本发明属于生物
技术领域：
，具体涉及一种膀胱癌znf154、pou4f2、eomes基因的引物及检测试剂盒。
背景技术：
：膀胱癌是指膀胱内细胞的恶性过度生长。最常见的过度生长位于膀胱腔内，也就是膀胱的粘膜上皮。人体内，空腔脏器的表面通常由上皮细胞构成。例如你的脸颊内侧，胃，肠子，胆囊，也包括膀胱均是由一层上皮细胞组成的。每个脏器都有它自己的一类上皮细胞。膀胱的粘膜上皮细胞称作尿路上皮细胞，由它生成的癌就称作尿路上皮癌，占到了所有膀胱癌的90％-95％，是最常见的一类膀胱癌。甲基化特异性荧光定量pcr(quantitativemethylation-specificpolymerasepolymerasechainreaction，qmsp)的技术首先由herman等于1996年描述。它利用dna经亚硫酸氢钠处理后，甲基化和非甲基化dna单链序列的差异来设计不同的pcr引物。msp是目前最敏感的技术，能发现0.1％的甲基化dna(～50pg)。相比现有的在临床上使用的生物标记物，甲基化生物标记物具有高灵敏高特异性的特点。cn201410310846.5申请了一种早期膀胱癌的多靶标检测方法，包括下述步骤：(1)提取患者尿液中所含的dna；(2)对步骤(1)获得的dna进行亚硫酸氢盐转化处理；(3)通过甲基化特异性荧光定量pcr对eomes、gdf15、nid2、pcdh17、pou4f2、tcf21、znf154这七个标志物基因进行检测，以alu-c4作为内参基因；(4)以步骤(3)中的ct值来判定患者是否为早期膀胱癌。该发明具有以下优点：采用多个生物标志物基因联合检测，在每个标志物的特异性都比较高的前提下，使用多个标志物联用的方式来提高检测的敏感性和特异性；根据多个生物标志物基因设计了特异性引物。技术实现要素：本发明目的在于提供一种膀胱癌znf154、pou4f2、eomes基因的引物及检测试剂盒，用于膀胱癌的快速、准确诊断。为实现上述目的，本发明提供一种膀胱癌znf154、pou4f2、eomes基因的引物，上述基因的引物为：znf154：pcr扩增上游引物：aggtgtgtttataggattagagatagtag；pcr扩增下游引物：aaaacaaccatccctatcccaaacct；eomes：pcr扩增上游引物：gttaggttggggaagtagag；pcr扩增下游引物：ccaccatcttcaattaaacctaacacc；pou4f2：pcr扩增上游引物：gggttagtaggggttggagttgg；pcr扩增下游引物：aaaaaaacaaaaaaaactcaaacctaaaa。为实现上述目的，本发明还提供一种膀胱癌检测试剂盒，所述试剂盒包括一对fam19a4、mir124-2基因的引物、ntp混合液、荧光染料、mgcl2、tqqdna聚合酶；其中基因的引物为：znf154：pcr扩增上游引物：aggtgtgtttataggattagagatagtag；pcr扩增下游引物：aaaacaaccatccctatcccaaacct；eomes：pcr扩增上游引物：gttaggttggggaagtagag；pcr扩增下游引物：ccaccatcttcaattaaacctaacacc；pou4f2：pcr扩增上游引物：gggttagtaggggttggagttgg；pcr扩增下游引物：aaaaaaacaaaaaaaactcaaacctaaaa。相比现有技术，本发明一种膀胱癌znf154、pou4f2、eomes基因的引物及检测试剂盒的有效效果在于：通过上述基因引物及试剂盒能够快速的检测膀胱癌具有的基因。具体实施方式下面结合具体实施方式进一步阐述本发明的技术方案。以下实施例旨在说明本发明而不是对本发明的进一步限定。本发明提供一种膀胱癌znf154、pou4f2、eomes基因的引物，上述基因引物具有：znf154：pcr扩增上游引物:aggtgtgtttataggattagagatagtag；pcr扩增下游引物:aaaacaaccatccctatcccaaacct；eomes：pcr扩增上游引物:gttaggttggggaagtagag；pcr扩增下游引物:ccaccatcttcaattaaacctaacacc；pou4f2：pcr扩增上游引物:gggttagtaggggttggagttgg；pcr扩增下游引物:aaaaaaacaaaaaaaactcaaacctaaaa。本发明还提供一种膀胱癌znf154、pou4f2、eomes基因检测试剂盒，试剂盒具有上述基因引物具有：znf154：pcr扩增上游引物:aggtgtgtttataggattagagatagtag；pcr扩增下游引物:aaaacaaccatccctatcccaaacct；eomes：pcr扩增上游引物:gttaggttggggaagtagag；pcr扩增下游引物:ccaccatcttcaattaaacctaacacc；pou4f2：pcr扩增上游引物:gggttagtaggggttggagttgg；pcr扩增下游引物:aaaaaaacaaaaaaaactcaaacctaaaa；dntp混合液，lcgreenplus染料，qqdna聚合酶。具体实施方案：一、样本来源：对30个膀胱癌患者尿路炎症尿液dna样本进行了检测。二、dna的提取及检测：提取dna模板：针对膀胱癌患者进行检测，取得尿液样本后按照体积比尿液:保存液＝4:1加入尿液保存液，混匀后迅速冻存在-20度或-80度。需提取时，温浴至尿液澄清，用低温离心机4℃，800g离心15min后，去上清，留沉淀进行提取。2：配制如下反应体系提供基因检测试剂盒，试剂盒具有上述基因引物具有：znf154：pcr扩增上游引物:aggtgtgtttataggattagagatagtagpcr扩增下游引物:aaaacaaccatccctatcccaaaccteomes：pcr扩增上游引物:gttaggttggggaagtagagpcr扩增下游引物:ccaccatcttcaattaaacctaacaccpou4f2：pcr扩增上游引物:gggttagtaggggttggagttggpcr扩增下游引物:aaaaaaacaaaaaaaactcaaacctaaaa成分(浓度)加入的体积10×pcrbuffer3.0μl10μmdntp混合液0.5μl10μmlcgreenplus染料1.0μl10μm引物1.0μl5μmtqqdna聚合酶0.2μl10μm模板1.0μlddh2o补足至pcr反应体系20μldntp混合液包括10mmdatp、10mmdctp、10mmdttp、10mmdgtp的混合液。3.pcr-hrm反应条件：4.检测结果分别对30例检测结果分析，确认确认30例检测出数值均符合膀胱癌基因携带的条件，满足膀胱癌的快速、准确诊断需求，可见本发明的检测试剂盒对膀胱癌患者有着很好的参考意义，其检测准确性高。上述实例只为说明本发明的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此项技术的人是能够了解本发明的内容并据以实施，并不能以此限制本发明的保护范围。凡根据本发明精神实质所做的等效变换或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围之内。序列表<110>苏州海苗生物科技有限公司<120>一种膀胱癌znf154、pou4f2、eomes基因的引物及检测试剂盒<160>6<170>siposequencelisting1.0<210>1<211>29<212>dna<213>(人工序列)<400>1aggtgtgtttataggattagagatagtag29<210>2<211>26<212>dna<213>(人工序列)<400>2aaaacaaccatccctatcccaaacct26<210>3<211>20<212>dna<213>(人工序列)<400>3gttaggttggggaagtagag20<210>4<211>27<212>dna<213>(人工序列)<400>4ccaccatcttcaattaaacctaacacc27<210>5<211>22<212>dna<213>(人工序列)<400>5gggttataggggttggagttgg22<210>6<211>29<212>dna<213>(人工序列)<400>6aaaaaaacaaaaaaaactcaaacctaaaa29当前第1页12