本发明属于医药领域，涉及一种n-(3-氮唑基苯基)异烟酰胺类化合物、含有该化合物的组合物及其制备方法。本发明还涉及这些化合物及组合物在抗痛风中的用途。
背景技术
痛风(gout)是由于长期高尿酸血症(hyperuricemia)导致尿酸盐沉积于关节和软组织而形成的一组异质性、代谢类疾病。其临床特点为：高尿酸血症，急、慢性关节炎，关节畸形，慢性间质性肾炎和肾结等，严重者还会并发肾衰竭和心脑血管病而危及生命。据统计，痛风已成为仅次于糖尿病的第二大代谢性疾病。近年来随着人民生活水平的提高和饮食结构的改变，我国的痛风发病率呈逐年上升的趋势，给社会带来了巨大的压力和沉重的经济负担。
痛风的发病机制为：当体内尿酸生成增多或排泄减少时，可导致体内尿酸水平升高，当超过其溶解限度时，尿酸会沉积于关节和软组织，引起炎症反应。尿酸是人体嘌呤代谢的最终产物。黄嘌呤氧化酶是嘌呤代谢中的一个关键酶。在嘌呤代谢的最后阶段，催化黄嘌呤和次黄嘌呤氧化生成尿酸，因此抑制黄嘌呤氧化酶的活性可以有效的减少尿酸的生成，在高尿酸血症和痛风的治疗中，黄嘌呤氧化酶抑制剂占有非常重要的地位。
目前已上市的黄嘌呤氧化酶抑制剂有别嘌醇(allopurinol)，非布司他(febuxostat)和托吡司他(topiroxostat)，种类十分有限且有一定的毒副作用，因此，研制高效低毒的黄嘌呤氧化酶抑制剂具有良好的市场前景。
在前期研究中，申请人发现了一系列的n-(3-氰基-4-烷氧基苯基)吡啶甲酰胺类化合物化合物作为xo抑制剂(cn201611206701.6；eurjmedchem,2017,141:362-372.)。然而该系列化合物由于氰基未能与asn768残基结合，故活性虽然优于别嘌醇，但是比托吡司他低了一个数量级。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种n-(3-氮唑基苯基)异烟酰胺类新化合物，所制备的化合物在体外黄嘌呤氧化酶抑制活性测试中显现出了良好的效果。本发明的另一目的在于提供所述n-(3-氮唑基苯基)异烟酰胺类新化合物的制备方法。
本发明是由如下技术方案实现的：
一种n-(3-氮唑基苯基)异烟酰胺类化合物，其特征在于：该化合物为如通式ⅰ所示的化合物；
其中：
各r1独立为2-10个碳的烷基、3-10个碳原子环烷基、烯丙基、甲氧乙基、苄基、取代苄基；取代苄基可以是卤代苄基、氰基苄基、烷氧基苄基、烷基苄基、烷氨基苄基；
各r2独立为h或1-5个碳的烷基；
各x独立为ch或n；
和各y独立为o或nh。
所述的n-(3-氮唑基苯基)异烟酰胺类化合物，其特征在于：所述通式ⅰ的化合物为下述任意一种：
n-(4-乙氧基-3-(1h-四唑-1-基)苯基)异烟酰胺(zya01)；
n-(4-正丙氧基-3-(1h-四唑-1-基)苯基)异烟酰胺(zya02)；
n-(4-异丙氧基-3-(1h-四唑-1-基)苯基)异烟酰胺(zya03)；
n-(4-正丁氧基-3-(1h-四唑-1-基)苯基)异烟酰胺(zya04)；
n-(4-异丁氧基-3-(1h-四唑-1-基)苯基)异烟酰胺(zya05)；
n-(4-仲丁氧基-3-(1h-四唑-1-基)苯基)异烟酰胺(zya06)；
n-(4-正戊氧基-3-(1h-四唑-1-基)苯基)异烟酰胺(zya07)；
n-(4-异戊氧基-3-(1h-四唑-1-基)苯基)异烟酰胺(zya08)；
n-(4-仲戊氧基-3-(1h-四唑-1-基)苯基)异烟酰胺(zya09)；
n-(4-正庚氧基-3-(1h-四唑-1-基)苯基)异烟酰胺(zya10)；
n-(4-正辛氧基-3-(1h-四唑-1-基)苯基)异烟酰胺(zya11)；
n-(4-苄氧基-3-(1h-四唑-1-基)苯基)异烟酰胺(zya12)；
n-[4-(4-氯)苄氧基-3-(1h-四唑-1-基)苯基]异烟酰胺(zya13)；
n-[4-(4-氰基)苄氧基-3-(1h-四唑-1-基)苯基]异烟酰胺(zya14)；
n-(4-甲氧乙氧基-3-(1h-四唑-1-基)苯基)异烟酰胺(zya15)；
n-(4-烯丙氧基-3-(1h-四唑-1-基)苯基)异烟酰胺(zya16)；
n-(4-环戊氧基-3-(1h-四唑-1-基)苯基)异烟酰胺(zya17)；
n-[4-(4-甲氧基)苄氧基-3-(1h-四唑-1-基)苯基]异烟酰胺(zya18)；
n-(4-正己氧基-3-(1h-四唑-1-基)苯基)异烟酰胺(zya19)；
n-(4-环己氧基-3-(1h-四唑-1-基)苯基)异烟酰胺(zya20)；
n-[4-(2-氰基)苄氧基-3-(1h-四唑-1-基)苯基]异烟酰胺(zya21)；
n-[4-(3-氰基)苄氧基-3-(1h-四唑-1-基)苯基]异烟酰胺(zya22)；
n-[4-(2-甲氧基)苄氧基-3-(1h-四唑-1-基)苯基]异烟酰胺(zya23)；
n-[4-(3-甲氧基)苄氧基-3-(1h-四唑-1-基)苯基]异烟酰胺(zya24)；
n-[4-(2-甲基)苄氧基-3-(1h-四唑-1-基)苯基]异烟酰胺(zya25)；
n-[4-(3-甲基)苄氧基-3-(1h-四唑-1-基)苯基]异烟酰胺(zya26)；
n-[4-(4-甲基)苄氧基-3-(1h-四唑-1-基)苯基]异烟酰胺(zya27)；
一种药用组合物，包含上述任何一项所述的化合物，其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物和药学上可接受的载体。
所述的化合物的制备方法，具体步骤为：
(1)以2-氨基-4-硝基苯酚为起始原料，经氮唑环合、还原，制得重要中间体4-氨基-2-(1h-氮唑-1-基)苯酚；
(2)4-氨基-2-(1h-氮唑-1-基)苯酚经异烟酰氯酰化，再经水解、烃化，得通式ⅰ所述化合物；
上述任何一种化合物、水合物或溶剂化物或药物组合物在制备抗高尿酸血症和抗痛风药物中的应用。
与现有技术相比，本发明具有如下具有效果：
本发明所提供的通式ⅰ的化合物通过引入氮唑基团，构建了与asn768残基的相互作用，与申请人已经公开的现有技术(cn201611206701.6；eurjmedchem,2017,141:362-372.)相比，分子结构创新性更强，活性大幅提升。且本发明所提供的通式ⅰ的化合物，制备方法简单可行，收率较高，易于大规模生产。
具体实施方式
本发明涉及一种n-(3-氮唑基苯基)异烟酰胺类化合物，其特征在于：该化合物为如通式ⅰ所示的化合物；
其中：
各r1独立为2-10个碳的烷基、3-10个碳原子环烷基、烯丙基、甲氧乙基、苄基、取代苄基；取代苄基可以是卤代苄基、氰基苄基、烷氧基苄基、烷基苄基、烷氨基苄基；
各r2独立为h或1-5个碳的烷基；
各x独立为ch或n；
和各y独立为o或nh。
通式ⅰ所示化合物还可以与淀粉、微晶纤维素、硬质酸镁、甘油等药学上可接受的辅料制成组合物制剂。
下面通过实施实例进一步说明该化合物的制备方法：
实施实例1
4-硝基-2-(1h-四唑-1-基)苯酚的制备
于500ml反应瓶中加入2-氨基-4-硝基苯酚(10.0g,64.88mmol)，冰乙酸(100ml)和原甲酸三乙酯(20.7g,129.67mmol)，搅拌下缓慢加入叠氮化钠(8.4g,129.67mmol)，80℃下反应过夜。反应完毕后冷却，倒入冰水中，抽滤，滤饼用大量水洗，自然干燥，得红棕色固体11.7g，收率：87.1％。
实施实例2
4-氨基-2-(1h-四唑-1-基)苯酚的制备
于250ml反应瓶中加入4-硝基-2-(1h-四唑-1-基)苯酚(6.0g,28.96mmol)，及还原铁粉(6.5g,115.84mmol)，氯化铵(3.1g,57.92mmol)，乙醇(90ml)和水(30ml)，80℃下回流反应过夜，反应完全，加水稀释，乙酸乙酯(50ml*3)萃取，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩至干得精产品4.24g，收率：82.6％。
实施实例3
4-异烟酰胺-2-(1h-四唑-1-基)苯基异烟酸甲酯的制备
于250ml反应瓶中加入4-氨基-2-(1h-四唑-1-基)苯酚(1.0g,5.64mmol)，三乙胺(5.2g,50.76mmol)和二氯甲烷(20ml)，-5℃搅拌下滴加二氯甲烷(20ml)的异烟酸酰氯(4.02g,22.56mmol)，维护温度反应1h后，加水，分出有机层，水层用二氯甲烷萃取，合并有机层，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩至干得精产品1.74g，收率：79.4％。
实施实例4
n-(4-羟基-3-(1h-四唑-1-基)苯基)异烟酰胺的制备
于100ml反应瓶中加入4-异烟酰胺-2-(1h-四唑-1-基)苯基异烟酸甲酯(2.0g,5.16mmol)，氢氧化钠(1.03g,25.80mmol)，甲醇(40ml)和水(15ml)，50℃下回流反应4h，反应完全，趁热抽滤，除去固体不溶物，用5％盐酸溶液调节ph至弱酸性，放冷析出，抽滤，滤饼烘干，得到黄色固体0.64g，收率：43.8％。实施实例5
n-(4-烷氧基-3-(1h-四唑-1-基)苯基)异烟酰胺的制备
于100ml反应瓶中加入n-(4-羟基-3-(1h-四唑-1-基)苯基)异烟酰胺(0.2g,0.708mmol)，氯代烷烃(0.85mmol)，碳酸钾(0.2g,1.416mmol)和dmf(10ml)，60℃下回流反应3h，反应完全，倒入冰水中，抽滤，滤饼自然干燥，得目标产物。
(1)n-(4-乙氧基-3-(1h-四唑-1-基)苯基)异烟酰胺(zya01)
白色固体粉末，收率：92.7％。m/z327.2[m+h]+。
(2)n-(4-正丙氧基-3-(1h-四唑-1-基)苯基)异烟酰胺(zya02)
类白色固体粉末，收率：84.4％。m/z341.2[m+h]+。
(3)n-(4-异丙氧基-3-(1h-四唑-1-基)苯基)异烟酰胺(zya03)
白色固体粉末，收率：87.3％。1hnmr(600mhz,dmso-d6)δ10.68(s,1h),9.79(s,1h),8.81(d,j＝5.4hz,2h),8.21(d,j＝2.5hz,1h),7.93(dd,j＝9.1,2.5hz,1h),7.88(d,j＝5.9hz,2h),7.44(d,j＝9.2hz,1h),4.79–4.68(m,1h),1.26(d,j＝6.0hz,6h)。
(4)n-(4-正丁氧基-3-(1h-四唑-1-基)苯基)异烟酰胺(zya04)
淡黄色固体粉末，收率：86.5％。1hnmr(600mhz,dmso-d6)δ10.68(s,1h),9.79(s,1h),8.81(d,j＝4.5hz,2h),8.20(s,1h),7.94(d,j＝8.5hz,1h),7.88(d,j＝4.4hz,2h),7.42(d,j＝9.0hz,1h),4.11(t,j＝6.1hz,2h),1.71–1.61(m,2h),1.31(dd,j＝14.6,7.3hz,2h),0.87(t,j＝7.3hz,3h)。
(5)n-(4-异丁氧基-3-(1h-四唑-1-基)苯基)异烟酰胺(zya05)
白色固体粉末，收率：82.4％。1hnmr(600mhz,dmso-d6)δ10.69(s,1h),9.79(s,1h),8.81(d,j＝5.1hz,2h),8.19(d,j＝2.5hz,1h),7.94(dd,j＝9.0,2.5hz,1h),7.89(dd,j＝4.7,1.3hz,2h),7.41(d,j＝9.1hz,1h),3.89(d,j＝6.4hz,2h),1.98(dp,j＝13.2,6.6hz,1h),0.87(d,j＝6.7hz,6h)。
(6)n-(4-仲丁氧基-3-(1h-四唑-1-基)苯基)异烟酰胺(zya06)
黄色固体粉末，收率：83.3％。1hnmr(600mhz,dmso-d6)δ10.69(s,1h),9.76(s,1h),8.81(d,j＝5.8hz,2h),8.21(d,j＝2.5hz,1h),7.93(dd,j＝9.1,2.5hz,1h),7.88(d,j＝5.9hz,2h),7.43(d,j＝9.2hz,1h),4.59–4.46(m,1h),1.64–1.52(m,2h),1.21(d,j＝6.1hz,3h),0.81(t,j＝7.4hz,3h)。
(7)n-(4-正戊氧基-3-(1h-四唑-1-基)苯基)异烟酰胺(zya07)
黄色固体粉末，收率：85.1％。1hnmr(600mhz,dmso-d6)δ10.68(s,1h),9.80(s,1h),8.81(d,j＝5.8hz,2h),8.20(d,j＝2.4hz,1h),7.94(dd,j＝9.0,2.4hz,1h),7.89(d,j＝5.8hz,2h),7.41(d,j＝9.1hz,1h),4.11(t,j＝6.4hz,2h),1.68(dd,j＝13.2,6.5hz,2h),1.27(dd,j＝8.7,5.5hz,4h),0.85(t,j＝6.8hz,3h)。
(8)n-(4-异戊氧基-3-(1h-四唑-1-基)苯基)异烟酰胺(zya08)
淡黄色固体粉末，收率：90.8％。1hnmr(600mhz,dmso-d6)δ10.68(s,1h),9.79(s,1h),8.81(d,j＝4.2hz,2h),8.21(d,j＝2.4hz,1h),7.94(dd,j＝9.0,2.3hz,1h),7.89(d,j＝5.6hz,2h),7.43(d,j＝9.1hz,1h),4.14(t,j＝6.3hz,2h),1.65–1.55(m,3h),0.86(d,j＝6.3hz,6h)。
(9)n-(4-仲戊氧基-3-(1h-四唑-1-基)苯基)异烟酰胺(zya09)
深黄色固体粉末，收率：89.1％。m/z369.2[m+h]+。
(10)n-(4-正庚氧基-3-(1h-四唑-1-基)苯基)异烟酰胺(zya10)
类白色固体粉末，收率：80.0％。m/z397.2[m+h]+。
(11)n-(4-正辛氧基-3-(1h-四唑-1-基)苯基)异烟酰胺(zya11)
白色固体粉末，收率：77.3％。1hnmr(600mhz,dmso-d6)δ10.68(s,1h),9.79(s,1h),8.81(dd,j＝4.5,1.5hz,2h),8.21(d,j＝2.5hz,1h),7.94(dd,j＝9.1,2.5hz,1h),7.89(dd,j＝4.5,1.5hz,2h),7.41(d,j＝9.1hz,1h),4.10(t,j＝6.4hz,2h),1.70–1.64(m,2h),1.28–1.19(m,10h),0.86(t,j＝7.1hz,3h)。
(12)n-(4-苄氧基-3-(1h-四唑-1-基)苯基)异烟酰胺(zya12)
黄色固体粉末，收率：88.6％。1hnmr(600mhz,dmso-d6)δ10.72(s,1h),9.85(s,1h),8.81(d,j＝4.9hz,2h),8.23(d,j＝2.5hz,1h),7.95(dd,j＝9.1,2.5hz,1h),7.89(d,j＝5.9hz,2h),7.51(d,j＝9.1hz,1h),7.39(s,2h),7.38(d,j＝1.5hz,2h),7.36–7.31(m,1h),5.27(s,2h)。
(13)n-[4-(4-氯)苄氧基-3-(1h-四唑-1-基)苯基]异烟酰胺(zya13)
褐色固体粉末，收率：76.7％。m/z423.2[m+h]+。
(14)n-[4-(4-氰基)苄氧基-3-(1h-四唑-1-基)苯基]异烟酰胺(zya14)
黄色固体粉末，收率：81.1％。m/z414.2[m+h]+。
(15)n-(4-甲氧乙氧基-3-(1h-四唑-1-基)苯基)异烟酰胺(zya15)
浅黄色固体粉末，收率：76.8％。m/z357.2[m+h]+。
(16)n-(4-烯丙氧基-3-(1h-四唑-1-基)苯基)异烟酰胺(zya16)
白色固体粉末，收率：84.2％。m/z339.2[m+h]+。
(17)n-(4-环戊氧基-3-(1h-四唑-1-基)苯基)异烟酰胺(zya17)
白色固体粉末，收率：78.3％。1hnmr(600mhz,dmso-d6)δ10.69(s,1h),9.75(s,1h),8.81(d,j＝5.7hz,2h),8.21(d,j＝2.4hz,1h),7.93(dd,j＝9.0,2.5hz,1h),7.88(d,j＝5.8hz,2h),7.41(d,j＝9.1hz,1h),5.04–4.84(m,1h),1.87(dd,j＝13.9,5.7hz,2h),1.73–1.63(m,2h),1.54(t,j＝7.1hz,4h)。
(18)n-[4-(4-甲氧基)苄氧基-3-(1h-四唑-1-基)苯基]异烟酰胺(zya18)
黄色固体粉末，收率：75.7％。m/z419.2[m+h]+。
(19)n-(4-正己基-3-(1h-四唑-1-基)苯基)异烟酰胺(zya19)
淡黄色固体粉末，收率：80.2％。1hnmr(600mhz,dmso-d6)δ10.68(s,1h),9.80(s,1h),8.81(d,j＝5.8hz,2h),8.20(d,j＝2.4hz,1h),7.94(dd,j＝9.0,2.4hz,1h),7.89(d,j＝5.9hz,2h),7.41(d,j＝9.1hz,1h),4.11(t,j＝6.4hz,2h),1.70–1.63(m,2h),1.29–1.20(m,6h),0.84(t,j＝6.8hz,3h)。
(20)n-(4-环己氧基-3-(1h-四唑-1-基)苯基)异烟酰胺(zya20)
白色固体粉末，收率：89.2％。。m/z381.2[m+h]+。
(21)n-[4-(2-氰基)苄氧基-3-(1h-四唑-1-基)苯基]异烟酰胺(zya21)
黄色固体粉末，收率：76.9％。m/z414.2[m+h]+。
(22)n-[4-(3-氰基)苄氧基-3-(1h-四唑-1-基)苯基]异烟酰胺(zya22)
褐色固体粉末，收率：72.2％。m/z414.2[m+h]+。
(23)n-[4-(2-甲氧基)苄氧基-3-(1h-四唑-1-基)苯基]异烟酰胺(zya23)；
黄色固体粉末，收率：79.3％。1hnmr(600mhz,dmso-d6)δ10.72(s,1h),9.73(s,1h),8.82(d,j＝4.1hz,2h),8.24(d,j＝2.5hz,1h),7.96(dd,j＝9.1,2.5hz,1h),7.90(d,j＝5.8hz,2h),7.53(d,j＝9.1hz,1h),7.37–7.32(m,1h),7.30(d,j＝7.4hz,1h),7.05(d,j＝8.2hz,1h),6.94(t,j＝7.4hz,1h),5.23(s,2h),3.80(s,3h)。
(24)n-[4-(3-甲氧基)苄氧基-3-(1h-四唑-1-基)苯基]异烟酰胺(zya24)
深黄色固体粉末，收率：74.6％。m/z419.2[m+h]+。
(25)n-[4-(2-甲基)苄氧基-3-(1h-四唑-1-基)苯基]异烟酰胺(zya25)
黄色固体粉末，收率：78.3％。m/z403.2[m+h]+。
(26)n-[4-(3-甲基)苄氧基-3-(1h-四唑-1-基)苯基]异烟酰胺(zya26)
黄色固体粉末，收率：76.9％。1hnmr(600mhz,dmso-d6)δ10.72(s,1h),9.85(s,1h),8.81(dd,j＝4.5,1.4hz,2h),8.23(d,j＝2.5hz,1h),7.95(dd,j＝9.1,2.6hz,1h),7.89(dd,j＝4.5,1.5hz,2h),7.50(d,j＝9.1hz,1h),7.26(t,j＝7.8hz,1h),7.17(d,j＝7.2hz,2h),7.14(d,j＝7.5hz,1h),5.22(s,2h),2.30(s,3h)。
(27)n-[4-(4-甲基)苄氧基-3-(1h-四唑-1-基)苯基]异烟酰胺(zya27)
深黄色固体粉末，收率：80.5％。1hnmr(600mhz,dmso-d6)δ10.69(s,1h),9.81(s,1h),8.81(d,j＝5.6hz,2h),8.21(d,j＝2.4hz,1h),7.93(dd,j＝9.1,2.5hz,1h),7.88(d,j＝5.9hz,2h),7.50(d,j＝9.1hz,1h),7.27(d,j＝7.9hz,2h),7.18(d,j＝7.8hz,2h),5.20(s,2h),2.29(s,3h)。
实施实例6目标化合物的黄嘌呤氧化酶抑制活性研究。
(1)试验材料
试剂：黄嘌呤氧化酶(frombovin,sigma)、黄嘌呤、磷酸二氢钾、氢氧化钠。仪器：电子分析天平(ar1140型)、电热恒温水浴锅(dk-98-1型)、uv2100
型紫外可见分光光度仪。
(2)实验方法
反应稀释液：50mm的磷酸钾缓冲液，ph值7.4。
样品配制：准确称取10μmmol的样品，加100μl的dmso溶解，然后加900ml的pbs得10mm的母液。
黄嘌呤底物的配制：准确称取9.127mg黄嘌呤，加少量naoh溶液溶解，再加pbs溶液稀释至100ml定容(每天现配)。
实验步骤：反应体系中依次加入黄嘌呤氧化酶(反应浓度1.4u/l)、受试药物(阳性药物采用别嘌醇)，25℃孵育15min后加入黄嘌呤底物(反应浓度86μm)，反应60min后测294nm吸光度值。每个样品平行操作3次，分别记录反应速率，取平均值计算样品的抑制率。
空白对照组不加黄嘌呤氧化酶，加与样品同样体积的pbs，记录吸光度的变化作为空白对照。
根据下列公式计算样品对xod的抑制率:
式中a样、a阴、a样空、a阴空:分别表示样品、空白对照、xod对照品和酶对照品的吸收峰值。测试结果见表1。实验结果表明，本发明涉及的化合物均具有很好的xo抑制剂活性。
表1系列在4.17μm下的抑制活性
实施实例7与化合物anp07和anp21的活性对比研究。
n-(3-氰基-4-烷氧基苯基)吡啶甲酰胺类是由申请人公开或报道xo抑制剂(cn201611206701.6；eurjmedchem,2017,141:362-372.)，其中活性最好的化合物分别为anp07和anp21，它们的分子结构如下：
实验步骤：反应体系中依次加入黄嘌呤氧化酶(反应浓度1.4u/l)、受试药物(终浓度分别为4.17μm，0.52μm，0.25μm)，25℃孵育15min后加入黄嘌呤底物(反应浓度86μm)，反应60min后测294nm吸光度值。每个样品平行操作3次，分别记录反应速率，取平均值计算样品的抑制率。活性对比研究结果见表2。由表2可以发现该发明代表化合物zya19,zya23和zya27的xo抑制活性远优于anp21和anp07。该发明中化合物无论分子结构方面还是药理活性方面均有显著的优势。
表2不同化合物在4.17μm，0.52μm，0.25μm浓度下的xo抑制活性