本发明涉及医药中间体领域，具体涉及一种用于制备具有抗肿瘤活性的钌配合物的配体及其制备方法和用途。
背景技术：
缺氧是大多数肿瘤的标志，它影响肿瘤生物学的许多方面。肿瘤组织中氧含量降低导致缺氧诱导因子-1α(hypoxiainduciblefactor-1α，hif-1α)蛋白的积累。通过调节与肿瘤代谢，血管生成，转移，增殖和分化相关的各种基因的表达，hif-1α在肿瘤发生过程中发挥重要作用，hif-1α已成为治疗肿瘤血管生成和癌症的重要靶标。1-苄基-3-(5-羟甲基-2-呋喃基)吲唑(yc-1)是一种有效的hif-1α抑制剂，正在开发作为靶向hif-1和肿瘤血管生成的新型抗癌剂。
肿瘤属于危害人类健康的重大疾病之一，前期以顺铂等为代表的铂类抗肿瘤药物在肿瘤疾病治疗中发挥着十分重要的作用，随着研究的深入越来越多的研究发现，非铂类抗肿瘤化合物也能表现出良好的治疗效果，且缓解甚至避免了铂类抗肿瘤药物带来的一些副作用或者克服铂类抗肿瘤药物所产生的耐药性，而钌类抗肿瘤药物认为是最具潜力的替代之一。其中，钌(ii)-芳烃有机金属配合物是近些年来最为引人关注的研究方向，显示出巨大的癌症治疗潜力。此外，芳烃-钌(ii)配合物中配位的配体可以提供更多调节其药理学性质(例如亲脂性和动力学性质)的可能。
而开发新型抗肿瘤药物，尤其是高活性，具有一定特异性的抗肿瘤药物，一直是追求的目标。而对于金属配合物抗肿瘤药物，其配体(作为制备抗肿瘤配合物的关键中间体)也起着重要的作用。
技术实现要素：
一类新的芳烃-钌配合物，它可以将生物活性的钌(ii)和hif-1α抑制剂yc-1递送至缺氧肿瘤细胞，以期通过多种机制表现其抗癌活性，从而提高化疗药物的治疗效果。
一种芳烃-钌配合物，其结构如式i所示：
其中r表示0-6个取代基，分别独立的选自h或c1-6的烷基；其中r优选为h、甲基、异丙基；
x、y分别表示卤素，其中卤素优选f、cl、br、i，更优选为cl。
式i的芳烃-钌配合物更优选为具体配合物1、2或3；配合物1-3的结构式如下：
一种式i所示芳烃-钌配合物的制备方法：包括用适量的有机溶剂将配体l1溶解于烧瓶中，向其中加二卤(芳基)钌(ii)二聚体(优选为[(arene)rucl2]2、[(c6h6)rucl2]2、[(c6me6)rucl2]2)，常温搅拌4小时，待原料反应完全后，柱层析分离(洗脱剂为dcm∶meoh＝80∶1)，得到式i所示芳烃-钌配合物。有机溶剂优选为dcm或甲醇。
所述式i所示芳烃-钌配合物的制备方法还可以包括yc-2和/或配体l1的合成步骤；
yc-2的合成步骤包括：用dmf将yc-1和丁二酸酐溶于烧瓶中，加入tea，50℃下反应4小时。待反应液冷却后，旋蒸除去dmf，加入适量水和dcm萃取后，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，除去溶剂得yc-2。
配体l1的合成步骤包括：将yc-2和hatu用dmf溶解，加入tea，氮气保护下，常温搅拌1-2小时后，加入5-氨基-1，10-菲啰啉，升温至60℃，反应过夜。待反应冷却至室温后，旋干除去dmf，硅胶拌样，柱层析分离(洗脱剂为dcm∶meoh＝40∶1)，得到配体l1。
所述配体l1的合成步骤还可以包括yc-2合成步骤；
具体配合物1-3的合成方程式如下：
a)丁二酸酐，三乙胺，dmf，50℃，4h；b)5-氨基-1，10-菲啰啉，三乙胺，hatu，dmf，60℃，12h；c)[(arene)rucl2]2、[(c6h6)rucl2]2、[(c6me6)rucl2]2，dcm，rt，4h。
芳烃-钌配合物可用于制备抗肿瘤药物，所述肿瘤优选为结肠癌、肺癌或所述肿瘤优选为缺氧肿瘤，所述缺氧肿瘤更优选为缺氧结肠癌、缺氧肺癌。
本发明的优点及效果：本发明通过设计首次顺利将引入hif-1α抑制剂yc-1引入到钌配合物中；所设计的芳烃-钌配合物合成方法简单，产物稳定；本发明芳烃-钌配合物具有较好的抗肿瘤活性，尤其对于缺氧肿瘤具有更好的抑制效果，即对缺氧肿瘤具有特异性，特别是配合物3，缺氧下在hct116细胞和a549细胞中的ic50值分别是12.7±0.6和15.7±0.6，只有常氧条件下一半左右，更加值得注意的是，两个值都低于顺铂的19.9±1.3和20.9±1.3，表现出缺氧条件下优于顺铂的细胞毒性。
作为此类芳烃-钌配合物制备过程中的关键中间体l1，在本发明的化合物设计以及产生药效的过程中发挥着关键作用。
本发明涉及配体l1作为中间体在制备配合物1、2或3中的应用。
本发明涉及配体l1作为中间体在制备式i的芳烃-钌配合物中的应用。
具体实施方式
合成例1：yc-2的合成
用10ml的dmf将yc-1(0.8406g，2.763mmol)和丁二酸酐(0.5539g，5.535mmol)溶于50ml烧瓶中，加入tea(0.5600g，5.535mmol)，50℃下反应4小时。待反应液冷却后，旋蒸除去dmf，加入适量水和dcm萃取后，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，除去溶剂得到白色固体1.04g，产率93.3％。anal.calcd(％)forc23h20n2o5：c68.31，h4.98，n6.93.found：c68.20，h4.91，n6.79；1hnmr(600mhz，dmso-d6)：δ2.50-2.52(m，2h)，2.57-2.59(m，2h)，5.19(s，2h)，5.73(s，2h)，6.71-6.72(d，1h，j＝3.4hz)，7.02-7.03(d，1h，j＝3.4hz)，7.24-7.28(m，4h)，7.30-7.33(m，2h)，7.45-7.47(m，1h)，7.76-7.77(d，1h，j＝8.5hz)，8.10-8.12(d，1h，j＝8.2hz)，12.24(s，1h)ppm。
合成例2：配体l1的合成
将yc-2(0.5000g，1.236mmol)和hatu(0.5091g，1.339mmol)用7.5ml的dmf溶解，加入tea(0.1355g，1.339mmol)，氮气保护下，常温搅拌1-2小时后，加入5-氨基-1，10-菲啰啉(0.2010g，1.030mmol)，升温至60℃，反应过夜。待反应冷却至室温后，旋干除去dmf，硅胶拌样，柱层析分离(洗脱剂为dcm∶meoh＝40∶1)，得到浅黄色固体0.3235g，产率54％。anal.calcd(％)forc35h27n5o4：c72.28，h4.68，n12.04.found：c72.20，h4.81，n11.96；1hnmr(600mhz，dmso-d6)：δ2.77-2.79(m，2h)，2.88-2.90(m，2h)，5.24(s，2h)，5.70(s，2h)，6.74-6.75(d，1h，j＝3.4hz)，7.01-7.02(d，1h，j＝3.3hz)，7.18-7.26(m，4h)，7.29-7.31(m，2h)，7.39-7.42(m，1h)，7.72-7.74(d，1h，j＝8.2hz)，7.75-7.77(q，1h，j＝4.4hz)，7.84-7.86(q，1h，j＝4.4hz)，8.08-8.09(d，1h，j＝8.2hz)，8.18(s，1h)，8.45-8.47(1h，d-d，j＝8.1，1.4hz)，8.69-8.70(d，1h，j＝7.4hz)，9.01(m，1h)，9.03-9.04(1h，d-d，j＝4.3，1.6hz)，9.12-9.13(1h，d-d，j＝4.2，1.5hz)，10.27(m，1h)ppm。
实施例1：芳烃-钌配合物1-3的合成
用适量的dcm将l1(0.2000g，0.3441mmol)溶解于烧瓶中，向其中分别加[(arene)rucl2]2、[(c6h6)rucl2]2、[(c6me6)rucl2]2(0.3441mmol)，常温搅拌4小时。待原料反应完全后，硅胶拌样，柱层析分离(洗脱剂为dcm∶meoh＝80∶1)，分别得到芳烃-钌配合物1-3。
化合物1：黄绿色粉末，0.23g(61.3％)。anal.calcd(％)forc45h41cl2n5o4ru：c60.88，h4.65，n7.89.found：c60.73，h4.54，n7.96；esi-ms：m/z[m-cl]+＝852.2；1hnmr(600mhz，dmso-d6)：δ0.89-0.91(t，6h，j＝6.6hz)，2.18(s，3h)，2.62(m，1h)，2.75-2.77(m，2h)，2.97-2.99(m，2h)，5.22(s，2h)，5.70(s，2h)，6.15-6.17(m，2h)，6.39(m，2h)，6.73-6.74(d，1h，j＝3.1hz)，7.00-7.01(d，1h，j＝3.1hz)，7.18-7.32(m，5h)，7.38-7.41(m，1h)，7.72-7.74(d，1h，j＝8.5hz)，8.06(m，1h)，8.08-8.10(d，1h，j＝8.1hz)，8.18(s，1h)，8.47(s，1h)，8.79-8.80(d，1h，j＝8.0hz)，9.27-9.28(d，1h，j＝8.0hz)，9.89(m，1h)，10.02(m，1h)，11.12(m，1h)ppm；13cnmr(150mhz，dmso-d6)：δ18.69，22.12，22.14，29.17，30.86，31.23，52.44，58.31，84.23，84.39，86.42，86.57，103.23，104.48，108.41，110.75，113.28，120.73，121.50，122.14，126.05，126.45，126.85，127.37，127.73，128.05，129.08，130.12，133.95，135.48，135.65，137.76，138.50，140.77，143.18，145.87，149.06，149.59，155.35，156.60，172.02，172.61ppm。
化合物2：黄绿色粉末，0.21g(59.6％)。anal.calcd(％)forc41h33cl2n5o4ru：c59.21，h4.00，n8.42.found：c59.33，h4.04，n8.30；esi-ms：m/z[m-cl]+＝796.2；1hnmr(600mhz，dmso-d6)：δ2.82-2.84(m，2h)，3.04(m，2h)，5.28(s，2h)，5.76(s，2h)，6.40(s，6h)，6.79-6.80(d，1h，j＝3.1hz)，7.06-7.07(d，1h，j＝3.1hz)，7.22-7.25(d，1h，j＝7.5hz)，7.29-7.38(m，5h)，7.44-7.46(m，1h)，7.78-7.80(d，1h，j＝8.5hz)，8.11(m，1h)，8.13-8.15(d，1h，j＝8.2hz)，8.23(m，1h)，8.50(s，1h)，8.82-8.83(d，1h，j＝8.0hz)，9.30-9.31(d，1h，j＝8.2hz)，10.03(m，1h)，10.17(m，1h)，11.18(m，1h)ppm；13cnmr(150mhz，dmso-d6)：δ29.19，31.32，52.41，58.29，87.11，108.38.110.71，113.29，120.69，121.49，122.11，125.85，126.56，126.65，127.35，127.73，128.04，129.07，130.12，133.92，135.46，135.77，137.76，138.46，140.73，143.33，146.02，149.06，149.57，155.56，156.82，172.03，172.61ppm。
化合物3：黄绿色粉末，0.25g(65.2％)。anal.calcd(％)forc47h45cl2n5o4ru：c61.64，h4.95，n7.65.found：c61.58，h4.90，n7.73；esi-ms：m/z[m-cl]+＝880.3；1hnmr(600mhz，dmso-d6)：δ2.10(s，18h)，2.75-2.77(m，2h)，2.98-3.00(m，2h)，5.21(s，2h)，5.69(s，2h)，6.72-6.73(d，1h，j＝2.9hz)，7.00-7.01(d，1h，j＝2.9hz)，7.18-7.25(m，4h)，7.28-7.31(m，2h)，7.38-7.40(m，1h)，7.72-7.73(d，1h，j＝8.4hz)，8.08-8.09(m，2h)，8.16(m，1h)，8.45(s，1h)，8.73-8.75(d，1h，j＝7.8hz)，9.24-9.27(m，2h)，9.37-9.38(m，1h)，11.16(m，1h)ppm；13cnmr(150mhz，dmso-d6)：δ15.75，29.19，31.23，52.42，58.29，95.81，108.41.110.75，113.28，120.71，121.50，122.14，126.24，126.27，127.06，127.36，127.73，128.05，129.07，129.87，134.05，135.36，135.46，137.75，138.05，140.74，143.23，145.92，149.04，149.58，153.05，154.24，172.06，172.62ppm。
体外细胞毒试验：
本发明测试了配合物1-3和配体l1在常氧和缺氧条件下，对结肠癌细胞hct116和人非小细胞肺癌细胞a549的细胞毒性，同时顺铂作为阳性对照组。
试验结果如上表所示，在常氧条件下，配体l1表现出对两种细胞系微弱的细胞毒性，而配合物1-3的抑制活性比较明显，ic50值在22.8-76.3之间，其中配合物3的活性最好，接近于顺铂。
在缺氧条件下，配体l1的细胞毒性要略好于常氧情况，在两种细胞系的ic50值分别是53.7±4.5和63.8±2.3，这是由于yc-1本身对于hif-1α的抑制作用。顺铂在常氧和缺氧条件下的细胞毒性相似。配合物1-3在缺氧条件下的活性都比常氧下的高出许多，特别是配合物3，缺氧下在hct116细胞和a549细胞中的ic50值分别是12.7±0.6和15.7±0.6，只有常氧条件下一半左右，更加值得注意的是，两个值都低于顺铂的19.9±1.3和20.9±1.3，表现出缺氧条件下优于顺铂的细胞毒性。
总之，这些结果表明，三种配合物在常氧和缺氧条件下有着明显不同的细胞毒性，尤其是配合物3，表现出对缺氧癌细胞选择性的显著的抗增殖活性。