本发明涉及一种制备p-[[[1-[(2-氨基-9h-嘌呤-9-基)甲基]环丙基]氧基]甲基]-磷酸(贝西福韦，besifovir)的方法，本发明还涉及新的中间体。
背景技术：
乙型肝炎是由乙型肝炎病毒引起的，可通过血液传播，母婴传播，性传播，皮肤粘膜破损传播。目前治疗慢性乙肝的药物可以分为核苷类似物和免疫抑制剂。核苷类抗乙肝病毒药物主要作用机制是抑制hbv病毒聚合酶的活性，通过竞争抑制作用阻止内源性核苷酸参与hbvdna复制，无法完全杀死乙肝病毒，因此抗乙肝病毒药物易具有停药反跳和易出现耐药的副作用，同时也会造成病人负担长时间的治疗。因此在当前慢性乙型肝炎治疗中，迫切需要新的药物解决这些问题。
贝西福韦酯是一种新型口服核苷类似物抗病毒药物，细胞水平的研究表明其肾毒性是阿德福韦酯的1/45，临床试验表明，该药抑制hbv活性是阿德福韦酯的100倍，而且具有良好的安全性，无明显的不良反应。而贝西福韦是目前合成贝西福韦酯的关键中间体，关于该化合物的制备，目前已公开了四种合成路线：
路线一(专利文献cn1487949a):
该路线中由化合物3制备化合物4的过程中使用了价格昂贵的溴甲基膦酸二异丙酯，同时由化合物6制备化合物7的过程中会生成杂质ⅰ和杂质ⅱ，纯化困难。
路线二(专利文献cn101061128b)：
该路线中，由化合物1制备化合物5的过程中，采用了另外一种羟基保护试剂三苯甲基氯，之后的步骤与路线一一致。路线一存在的问题依然存在。
路线三(专利文献wo2005058926a1)：
该路线通过重构嘌呤环的方法能够避免杂质ⅰ和杂质ⅱ的生成，但该路线采用了极易爆炸的叠氮钠，存在安全隐患；同时在由化合物14制备化合物15时采用了价格昂贵的2,5-二氨基-4,6-二氯嘧啶，增加了实验成本。
路线四(专利文献cn106432330a):
该路线相对路线三避免了叠氮钠的使用，但还是采用了价格昂贵的2,5-二氨基-4,6-二氯嘧啶，增加了实验成本。
技术实现要素：
本发明对现有技术进行了优化，采用了新的方法降低了纯化难度，提高了产率，降低了成本。
因此，本发明的一个目的在于提供一种制备贝西福韦的新的方法。
本发明的另一个目的是提供在制备贝西福韦的过程中得到的新的中间体。
本发明提供的一种制备贝西福韦的新的方法的合成路线如下所示：
具体而言，本发明提供一种制备p-[[[1-[(2-氨基-9h-嘌呤-9-基)甲基]环丙基]氧基]甲基]-磷酸的方法，该方法包含以下步骤：
1)使下式(1)的化合物
与叔丁基二苯基氯硅烷反应制备下式(2)的2-((叔丁基(二苯基)甲硅烷基)氧基)乙酸乙酯，
2)式(2)化合物与乙基溴化镁反应制备固体形式的下式(3)的1-((叔丁基(二苯基)甲硅烷基)氧基)环丙醇，
3)式(3)化合物在叔丁醇锂作为碱的条件下与对甲苯磺酰氧甲基膦酸二乙酯反应制备下式(23)的1-((叔丁基(二苯基)甲硅烷基)氧基)环丙氧甲基膦酸二乙酯，
4)式(23)化合物经氟化铵水解制备下式(24)的1-(羟甲基)环丙氧甲基膦酸二乙酯，
5)式(24)化合物与下式(28)化合物反应制备固体形式的下式(22)的1-((2-氨基-6-氯-9h-嘌呤-9-基)甲基)环丙氧甲基膦酸二乙酯，
6)式(22)化合物在催化剂和供氢体的条件下还原脱氯制备固体形式的下式(25)的1-((2-氨基-9h-嘌呤-9-基)甲基)环丙氧甲基膦酸二乙酯，
7)式(25)化合物经三甲基溴硅烷水解制备下式(9)的贝西福韦，即p-[[[1-[(2-氨基-9h-嘌呤-9-基)甲基]环丙基]氧基]甲基]-磷酸。
其中所述步骤5)中采用的试剂为三苯基膦，偶氮二甲酸二异丙酯及三氟乙酸。
其中所述步骤6)中所用的供氢体为甲酸铵。
其中所述步骤6)中，将最后得到的产物在乙酸乙酯溶液中搅拌打碎，，过滤得到白色固体形式的25。
本发明还提供下式(23)所示的化合物，
本发明还提供下式(24)所示的化合物：
每种反应物的优选用量和反应条件将会在下面进行详细说明。
本发明提供一种由化合物1制备贝西福韦的新方法，这将会在下面的实施例中进行详细描述。然而这些实施例只是对本发明的举例说明，而不是通过任何方式对本发明的范围进行限定。
实施例：
步骤一：2-((叔丁基(二苯基)甲硅烷基)氧基)乙酸乙酯(2)的制备：
将1(100.0g,960.52mmol)和咪唑(77.3g,1.15mol)溶于二氯甲烷(1.5l)中，冰浴条件下用恒压滴液漏斗缓慢滴加叔丁基二苯基氯硅烷(264.0g,960.52mmol)。滴加完毕后，转移至室温反应16h。过滤，滤液用1.0mol/l的盐酸溶液(300ml×2)清洗，二氯甲烷层用饱和碳酸氢钠溶液(100ml×2)清洗，无水硫酸钠干燥，浓缩得白色透明液体2(297.7g,91％)。esi-ms(m/z):365.1564[m+na]+；1hnmr(300mhz,cdcl3)δ：7.87～7.76(m,4h),7.47(q,j＝5.4hz,6h),4.35(s,2h),4.22(q,j＝7.1hz,2h),1.28(t,j＝7.1hz,3h),1.21(s,9h)；13cnmr(75mhz,cdcl3)δ：171.2,135.7,132.9,130.0,127.9,62.4,60.7,26.8,19.4,14.2。
步骤二：1-((叔丁基(二苯基)甲硅烷基)氧基)环丙醇(3)的制备：
氮气保护下向500.0ml三口圆底烧瓶中加入2(20.0g,58.73mmol)和重蒸thf(250.0ml)；于-15℃条件下依次缓慢滴加钛酸四异丙酯(3.3g,11.75mmol)和乙基溴化镁(70.5ml,140.95mmol)(2.0mol/linthf)。滴加完毕，转移至室温反应4h。饱和氯化铵(100ml)淬灭反应，乙酸乙酯萃取(100ml×3)，合并有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，油泵抽干，正己烷(20ml)重结晶得白色透明固体3(14.4g,75％)。esi-ms(m/z):349.1626[m+na]+；1hnmr(300mhz,cdcl3)δ:7.75～7.70(m,4h),7.49～7.40(m,6h),3.73(s,2h),1.12(s,9h),0.82(t,j＝6.5hz,2h),0.48(t,j＝6.5hz,2h)；13cnmr(75mhz,cdcl3)δ:135.6,133.4,129.8,127.8,69.4,56.5,26.9,19.4,11.4。
步骤三：1-((叔丁基(二苯基)甲硅烷基)氧基)环丙氧甲基膦酸二乙酯(23)的制备：
取干燥的三口圆底烧瓶，加入无水碘化锂(630.9mg,4.71mmol)，氮气保护，无水dmf转移化合物3(20.5g,62.90mmol)于烧瓶中，然后将烧瓶置于60℃油浴锅中，同时缓慢滴加对甲苯磺酰氧甲基膦酸二乙酯(20.3g,62.90mmol)和叔丁醇锂(45.7ml,100.64mmol)(2.2mol/linthf)。滴加完毕，恒温反应4h。饱和氯化铵(100ml)淬灭反应，过滤，滤液用乙酸乙酯萃取(100ml×3)，饱和氯化钠溶液(50ml×3)清洗有机层，无水硫酸钠干燥有机层，过滤，浓缩得红棕色液体23(26.3g,83％)。esi-ms(m/z):499.2036[m+na]+；1hnmr(300mhz,cdcl3)δ:7.75～7.64(m,4h),7.49～7.35(m,6h),4.16(dq,j＝14.2,7.1hz,4h),4.05(d,j＝9.3hz,2h),3.80(s,2h),1.33(t,j＝7.1hz,6h),1.08(s,9h),0.90(q,j＝5.5hz,2h),0.56(q,j＝5.5hz,2h)；13cnmr(75mhz,cdcl3)δ:135.6,133.2,129.8,127.8,67.2,64.9,64.7,62.45,62.4,26.8,19.2,16.4,11.0。
步骤四：1-(羟甲基)环丙氧甲基膦酸二乙酯(24)的制备：
单口瓶中加入23(15.0g,31.50mmol)，氟化铵(4.7g,125.99mmol)，用100ml甲醇溶解，置于油浴锅中加热回流。点板监测反应完后，过滤，浓缩滤液，经快速硅胶纯化得红棕色液体24(6.7g,89％)。esi-ms(m/z):239.1047[m+h]+；1hnmr(300mhz,cdcl3)δ：4.35(s,1h),4.01(d,j＝5.6hz,4h),3.80(dd,j＝8.1,3.7hz,2h),3.51(s,2h),1.18(t,j＝7.1hz,6h),0.72(s,2h),0.48(s,2h)；13cnmr(75mhz,cdcl3)δ：65.4,63.7,62.6,62.5,61.5,16.3,16.2,11.0。
步骤五：1-((2-氨基-6-氯-9h-嘌呤-9-基)甲基)环丙氧甲基膦酸二乙酯(22)的制备：
取干燥三口瓶，加入化合物24(10g,419.78mmol)，化合物28(11.3g,419.78mmol)，三苯基膦(13.2g,503.74mmol)后用无水thf(200ml)溶解，除氧，置于-30℃条件下，缓慢滴加diad(10.1g,503.74mmol)；滴加完毕转移至室温反应1h。加水(50ml)，用乙酸乙酯萃取(50ml×3)，有机层用饱和氯化钠溶液(50ml×2)清洗后用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，快速硅胶纯化除去三苯基氧膦，得到的产物用二氯甲烷40ml溶解，加入三氟乙酸(dcm:tfa＝2：1)，室温反应1h，加入饱和碳酸氢钠溶液(150ml)调至碱性，二氯甲烷(100ml×3)萃取，饱和氯化钠溶液(100ml)清洗有机层一次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得黄棕色油状物质，加入乙酸乙酯，打浆，过滤得到白色固体6(10.3g,63％)。esi-ms(m/z):390.1092[m+h]+；1hnmr(300mhz,cdcl3)δ：8.10(s,1h),5.34(s,2h),4.21(s,2h),4.15～4.03(m,4h),3.89(d,j＝10.3hz,2h),1.27(t,j＝7.1hz,6h),1.02(t,j＝6.4hz,2h),0.86(t,j＝6.5hz,2h)；13cnmr(75mhz,cdcl3)δ:159.2,154.2,151.1,143.0,124.9,64.0,63.8,62.7,62.6,60.9,46.4,16.4,16.4,12.6。
步骤六：1-((2-氨基-9h-嘌呤-9-基)甲基)环丙氧甲基膦酸二乙酯(25)的制备：
化合物22(5.0g,12.85mmol)溶于100.0ml甲醇中，加入500mgpd/c和甲酸铵(4.1g,64.25mmol)，室温搅拌反应。硅藻土过滤，浓缩，二氯甲烷(30ml)洗涤，洗涤液浓缩，加入乙酸乙酯(20ml)超声，过滤，得白色固体化合物25(4.2g,92％)。esi-ms(m/z):378.1272[m+na]+；1hnmr(300mhz,cdcl3)δ：8.68(s,1h),8.08(s,1h),5.16(s,2h),4.23(s,2h),4.09(p,j＝7.2hz,4h),3.90(d,j＝10.3hz,2h),1.27(t,j＝7.1hz,6h),1.03(t,j＝6.4hz,2h),0.87(t,j＝6.5hz,2h)；13cnmr(75mhz,cdcl3)δ：159.9,153.5,149.6,143.0,127.9,64.0,63.8,63.1,62.8,62.6,60.8,45.8,16.4,16.3,12.3。
步骤七：p-[[[1-[(2-氨基-9h-嘌呤-9-基)甲基]环丙基]氧基]甲基]-磷酸(贝西福韦，besifovir)的制备：
化合物25(5.0g,14.07mmol)溶于无水二氯甲烷(20ml)中，于冰浴条件下缓慢滴加三甲基溴硅烷(10.8g,70.35mmol)，滴加完毕转移至室温反应16h。直接旋干溶剂，然后依次分别加入二氯甲烷(30ml×2)，甲醇(30ml×2)，旋干，得到微黄色固体。甲醇重结晶得白色固体9(3.8g,90％)。esi-ms(m/z):300.0863[m+h]+；1hnmr(300mhz,dmso)δ：9.02(s,1h),8.75(s,1h),4.33(s,2h),3.75(d,j＝10.2hz,2h),0.90(s,4h)；13cnmr(75mhz,dmso)δ：157.7,154.4,150.6,139.1,126.0,64.6,63.5,63.3,62.5,46.4,12.1。
步骤八：(2-氨基-6-氯-9h-嘌呤-9-基)甲酸叔丁酯(27)的制备：
于单口瓶中加入化合物26(20g,117.95mmol)，二碳酸二叔丁酯(25.7g,117.95mmol)，dmf(200ml)；冰浴条件下加入dmap(720.5mg,5.90mmol)；待溶液变澄清，加水(30ml)，过滤，滤饼用水(60ml)清洗，干燥得白色固体27(33.2g,94％)。esi-ms(m/z):292.0572[m+na]+；1hnmr(300mhz,cdcl3)δ:8.11(s,1h),6.20(s,2h),1.64(s,9h)；13cnmr(75mhz,cdcl3)δ:160.7,153.3,152.2,145.5,140.0,125.2,87.1,27.9。
步骤九：2-(n-叔丁氧羰基)氨基-6-氯嘌呤(28)的制备：
化合物27(20g,74.16mmol)用无水thf(300ml)溶解后，于冰浴条件下缓慢加入nah(6.7g,166.86mmol)(60％dispersioninmineraloil)，加完后氮气保护，室温反应2h。加入饱和碳酸氢钠溶液(50ml)，过滤，滤液旋干，除去其中的thf,残余浓缩液中加入乙酸乙酯(30ml)，过滤，滤饼用乙酸乙酯(60ml)洗涤，干燥得白色固体11(18.2g；91％)。esi-ms(m/z):292.0570[m+na]+；1hnmr(300mhz,dmso)δ：13.61(s,1h),10.25(s,1h),8.46(s,1h),1.46(s,10h)；13cnmr(75mhz,dmso)δ：155.00,152.80,151.37,148.80,145.24,126.65,79.86,28.30.
如以上所解释的那样，当使用对甲苯磺酰氧甲基膦酸二乙酯代替溴甲基膦酸二异丙酯时，反应能顺利进行，这就大大降低了实验成本。在由化合物24制备化合物22过程中，对2-氨基-6-氯嘌呤的2位氨基进行保护，然后经mitsunobu反应，能有效地避免杂质杂质ⅰ和杂质ⅱ生成，产率由33％提升至63％,最终采用打浆的方法得到化合物22，简化了纯化操作，节约了成本。在由化合物22制备化合物25的过程中，用pd/c和甲酸铵参与还原反应代替pd/c+h2，结果显示反应能高产率地进行，反应条件更加温和，这就避免了使用氢气，给工业化生产带来安全隐患。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施例对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。