一类可抑制PIM1激酶活性的4－（2H－苯并吡喃－3－基）－2－乙烯基噻唑类化合物及其应用的制作方法

本发明属于医药技术领域，涉及一类可抑制pim1激酶活性的4-(2h-苯并吡喃-3-基)-2-乙烯基噻唑类化合物及其应用。

背景技术：

pim1是一种癌基因，最早被发现为莫洛尼小鼠白血病病毒的前病毒插入点，在调控细胞凋亡、分化、增殖以及肿瘤形成等方面发挥非常重要的作用。pim1蛋白激酶具有丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶活性，引起许多细胞因子信号转导通路的下游效应子的启动。pim1激酶可以下调丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶2a(proteinphosphatase2a，pp2a)水平，促进癌基因c-myc的表达，导致肿瘤的发生。pim1激酶还可以提高细胞周期素b1(cyclinb1)、cyclinb1-cdk1复合物的活性，延迟胞质分裂来加速产生多倍体，并在细胞周期中直接结合磷酸化磷酸酶cdc25a。目前已证实pim1与白血病、淋巴瘤、肺癌、乳腺癌、前列腺癌等多种肿瘤的发生密切相关，在肿瘤的诊断、治疗、预后评价等方面具有重要的作用。pim1已成为抗肿瘤治疗的重要靶点。目前，国外已有pim1抑制剂进入临床试验，但尚未有选择性抑制pim1激酶活性的分子靶向药物面世。

技术实现要素：

本发明的目的是针对上述技术问题提供了一类可抑制pim1激酶活性的4-(2h-苯并吡喃-3-基)-2-乙烯基噻唑类化合物。

本发明另一个目的是提供上述化合物在制药中的应用。

本发明通过建立pim1高通量抑制剂筛选模型，在体外酶学水平上寻找先导化合物(化合物样品均购自lifechemical公司筛选化合物库)，发现了一类结构新颖的pim1激酶抑制剂，都是基于4-(2h-苯并吡喃-3-基)-2-乙烯基噻唑类的母核结构。本发明可以为靶向pim1的抗肿瘤治疗提供结构新颖的先导化合物，为新型抗肿瘤分子靶向药物的研发提供依据。

本发明的目的是通过下列技术方案实现的：

一类可抑制pim1激酶活性的4-(2h-苯并吡喃-3-基)-2-乙烯基噻唑类化合物，其结构如通式(i)所示：

其中：

r1代表c3-c7的环烷基、苯基或取代苯基，所述取代基为烷基、链烯基、烷氧基、亚甲二氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、卤素、硝基、羟基、羟烷基、巯基、氰基、羧基、甲酰基、氨基、烷氨基或二烷基氨基；

r2代表c1-c10的烷基、羟基、羟烷基、卤素、卤代烷基、氰基。

所述的化合物在制备靶向抗肿瘤药中的应用，所述的靶向抗肿瘤药为pim1激酶抑制剂。

具体地说，本发明建立了pim1激酶抑制剂筛选模型；通过初筛与复筛，发现一类可抑制pim1激酶活性活的化合物。步骤如下：

步骤一：建立pim1激酶抑制剂高通量筛选模型；

步骤二：阳性药测试；

步骤三：样品初筛、复筛，获得先导化合物。

附图说明

图1：pim1激酶筛选模型中，pim1激酶浓度的优化(n＝3)；

图2：pim1激酶筛选模型中，pim1激酶反应时间的优化(n＝3)；

图3：pim1激酶筛选模型中，pim1激酶底物浓度的优化(n＝3)；

图4：pim1激酶筛选模型中，atp浓度的优化(n＝3)；

图5：pim1激酶筛选模型中，阳性对照staurosporine(sts)的抑制曲线(n＝3)；

图6：先导化合物活性列表

具体实施方式

以下结合附图对本发明作进一步的阐述。

1.检测方法

均相时间分辨荧光(htrf)方法分为两个步骤：一是酶促反应，即当加入atp后启动反应，激酶使底物发生磷酸化反应，将磷酸根连接在有生物素标记的底物上；二是终止及检测过程，在这个过程中edta终止了反应的进行，有铕元素标记抗磷酸化酪氨酸抗体靠近底物的磷酸根上，标记xl665的异藻蓝蛋白结合在底物的生物素标记上，两个荧光基团在互相靠近的过程中发生能量共振转移并在665nm处产生荧光，游离的tkantibody(标记铕离子)在620nm处发生荧光，此信号可作为背景信号，而游离的sa-xl665只产生短暂的荧光，通过延后检测时间(加入终止剂后1小时再进行检测)可将其忽略。最终仪器给出的信号值由下列公式进行计算：

ratio＝(665nm/620nm)×10⁴

2.模型建立与筛选

(1)以细胞培养基配制化合物溶液。在384孔板中每孔加入pim1激酶溶液2μl，底物溶液2μl，缓冲液或待筛化合物4μl，atp2μl(n＝2)。室温反应1小时。(试剂盒kinease^tm，cat.no62tk0pej，厂家cisbiobioassays)

(2)每孔加入tk-ab5μl，sa-xl6655μl，室温孵育1小时。

(3)利用beckmancoulter检测平台htrf模块进行检测。

(4)筛选模型的优化见图1～图4。

(5)阳性药结果见图5。

(6)先导化合物活性见图6。

3.实验结果

筛选得到的该类化合物结构通式与ic50值如下：

技术特征：

技术总结
本发明属于医药技术领域，公开了一类可抑制PIM1激酶活性的4‑(2H‑苯并吡喃‑3‑基)‑2‑乙烯基噻唑类化合物及其应用。该类化合物结构如通式(I)所示，其中R1代表C4‑C7的环烷基、苯基或取代苯基，R2代表C1‑C10的烷基、羟基、羟烷基、卤素、卤代烷基、氰基。该化合物可用于制备PIM1激酶抑制剂，为制备靶向抗肿瘤药提供了更多选择。

技术研发人员：俞军;杨翊柠;林森森;吴晓柳;朱明;张元颖;李金田;张晓梅
受保护的技术使用者：江苏省肿瘤医院
技术研发日：2018.05.24
技术公布日：2018.11.09