本发明涉及生物制药技术领域，尤其是涉及一种通过离子交换层析提高蛋白样品中唾液酸含量的方法。
背景技术：
唾液酸含量直接影响药物蛋白的半衰期，无唾液酸或唾液酸含量低的药物蛋白，在人体内很快被降解。因此，提高唾液酸的含量能避免药物蛋白的很快降解，延长药物蛋白的半衰期。
现有技术中，对目标蛋白进行离子交换纯化时只侧重于目标蛋白的含量及得率，忽略了对唾液酸含量的控制，纯化后的目的蛋白样本中的唾液酸无含量提升的效果。通常情况下，现有技术中下游工艺对蛋白药物唾液酸含量的提高非常有限，难以达到提高唾液酸含量的效果。
技术实现要素：
本发明所要解决的技术问题在于，提供一种离子交换层析的方法，能够提高目的蛋白的唾液酸含量。
为解决上述技术问题，本发明提供的技术方案为：一种通过离子交换层析提高唾液酸含量的方法，使用阴离子交换填料以结合洗脱的方式对目标蛋白进行纯化。
具体的，所述阴离子交换填料为poros50hq填料。
具体的，上述方法中，目标蛋白的载量为50g/l填料。
具体的，上述方法包括：
1)上样步骤，上样过程中目的蛋白与填料结合；
2)淋洗步骤，采用低盐淋洗，去除部分低唾液酸含量蛋白；
3)精细纯化，进行目标蛋白的精细纯化操作。
具体的，上述方法还包括：4)质量评估：检测目标蛋白的唾液酸含量，评估其提升效果。
具体的，所述淋洗步骤有三步淋洗操作，分别为淋洗1、淋洗2和淋洗3。其中，淋洗1溶液为50mmtris-hcl，ph8.0；淋洗2溶液为50mmtris-hcl,35mmnacl，ph8.0；淋洗3溶液为50mmtris-hcl，ph8.0。
具体的，淋洗1体积为5个柱体积；淋洗2体积为3个柱体积；淋洗3体积为3个柱体积。
具体的，洗脱峰收集范围250-250mau/mm。上样和淋洗1保留时间为≥4分钟。
本发明提供的离子交换层析的方法，能够显著的提高目标蛋白中唾液酸的含量，有利于避免药物蛋白的很快降解，延长药物蛋白的半衰期。本发明提供的方法，阴离子交换层析在对蛋白质样品进行精细纯化操作的同时也达到了显著提高唾液酸含量的效果。
附图说明
图1为本发明的一具体实施例的流程图。
图2为经本发明的方法处理前后的蛋白样品中唾液酸含量对比图。
具体实施方式
下面将对本发明的技术方案进行清楚、完整的描述，显然，所描述的实施例是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
如图1所示，为本发明的一具体实施例的流程图。该离子交换层析提高唾液酸含量的方法，包括：根据需要对层析柱进行前消毒、预平衡和平衡操作，然后进行上样，上样之后进行三步淋洗操作，然后对目标蛋白(重组蛋白)进行精细纯化操作，洗脱目标蛋白，经过0.2μm滤膜过滤，收集样品并保存。根据需要对层析柱进行再生、后消毒和保存。
本发明的离子交换层析提高唾液酸含量的以具体实施例如下：使用阴离子交换填料以结合洗脱的方式对目标蛋白(重组蛋白)进行精细纯化。层析条件如下：采用阴离子交换层析填料poros50hq；载量为50g/l填料；结束上样后有三步淋洗操作：淋洗1、淋洗2和淋洗3；淋洗1溶液为50mmtris-hcl(ph8.0)；淋洗1体积为5个柱体积；淋洗2溶液为50mmtris-hcl,35mmnacl(ph8.0)；淋洗2体积为5个柱体积；淋洗3溶液为50mmtris-hcl(ph8.0)；淋洗3体积为3个柱体积；洗脱溶液为50mmtris-hcl,200mmnacl(ph8.0)；洗脱峰收集范围250-250mau/mm；上样和淋洗1保留时间为≥4分钟。分别检测上样样品、淋洗2和洗脱样品的唾液酸含量。
如图2所示，上样样品中唾液酸含量为6.01mol/mol，收集的淋洗2中唾液酸含量为2.30mol/mol，洗脱样品中唾液酸含量为6.56mol/mol，经处理后蛋白样品中唾液酸含量提高9％以上。
综上所述，上述各实施例仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限定本发明的保护范围，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，皆应包含在本发明的保护范围内。