本发明涉及一种n(π)-甲基-l-组氨酸衍生物的制备方法，本发明还提供了一种由n(π)-甲基-l-组氨酸衍生物制备鲸肌肽的方法。
背景技术
鲸肌肽是天然存在于脊椎动物体内的一类组氨酸二肽。随着研究的深入，鲸肌肽的许多生物活性已被证实，如生理ph缓冲作用、抗氧化、抗衰老等功能。相对于肌肽，鲸肌肽对抗肌肽水解酶的能力更强，同等条件下水解速率仅为肌肽的五分之一。因此可以延长其在组织器官中的半衰期，减少服用量和服用次数，具有良好的应用前景。鲸肌肽在肌肉中含量很低，且目前尚无工业化合成方法。随着研究的深入，鲸肌肽在食品、医药领域的需求量越来越大，因此开发鲸肌肽工业化制备方法显得特别迫切。
有关鲸肌肽的制备方法已有研究报道。1965年，dennis等报道了从n(π)-甲基-l-组氨酸甲酯与丙氨酸衍生物制备鲸肌肽。其所需的n(π)-甲基-l-组氨酸甲酯由水解鲸肌肽衍生而来，没有工业化价值。
2016年toshiyukikan等在synlett2016,27,2734–2736上报道了如下路线：
上述路线中原辅料价格昂贵，光学纯度较低，且路线中用到柱层析无法工业化。因此，急需提供一条原辅料廉价易得、操作简便、适于工业化生产的制备鲸肌肽的合成路线。
技术实现要素：
本发明的一个目的是提供一种n(π)-甲基-l-组氨酸衍生物的制备方法，另一个目的是提供一种由合成的n(π)-甲基-l-组氨酸衍生物制备鹅肌肽的方法，该方法选择性好、收率高、适合工业化生产。
为实现上述技术目的，本发明采用以下技术方案：
一种n(π)-甲基-l-组氨酸衍生物的制备方法，包含以下步骤：
步骤a：在碳酰化试剂的保护下，在中性或碱性条件下，化合物(ⅱ)于一定溶剂中与咪唑反应得到化合物(ⅲ)；
步骤b：化合物(ⅲ)于一定溶剂中，与甲基化试剂反应，得到化合物(ⅳ)；
步骤c：在中性或碱性条件下，化合物(ⅳ)于一定溶剂中，与醇发生醇解反应，得到化合物(v)；
步骤d：在碱性条件下，化合物(v)于一定溶剂中或无溶剂条件下，与脱除试剂反应，得到n(π)-甲基-l-组氨酸衍生物(ⅰ)；
反应路线如下：
其中，r1为h，任意取代的c1-c8脂肪烷烃，任意取代的c7-c17的苯基、任意取代的c7-c17的苄基，优选为甲基、乙基、异丙基、叔丁基、苯基、苄基、对甲氧基；r2为任意取代的c1-c8脂肪烷烃，任意取代的c7-c17的苯基、任意取代的c7-c17的苄基，优选为甲基、乙基、异丙基、叔丁基、苯基、苄基、对甲氧基。
其中，步骤a所述的碳酰化试剂为三光气、光气、碳酸二甲酯或尿素中的一种或多种；优选为光气、三光气；所述碱为碳酸氢钠、碳酸钠、碳酸氢钾、碳酸钾、碳酸铯、碳酸钙、碳酸锂、氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化锂、氢氧化镁、氢氧化钙、叔丁醇镁、叔丁醇钠、叔丁醇钾、甲醇钠、乙醇钠、三乙胺、二乙胺、二甲胺、三甲胺、二异丙基乙基胺、吡啶、4-二甲氨基吡啶、n-甲基吗啉、1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯、1,5-二氮杂双环[4.3.0]壬-5-烯或1,4-二氮杂二环[2.2.2]辛烷中的一种或多种，优选为碳酸氢钠、碳酸钠、碳酸氢钾、碳酸钾或三乙胺中的一种或多种；所述溶剂选自苯、甲苯、氯苯、二甲苯、异丙苯、乙腈、苯腈、乙酸乙酯、乙酸异丙酯、2-丁酮、丙酮、1,2-二甲基-2-咪唑酮、二甲亚砜、二甲基砜、环丁砜、六甲基磷酰铵、n,n-二甲基甲酰胺、n,n-二甲基乙酰胺、n,n-二乙基甲酰胺、n-甲基吡咯烷酮、吡啶、甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇、乙二醇、叔丁醇、叔戊醇、聚乙二醇、乙二醇单甲醚、乙二醇二甲醚、二乙二醇二甲醚、1,2-丙二醇、二乙氧基甲烷、二氧六环、甲基叔丁基醚、异丙醚、四氢呋喃、2-甲基四氢呋喃、正己烷、环己烷、二氯甲烷、1,2-二氯乙烷、氯仿或水中的一种或多种；优选为甲苯、乙腈、、乙二醇二甲醚、二乙氧基甲烷、二氧六环、n,n-二甲基甲酰胺、n,n-二甲基乙酰胺、n,n-二乙基甲酰胺、n-甲基吡咯烷酮、四氢呋喃、2-甲基四氢呋喃或水中的一种或多种。
其中，步骤a中，所述碳酰化试剂为三光气时，三光气与化合物(ii)的投料摩尔比为0.2-3：1，优选为0.3-1：1；所述碱与化合物(ii)的投料摩尔比为0.1-5：1，优选为1-3：1；所述反应温度为-78～150℃，优选为-10～130℃；反应时间0.5～36小时，优选为1～24小时。
其中，所述碳酰化试剂为光气、碳酸二甲酯或尿素中的一种或多种时，所述碳酰化试剂与化合物(ii)的投料摩尔比为0.8-5：1，优选为0.9-2：1；所述碱与化合物(ii)的投料摩尔比为0.1-5：1，优选为1-3：1；所述反应温度为-78～150℃，优选为-10～130℃；反应时间0.5～36小时，优选为1～24小时。
其中，步骤b中所述溶剂选自苯、甲苯、氯苯、二甲苯、异丙苯、乙腈、苯腈、乙酸乙酯、乙酸异丙酯、2-丁酮、丙酮、1,2-二甲基-2-咪唑酮、二甲亚砜、二甲基砜、环丁砜、六甲基磷酰铵、n,n-二甲基甲酰胺、n,n-二甲基乙酰胺、n,n-二乙基甲酰胺、n-甲基吡咯烷酮、吡啶、甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇、乙二醇、叔丁醇、叔戊醇、聚乙二醇、乙二醇单甲醚、乙二醇二甲醚、二乙二醇二甲醚、1,2-丙二醇、二乙氧基甲烷、二氧六环、甲基叔丁基醚、异丙醚、四氢呋喃、2-甲基四氢呋喃、正己烷、环己烷、二氯甲烷、1,2-二氯乙烷、氯仿或水中的一种或多种；优选为甲苯、乙腈、乙酸异丙酯、乙酸乙酯、乙二醇二甲醚、二乙氧基甲烷、二氧六环、四氢呋喃、2-甲基四氢呋喃、二氯甲烷或水中的一种或多种；所述甲基化试剂为碘甲烷、硫酸二甲酯或碳酸二甲酯中的一种或多种；所述反应可以在有无碱的条件进行，所述碱为碳酸氢钠、碳酸钠、碳酸氢钾、碳酸钾、碳酸铯、碳酸钙、碳酸锂、氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化锂、氢氧化镁、氢氧化钙、叔丁醇镁、叔丁醇钠、叔丁醇钾、甲醇钠、乙醇钠、三乙胺、二乙胺、二甲胺、三甲胺、二异丙基乙基胺、吡啶、4-二甲氨基吡啶、n-甲基吗啉、1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯、1,5-二氮杂双环[4.3.0]壬-5-烯、1,4-二氮杂二环[2.2.2]辛烷、钠氢、六甲基二硅氨基锂、六甲基二硅氨基钠、六甲基二硅氨基钾、丁基锂或二异丙基氨基锂中的一种或多种，优选为碳酸氢钠、碳酸钠、碳酸氢钾、碳酸钾或三乙胺中的一种或多种。
其中，步骤b中所述甲基化试剂与化合物(iii)的投料摩尔比为0.8-5：1，优选为1-3：1；所述碱与化合物(iii)的投料摩尔比为0.1-5：1，优选为1-2：1；所述反应温度选自-78-150℃，优选为20-130℃；反应时间0.5-48小时，优选为1-24小时。
其中，步骤c中所述醇为甲醇、乙醇、异丙醇、叔丁醇、苄醇、对甲氧基苄醇或苯酚中的一种；所述碱为碳酸氢钠、碳酸钠、碳酸氢钾、碳酸钾、碳酸铯、碳酸钙、碳酸锂、氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化锂、氢氧化镁、氢氧化钙、叔丁醇镁、叔丁醇钠、叔丁醇钾、甲醇钠、乙醇钠、三乙胺、二乙胺、二甲胺、三甲胺、二异丙基乙基胺、吡啶、4-二甲氨基吡啶、n-甲基吗啉、1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯、1,5-二氮杂双环[4.3.0]壬-5-烯、1,4-二氮杂二环[2.2.2]辛烷、钠氢、六甲基二硅氨基锂、六甲基二硅氨基钠、六甲基二硅氨基钾、丁基锂或二异丙基氨基锂中的一种或多种，优选为碳酸氢钠、碳酸钠、碳酸氢钾、碳酸钾或三乙胺中的一种或多种；所述溶剂选自苯、甲苯、氯苯、二甲苯、异丙苯、乙腈、苯腈、乙酸乙酯、乙酸异丙酯、2-丁酮、丙酮、1,2-二甲基-2-咪唑酮、二甲亚砜、二甲基砜、环丁砜、六甲基磷酰铵、n,n-二甲基甲酰胺、n,n-二甲基乙酰胺、n,n-二乙基甲酰胺、n-甲基吡咯烷酮、吡啶、甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇、乙二醇、叔丁醇、叔戊醇、苄醇、对甲氧基苄醇、聚乙二醇、乙二醇单甲醚、乙二醇二甲醚、二乙二醇二甲醚、1,2-丙二醇、二乙氧基甲烷、二氧六环、甲基叔丁基醚、异丙醚、四氢呋喃、2-甲基四氢呋喃、正己烷、环己烷、二氯甲烷、1,2-二氯乙烷、氯仿或水中的一种或多种；优选为二甲苯、氯苯、二乙二醇二甲醚、n,n-二甲基甲酰胺、n,n-二甲基乙酰胺、n,n-二乙基甲酰胺或n-甲基吡咯烷酮中的一种或多种。
其中，步骤c中所述醇与化合物(iv)的投料摩尔比为1-100：1；优选为1-50：1；所述试剂与化合物(iv)的投料的摩尔比为0.8-5：1，优选为1-3：1；所述碱与化合物(iv)的投料摩尔比为0.1-5：1，优选为1-2：1；所述反应温度选自-20-180℃，优选为20-150℃；反应时间1-120小时，优选为5-96小时。
其中，步骤d中所述碱为碳酸氢钠、碳酸钠、碳酸氢钾、碳酸钾、碳酸铯、碳酸钙、碳酸锂、氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化锂、氢氧化镁、氢氧化钙、叔丁醇镁、叔丁醇钠、叔丁醇钾、甲醇钠、乙醇钠中的一种或多种，优选为碳酸氢钠、碳酸钠、碳酸氢钾、碳酸钾、氢氧化钠或氢氧化钾中的一种或多种；所述溶剂选自苯、甲苯、氯苯、二甲苯、异丙苯、乙腈、苯腈、乙酸乙酯、乙酸异丙酯、2-丁酮、丙酮、1,2-二甲基-2-咪唑酮、二甲亚砜、二甲基砜、环丁砜、六甲基磷酰铵、n,n-二甲基甲酰胺、n,n-二甲基乙酰胺、n,n-二乙基甲酰胺、n-甲基吡咯烷酮、吡啶、甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇、乙二醇、叔丁醇、叔戊醇、聚乙二醇、乙二醇单甲醚、乙二醇二甲醚、二乙二醇二甲醚、1,2-丙二醇、二乙氧基甲烷、二氧六环、甲基叔丁基醚、异丙醚、四氢呋喃、2-甲基四氢呋喃、正己烷、环己烷、二氯甲烷、1,2-二氯乙烷、氯仿或水中的一种或多种；优选为甲苯、乙腈、乙酸异丙酯、乙酸乙酯、乙二醇二甲醚、二乙氧基甲烷、二氧六环、四氢呋喃、2-甲基四氢呋喃、二氯甲烷或水中的一种或多种；
其中，步骤d中，当r2为取代苄基时，脱除条件还可以为pd-c/氢给予体、pd黑/氢给予体、raneyni/氢给予体、na/nh3(l)中的一种或多种，优选为pd-c/氢给予体、pd黑/氢给予体或raneyni/氢给予体中的一种或多种；所述脱除试剂与化合物(iv)的投料量的摩尔比为0.05-5：1，优选0.1-3:1；当使用pd-c或pd黑时，所述试剂中pd含量与化合物(v)的投料量的质量比为0.005-0.5：1，优选为0.01-0.2：1；当r2为叔丁基、叔戊基、异丙基时，脱除条件还可以为盐酸、硫酸、磷酸、醋酸、甲酸、甲磺酸、三氟甲磺酸或三氟乙酸中的一种或多种，优选为盐酸、甲酸、醋酸或三氟乙酸中的一种或多种；所述试剂与化合物(v)的投料质量比为0.1-20：1，优选为0.1-5：1。
其中，步骤d中所述碱与化合物(v)的投料摩尔比为0.1-5：1，优选为0.1-1：1；所述反应温度选自0-150℃，优选为20-130℃；反应时间0.5-48小时，优选为1-24小时。
一种由上述n(π)-甲基-l-组氨酸衍生物制备鲸肌肽的方法，包含以下步骤：
步骤e：在有/无碱和有/无活化剂的条件下，n(π)-甲基-l-组氨酸衍生物(ⅰ)于一定溶剂中，与缩合试剂化合物(viii)缩合得到化合物(vi)；
步骤f：在碱性条件下，化合物(vi)一定溶剂中或无溶剂条件下，与脱除试剂反应，得到化合物(vii)，即鲸肌肽；
反应路线如下：
其中，r3为叔丁氧羰基、苄氧羰基、芴甲氧羰基、甲氧羰基、乙氧羰基、叔丁基、苄基、对甲氧基苄基或三苯甲基中的一种。
其中，步骤e中，所述缩合试剂为氯甲酸乙酯、氯甲酸异丙酯、羰基二咪唑、甲磺酰氯、对甲苯磺酰氯、对硝基苯磺酰氯、二环己基碳二亚胺、二异丙基碳二亚胺、1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳二亚胺、o-(7-氮杂苯并三氮唑-1-基)-二(二甲胺基)碳鎓六氟磷酸盐、o-(苯并三氮唑-1-基)-二(二甲胺基)碳鎓六氟磷酸盐、苯并三氮唑-1-基氧-三(二甲胺基)鏻鎓六氟磷酸盐、苯并三氮唑-1-基氧-三(四氢吡咯基)鏻鎓六氟磷酸盐、二苯基磷酰氯、二(2-氧-3-唑烷基)磷酰氯、正丙基磷酸酐、二氯亚砜、草酰氯、三光气中的一种或多种；优选为氯丙酸异丙酯、二异丙基碳二亚胺、o-(7-氮杂苯并三氮唑-1-基)-二(二甲胺基)碳鎓六氟磷酸盐、o-(苯并三氮唑-1-基)-二(二甲胺基)碳鎓六氟磷酸盐、苯并三氮唑-1-基氧-三(四氢吡咯基)鏻鎓六氟磷酸盐、二苯基磷酰氯、正丙基磷酸酐、二氯亚砜、草酰氯、三光气中的一种或多种；所述碱选自碳酸氢钠、碳酸钠、碳酸氢钾、碳酸钾、碳酸铯、碳酸钙、碳酸锂、氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化锂、氢氧化镁、氢氧化钙、叔丁醇镁、叔丁醇钠、叔丁醇钾、甲醇钠、乙醇钠、三乙胺、二乙胺、二甲胺、三甲胺、二异丙基乙基胺、吡啶、4-二甲氨基吡啶、n-甲基吗啉、1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯、1,5-二氮杂双环[4.3.0]壬-5-烯、1,4-二氮杂二环[2.2.2]辛烷、钠氢、六甲基二硅氨基锂、六甲基二硅氨基钠、六甲基二硅氨基钾、丁基锂、二异丙基氨基锂中的一种或多种，优选为三乙胺、二异丙基乙基胺、n-甲基吗啉中的一种或多种；所述活化剂为n,n-二甲基吡啶、1-羟基苯并三氮唑、1-羟基-吡啶并三氮唑中的一种或多种；所述溶剂选自苯、甲苯、氯苯、二甲苯、异丙苯、乙腈、苯腈、乙酸乙酯、乙酸异丙酯、2-丁酮、丙酮、1,2-二甲基-2-咪唑酮、二甲亚砜、二甲基砜、环丁砜、六甲基磷酰铵、n,n-二甲基甲酰胺、n,n-二甲基乙酰胺、n,n-二乙基甲酰胺、n-甲基吡咯烷酮、吡啶、甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇、乙二醇、叔丁醇、叔戊醇、聚乙二醇、乙二醇单甲醚、乙二醇二甲醚、二乙二醇二甲醚、1,2-丙二醇、二乙氧基甲烷、二氧六环、甲基叔丁基醚、异丙醚、四氢呋喃、2-甲基四氢呋喃、正己烷、环己烷、二氯甲烷、1,2-二氯乙烷、氯仿、水中的一种或多种；优选为甲苯、乙腈、乙酸异丙酯、乙酸乙酯、n,n-二甲基甲酰胺、乙二醇二甲醚、二乙氧基甲烷、二氧六环、四氢呋喃、2-甲基四氢呋喃、二氯甲烷、水中的一种或多种。
其中，步骤e中，所述化合物(viii)与n(π)-甲基-l-组氨酸衍生物(ⅰ)的投料质量比为0.8-3:1，优选为0.9-2:1；所述碱与n(π)-甲基-l-组氨酸衍生物(ⅰ)的投料摩尔比为0.8-6：1，优选为0.9-4：1；所述活化剂与n(π)-甲基-l-组氨酸衍生物(ⅰ)的投料摩尔比为0.8-5:1，优选为0.9-3:1；所述反应温度选自0-150℃，优选为20-130℃；反应时间0.5-48小时，优选为1-24小时。
所述步骤e可以一次性全部投料也可以生成活性物种后再加入n(π)-甲基-l-组氨酸衍生物(ⅰ)。
其中，步骤f中，当r1为脂肪烷烃、取代苯基、取代苄基时，所述碱为碳酸氢钠、碳酸钠、碳酸氢钾、碳酸钾、碳酸铯、碳酸钙、碳酸锂、氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化锂、氢氧化镁、氢氧化钙、叔丁醇镁、叔丁醇钠、叔丁醇钾、甲醇钠、乙醇钠中的一种或多种，优选为碳酸氢钠、碳酸钠、碳酸氢钾、碳酸钾、氢氧化钠、氢氧化钾中的一种或多种；所述溶剂选自苯、甲苯、氯苯、二甲苯、异丙苯、乙腈、苯腈、乙酸乙酯、乙酸异丙酯、2-丁酮、丙酮、1,2-二甲基-2-咪唑酮、二甲亚砜、二甲基砜、环丁砜、六甲基磷酰铵、n,n-二甲基甲酰胺、n,n-二甲基乙酰胺、n,n-二乙基甲酰胺、n-甲基吡咯烷酮、吡啶、甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇、乙二醇、叔丁醇、叔戊醇、聚乙二醇、乙二醇单甲醚、乙二醇二甲醚、二乙二醇二甲醚、1,2-丙二醇、二乙氧基甲烷、二氧六环、甲基叔丁基醚、异丙醚、四氢呋喃、2-甲基四氢呋喃、正己烷、环己烷、二氯甲烷、1,2-二氯乙烷、氯仿、水中的一种或多种；优选为甲苯、乙腈、乙酸异丙酯、乙酸乙酯、乙二醇二甲醚、二乙氧基甲烷、二氧六环、四氢呋喃、2-甲基四氢呋喃、二氯甲烷、水中的一种或多种。
其中，步骤f中，当r1为取代苄基时，脱除试剂还可以为pd-c/氢给予体、pd黑/氢给予体、raneyni/氢给予体、na/nh3(l)中的一种或多种，优选为pd-c/氢给予体、pd黑/氢给予体、raneyni/氢给予体中的一种或多种；所述脱除试剂与化合物(vi)的投料量的摩尔比为0.05-5:1，优选0.1-3:1；当使用pd-c或pd黑时，所述脱除试剂中pd含量与化合物(vi)的投料量的质量比为0.005-0.5:1，优选为0.01-0.2:1；当r1为叔丁基、叔戊基、异丙基时，脱除试剂还可以为盐酸、硫酸、磷酸、醋酸、甲酸、甲磺酸、三氟甲磺酸、三氟乙酸中的一种或多种，优选为盐酸、甲酸、醋酸、三氟乙酸中的一种或多种；所述脱除试剂与化合物(vi)的投料质量比为0.1-20:1，优选为0.1-5:1。
其中，步骤f中，所述碱与化合物(vi)的投料摩尔比为0.1-5:1，优选为0.1-1:1；所述反应温度选自0-150℃，优选为20-130℃；反应时间0.5-48小时，优选为1-24小时。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：(1)本发明的原辅料廉价易得，选择性好，收率高；(2)本发明的方法操作简单易行、工艺稳定、易于控制、反应后处理方便、产物收率好，纯度高，可以经济方便地用于工业化生产。
具体实施方式
下面用具体实施例对本发明进一步说明。
实施例1
步骤a、化合物(iii)的制备
l-组氨酸甲酯二盐酸盐(10g，41mmol)溶于100ml乙腈中，20-30℃下分批加入三乙胺(8.3g，82mmol)；加毕后，20-30℃搅拌1小时；分批加入三光气(6.08g，20.5mmol)，随后加入0.1mldmf，升温至60-70℃搅拌5小时，tlc检测反应完毕。浓缩，用二氯甲烷水分液，有机相浓缩后用乙腈重结晶。过滤后烘干得白色固体6.8g。摩尔收率85％。
步骤b、步骤c和步骤d、化合物(iv)、化合物(v)和化合物(i)的制备
甲基(s)-5-氧基-5,6,7,8-四氢咪唑基[1,5-c]嘧啶基-7-碳酸酯(10g，51mmol)溶于100ml乙腈中。20-30℃加入碘甲烷(10.85g，76.5mmol)，升温至80-90℃，搅拌24h，tlc检测基本反应完全，浓缩后得到的粗品直接投下一步。
粗品悬浮于50ml叔丁醇中，加入二异丙基乙基胺(13.2g，102mmol)，80-90℃搅拌48h，tlc显示基本反应完全，浓缩后得到的粗品直接投下一步。
粗品溶于100ml四氢呋喃，加入5ml6m的盐酸，20-30℃搅拌2小时，浓缩后用乙醇打浆，过滤后烘干得白色固体9.4g，摩尔收率65％，纯度97％。
步骤e、化合物(vi)的制备
boc-甘氨酸(10g，52.8mmol)溶于120ml二氯甲烷中。0-10℃加入三乙胺(18.7g，184.8mmol)、氯甲酸异丙酯(7.57g，55.4mmol)。缓慢升至20-30℃后继续搅拌两小时。20-30℃分批加入n(π)-甲基-l-组氨酸甲酯二盐酸盐(13.5g，52.8mmol)，维持20-30℃搅拌24小时。tlc检测反应基本完全。过滤后滤液用水洗，浓缩后用异丙醇打浆。过滤后烘干的类白色固体15.9g。摩尔收率85％。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ1.43(s,9h),2.42-2.48(m,2h),3.02(dd,j＝5.1,14.7hz,1h),3.07(dd,j＝5.1,14.7hz,1h),3.40-3.46(m,2h),3.63(s,3h),3.71(s,3h),4.79(td,j＝5.1,7.4hz,1h),5.69(br,1h),6.64(s,1h),7.34(s,1h)。
步骤f、l-鲸肌肽的制备
甲基n(α)-(3-((叔丁氧羰基)胺基)丙氧基)-n(π)-甲基-l-组氨酸酯(10g，28mmol)溶于100ml甲醇中，加入1m的氢氧化钠水溶液28ml，20-30℃搅拌过夜。浓缩后加入100ml水，用盐酸调至ph2-4，20-30℃搅拌1小时。tlc检测反应完毕。分批加入碳酸氢钠固体中和至ph～8，浓缩。用四氢呋喃萃取，饱和食盐水洗涤。浓缩，加入甲叔醚析出固体。过滤后烘干，得白色固体5.5g，摩尔收率为82％，化学纯度为97％；光学纯度为97％。1hnmr(500mhz,d2o)δ2.48-2.60(m,2h),2.90(dd,j＝5.7,15.3hz,1h),3.03(dd,j＝5.7,15.3hz,1h),3.06-3.14(m,2h),3.67(s,3h),4.32(td,j＝5.7,7.9hz,1h),7.03(s,1h),8.25(s,1h)。
实施例2
步骤a、化合物(iii)的制备
l-组氨酸乙酯二盐酸盐(41mmol)溶于100ml乙腈中，20-30℃下分批加入碳酸氢钠(41mmol)，加毕后，20-30℃搅拌1小时；分批加入三光气(12.3mmol)，随后加入0.1mldmac，升温至80-90℃搅拌1小时，tlc检测反应完毕，浓缩，用二氯甲烷水分液，有机相浓缩后用乙腈重结晶，过滤后烘干得白色固体7.0g，摩尔收率88％。
步骤b、步骤c和步骤d、化合物(iv)、化合物(v)和化合物(i)的制备
乙基(s)-5-氧基-5,6,7,8-四氢咪唑基[1,5-c]嘧啶基-7-碳酸酯(51mmol)溶于100ml乙腈中。20-30℃加入硫酸二甲酯(51mmol)和碳酸氢钾(51mmol)，升温至80-90℃，搅拌12h，tlc检测基本反应完全，浓缩后得到的粗品直接投下一步。
粗品悬浮于50ml苄醇中，加入碳酸氢钾(51mmol)，120-130℃搅拌5h，tlc显示基本反应完全，浓缩后得到的粗品直接投下一步。
粗品溶于100ml乙酸异丙酯，加入10％pd-c0.2g，甲酸铵(5.1mmol)，70-80℃搅拌12小时，浓缩后用乙醇打浆，过滤后烘干得白色固体9.5g，摩尔收率66％，纯度97％。
步骤e、化合物(vi)的制备
n-(苄氧羰基)氨基乙酸(52.8mmol)溶于120ml乙酸乙酯中。0-10℃加入二异丙基乙基胺(47.5mmol)、氯丙酸异丙酯(79.2mmol)，缓慢升温至60-70℃继续搅拌两小时；20-30℃分批加入n(π)-甲基-l-组氨酸甲酯二盐酸盐(13.5g，52.8mmol)，维持温度为60-70℃搅拌12小时，tlc检测反应基本完全，过滤后滤液用水洗，浓缩后用异丙醇打浆。过滤后烘干的类白色固体16.0g，摩尔收率85.5％。
步骤f、l-鲸肌肽的制备
甲基n(α)-(3-((苄氧羰基)胺基)丙氧基)-n(π)-甲基-l-组氨酸酯(28mmol)溶于100ml乙酸异丙酯中，加入1m的氢氧化钠水溶液28ml，升温至60-70℃搅拌12h，浓缩后加入100ml水，用甲酸调至ph2-4，恒温搅拌1小时，tlc检测反应完毕。分批加入氢氧化钠固体中和至ph～8，浓缩。用四氢呋喃萃取，饱和食盐水洗涤，浓缩，加入甲叔醚析出固体，过滤后烘干，得白色固体5.7g，摩尔收率为85％，化学纯度为97％；光学纯度为99％。
实施例3
步骤a、化合物(iii)的制备
l-组氨酸异丙酯二盐酸盐(41mmol)溶于100ml乙腈中，20-30℃下分批加入三乙胺(82mmol)，加毕后，20-30℃搅拌1小时；分批加入三光气(41mmol)，随后加入0.1mldmf，升温至0-10℃搅拌24小时，tlc检测反应完毕。浓缩，用二氯甲烷水分液，有机相浓缩后用乙腈重结晶，过滤后烘干得白色固体6.6g，摩尔收率83％。
步骤b、步骤c和步骤d、化合物(iv)、化合物(v)和化合物(i)的制备
异丙基(s)-5-氧基-5,6,7,8-四氢咪唑基[1,5-c]嘧啶基-7-碳酸酯(51mmol)溶于100ml乙二醇二甲醚中。20-30℃加入碳酸二甲酯(153mmol)。升温至80-90℃，搅拌24h。tlc检测基本反应完全。浓缩后得到的粗品直接投下一步。
粗品悬浮于50ml苄醇中，加入碳酸钾(76.5mmol)。120-130℃搅拌96h，tlc显示基本反应完全。浓缩后得到的粗品直接投下一步。
粗品溶于100ml二乙氧基甲烷，加入10％pd-c0.3g，甲酸/三乙胺(76.5mmol)，80-90℃搅拌1小时，浓缩后用乙醇打浆，过滤后烘干得白色固体9.7g，摩尔收率67％，纯度97％。
步骤e、甲基n(α)-(3-((芴甲氧羰基)胺基)丙氧基)-n(π)-甲基-l-组氨酸酯的制备
n-(芴甲氧羰基)氨基乙酸(52.8mmol)溶于120ml四氢呋喃中。0-10℃加入n-甲基吗啉(132mmol)、二异丙基碳二亚胺(105.6mmol)和1-羟基-吡啶并三氮唑(158.4mmol)。缓慢升温至80-90℃继续搅拌两小时。20-30℃分批加入n(π)-甲基-l-组氨酸甲酯二盐酸盐(13.5g，52.8mmol)，维持温度为80-90℃搅拌1小时。tlc检测反应基本完全。过滤后滤液用水洗，浓缩后用异丙醇打浆。过滤后烘干的类白色固体15.8g，摩尔收率为84％。
步骤f、l-鲸肌肽的制备
甲基n(α)-(3-((苄氧羰基)胺基)丙氧基)-n(π)-甲基-l-组氨酸酯(28mmol)溶于100ml乙腈中，加入1m的氢氧化钠水溶液28ml，升温至80-90℃搅拌1h。浓缩后加入100ml水，用醋酸调至ph2-4，恒温搅拌1小时。tlc检测反应完毕。分批加入氢氧化钠固体中和至ph～8，浓缩。用四氢呋喃萃取，饱和食盐水洗涤。浓缩，加入甲叔醚析出固体。过滤后烘干，得白色固体5.8g，5.4g，摩尔收率：87％，化学纯度为98％，光学纯度为98％。
实施例4
步骤a、化合物(iii)的制备
l-组氨酸异丙酯二盐酸盐(41mmol)溶于100ml乙腈中，20-30℃下分批加入三乙胺(82mmol)，加毕后，20-30℃搅拌1小时；分批加入光气(36.9mmol)，随后加入0.1mlnmp，升温至60-70℃搅拌5小时，tlc检测反应完毕，浓缩，用二氯甲烷水分液，有机相浓缩后用乙腈重结晶，过滤后烘干得白色固体7.0g，摩尔收率88％。
步骤b、步骤c和步骤d、化合物(iv)、化合物(v)和化合物(i)的制备
异丙基(s)-5-氧基-5,6,7,8-四氢咪唑基[1,5-c]嘧啶基-7-碳酸酯(51mmol)溶于100ml乙二醇二甲醚中。20-30℃加入碘甲烷(76.5mmol)和碳酸氢钾(51mmol)，升温至80-90℃，搅拌24h。tlc检测基本反应完全。浓缩后得到的粗品直接投下一步。
粗品悬浮于50ml异丙醇中，加入三乙胺(51mmol)。80-90℃℃搅拌48h，tlc显示基本反应完全。浓缩后得到的粗品直接投下一步。
粗品溶于100ml四氢呋喃，加入5ml6m的醋酸，20-30℃搅拌2小时。浓缩后用乙醇打浆，过滤后烘干得白色固体9.4g，摩尔收率65％，纯度96％。
步骤e、甲基n(α)-(3-((甲氧羰基)胺基)丙氧基)-n(π)-甲基-l-组氨酸酯的制备
n-(甲氧羰基)氨基乙酸(52.8mmol)溶于120ml甲苯中。0-10℃加入三乙胺(18.7g，184.8mmol)、光气(55.4mmol)和n,n-二甲基吡啶(47.5mmol)缓慢升至20-30℃后继续搅拌两小时。20-30℃分批加入n(π)-甲基-l-组氨酸甲酯二盐酸盐(13.5g，52.8mmol)，维持20-30℃搅拌24小时。tlc检测反应基本完全。过滤后滤液用水洗，浓缩后用异丙醇打浆。过滤后烘干的类白色固体15.6g，摩尔收率为83％。
步骤f、l-鲸肌肽的制备
甲基n(α)-(3-((甲氧羰基)胺基)丙氧基)-n(π)-甲基-l-组氨酸酯(28mmol)溶于100ml乙腈中，加入1m的氢氧化钠水溶液28ml，升温至80-90℃搅拌1h。浓缩后加入100ml水，用醋酸调至ph2-4，恒温搅拌1小时。tlc检测反应完毕。分批加入氢氧化钠固体中和至ph～8，浓缩。用四氢呋喃萃取，饱和食盐水洗涤。浓缩，加入甲叔醚析出固体。过滤后烘干，得白色固体5.7g，摩尔收率：85％，化学纯度：97％；光学纯度：98％。
实施例5
步骤a、化合物(iii)的制备
l-组氨酸异丙酯二盐酸盐(41mmol)溶于100ml乙腈中，20-30℃下分批加入三乙胺(123mmol)，加毕后，20-30℃搅拌1小时；分批加入碳酸二甲酯(82mmol)，随后加入0.1ml四氢呋喃，升温至60-70℃搅拌5小时，tlc检测反应完毕。浓缩，用二氯甲烷水分液，有机相浓缩后用乙腈重结晶，过滤后烘干得白色固体6.7g，摩尔收率84％。
步骤b、步骤c和步骤d、化合物(iv)、化合物(v)和化合物(i)的制备
叔丁基(s)-5-氧基-5,6,7,8-四氢咪唑基[1,5-c]嘧啶基-7-碳酸酯(51mmol)溶于100ml乙二醇二甲醚中。20-30℃加入碘甲烷(76.5mmol)和碳酸氢钠(51mmol)，升温至80-90℃，搅拌24h。tlc检测基本反应完全。浓缩后得到的粗品直接投下一步。
粗品悬浮于50ml叔丁醇中，加入二异丙基乙基胺(13.2g，102mmol)，80-90℃搅拌48h，tlc显示基本反应完全。浓缩后得到的粗品直接投下一步。
粗品溶于100ml四氢呋喃，加入10ml6m的甲酸，20-30℃搅拌2小时，浓缩后用乙醇打浆，过滤后烘干得白色固体9.3g，摩尔收率64％，纯度98％。
步骤e、甲基n(α)-(3-((乙氧羰基)胺基)丙氧基)-n(π)-甲基-l-组氨酸酯的制备
n-(乙氧羰基)氨基乙酸(52.8mmol)溶于120ml甲苯中。0-10℃加入三乙胺(18.7g，184.8mmol)、二氯亚砜(55.4mmol)和1-羟基苯并三氮唑(105.6mmol)缓慢升至20-30℃后继续搅拌两小时。20-30℃分批加入n(π)-甲基-l-组氨酸甲酯二盐酸盐(13.5g，52.8mmol)，维持维持20-30℃搅拌24小时。tlc检测反应基本完全。过滤后滤液用水洗，浓缩后用异丙醇打浆。过滤后烘干的类白色固体16.1g。摩尔收率86％。
步骤f、l-鲸肌肽的制备
甲基n(α)-(3-((乙氧羰基)胺基)丙氧基)-n(π)-甲基-l-组氨酸酯(28mmol)溶于100ml乙腈中，加入1m的氢氧化钠水溶液28ml，升温至80-90℃搅拌1h。浓缩后加入100ml水，用醋酸调至ph2-4，恒温搅拌1小时。tlc检测反应完毕。分批加入氢氧化钠固体中和至ph～8，浓缩。用四氢呋喃萃取，饱和食盐水洗涤。浓缩，加入甲叔醚析出固体。过滤后烘干，得白色固体5.6g，摩尔收率为84％，化学纯度为98％；光学纯度为99％。
实施例6
步骤a、化合物(iii)的制备
l-组氨酸异丙酯二盐酸盐(41mmol)溶于100ml乙腈中，20-30℃下分批加入碳酸钾(82mmol)，加毕后，20-30℃搅拌1小时；分批加入尿素(61.5mmol)，随后加入0.1ml四氢呋喃，升温至60-70℃搅拌5小时，tlc检测反应完毕，浓缩，用二氯甲烷水分液，有机相浓缩后用乙腈重结晶，过滤后烘干得白色固体6.5g，摩尔收率82％。
步骤b、步骤c和步骤d、化合物(iv)、化合物(v)和化合物(i)的制备
甲基(s)-5-氧基-5,6,7,8-四氢咪唑基[1,5-c]嘧啶基-7-碳酸酯(10g，51mmol)溶于100ml乙腈中。20-30℃加入碘甲烷(10.85g，76.5mmol)。升温至80-90℃，搅拌24h。tlc检测基本反应完全。浓缩后得到的粗品直接投下一步。
粗品悬浮于50ml叔丁醇中，加入二异丙基乙基胺(13.2g，102mmol)。80-90℃搅拌48h，tlc显示基本反应完全。浓缩后得到的粗品直接投下一步。
粗品溶于100ml四氢呋喃，加入5ml6m的盐酸，20-30℃搅拌2小时，浓缩后用乙醇打浆，过滤后烘干得白色固体9.4g，摩尔收率65％，纯度98％。
步骤e、甲基n(α)-(3-((叔丁氧羰基)胺基)丙氧基)-n(π)-甲基-l-组氨酸酯的制备
boc-甘氨酸(10g，52.8mmol)溶于120ml二氯甲烷中。0-10℃加入三乙胺(18.7g，184.8mmol)、氯甲酸异丙酯(7.57g，55.4mmol)。缓慢升至20-30℃后继续搅拌两小时。20-30℃分批加入n(π)-甲基-l-组氨酸甲酯二盐酸盐(13.5g，52.8mmol)，维持20-30℃搅拌24小时。tlc检测反应基本完全。过滤后滤液用水洗，浓缩后用异丙醇打浆。过滤后烘干的类白色固体15.6g。摩尔收率83％。
步骤f、l-鲸肌肽的制备
甲基n(α)-(3-((叔丁氧羰基)胺基)丙氧基)-n(π)-甲基-l-组氨酸酯(10g，28mmol)溶于100ml甲醇中，加入1m的氢氧化钠水溶液28ml，20-30℃搅拌过夜。浓缩后加入100ml水，用盐酸调至ph2-4，20-30℃搅拌1小时。tlc检测反应完毕。分批加入碳酸氢钠固体中和至ph～8，浓缩。用四氢呋喃萃取，饱和食盐水洗涤。浓缩，加入甲叔醚析出固体。过滤后烘干，得白色固体5.8g，摩尔收率为86％，化学纯度为97％，光学纯度为97％。
实施例7
步骤a、化合物(iii)的制备
l-组氨酸异丙酯二盐酸盐(41mmol)溶于100ml乙腈中，20-30℃下分批加入碳酸氢钾(82mmol)，加毕后，20-30℃搅拌1小时；分批加入尿素(61.5mmol)，随后加入0.1ml四氢呋喃，升温至60-70℃搅拌5小时，tlc检测反应完毕，浓缩，用二氯甲烷水分液，有机相浓缩后用乙腈重结晶，过滤后烘干得白色固体6.6g，摩尔收率83％。
步骤b、步骤c和步骤d、化合物(iv)、化合物(v)和化合物(i)的制备
苄基(s)-5-氧基-5,6,7,8-四氢咪唑基[1,5-c]嘧啶基-7-碳酸酯(10g，51mmol)溶于100ml乙腈中。20-30℃加入碘甲烷(10.85g，76.5mmol)，升温至70-90℃，搅拌24h。tlc检测基本反应完全。浓缩后得到的粗品直接投下一步。
粗品悬浮于50ml叔丁醇中，加入二异丙基乙基胺(13.2g，102mmol)。80-90℃搅拌48h，tlc显示基本反应完全。浓缩后得到的粗品直接投下一步。
粗品溶于100ml四氢呋喃，加入5ml6m的盐酸，20-30℃搅拌2小时，浓缩后用乙醇打浆，过滤后烘干得白色固体9.7g，摩尔收率67％，纯度97％。
步骤e、甲基n(α)-(3-((叔丁氧羰基)胺基)丙氧基)-n(π)-甲基-l-组氨酸酯的制备
boc-甘氨酸(10g，52.8mmol)溶于120ml二氯甲烷中。0-10℃加入三乙胺(18.7g，184.8mmol)、氯甲酸异丙酯(7.57g，55.4mmol)。缓慢升至20-30℃后继续搅拌两小时。20-30℃分批加入n(π)-甲基-l-组氨酸甲酯二盐酸盐(13.5g，52.8mmol)，维持20-30℃搅拌24小时。tlc检测反应基本完全。过滤后滤液用水洗，浓缩后用异丙醇打浆。过滤后烘干的类白色固体15.8g，摩尔收率8,4％。
步骤f、l-鲸肌肽的制备
甲基n(α)-(3-((叔丁氧羰基)胺基)丙氧基)-n(π)-甲基-l-组氨酸酯(10g，28mmol)溶于100ml甲醇中，加入1m的氢氧化钠水溶液28ml，20-30℃搅拌过夜。浓缩后加入100ml水，用四氢呋喃萃取，饱和食盐水洗涤。浓缩，加入甲叔醚析出固体。过滤后烘干，得白色固体5.6g，摩尔收率为83％，化学纯度为98％，光学纯度为99％。
实施例8
步骤a、化合物(iii)的制备
l-组氨酸异丙酯二盐酸盐(41mmol)溶于100ml乙腈中，20-30℃下分批加入三乙胺(82mmol)。加毕后，20-30℃搅拌1小时；分批加入尿素(61.5mmol)，随后加入0.1ml四氢呋喃。升温至60-70℃搅拌5小时，tlc检测反应完毕。浓缩，用二氯甲烷水分液，有机相浓缩后用乙腈重结晶。过滤后烘干得白色固体6.8g，摩尔收率85.5％。
步骤b、步骤c和步骤d、化合物(iv)、化合物(v)和化合物(i)的制备
苄基(s)-5-氧基-5,6,7,8-四氢咪唑基[1,5-c]嘧啶基-7-碳酸酯(10g，51mmol)溶于100ml乙腈中，20-30℃加入碘甲烷(10.85g，76.5mmol)，升温至80-90℃，搅拌24h，tlc检测基本反应完全。浓缩后得到的粗品直接投下一步。
粗品悬浮于50ml叔丁醇中，加入二异丙基乙基胺(13.2g，102mmol)。80-90℃搅拌48h，tlc显示基本反应完全。浓缩后得到的粗品直接投下一步。
粗品溶于100ml四氢呋喃，加入5ml6m的盐酸，20-30℃搅拌2小时。浓缩后用乙醇打浆，过滤后烘干得白色固体9.3g，摩尔收率64％，纯度99％。
步骤e、甲基n(α)-(3-((叔丁氧羰基)胺基)丙氧基)-n(π)-甲基-l-组氨酸酯的制备
boc-甘氨酸(10g，52.8mmol)溶于120ml二氯甲烷中。0-10℃加入三乙胺(18.7g，184.8mmol)、氯甲酸异丙酯(7.57g，55.4mmol)。缓慢升至20-30℃后继续搅拌两小时。20-30℃分批加入n(π)-甲基-l-组氨酸甲酯二盐酸盐(13.5g，52.8mmol)，维持20-30℃搅拌24小时。tlc检测反应基本完全。过滤后滤液用水洗，浓缩后用异丙醇打浆，过滤后烘干的类白色固体16g，摩尔收率86％。
步骤f、l-鲸肌肽的制备
甲基n(α)-(3-((叔丁氧羰基)胺基)丙氧基)-n(π)-甲基-l-组氨酸酯(10g，28mmol)溶于100ml甲醇中，加入1m的氢氧化钠水溶液28ml，20-30℃搅拌过夜。浓缩后加入100ml水，用四氢呋喃萃取，饱和食盐水洗涤。浓缩，加入甲叔醚析出固体。过滤后烘干，得白色固体5.9g，摩尔收率为88％，化学纯度为97％，光学纯度为98％。
实施例9
步骤a、化合物(iii)的制备
l-组氨酸异丙酯二盐酸盐(41mmol)溶于100ml乙腈中，20-30℃下分批加入碳酸钠(82mmol)，加毕后，20-30℃搅拌1小时；分批加入尿素(61.5mmol)，随后加入0.1ml四氢呋喃，升温至60-70℃搅拌5小时，tlc检测反应完毕，浓缩，用二氯甲烷水分液，有机相浓缩后用乙腈重结晶，过滤后烘干得白色固体6.9g，摩尔收率87％。
步骤b、步骤c和步骤d、化合物(iv)、化合物(v)和化合物(i)的制备
苄基(s)-5-氧基-5,6,7,8-四氢咪唑基[1,5-c]嘧啶基-7-碳酸酯(10g，51mmol)溶于100ml乙腈中，20-30℃加入碘甲烷(10.85g，76.5mmol)，升温至80-90℃，搅拌24h，tlc检测基本反应完全，浓缩后得到的粗品直接投下一步。
粗品悬浮于50ml叔丁醇中，80-90℃搅拌48h，tlc显示基本反应完全。浓缩后得到的粗品直接投下一步。
粗品溶于100ml四氢呋喃，加入5ml6m的盐酸，20-30℃搅拌2小时。浓缩后用乙醇打浆，过滤后烘干得白色固体9.6g，摩尔收率66％，纯度98％。
步骤e、甲基n(α)-(3-((叔丁氧羰基)胺基)丙氧基)-n(π)-甲基-l-组氨酸酯的制备
boc-甘氨酸(10g，52.8mmol)溶于120ml二氯甲烷中。0-10℃加入三乙胺(18.7g，184.8mmol)、氯甲酸异丙酯(7.57g，55.4mmol)。缓慢升至20-30℃后继续搅拌两小时。20-30℃分批加入n(π)-甲基-l-组氨酸甲酯二盐酸盐(13.5g，52.8mmol)，维持20-30℃搅拌24小时。tlc检测反应基本完全。过滤后滤液用水洗，浓缩后用异丙醇打浆。过滤后烘干的类白色固体15.8g，摩尔收率84％。
步骤f、l-鲸肌肽的制备
甲基n(α)-(3-((叔丁氧羰基)胺基)丙氧基)-n(π)-甲基-l-组氨酸酯(10g，28mmol)溶于100ml甲醇中，加入1m的氢氧化钠水溶液28ml，20-30℃搅拌过夜。浓缩后加入100ml水，用四氢呋喃萃取，饱和食盐水洗涤。浓缩，加入甲叔醚析出固体，过滤后烘干，得白色固体5.4g，摩尔收率：81％，化学纯度：98％；光学纯度：98％。