯，溶剂四氢呋喃25ml，加热至80℃，加热反应6小时，用薄层色谱监控反应，反应完全后，停止加热，撤去冷凝装置，将混合体系减压浓缩溶剂，通过柱层析分离提纯，干燥得到目标化合物(12)120.8mg，收率为81%。
1h-nmr(300mhz,dmso-d6)δ(ppm):10.08(1h,s),8.87(2h,d),8.65(1h,d),7.84-7.93(3h,m),7.71(1h,t),7.42(1h,d),3.33(2h,m),2.03(3h,t);13c-nmr(75mhz,dmso-d6)δ(ppm):182,3,169.4,162.8,140.2,128.4,121.0,119.4,117.9,114.3,102.3,76.4,48.5,17.8;ms(esi)for(m+na)+:362.1。
实施例13
化合物(r)-5-bromo-1-ethyl-2-oxospiro[indoline-3,2'-oxete]-3'-carbaldehyde(13)的制备
于100ml圆底烧瓶中，按投料比（5-溴代靛红:乙醇(1:1.5);5-溴代靛红:丙二醛(1:1.2)）分别加入5-溴代靛红100mg（0.44mmol）、乙醇30.4mg（0.66mmol）和丙二醛38.2mg（0.53mmol），加入催化量（5-溴代靛红的0.1倍当量）的007×7、二茂铁和醋酸钯，溶剂苯30ml，加热至90℃，加热反应6小时，用薄层色谱监控反应，反应完全后，停止加热，撤去冷凝装置，将混合体系减压浓缩溶剂，通过柱层析分离提纯，干燥得到目标化合物(13)114.8mg，收率为85%。
1h-nmr(300mhz,dmso-d6)δ(ppm):8.77(1h,s),8.40(1h,d),8.37(1h,d),8.03(1h,d),3.48(1h,d),3.45(2h,m),2.60(3h,t);13c-nmr(75mhz,dmso-d6)δ(ppm):165.7,153.9,140.3,132.4,131.6,129.6,123.2,121.2,108.5,59.9,20.1;ms(esi)for(m+h)+:308.0。
实施例14
化合物(r)-7-chloro-1-ethyl-2-oxospiro[indoline-3,2'-oxete]-3'-carbaldehyde(14)的制备
于100ml圆底烧瓶中，按投料比（7-氯代靛红:苄醇(1:1.5);7-氯代靛红:丙二醛(1:1.2)）分别加入7-氯代靛红80mg（0.44mmol）、苄醇71.3mg（0.66mmol）和丙二醛38.2mg（0.53mmol），加入催化量（7-氯代靛红的0.1倍当量）的001×7mb、二茂铁和醋酸钯，溶剂苯50ml，加热至90℃，加热反应6小时，用薄层色谱监控反应，反应完全后，停止加热，撤去冷凝装置，将混合体系减压浓缩溶剂，通过柱层析分离提纯，干燥得到目标化合物(14)115.8mg，收率为81%。
1h-nmr(300mhz,dmso-d6)δ(ppm):9.18(1h,s),8.27(1h,d),7.93-8.02（2h,m），7.53-7.58(5h,m),7.12(1h,s),4.91(2h,s);13c-nmr(75mhz,dmso-d6)δ(ppm):181.3,155.7,148.0,140.1,134.1,128.1,123.4,119.2,114.1,113.7,113.1,112.7,109.5,87.2,50.4;ms(esi)for(m+na)+:348.1。
实施例15
化合物(r)-3'-benzoyl-7-bromo-4'-phenyl-1-propylspiro[indoline-3,2'-oxet]-2-one(15)的制备
于100ml圆底烧瓶中，按投料比（7-溴代靛红:苄醇(1:1.5);7-溴代靛红:1，3-二苯基丙二酮(1:1.2)）分别加入7-溴代靛红100mg（0.44mmol）、苄醇71.3mg（0.66mmol）和1，3-二苯基丙二酮118.8mg（0.53mmol），加入催化量（7-溴代靛红或其衍生物的0.1倍当量）的007×7、二茂铁和醋酸钯，溶剂四氯化碳30ml，加热至80℃，加热反应6小时，用薄层色谱监控反应，反应完全后，停止加热，撤去冷凝装置，将混合体系减压浓缩溶剂，通过柱层析分离提纯，干燥得到目标化合物(15)183.4mg，收率为80%。
1h-nmr(300mhz,dmso-d6)δ(ppm):8.34(1h,d),8.08-8.17(4h,m),7.84-8.08(6h,m),7.51(1h,t),7.37(1h,d),7.24-7.29(5h,m),4.05(2h,t);13c-nmr(75mhz,dmso-d6)δ(ppm):185.0,162.1,158.3,134.5,129.5,123.2,122.9,122.1,115.4,107.3,102.8,100.2,97.9,88.6,46.4;ms(esi)for(m+h)+:522.1。
实施例16
化合物(r)-3'-benzoyl-5-chloro-4'-phenyl-1-propylspiro[indoline-3,2'-oxet]-2-one(16)的制备
于100ml圆底烧瓶中，按投料比（5-氯代靛红:丙醇(1:1.5);5-氯代靛红:1，3-二苯基丙二酮(1:1.2)）分别加入5-氯代靛红80mg（0.44mmol）、丙醇39.6mg（0.66mmol）和1，3-二苯基丙二酮118.8mg（0.53mmol），加入催化量（5-氯代靛红的0.1倍当量）的007×7、二茂铁和醋酸钯，溶剂四氢呋喃50ml，加热至80℃，加热反应6小时，用薄层色谱监控反应，反应完全后，停止加热，撤去冷凝装置，将混合体系减压浓缩溶剂，通过柱层析分离提纯，干燥得到目标化合物(16)156.7mg，收率为83%。
1h-nmr(300mhz,dmso-d6)δ(ppm):8.21(1h,d),8.02-8.14(4h,m),7.86-7.93(6h,m),7.61-7.63(2h,m),3.64(2h,t),2.05(2h,m),1.97(3h,t);13c-nmr(75mhz,dmso-d6)δ(ppm):181.9,168.4,156.4,143.4,129.4,125.4,123.6,120.7,119.1,118.6,117.5,106.5,102.3,86.7,42.4,25.0,14.1;ms(esi)for(m+h)+:496.1。
实施例17本发明化合物的抗菌活性测试
对本发明合成的化合物进行了大肠杆菌抑菌活性测试，实验采用标准菌株：大肠埃希菌atcc25922、大肠埃希菌10-1、大肠埃希菌10-2。
菌株的准备及菌液的配制：用接种环将受试菌菌种（大肠埃希菌atcc25922、大肠埃希菌10-1、大肠埃希菌10-2）保存液划平板接种于lb固体培养基培养皿，倒置于37℃培养箱过夜。次日从lb固体培养皿中挑取单菌落接种于6～10ml的lb液体培养基，150rpm、37℃振荡培养3h。取100此菌液均匀涂布于lb固体平板，倒置于培养箱37℃培养过夜，16～18h后收集对数生长期活菌，用无菌水制成菌数约106cfu·ml-1的菌悬液，备用。
含药琼脂平板的准备：将mh琼脂加热溶解并置于45~50℃水浴进行平衡，分别加入倍比稀释为不同浓度(160、300、600μg·ml-1)的受试药物，混合均匀倾倒灭菌平皿，放入密封塑料袋中，置于2～8℃环境保存。
最小抑茵浓度的测定：采用琼脂平板二倍稀释法测定受试药物对供试菌的最小抑菌浓度(mics)，使用多点接种仪将制备好的菌液接种于含药mh琼脂培养基，形成直径为5～8mm的菌斑，将平板置于25℃培养18～24h后观察细菌生长状态，以抑制细菌生长的最低药物浓度为其mic。
试验结果详见表1，其中，样品是指相应实施例中制备的靛红母核螺环化合物，样品编号对应制备实施例中所得到的化合物的具体编号。
表1结果显示，化合物1-16在所测试的3种大肠杆菌中均表现出了不同程度的抗菌活性，其中化合物13-16的活性较好，对大肠杆菌呈现较强的抑制效果，在特定大肠杆菌中抗菌效力优于或等同于靛红。综上，本发明的靛红母核螺环化合物可作为革兰氏阴性菌抗菌候选药物，并进一步进行临床前研究。