本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种烟草赤星病抗性相关的qtl及其定位方法与应用。
背景技术：
烟草赤星病由链格孢菌（alternariaalternate(fr.)keissl(a.tenuisnees))引起，是最具破坏性的烟草（nicotianatabacuml.）叶斑病害之一，在烟叶的的成熟期发生严重，对烟草的产量和质量影响较大。病害通常从烟株下部叶开始发生，随着叶片的成熟，自下而上蔓延。最初在叶片上出现黄褐色圆形小斑点，而后变成褐色，并逐步扩大，病斑圆形或不规则圆形，具同心轮纹，外围有淡黄色晕圈。严重时，病斑相互连接合并，致使病斑焦枯、破碎而失去价值（shewhd,lucasgb.compendiumoftobaccodisease[j].americanphytopathologicalsociety(aps),1990:10-12；朱贤朝,王彦亭,王智发.中国烟草病害[m],中国农业出版社,2002:64-75.）。
培育抗烟草赤星病的优良品种是预防该病最经济、有效的途径，相关研究表明烟草赤星病的抗性属于受微效多基因控制且极易受环境影响的数量性状，因此极大地增加了培育抗赤星病烟草品种的难度。分子标记辅助选择育种（mas）是利用与目的性状基因连锁的分子标记对目标性状基因型进行快捷、有效地选择，可以加快作物育种的进程。对数量性状（或微效多基因控制的复杂性状）进行mas的先决条件是利用分子标记对目的性状进行全基因组的qtl扫描定位。迄今，qtl定位研究在烟草上虽有较多的报道，但在烟草赤星病抗性基因qtl定位分析方面的报道较少（tongzj,etal.mappingofquantitativetraitlociconferringresistancetobrownspotinflue-curedtobacco(nicotianatabacuml.).plantbreed,2012,131:335–339;蒋彩虹等.一个与净叶黄抗赤星病基因紧密连锁的ssr标记.中国烟草科学,2012,33(1):9–22;蒋彩虹等.一个抗赤星病基因的ssr标记连锁群.分子植物育种,2013,11(4):566–569.）。究其原因是烟草栽培品种间的多态性水平极其低下，高质量的烟草遗传连锁图谱构建工作十分困难，因而已报道的基于不完整（低质量）的烟草遗传图谱进行的赤星病抗性基因qtl定位分析的结果，不能满足烟草抗赤星病的分子标记辅助育种需求。
技术实现要素：
本发明的第一目的在于提供一种烟草赤星病抗性相关的qtl；第二目的在于提供所述的烟草赤星病抗性相关的qtl的定位方法；第三目的在于提供所述的烟草赤星病抗性相关的qtl应用。
本发明的第一目的是这样实现的，所述的烟草赤星病抗性相关的qtl由2个组成，1个位于第20号连锁群上的ssr标记tms05179和tms04022之间，1个位于第23号连锁群上的ssr标记tm61049和tm62212之间，两者一起解释了两亲本间~81%的病情指数差异及~64%的加性效应。
本发明的第二目的是这样实现的，包括以下步骤：
a、以亲本红花大金元和beinhart1000-1杂交后获得其后代f1，第一年种植f1和亲本，自交并收获f2种子；第二年种植包含亲本、f1、f2各世代材料及抗、感对照品种，其中，抗感对照品种（净叶黄和speightg-140）、两亲本和f1各种植3个重复，每个重复15株，共计45株；此外，用于田间烟草赤星病抗性鉴定的362个f2株系（组培快繁获得）也于第二年种植，每个株系含有45个具有相同基因型的组培单株，即：每个株系种植3个重复，每个重复15个单株；
b、利用组织培养快繁技术，将362个f2单株进一步扩繁为362个f2株系；
c、将赤星病菌强毒株0-268接种于ca培养基上，在25~30℃条件下培养10~20天，待菌丝布满培养基表面时，于4℃进行保存；在田间叶片接近成熟期时，1.00%的灭菌葡萄糖溶液洗下菌苔，过滤获得分生孢子液，再用1.00%的葡萄糖、1.00%甘油、0.25%吐温80组成的水溶液配制104个/毫升的分生孢子悬浮液，利用新配置的烟草赤星病菌分生孢子悬浮液，对两亲本、362个f2株系和抗、感病对照品种（净叶黄和speightg-140）进行接病菌试验，并在对照品种病情指数（di）达到75时，按国家标准gb/t23222烟草病虫害分级及调查方法进行调查，将3个重复共计45株接种烟株的所有叶片进行分级调查，并计算出平均病情指数来替代原始f2单株的病情指数，调查分级和病情指数计算公式如下：
0级：全叶无病；
1级：病斑面积占全叶面积1%以下；
3级：病斑面积占全叶面积1-5%；
5级：病斑面积占全叶面积5-10%；
7级：病斑面积占全叶面积10-20%；
9级：病斑面积占全叶面积20%以上；
病情指数（di）=[(病级代表值×该级叶片数）/（调查总叶片数×最高级代表值）]×100；
d、亲本和362份f2单株的基因组dna提取和纯化，ssr-pcr扩增和pcr扩增产物电泳检测；
e、利用两亲本和f1三份材料对参试的ssr标记进行多态标记筛选，选取呈共显性多态的ssr标记进行f2群体基因型分析；其次，将获得的f2群体基因型数据经过偏分离分析，并将分离比符合1:2:1的标记用于遗传连锁图谱的构建；最后，利用作图软件joinmap®v4.0分析符合1:2:1分离比例的标记间的遗传连锁关系，并利用软件mapchartv2.22绘制遗传图谱；
f、基于构建获得的遗传图谱并结合田间赤星病病情指数（di），利用mapqtl®v6软件提供的restrictedmultiple-qtlmodelmapping(rmqm)方法进行全基因组qtl扫描定位，相关的参数设置如下：algorithm=regression，teststatistic=lod，fitdominanceforf2=yes，mappingstepsize=1.0，maximumnumberofneighboringmarkers=30，maximumnumberofiterations=10000，numberofpermutations=10000。
本发明的第三目的是这样实现的，所述的烟草赤星病抗性相关的qtl在烟草抗赤星病的分子标记辅助育种中的应用。
本发明利用抗、感烟草赤星病品种beinhart1000-1和红花大金元衍生的f2作图群体构建一张高质量雪茄烟遗传连锁图谱，并结合组培快繁形成的f2株系的田间赤星病病情指数进行全基因组qtl定位分析，检测获得与烟草赤星病抗性相关的qtls，为开展烟草抗赤星病的分子标记辅助育种工作奠定基础。
附图说明
图1为本发明烟草赤星病病情指数在f2群体中的分布频率示意图；
图2和图3为本发明基于362个f2单株（红花大金元/beinhart1000-1）的雪茄烟遗传连锁图谱的构建。图中每条连锁群的左右两侧分别为遗传距离（厘摩尔）和标记名称；
图4为烟草赤星病qtl定位分析的结果；
其中，位于第20号连锁群（lg20）上与qtbs20紧密连锁的两侧标记为tms05179和tms04022；位于第23号连锁群（lg23）上与qtbs23紧密连锁的两侧标记为tm61049和tm62212。
具体实施方式
下面结合实施例和附图对本发明作进一步的说明，但不以任何方式对本发明加以限制，基于本发明教导所作的任何变换或替换，均属于本发明的保护范围。
本发明所述的烟草赤星病抗性相关的qtl由2个组成，1个位于第20号连锁群上的ssr标记tms05179和tms04022之间，1个位于第23号连锁群上的ssr标记tm61049和tm62212之间，两者一起解释了两亲本间~81%的病情指数差异及~64%的加性效应。
所述位于第20号连锁群上的ssr标记tms05179的引物为：
tms05179f：tggcttacctagcgggttg
tms05179r：aaggagcctacccaccattt
产物序列：
感病亲本/材料-红大中扩增产物（长度212bp，基序（motif）为ttc）：
tggcttacctagcgggttgcaaattgtcactcctaaatatgatgtagacaatatattttaatgactgttttcaccgctcttcttcttcttcttcttcttcttcttcttcatcaatcaataccgtagtactccattaaatatccgatttcctaaacgaaatgaatgctacaacgaataccggtacgtagcttgaaatggtgggtaggctcctt
抗病亲本/材料-beinhart1000-1中扩增产物（长度221bp，基序（motif）为ttc）：
tggcttacctagcgggttgcaaattgtcactcctaaatatgatgtagacaatatattttaatgactgttttcaccgctcttcttcttcttcttcttcttcttcttcttcttcttcttcatcaatcaataccgtagtactccattaaatatccgatttcctaaacgaaatgaatgctacaacgaataccggtacgtagcttgaaatggtgggtaggctcctt
所述位于第20号连锁群上的ssr标记tms04022的引物为：
tms04022f：tatggcaatcatcccatgaa
tms04022r：ttggaggcctaagggtaaaaa
产物序列：
感病亲本/材料-红大中扩增产物（长度243bp，基序（motif）为aag）：
tatggcaatcatcccatgaaatgttgttgaggattgcaccggacattggtacagcgaattggagctcgtacatggctggaatattaggagctaagatggaaacaacgtcaagaagaagaagaagaagaagaagaagaagaagaagaagaagaagaagaagaagaagaagaagatgctaattttaagcaacgagtataagtctcagaccatgtgtaacttatatttttacccttaggcctccaa
抗病亲本/材料-beinhart1000-1中扩增产物（长度231bp，基序（motif）为aag）：
tatggcaatcatcccatgaaatgttgttgaggattgcaccggacattggtacagcgaattggagctcgtacatggctggaatattaggagctaagatggaaacaacgtcaagaagaagaagaagaagaagaagaagaagaagaagaagaagaagaagaagatgctaattttaagcaacgagtataagtctcagaccatgtgtaacttatatttttacccttaggcctccaa
所述位于第23号连锁群上的的ssr标记tm61049的引物为：
tm61049f：ttgtgcatagaaatgtggaacc
tm61049r：tgcgaagaagttctaagggaat
产物序列：
感病亲本/材料-红大中扩增产物（长度201bp，基序（motif）为at）：
ttgtgcatagaaatgtggaaccccttttcaataatgaccaaaatcccttttgagctgcaattatgatatatatatatatatatatatatatatataggcaaagaagggcaagacgaagtgaaaaaatatttgaaagaccttccggatttattaaacattcagcctcggggggatattatattcccttagaacttcttcgca
抗病亲本/材料-beinhart1000-1中扩增产物（长度211bp，基序（motif）为at）：
ttgtgcatagaaatgtggaaccccttttcaataatgaccaaaatcccttttgagctgcaattatgatatatatatatatatatatatatatatatatatatatataggcaaagaagggcaagacgaagtgaaaaaatatttgaaagaccttccggatttattaaacattcagcctcggggggatattatattcccttagaacttcttcgca
所述位于第23号连锁群上的ssr标记tm62212的引物为：
tm62212f：caatccgttcaccaaccatt
tm62212r：tccgatccctgttttctctc。
产物序列：
感病亲本/材料-红大中扩增产物（长度202bp，基序（motif）为ac）：
caatccgttcaccaaccatttcgacctcgatatcaaaaagtccacttccggtcaaacttctcaaaaaccttcaaatttctatctttagccaaacgattacacacacacacacacacacacacacacacacacacacacccaaaatgacccacggatctccgaatttacttccgatcgcgctcgagagaaaacagggatcgga
抗病亲本/材料-beinhart1000-1中扩增产物（长度196bp，基序（motif）为ac）：
caatccgttcaccaaccatttcgacctcgatatcaaaaagtccacttccggtcaaacttctcaaaaaccttcaaatttctatctttagccaaacgattacacacacacacacacacacacacacacacacacccaaaatgacccacggatctccgaatttacttccgatcgcgctcgagagaaaacagggatcgga
本发明所述的烟草赤星病抗性相关的qtl的定位方法，包括以下步骤：
a、以亲本红花大金元和beinhart1000-1杂交后获得其后代f1，第一年种植f1和亲本，自交并收获f2种子；第二年种植包含亲本、f1、f2各世代材料及抗、感对照品种，其中，抗感对照品种（净叶黄和speightg-140）、两亲本和f1各种植3个重复，每个重复15株，共计45株；此外，用于田间烟草赤星病抗性鉴定的362个f2株系（组培快繁获得）也于第二年种植，每个株系含有45个具有相同基因型的组培单株，即：每个株系种植3个重复，每个重复15个单株；
b、利用组织培养快繁技术，将362个f2单株进一步扩繁为362个f2株系；
c、将赤星病菌强毒株0-268接种于ca培养基上，在25~30℃条件下培养10~20天，待菌丝布满培养基表面时，于4℃进行保存；在田间叶片接近成熟期时，1.00%的灭菌葡萄糖溶液洗下菌苔，过滤获得分生孢子液，再用1.00%的葡萄糖、1.00%甘油、0.25%吐温80组成的水溶液配制104个/毫升的分生孢子悬浮液，利用新配置的烟草赤星病菌分生孢子悬浮液，对两亲本、362个f2株系和抗、感病对照品种（净叶黄和speightg-140）进行接病菌试验，并在对照品种病情指数（di）达到75时，按国家标准gb/t23222烟草病虫害分级及调查方法进行调查，将3个重复共计45株接种烟株的所有叶片进行分级调查，并计算出平均病情指数来替代原始f2单株的病情指数，调查分级和病情指数计算公式如下：
0级：全叶无病；
1级：病斑面积占全叶面积1%以下；
3级：病斑面积占全叶面积1-5%；
5级：病斑面积占全叶面积5-10%；
7级：病斑面积占全叶面积10-20%；
9级：病斑面积占全叶面积20%以上；
病情指数（di）=[(病级代表值×该级叶片数）/（调查总叶片数×最高级代表值）]×100；
d、亲本和362份f2单株的基因组dna提取和纯化，ssr-pcr扩增和pcr扩增产物电泳检测；
e、利用两亲本和f1三份材料对参试的ssr标记进行多态标记筛选，选取呈共显性多态的ssr标记进行f2群体基因型分析；其次，将获得的f2群体基因型数据经过偏分离分析，并将分离比符合1:2:1的标记用于遗传连锁图谱的构建；最后，利用作图软件joinmap®v4.0分析符合1:2:1分离比例的标记间的遗传连锁关系，并利用软件mapchartv2.22绘制遗传图谱；
f、基于构建获得的遗传图谱并结合田间赤星病病情指数（di），利用mapqtl®v6软件提供的restrictedmultiple-qtlmodelmapping(rmqm)方法进行全基因组qtl扫描定位，相关的参数设置如下：algorithm=regression，teststatistic=lod，fitdominanceforf2=yes，mappingstepsize=1.0，maximumnumberofneighboringmarkers=30，maximumnumberofiterations=10000，numberofpermutations=10000。
本发明所述的烟草赤星病抗性相关的qtl的应用为所述的烟草赤星病抗性相关的qtl在烟草抗赤星病的分子标记辅助育种中的应用。
下面以具体实施案例对本发明做进一步说明：
1、材料与方法
1.1植物材料
本研究用于遗传图谱构建的群体是由红花大金元和beinhart1000-1衍生的362个f2单株构成，其中，红花大金元是具有优良品质但极易感烟草赤星病的烤烟品种，而beinhart1000-1则是由美国引进的具有烟草赤星病抗性的优良雪茄烟品种。2015年种植亲本红花大金元和beinhart1000-1，杂交后获得其后代f1；2016年种植f1和亲本，自交并收获f2种子；2017年种植包含亲本、f1、f2各世代材料及抗、感对照品种，其中，抗感对照品种（净叶黄和speightg-140）、两亲本和f1各种植3个重复，每个重复15株，共计45株；此外，用于田间烟草赤星病抗性鉴定的362个f2株系（组培快繁获得）也于2017年种植，每个株系含有45个具有相同基因型的组培单株，即：每个株系种植3个重复，每个重复15个单株。以上试验材料均种植于云南省玉溪市研和实验基地，株行距为0.50m×1.00m，且按当地优质烟生产技术措施进行栽培管理。
1.2组培快繁
利用组织培养快繁技术，将362个f2单株进一步扩繁为362个f2株系，其具体方法如下：
1）外植体的处理：取~5cm长的幼嫩叶片为外植体，在超净台上用70%乙醇灭菌10~15s，无菌水漂洗3次后，以0.1%升汞浸泡灭菌7min，无菌水冲洗3次；用无菌滤纸吸去表面水珠，去除主脉和叶片的边缘，将其切成10mm×15mm左右的小块备用。
2）培养基的配置：诱芽培养基为ms+kt5.0mg/l+naa0.2mg/l，诱根培养基为1/2ms（ms基本培养基大量元素减半），培养基ph调至5.8，在121~126℃恒温下灭菌后备用。
3）室内培养条件：培养温度为25℃，每日光照14h，培养架隔板中心光照度为3600lx。
4）再生植株诱导：无菌条件下，将无菌处理的外植体转接到诱芽培养基中进行丛生芽诱导，将培养获得的丛生芽转接到诱根培养基中，诱导生很。获得的再生植株，移入育苗盘中一周后，即可成活。
1.3接菌与抗性调查
将赤星病菌强毒株0-268（由云南省烟草农业科学研究院提供）接种于ca培养基上，在28℃条件下培养15天，待菌丝布满培养基表面时，保存在4℃的冰箱中备用。在田间叶片接近成熟期时，1.00%的灭菌葡萄糖溶液洗下菌苔，过滤获得分生孢子液，再用1.00%的葡萄糖、1.00%甘油、0.25%吐温80组成的水溶液配制104个/毫升的分生孢子悬浮液。利用新配置的烟草赤星病菌分生孢子悬浮液，对两亲本、362个f2株系和抗、感病对照品种（净叶黄和speightg-140）进行接病菌试验，并在对照品种病情指数（di）达到75时，按国家标准gb/t23222烟草病虫害分级及调查方法进行调查。将3个重复共计45株接种烟株的所有叶片进行分级调查，并计算出平均病情指数来替代原始f2单株的病情指数。调查分级和病情指数计算公式如下：
0级：全叶无病。
1级：病斑面积占全叶面积1%以下。
3级：病斑面积占全叶面积1-5%。
5级：病斑面积占全叶面积5-10%。
7级：病斑面积占全叶面积10-20%。
9级：病斑面积占全叶面积20%以上。
病情指数（di）=[(病级代表值×该级叶片数）/（调查总叶片数×最高级代表值）]×100
1.4ssr标记分析
亲本和362份f2单株的基因组dna提取和纯化是按照tong等（tongzj,yangzm,etal.large-scaledevelopmentofmicrosatellitemarkersinnicotianatabacumandconstructionofageneticmapofflue-curedtobacco.plantbreed,2012,131:674–680.）方法进行。ssr-pcr扩增体系和程序分别参照bindler等（bindler,g,etal.ahighdensitygeneticmapoftobacco(nicotianatabacuml.)obtainedfromlargescalemicrosatellitemarkerdevelopment.theorapplgenet,2011,123:219–230.）和tong等（tongzj,etal.large-scaledevelopmentofssrmarkersintobaccoandconstructionofalinkagemapinflue-curedtobacco.breedingscience,2016,66:381-390.）。pcr扩增产物的6%非变性聚丙烯酰胺凝胶（non-denaturingpage）电泳检测则参照许绍斌等（许绍斌等.简单快速的dna银染和胶保存方法.遗传,2002,24(3):335–336）的方法进行。
1.5遗传图谱构建
首先，利用两亲本和f1三份材料对参试的ssr标记进行多态标记筛选，选取呈共显性多态的ssr标记进行f2群体基因型分析。其次，将获得的f2群体基因型数据经过偏分离分析（卡方检测），并将分离比符合1:2:1的标记用于遗传连锁图谱的构建。最后，利用作图软件joinmap®v4.0分析符合1:2:1分离比例的标记间的遗传连锁关系，并利用软件mapchartv2.22绘制遗传图谱。以上软件相关参数的设置参照tong等（tongzj,etal.large-scaledevelopmentofssrmarkersintobaccoandconstructionofalinkagemapinflue-curedtobacco.breedingscience,2016,66:381-390.）进行。
1.6qtl定位分析
基于构建获得的遗传图谱并结合田间赤星病病情指数（di），利用mapqtl®v6软件提供的restrictedmultiple-qtlmodelmapping(rmqm)方法进行全基因组qtl扫描定位，相关的参数设置如下：algorithm=regression，teststatistic=lod，fitdominanceforf2=yes，mappingstepsize=1.0，maximumnumberofneighboringmarkers=30，maximumnumberofiterations=10000，numberofpermutations=10000。qtls的命名按照mccouch等（mccouchsr,etal.reportonqtlnomenclature.ricegenetnewsl,1997,14:11–13.）进行，即：前缀q+性状名称缩写+lg数目。
2、结果与分析
2.1赤星病抗性鉴定结果
由田间赤星病抗性鉴定结果可知，两亲本间的赤星病抗性差异较大，beinhart1000-1和红花大金元的平均病情指数（di）分别为7.39（变异范围：2.03-13.96）和91.28（78.85-98.38）。根据前文对病级的定义，可知赤星病的病情指数应在0-100间进行变化，因此，beinhart1000-1和红花大金元在赤星病抗性上分别表现出两个极端，即分别表现为高抗和高感烟草赤星病。
赤星病的病情指数在由组培快繁获得的f2群体中呈连续性分布（变异范围：2.31-98.13），即呈典型的正态分布且几乎所有的数据均落在两亲本内（图1）。这一结果刚好与已报道的研究结果相符，即烟草赤星病的抗性是典型的数量性状。同时也表明，在f2群体中不存在赤星病抗性的超亲分离现象，这意味着感病（高值病情指数）和抗病（低值病情指数）的等位基因在两亲本间是完全连锁在一起的，即所有高值病情指数的亲本具有易感病的等位基因，而所有低值病情指数的亲本具有抗病等位基因。
2.2遗传连锁图谱构建
利用两亲本和f1三份材料，对共计38437对ssr引物（tm、tmt、tms和pt系列引物分别为11302、12016、10000和5119对）进行多态性分析，其中，仅筛选出677对（tm、tmt、tms和pt系列多态性引物分别为138、187、172和180对）在两亲本间有多态且在f1上呈共显性的ssr引物，多态率低至~1.76%（677/38437）。利用筛选出的稳定且呈共显性多态的ssr引物在362个f2单株中所获得的基因型数据进行连锁分析，最终获得了一张含有670个ssr标记、较均匀分布于24个连锁群、覆盖烟草基因组总长度为2878.732cm、相邻标记间的平均距离为4.297cm的高质量雪茄烟遗传连锁图谱（表1，图2）。每条连锁群所包含的ssr标记数目在13（lg05）-43（lg02）个之间，各染色体的长度范围是43.122cm（lg19）-186.598cm（lg22），各染色体相邻标记间平均间隔的变化在2.398cm-6.794cm之间（表1，图2）。此外，受益于共有的180个pt系列标记，我们将本研究构建的图谱上连锁群的顺序和编号与bindler等公布的图谱上相应的连锁群保持一致（表1，图2）。
表1基于ssr标记的雪茄烟遗传连锁图谱的统计信息
表注：括号外数字表示该连锁群上的pt系列标记总数；括号内的数字表示位于bindler等布的连锁群上的pt系列标记数。
2.3qtl定位分析
共有2个与烟草赤星病抗性基因相关的qtls在本研究中被检测到，其分别位于第20（lg20）和23（lg23）号连锁群上（表2）。其中，qtbs20是2个qtls中具有最大效应值的一个，其解释了~18.31%的表型变异。2个qtls均具有显著的加性效应，但仅有qtbs23表现出显著的显性效应，这表明，感病基因（具有较高的di值）相对于抗病基因（具有较低的di值）呈现出完全显性（表2）。此外，2个抗病的等位基因全部源自抗病亲本–beinhart1000-1（表2）。这一结果也刚好与赤星病病情指数在两亲本和f2群体中的分布是相吻合的，即抗病等位基因与感病等位基因分别与抗、感病亲本完全连锁。
表2烟草赤星病抗性qtls定位分析结果
表注：a负的加性效应值表示源自抗病亲本beinhart1000-1的等位基因（位点）降低了烟草赤星病的病情指数，b表示qtl位点解释的表型变异比率。
本发明通过对2个qtls两侧的标记进行检测，在362个f2单株中分别有5和3株与红花大金元和beinhart1000-1一致的基因型单株，其平均di值分别为85.93（变异范围：78.38-91.57）和17.96（变异范围：9.49-26.17）。所以，这两组的di值差异为85.93–17.96=67.97（占两亲本间di值差异的~81%），解释了~23%的加性效应值（2个qtls共同解释了~64%）。这说明，在2个qtls的加性效应中存在着两两间的互作效应（上位性效应），这也正是解释两亲本间剩余~19%（1-81%）的di值。
本发明的结论如下：
1）以抗、感烟草赤星病品种beinhart1000-1和红花大金元衍生的362个f2单株构建了一张含有670个ssr标记、分布于24个连锁群、覆盖基因组总长度为2878.732cm的高质量雪茄烟遗传连锁图谱；
2）利用组培快繁技术将f2单株扩繁为含有362个f2株系，且每个株系含有45个具有相同基因型的组培植株，并获得各f2株系的田间赤星病病情指数（di）；
3）基于已构建的遗传图谱并结合田间赤星病病情指数进行全基因组qtl定位分析，检测到2个与烟草赤星病抗性相关的qtls。此2个qtls一起解释了两亲本间~81%的病情指数差异及~64%的加性效应，为开展烟草抗赤星病的分子标记辅助育种工作奠定了基础。
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<110>云南省烟草农业科学研究院
<120>一种烟草赤星病抗性相关的qtl及其定位方法与应用
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