本发明涉及鱼皮的深加工领域，尤其是涉及一种鱼皮胶原蛋白肽螯合亚铁的制备方法。技术背景鱼皮含有丰富的蛋白质和多种微量元素，其蛋白质主要是大分子的胶原蛋白及粘多糖的成分，是女士养颜护肤美容保健佳品，医学研究发现，“鱼皮”中的白细胞素—亮氨酸有抗癌作用。鱼皮含有丰富的胶原蛋白，每100g干鲨皮中含蛋白质67.1g、脂肪0.5g、其蛋白质为胶原蛋白，对美容补钙都很有好处。一种酸溶性鱼皮胶原蛋白，是以海鱼皮为原料，经切碎、nacl溶液浸泡去杂质、乙醇丙酮脱脂的处理，进而用柠檬酸和醋酸的混合液浸泡提取后离心分离得酸溶性鱼皮胶原溶液，再经nacl固体盐析得酸溶性鱼皮胶原蛋白沉淀，最后将酸溶性鱼皮胶原蛋白沉淀溶解于醋酸溶液中，而后透析或经分子量大于6万的醋酸纤维中空纤维膜进行超滤处理，透析或超滤得到的固体真空冷冻干燥即可得到产品。产品洁白，无腥味，冷冻干燥后呈海绵状。胶原蛋白制品纯度达≥97%。胶原蛋白中含有丰富的甘氨酸、脯氨酸及羟脯氨酸，其水解产物中还有生理活性肽。技术实现要素：本发明的目的在于提供一种鱼皮胶原蛋白肽螯合亚铁的制备方法，鱼皮胶原蛋白肽螯合亚铁螯合率较高，易于被机体吸收，制备鱼皮胶原蛋白肽过程中可以大大提高酶活性、防止酶的失活，提高酶解效率，螯合反应中降低螯合环境中s2-的含量有助于鱼皮胶原蛋白肽螯合亚铁复配物的稳定生成。本发明针对
背景技术：
：中提到的问题，采取的技术方案为：一种鱼皮胶原蛋白肽螯合亚铁的制备方法，包括：预处理、提取胶原蛋白、提取胶原蛋白肽、螯合，具体包括以下步骤：预处理：鲫鱼皮清洗干净，放入0.2～0.3mol/l稀盐酸溶液中浸泡25～30min，处理完成后用清水洗涤至中性，然后烘干、粉碎，过80～100目筛；预处理可以去除鱼皮中的污泥、粘液、金属离子等杂质，可以降低杂质对胶原蛋白的提取过程的影响程度，提高提取效率；提取胶原蛋白：准确称取预处理过的鱼皮样品，加入4～5倍量的2～3%乙酸溶液，然后在1～2℃温度下提取12～24h；在1～2℃、8500～9000r/min条件下将酸提液离心20～40min，收集上清液；剩余残渣按1g:10～15ml的比例浸入3～5g/l胃蛋白酶溶液中，调节ph为1.2～2.5，温度为10～15℃，在频率为40～60khz、密度为0.50～0.53w/cm2的超声波辅助下酶提6～8h；酶提液在相同条件下离心后，合并上清液，即得到胶原蛋白液；首先用酸法浸提，然后配合蛋白酶提取可以将鲫鱼鱼皮中75%以上的胶原蛋白质提取出来，提取效率较高，而且用时较短，成本低廉；提取胶原蛋白肽：将胶原蛋白液调整为浓度为3.5～5%，调节ph值至6.3～6.5，然后，加入胶原蛋白液干重3～6%的木瓜蛋白酶，再加入木瓜蛋白酶重量5～6%的4-羟基苯乙醇、1.2～1.3%的茴香丙酮，在60～62℃温度下酶解25～30min，将酶解液沸水浴10～15min灭酶，冷却后于4000～6000r/min条件下离心20～45min，收集上清液即得胶原蛋白肽溶液；以胃蛋白酶酶解后无需灭酶即升高ph值并以木瓜蛋白酶酶解，不仅减少了提取时间，而且降低了提取的功耗与成本；同时特殊配比的4-羟基苯乙醇与茴香丙酮具有协同效果，该协同作用可以使茴香丙酮作用于木瓜蛋白酶的活性中心半胱氨酸的巯基，提高木瓜蛋白酶的活性，4-羟基苯乙醇还可以有效防止木瓜蛋白酶活性中心半胱氨酸的巯基被氧化失活，提高木瓜蛋白酶中活性成分的含量，进而加快酶解反应的进行，提高酶解效率，降低反应时间，获得分子量均匀、活性较高的胶原蛋白肽；螯合：将胶原蛋白肽溶液经低温干燥后得到固含量15～20%的肽液，调节ph值至7.3～7.5，加入1.2～1.5倍的浓度为1.2～1.5mol/l的fecl2溶液，再加入胶原蛋白肽溶液干物重量0.1～0.12‰的复配助剂，在25～28℃温度下震荡螯合30～45min，将螯合液于1～2℃温度下以12000～15000r/min转速离心浓缩20～45min，取上清液真空浓缩，冷冻干燥后即得鱼皮胶原蛋白肽螯合亚铁；鱼皮胶原蛋白肽螯合亚铁螯合率较高，易于被机体吸收，避免了无机铁盐稳定性差、胃肠刺激大、易受到肠内容物干扰、生物利用率低、存在一定毒副作用等缺点，同时鱼皮胶原蛋白肽可以补充机体所需氨基酸，降低血压、血脂，具有较好的保健功效，是一种高效的鱼皮胶原蛋白肽亚铁复配物。作为优选，复配助剂中含有下列含量的物质：75～85%的抗坏血酸、15～18%的苹果酸与1.5～2.5的(s,s)-1,2-二苯基乙二胺；抗坏血酸可以在极大程度上防止二价铁氧化成褐色化三氧化二铁沉淀，另外，在抗坏血酸与苹果酸存在的条件下，(s,s)-1,2-二苯基乙二胺可以与螯合环境中的s2-离子产生配位络合，生成稳定的配合物，降低了螯合环境中的s2-含量，避免了s2-与稳定螯合物中的金属离子发生反应，有助于鱼皮胶原蛋白肽螯合亚铁复配物的生成。与现有技术相比，本发明的优点在于：1）酶解鱼皮胶原蛋白时，4-羟基苯乙醇与茴香丙酮的协同作用可以使茴香丙酮作用于木瓜蛋白酶的活性中心半胱氨酸的巯基，提高酶活性，还可以有效防止酶活性中心半胱氨酸的巯基被氧化失活，加快酶解反应的进行，提高酶解效率；2）鱼皮胶原蛋白肽与亚铁离子螯合时，(s,s)-1,2-二苯基乙二胺可以与螯合环境中的s2-产生配位络合，生成稳定的配合物，避免了s2-与稳定螯合物中的金属离子发生反应，有助于鱼皮胶原蛋白肽螯合亚铁复配物的稳定生成；3）鱼皮胶原蛋白肽螯合亚铁螯合率较高，易于被机体吸收，避免了无机铁盐稳定性差、胃肠刺激大、易受干扰、利用率低、存在毒副作用等缺点，同时鱼皮胶原蛋白肽可以补充机体所需氨基酸，降低血压、血脂，具有较好的保健功效，是一种高效的鱼皮胶原蛋白肽亚铁复配物。具体实施方式下面通过实施例对本发明方案作进一步说明：实施例1：一种鱼皮胶原蛋白肽螯合亚铁的制备方法，包括以下步骤：1）鲫鱼皮清洗干净，放入0.2mol/l稀盐酸溶液中浸泡25min，处理完成后用清水洗涤至中性，然后烘干、粉碎，过80目筛；2）准确称取预处理过的鱼皮样品，加入4倍量的2%乙酸溶液，然后在1℃温度下提取12h；在1℃、8500r/min条件下将酸提液离心20min，收集上清液；剩余残渣按1g:10ml的比例浸入3g/l胃蛋白酶溶液中，调节ph为1.2，温度为10℃，在频率为40khz、密度为0.50w/cm2的超声波辅助下提取6h；3）将胶原蛋白液调整为浓度为3.5%，调节ph值至6.3，然后，加入胶原蛋白液干重3%的木瓜蛋白酶，再加入木瓜蛋白酶重量5%的4-羟基苯乙醇、1.2%的茴香丙酮，在60℃温度下酶解25min，将酶解液沸水浴10min灭酶，冷却后于4000r/min条件下离心20min，收集上清液即得胶原蛋白肽溶液；4）将胶原蛋白肽溶液经低温干燥后得到固含量15%的肽液，调节ph值至7.3，加入1.2倍的浓度为1.2mol/l的fecl2溶液，再加入胶原蛋白肽溶液干物重量0.1‰的复配助剂，复配助剂中含有83.5%的抗坏血酸、15%的苹果酸与1.5的(s,s)-1,2-二苯基乙二胺，在25℃温度下震荡螯合30min，将螯合液于1℃温度下以12000r/min转速离心浓缩20min，取上清液真空浓缩，冷冻干燥后即得鱼皮胶原蛋白肽螯合亚铁。实施例2：一种鱼皮胶原蛋白肽螯合亚铁的制备方法，包括以下步骤：1）预处理：鲫鱼皮清洗干净，放入0.3mol/l稀盐酸溶液中浸泡30min，处理完成后用清水洗涤至中性，然后烘干、粉碎，过100目筛；预处理可以去除鱼皮中的污泥、粘液、金属离子等杂质，可以降低杂质对胶原蛋白的提取过程的影响程度，提高提取效率；2）提取胶原蛋白：准确称取预处理过的鱼皮样品，加入5倍量的3%乙酸溶液，然后在2℃温度下提取24h；在2℃、9000r/min条件下将酸提液离心40min，收集上清液；剩余残渣按1g:15ml的比例浸入5g/l胃蛋白酶溶液中，调节ph为2.5，温度为15℃，在频率为60khz、密度为0.53w/cm2的超声波辅助下提取8h；酶提液在相同条件下离心后，合并上清液，即得到胶原蛋白液；首先用酸法浸提，然后配合蛋白酶提取可以将鲫鱼鱼皮中75%以上的胶原蛋白质提取出来，提取效率较高，而且用时较短，成本低廉；3）提取胶原蛋白肽：将胶原蛋白液调整为浓度为5%，调节ph值至6.5，然后，加入胶原蛋白液干重6%的木瓜蛋白酶，再加入木瓜蛋白酶重量6%的4-羟基苯乙醇、1.3%的茴香丙酮，在62℃温度下酶解30min，将酶解液沸水浴15min灭酶，冷却后于6000r/min条件下离心45min，收集上清液即得胶原蛋白肽溶液；以胃蛋白酶酶解后无需灭酶即升高ph值并以木瓜蛋白酶酶解，不仅减少了提取时间，而且降低了提取的功耗与成本；同时特殊配比的4-羟基苯乙醇与茴香丙酮具有协同效果，该协同作用可以使茴香丙酮作用于木瓜蛋白酶的活性中心半胱氨酸的巯基，提高木瓜蛋白酶的活性，4-羟基苯乙醇还可以有效防止木瓜蛋白酶活性中心半胱氨酸的巯基被氧化失活，提高木瓜蛋白酶中活性成分的含量，进而加快酶解反应的进行，提高酶解效率，降低反应时间，获得分子量均匀、活性较高的胶原蛋白肽；4）螯合：将胶原蛋白肽溶液经低温干燥后得到固含量20%的肽液，调节ph值至7.5，加入1.5倍的浓度为1.5mol/l的fecl2溶液，再加入胶原蛋白肽溶液干物重量0.12‰的复配助剂，复配助剂中含有80%的抗坏血酸、18%的苹果酸与2的(s,s)-1,2-二苯基乙二胺，在28℃温度下震荡螯合45min，将螯合液于2℃温度下以15000r/min转速离心浓缩45min，取上清液真空浓缩，冷冻干燥后即得鱼皮胶原蛋白肽螯合亚铁；鱼皮胶原蛋白肽螯合亚铁螯合率较高，易于被机体吸收，避免了无机铁盐稳定性差、胃肠刺激大、易受到肠内容物干扰、生物利用率低、存在一定毒副作用等缺点，同时鱼皮胶原蛋白肽可以补充机体所需氨基酸，降低血压、血脂，具有较好的保健功效，是一种高效的鱼皮胶原蛋白肽亚铁复配物。实施例3：一种鱼皮胶原蛋白肽螯合亚铁的制备方法，包括：预处理、提取胶原蛋白、提取胶原蛋白肽、螯合，具体包括以下步骤：预处理：鲫鱼皮清洗干净，放入0.25mol/l稀盐酸溶液中浸泡25min，处理完成后用清水洗涤至中性，然后烘干、粉碎，过100目筛；预处理可以去除鱼皮中的污泥、粘液、金属离子等杂质，可以降低杂质对胶原蛋白的提取过程的影响程度，提高提取效率；提取胶原蛋白：准确称取预处理过的鱼皮样品，加入4倍量的2.5%乙酸溶液，然后在1℃温度下提取18h；在1℃、8800r/min条件下将酸提液离心30min，收集上清液；剩余残渣按1g:12ml的比例浸入4g/l胃蛋白酶溶液中，调节ph为2.2，温度为12℃，在频率为50khz、密度为0.52w/cm2的超声波辅助下提取7h；酶提液在相同条件下离心后，合并上清液，即得到胶原蛋白液；首先用酸法浸提，然后配合蛋白酶提取可以将鲫鱼鱼皮中75%以上的胶原蛋白质提取出来，提取效率较高，而且用时较短，成本低廉；提取胶原蛋白肽：将胶原蛋白液调整为浓度为4%，调节ph值至6.4，然后，加入胶原蛋白液干重5%的木瓜蛋白酶，再加入木瓜蛋白酶重量5.2%的4-羟基苯乙醇、1.2%的茴香丙酮，在60℃温度下酶解30min，将酶解液沸水浴12min灭酶，冷却后于5500r/min条件下离心30min，收集上清液即得胶原蛋白肽溶液；以胃蛋白酶酶解后无需灭酶即升高ph值并以木瓜蛋白酶酶解，不仅减少了提取时间，而且降低了提取的功耗与成本；同时特殊配比的4-羟基苯乙醇与茴香丙酮具有协同效果，该协同作用可以使茴香丙酮作用于木瓜蛋白酶的活性中心半胱氨酸的巯基，提高木瓜蛋白酶的活性，4-羟基苯乙醇还可以有效防止木瓜蛋白酶活性中心半胱氨酸的巯基被氧化失活，提高木瓜蛋白酶中活性成分的含量，进而加快酶解反应的进行，提高酶解效率，降低反应时间，获得分子量均匀、活性较高的胶原蛋白肽；螯合：将胶原蛋白肽溶液经低温干燥后得到固含量18%的肽液，调节ph值至7.4，加入1.4倍的浓度为1.3mol/l的fecl2溶液，再加入胶原蛋白肽溶液干物重量0.1‰的复配助剂，在26℃温度下震荡螯合35min，将螯合液于2℃温度下以14500r/min转速离心浓缩30min，取上清液真空浓缩，冷冻干燥后即得鱼皮胶原蛋白肽螯合亚铁；鱼皮胶原蛋白肽螯合亚铁螯合率较高，易于被机体吸收，避免了无机铁盐稳定性差、胃肠刺激大、易受到肠内容物干扰、生物利用率低、存在一定毒副作用等缺点，同时鱼皮胶原蛋白肽可以补充机体所需氨基酸，降低血压、血脂，具有较好的保健功效，是一种高效的鱼皮胶原蛋白肽亚铁复配物。复配助剂中含有下列含量的物质：80%的抗坏血酸、17.5%的苹果酸与2.2%的(s,s)-1,2-二苯基乙二胺；抗坏血酸可以在极大程度上防止二价铁氧化成褐色化三氧化二铁沉淀，另外，在抗坏血酸与苹果酸存在的条件下，(s,s)-1,2-二苯基乙二胺可以与螯合环境中的s2-离子产生配位络合，生成稳定的配合物，降低了螯合环境中的s2-含量，避免了s2-与稳定螯合物中的金属离子发生反应，有助于鱼皮胶原蛋白肽螯合亚铁复配物的生成。实施例4：测定亚铁离子含量：精确称取实施例1-3中的鱼皮胶原蛋白肽螯合亚铁1.000g，加入50ml1mol/l的硫酸溶液至完全溶解，再缓慢滴加2～3滴邻二氮杂菲指示剂，然后以0.1mol/l硫酸铈标准溶液滴定至浅黄色，记录消耗硫酸铈标准溶液的体积（v），同时做空白组测试，1ml0.11mol/l硫酸铈标准溶液相当于5.59g二价铁。实施例1-3中的鱼皮胶原蛋白肽螯合亚铁中的二价铁含量如表1所示，由表1可知，实施例1-3中的鱼皮胶原蛋白肽螯合亚铁中二价铁的含量均超过了10%，说明鱼皮胶原蛋白肽对亚铁离子的螯合率较高，其结构较稳定。表1.实施例1-3中的鱼皮胶原蛋白肽螯合亚铁中的二价铁含量项目实施例1实施例2实施例3v（ml）17.319.820.2亚铁含量（%）10.6412.1812.42本发明操作步骤中的常规操作为本领域技术人员所熟知，在此不进行赘述。以上所述的实施例对本发明的技术方案进行了详细说明，应理解的是以上所述仅为本发明的具体实施例，并不用于限制本发明，凡在本发明的原则范围内所做的任何修改、补充或类似方式替代等，均应包含在本发明的保护范围之内。当前第1页12