本发明属于植物分子生物学领域，具体涉及一种用于鉴定黄州萝卜的SSR标记及方法。
背景技术：
“黄州萝卜”是中国湖北省黄冈市黄州区具有地方特色的农家品种，有着悠久的种植历史。黄州萝卜以品质好、产量高而著称，尤其是品质：肉质紧密嫩脆，水分中等，生食味稍甜，熟食味鲜美，久煮不绵，回锅不烂。素有“生食甜，熟食香，腌食脆，冬藏春吃更有味”的美称。据华中农业大学刘砾善测定，黄州萝卜每100g可食部分含维生素C 23mg，赖氨酸含量为一般白萝卜的2.5倍。
1959年，“黄州萝卜”被选送到北京参加国庆10周年农展馆的展览并获奖，1992年又被选入湖北省名、特、优、新农产品开发项目库，成为湖北省具有开发前景的名优农产品资源之一。2008年8月，“黄州萝卜”正式成为国家地理标志保护产品。黄冈积极系列开发“黄州萝卜”，种子的提纯复壮成效显著，种植面积不断扩大，在黄冈市康尔达食品有限公司的带动下，黄州萝卜生产企业和农户要加大产品的深加工，以提高黄州萝卜的附加值，达到增加经济产出、提高经济效益的目标。
“黄州萝卜”作为优秀的黄冈地方品种得到广泛推广，市场影响力日益增强。近年来该传统品种出现纯度下降甚至是品种自交退化等不良现象，因此提高和加强“黄州萝卜”纯度及生活力等任务迫在眉睫，对其开展提纯扶状工作尤为紧迫。目前还没有用于鉴定黄州萝卜品种的SSR分子标记，SSR分子标记可分析探讨供试材料的遗传多样性，筛选“黄州萝卜”特异性分子标记，可为“黄州萝卜”提纯扶壮工作提供有利工具。
技术实现要素：
本发明的目的在于解决现有技术存在的问题，提供一种用于鉴定黄州萝卜的SSR标记及方法。
本发明的目的通过下述技术方案实现：
一种用于鉴定黄州萝卜的SSR标记，为R102标记，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
扩增上述标记的引物的序列如下所示：
R102-F：gggaggaaaccggttaagaa，
R102-R：gtcccgtccatgtcgaatac；
上述SSR标记或引物在鉴定黄州萝卜中的应用。
一种鉴定黄州萝卜的方法，包括如下步骤：提取待检样品的DNA，使用上述引物进行PCR扩增，若扩增出227bp的特异条带，则判断所鉴定样品是黄州萝卜。
本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：
(1)首次开发出适用于黄州萝卜特征与纯度检测的SSR分子标记；
(2)目前能在夏抗萝卜、红宝萝卜和黄州萝卜及其它红皮、白皮萝卜等中快速检测出黄州萝卜；
(3)较形态学鉴定方法准确性大大提高。
具体实施方式
以下实施例用于进一步说明本发明，但不应理解为对本发明的限制。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。
实施例1
(1)DNA的提取：将黄州萝卜的种子放置在25℃恒温培养箱3天，待种子子叶长出后取子叶100mg叶片，提取萝卜子叶的总基因组DNA，之后用1％的琼脂糖凝胶电泳及紫外分光光度计分别检测总DNA纯度和含量。
(2)引物初步筛选：根据萝卜的SSR重复片段设计引物，以提取的基因组DNA为模板，使用所设计引物分别进行PCR扩增。
PCR体系为：12.5μL PCR Master mix(Thermo ScientificTM)、0.5μL DNA、上下游引物各1μL、10μL双蒸水。
反应程序为：94℃模板预变性5min；94℃预变性30s，55-60℃退火30s，72℃延伸30s，40个循环；最后72℃延伸10min。
PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，电泳时以600bp的DNA Marker(含有100、200、300、400、500、600bp)为对照，筛选100bp-300bp之间有清晰明显条带的引物。共筛选到25对引物，所筛选引物具体见表1。
表1引物序列
(3)黄州萝卜鉴定引物的筛选
提取不同品种萝卜(包括黄州萝卜、南畔洲萝卜、南乡萝卜、夏抗40天、双红萝卜、红宝、短叶-13、七叶红、红庙萝卜、春白一号、脉地湾萝卜、武青一号等)的基因组DNA，分别使用上述25对引物进行PCR扩增，扩增产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)，结果显示R102和R112引物能够特异性鉴定所检测样品是否为黄州萝卜。具体情况如下：
R102引物扩增结果：通过PAGE检测PCR扩增条带在黄州萝卜与其它萝卜之间的差异，唯有黄州萝卜扩增出227bp的特异条带，而其它萝卜在227bp处均没有扩增出任何条带，因此R102标记可作为鉴定出黄州萝卜的特异标记。进一步测序，结果显示该227bp特异条带序列如SEQ ID NO.1所示。
R112引物扩增结果：通过PAGE检测PCR扩增条带在黄州萝卜与其它萝卜之间的差异，上述萝卜都能够扩增出251bp的条带，但唯有黄州萝卜在400bp处扩增出不同于其它萝卜的特异条带，其它萝卜在400bp处均没扩增出任何条带，因此R112标记可作为鉴定出黄州萝卜的特异标记。
上述内容表明R102和R112标记可开发为鉴定黄州萝卜特征与纯度的SSR分子标记，R102和R112引物对可用于鉴定黄州萝卜。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 黄冈师范学院
<120> 一种用于鉴定黄州萝卜的SSR标记及方法
<160> 3
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 227
<212> DNA
<213> Raphanus sativus
<400> 1
gggaggaaac cggttaagaa gaggaagaaa ataagaagag aagaaaaagc agaagcacaa 60
ccattatcat tcctttccct caaactcaga ccttcacctt cttcttcttc ttcttcttct 120
tcttcttctt cttcttctta tcgttcttcg atctccatgg cgaatctaac aacaacgaag 180
aacgcgaaag ctcgcctgag aggcgtcgta ttcgacatgg acgggac 227
<210> 2
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
gggaggaaac cggttaagaa 20
<210> 3
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
gtcccgtcca tgtcgaatac 20