一种弓形虫棒状体蛋白ROP18的单克隆抗体、分泌该抗体的细胞株及其用途的制作方法

本发明涉及一种弓形虫棒状体蛋白rop18的单克隆抗体、分泌该抗体的细胞株及其用途，属于免疫检测技术领域。

背景技术

弓形虫是一种人兽间广为流行的胞内寄生原虫，其感染严重危害人类健康和畜牧业的发展。虽然弓形虫属下仅刚地弓形虫(t.gondii)一个虫种，但世界各地的弓形虫存在着丰富的遗传多样性type1，type2和type3是流行于北美和欧洲的三个经典基因型，其在小鼠体内表现为强、中、弱不同的毒力特征，寻找与弓形虫基因型/虫株毒力相关的效应分子及其作用机制是近年本领域的研究热点。

弓形虫棒状体蛋白18(rhoptryprotein18，rop18)是目前公认的与经典基因型弓形虫毒力相关的效应分子之一，该蛋白通过与宿主不同分子相互作用，帮助虫体逃脱机体的免疫清除并促进其在体内的增殖，同时也参与机体的不同发病环节，因而该蛋白已成为疾病诊断、疫苗研制和抗弓形虫药物重要的靶点。

和多克隆抗体相比，单克隆抗体具有高特异性、高均一性的特点。虽然rop18已成为弓形虫研究领域的“明星分子”，但遗憾的是，迄今尚没有商业化的rop18单克隆抗体问世，限制了对其分子作用机制和临床应用的进一步研究。

技术实现要素：

本发明旨在提供一种弓形虫棒状体蛋白rop18的单克隆抗体、分泌该抗体的细胞株及其用途。本发明以弓形虫棒状体蛋白rop18为靶点，致力于研究其单克隆抗体，建立间接酶联免疫法筛选和抗原表位初步鉴定，为进一步研究奠定了基础。

本发明弓形虫棒状体蛋白rop18的单克隆抗体细胞株，为杂交瘤细胞株t2，由中国典型培养物保藏中心保藏，地址：中国·武汉·武汉大学，保藏编号为cctccno：c2018115，保藏日期为2018年7月10日。

本发明弓形虫棒状体蛋白rop18的单克隆抗体，由所述弓形虫棒状体蛋白rop18的单克隆抗体细胞株分泌产生。

所述单克隆抗体的重链可变区cdr包括包括三个互补决定区cdr1～cdr3：cdr1的氨基酸序列如seqidno：1所示，cdr2的氨基酸序列如seqidno：2所示，cdr3的氨基酸序列如seqidno：3所示。

所述单克隆抗体的轻链可变区cdr包括三个互补决定区cdr1～cdr3：cdr1的氨基酸序列如seqidno：4所示，cdr2的氨基酸序列如seqidno：5所示，cdr3的氨基酸序列如seqidno：6所示。

本发明弓形虫棒状体蛋白rop18的单克隆抗体的用途，是在制备检测弓形虫棒状体蛋白18抗原试剂中的应用。

本发明通过细胞融合技术制备了一株鼠源的弓形虫棒状体蛋白rop18单克隆抗体细胞株t2，该细胞株分泌的单克隆抗体经过间接竞争酶联免疫法筛选和抗原表位初步鉴定，为进一步的临床应用奠定基础。

附图说明

图1为重组质粒双酶切鉴定。从图1中可以看出rop18基因正确插入pet28a载体。

图2为pet28a-rop18的优化表达。从图2中可以看出优化后的rop18基因在原核载体高效表达。

图3为his亲和层析柱纯化后融合蛋白。从图3中可以看出纯化后得到高纯度his-rop18蛋白。

图4为rop18融合蛋白的western-blot检测。从图4中可以看出his-rop18蛋白能被his单抗特异性识别，表明重组蛋白表达正确。

图5为杂交瘤细胞亚克隆。图中a培养10天单克隆、b培养14天单克隆、c培养18天单克隆、d培养20天单克隆。从图5中可以看出获得单克隆杂交瘤细胞株。

图6为抗体效价测定。从图6中可以看出获得了高效价单克隆抗体。

图7为亚型鉴定。从图7中可以看出t2株单克隆抗体的亚型为igm/κ型。

图8为染色体分析。从图8中可以看出筛选到的杂交瘤细胞株符合骨髓瘤细胞和脾细胞融合的染色体特征。

图9为抗体westernblot鉴定。从图9中可以看出rop18t2单克隆抗体能特异性识别天然rop18蛋白。

图10为抗原表位识别。从图10中可以看出rop18t2株单克隆抗体所识别的抗原表位所在位置。

具体实施方式

实施例1：构建pet28a-rop18重组质粒

1、密码子优化rop18，合成优化后的基因rop18u

运用上海捷瑞生物工程有限公司的optigene^tm密码子优化分析平台对rop18编码基因进行密码子优化，合成优化后的全长基因rop18u。

2、rop18基因和pet28a的双酶切与酶连

使用限制性内切酶bamhi和sali对rop18基因和pet28a进行双酶切，配制双酶切反应体系37℃水浴反应过夜。

双酶切反应体系：

酶切后电泳回收纯化，使用t4dna连接酶酶连rop18基因和pet28a，保持插入片段与载体片段的摩尔比例在3:1～7:1之间，配制酶连反应体系16℃反应过夜。

酶连反应体系：

3、rop18重组质粒转化大肠埃希菌bl21(de3)

a、制备bl21(de3)感受态：

①接种bl21(de)于2mllb培养液中，37℃，220rpm摇菌过夜；

②取0.25ml菌液至25mllb培养液中，继续摇菌4～6h至od600达到0.6，将所有菌液转移至50ml离心管内，冰浴10min；

③4℃，3000g离心10min，弃尽上清，缓慢加入20ml0.1mol/l预冷cacl2轻轻悬浮菌体，冰浴30min；

④4℃，3000g离心10min，弃尽上清，缓慢加入2ml含15％甘油的0.05mol/l预冷cacl2轻轻悬浮菌体；

⑤分装于1.5mlep管中，每管200ul，冰浴1～2h后于-80℃保存。

b、bl21(de3)的化学转化：

①-80℃取出bl21(de3)感受态，冰上溶化后静置10min；

②取10ul重组质粒加入bl21(de3)感受态悬液中，轻轻混匀，冰上静置30～45min，每隔10-15min轻轻摇晃一次；

③将ep管置于42℃水浴中反应90s，期间勿摇晃ep管；

④即刻将ep管转移至冰浴中，静置3～5min；

⑤加入600ullb培养液，轻轻混匀后将ep管转移至摇床上，37℃，150rpm温育1h，使菌体恢复正常状态；

⑥3000g离心3min，留下100ul上清，置于冰上吹打混匀；

⑦涂布棒将其涂布于含有amp的lb平板上，将平板置于室温至液体被吸收后，翻板，将平板置于37℃温箱中温育12～16h；

⑧在培养后的平板上挑取多个单菌落至多份lb-a培养液中继续培养即可获得rop18的重组菌。

4、rop18阳性克隆的筛选与保种

转化至bl21(de3)后，将获得的重组菌同上方法继续培养，取部分菌液提取质粒后进行pcr、双酶切和测序鉴定，正确无误后取500ul菌液与30％甘油1:1无菌混合，保存于-80℃备用。

实施例2：免疫蛋白的表达和纯化

1、重组蛋白诱导表达

①将试验所用的离心管、微量移液器、枪头、试管架、酒精灯、打火机、lb培养基、卡那霉素放置工作台紫外灯照30min。

②在酒精灯旁用1000μl微量移液器吸取3mllb到15ml离心管中再用20μl微量移液器吸取3.5μl卡那霉素到离心管中。

③从-80℃冰箱里取出菌种置于冰盒上，用20μl微量移液器吸取20μl菌液到离心管中，迅速将菌放回-80℃冰箱。将离心管做好标记置于37℃，220rpm摇床摇菌过夜13h。

④取小摇菌液2ml，加入到200mllb培养基中(加入200μl卡那霉素)继续摇菌，当菌液od值为600时(对数期)取出1ml菌液作诱导前组，剩下的加入iptg诱导剂200μl(220rpm、37℃)。

⑤将剩下的菌液4000rpm离心10min，弃去上清，沉淀用10mlpbs重悬。

⑥超声破碎(400w，超3s停3s，6min一个循环，共两个循环)。破碎后取1ml12000转离心将上清与沉淀分开，将上清吸取到新离心管中沉淀用1mlpbs重悬。

上清、沉淀各取160μl到新离心管中，各加入40μl5×buffer，混匀。

⑦将每次取样的离心管12000rpm离心1min，弃去上清每支离心管加入140μl1×buffer，将全部样品在微波炉中沸水煮10min。

2、细菌总蛋白的sds-page电泳

①胶模固定：将两块干净的玻璃板对齐夹好。将胶模装入电泳槽固定好。加水进行5min检漏。

②制备分离胶：按分离胶配制方法配好10％分离胶，用1ml微量移液器缓慢注入胶模中，离梳子下缘1cm处(占玻璃板的2/3)停止注入，为防止氧气扩散到凝胶中抑制聚合作用，沿玻璃板壁轻轻加一层去离子水层，室温下聚合40min。

③待聚合完成后，分离胶上层成一直线，倒去上面的去离子水，用吸水纸吸去残留的水分，然后加入5％的浓缩胶，插入样品梳子，注意避免汽泡出现，把凝胶垂直放置于室温下等待聚合。

④室温30min即可聚合完成，小心拔下梳子，将凝胶固定放置在电泳装置中，加入电泳缓冲液。

⑤把蛋白marker和煮沸过的样品上样。

⑥电泳：55v电压，恒压电泳30min。当样品迁移到上层浓缩胶与下层分离胶的分界处，把电压调到110v，然后继续电泳2h左右。溴酚蓝迁移到下层分离胶底边，应停止电泳。打开电泳装置，卸下玻璃板，用剥胶板小心剥下凝胶，切去浓缩胶。把分离胶用考马斯亮蓝进行染色。

⑦把分离胶置于含考马斯亮蓝染色的容器中缓慢摇动2h进行染色。

⑧弃去染色液，用水洗一次，再加入脱色液，继续缓慢摇动2h。倒掉脱色液，再加新的脱色液，直到脱色完成。

⑨观察诱导表达的结果。

3、目的蛋白的诱导表达条件优化

①最佳诱导时间的选择

在诱导温度(37.0℃)等相同的条件下，iptg诱导后的培养时间分别选取为2h、3h、4h和5h。对不同时机诱导的样品分别取1ml菌液行sds-page电泳，用空白菌株和未诱导的大肠埃希菌做对照，分析不同诱导时间条件下目的蛋白表达情况。

②最佳诱导温度的选择

在诱导物浓度(1mmol/l)、诱导时间(4h)相同的条件下，选取4个不同的温度梯度30℃、32℃、34℃和37℃对表达菌进行诱导表达。对不同诱导时间样品分别取1ml菌液行sds-page电泳，以空白菌株和未诱导的大肠埃希菌做对照，分析不同诱导温度条件下目的蛋白表达情况。

③最佳超声破碎时间的选择

在诱导物浓度(1mmol/l)、诱导时间(4h)、诱导温度(37.0℃)相同的条件下，诱导表达蛋白后超声破碎(400w，超3s停3s，6min一个循环，共两个循环，破碎时第2、4、6、8、10、12min取1ml到ep管中)，对不同超声破碎时间样品分别取1ml菌液行sds-page电泳，以空白菌株和未诱导的大肠埃希菌做对照，分析不同超声破碎时间条件下目的蛋白表达情况。

4、重组蛋白rop18包涵体的变复性

①超声破碎后12000rpm离心10min，取沉淀进行变复性。

②含变性剂的各种缓冲液的配制，需调节ph8(根据等电点9.86确定ph为7.9)

③12000rpm离心10分钟收集菌体。弃上清，尽量去除培养基。加入20mla液(含edta、含2m尿素)，重悬菌体室温洗涤2h。

④10000rpm离心10min，弃上清，收沉淀。③、④步骤重复两次。

⑤用5mlb液(含7m盐酸胍)溶解变性室温过夜。

⑥过夜后将上一步溶液加入c液(含4m尿素)5ml，4℃静置2h后10000/min离心15min，将上清装入透析袋进行透析复性(透析袋预先用沸水煮10min后用纯水洗涤)。

⑦透析1：200ml含4m尿素透析液4℃过夜。

⑧透析2：200ml3m尿素透析液4℃6h。

⑨透析3：200ml2m尿素透析液4℃过夜。

⑩透析5：200mltris液4℃6h(重复两次)。

4℃12000r/min×15min离心取上清。

5、融合蛋白rop18的纯化

①各液的稀释配制(1×chargebuffer、1×bindingbuffer、1×washbuffer、1×elutebuffer以及用1×bindingbuffer和1×elutebuffer按不同比例混合的100mm、400mm咪唑)(rop18)。

②将已经用过的填料用纯水洗涤三次(1000转离心2min)，上柱后按以下步骤先后洗柱：

a、1.5mlh2o(3倍床体积)

b、2.5ml1×chargebuffer(5倍床体积)

c、1.5ml1×bindingbuffer(3倍床体积)

③当bindingbuffer至树脂面时，加样(变复性后离心上清，需用0.45μm滤头过滤)，反复三次，样品滴完后，用5ml1×bindingbuffer洗树脂柱一次。

④用1％tritonx-100洗树脂柱一次。

⑤分别按顺序用配制好的1×bindingbuffer和1×elutebuffer混合液洗树脂柱一次，依次接收，1ml/管，并按接收的先后顺序编号，sds-page检测洗脱的蛋白集中于哪些接收管。

⑥当滴完后，加水洗树脂柱后再加入5ml20％乙醇，柱子内剩3ml后塞上塞子，用封口膜封口，放置4℃冰箱，以备下次再用。

实施例3：小鼠免疫和效价测定

(1)小鼠免疫：取两只2ml注射器，各吸取弗氏佐剂(初次免疫用的完全佐剂，第二和第三次免疫用的不完全佐剂)和纯化蛋白(按1:1等体积)中间用输液管连接，左右推动混合，充分乳化(乳化时间约30min)。俯卧固定小鼠后，擦拭酒精消毒，用食指和大拇指捏起皮肤，有缺口锋利面针尖朝上扎入皮下后推入蛋白，每只小鼠免疫剂量为50μg，每两周免疫一次。对三免后的小鼠进行腹腔注射蛋白加强免疫，不加佐剂，注射20μg。

(2)间接elisa测小鼠血清抗体效价

①抗原包被

用包被液(0.05mol/l的碳酸盐缓冲液，ph9.6)把重组蛋白抗原稀释为50ng/ml、100ng/ml、200ng/ml，将稀释好的抗原液于每个酶标板孔中加入50μl。37℃孵育1h后于4℃包被过夜。次日倒掉包被液，pbst洗涤6次，每次浸泡3min。

②封闭

在酶标板上每孔加入200μl封闭液，37℃孵育1h。弃去封闭液，洗涤6次同上。

③加一抗(血清)

将免疫小鼠抗血清稀释液中制成1:1600的抗血清。给酶标板上a行的1号孔加100μl的1:1600的血清。给酶标板上a行的2到11孔各加入抗体稀释液100μl，然后给a组的第二孔加入100μl1:1600的抗血清，吹吸十次后吸取100μl的血清加到第三孔，再吹吸十次取100μl加到第四孔，依次加到第8孔。这样每孔均为100μl，经过7次二倍稀释，血清稀释度为1:204800。实验设置两个复孔。另外设置两组空白对照和阴性对照。加完后37℃孵育1h。洗涤同上。

⑤加酶标二抗

各孔加入稀释倍数为1:5000的酶标二抗(羊抗鼠)50μl，37℃孵育1h。洗涤同上。

⑥显色

每孔各加tmb显色液100μl后将酶标板室温避光15min左右，当阴性对照孔显蓝绿色时终止。终止时每孔加入50μl的2mol/l浓硫酸。终止后迅速用酶标仪测定酶标板各孔od450的值。

⑦结果：计算阳性血清p与阴性血清值n之比，当p/n≥2.1时为阳性，p/n＜2.1而≥1.5为可疑，p/n小于1.5为阴性。以阴性对照深色的最高稀释度作为抗体效价。

实施例4：细胞融合和筛选

(1)取免疫小鼠脾细胞：用剪刀剪开皮肤及腹膜，使脾脏暴露出来，用镊子提起脾脏，沿根部剪下，去除结缔组织、脂肪后，置于细胞培养皿中(内含不含血清的dmem培养基)，研磨后吸取到50ml离心管中1500转离心5min，弃上清。

(2)加入10ml0.83％氯化铵溶液轻轻重悬起来，冰浴5-10min，离心，弃上清。

(3)加入10mlsp2/0细胞悬液(融合前一天传代铺板，约107个细胞)，离心，将离心管轻轻敲松有滑动(但不能散)。

(4)加入800μlpeg1500(缓慢滴加，约加3min)，放置1min。

(5)加含20％血清培养基1ml(缓慢滴加，约2min)，再加入3ml含20％血清培养基，1min加完，再补加10ml含20％血清培养基重悬冲散，吸取入皿中，37℃的co2培养箱培养。

(6)第二天吹打下贴壁细胞置于50ml离心管中1500转离心5min，加入含hat培养基，铺板到含饲养细胞的96孔板中，每孔150μl(约105个)，置于37℃co2培养箱培养。

(7)hat培养基选择培养约10天后换ht培养基进行选择培养，ht培养基选择培养约10天后进行阳性克隆的筛选。

(8)采用间接elisa进行筛选：

①抗原包被

用包被液(0.05mol/l的碳酸盐缓冲液，ph9.6)把重组蛋白抗原稀释为200ng/ml，将稀释好的抗原液于每个酶标板孔中加入50μl。37℃孵育1h后于4℃包被过夜。次日倒掉包被液，pbst洗涤6次，每次浸泡3min。

②加入待检测细胞上清

将长到三分之二的杂交瘤从96孔板中吸取100μl上清，加入到包被好的酶标板中。另外设置两组阴性对照。加完后37℃孵育1h。倒掉孔内液体，pbst洗涤6次，每次浸泡3min。

③加酶标二抗

各孔加入稀释倍数为1:5000的酶标二抗(羊抗鼠)50μl，37℃孵育1h。洗涤同上。

④显色

每孔各加tmb显色液100μl后将酶标板室温避光15min左右，当阴性对照孔显蓝绿色时终止。终止时每孔加入50μl的2mol/l浓硫酸。终止后迅速用酶标仪测定酶标板各孔od450的值。

当样本检测孔大于阴性对照od值的2.1倍时，为阳性结果。将其杂交瘤细胞转移至24孔培养板中扩大培养，反复几次上述elisa方法检测培养上清，阳性孔转移至培养瓶中进一步扩大培养，冻存原代细胞并进一步作亚克隆。

(9)采用有限稀释法对阳性孔进行克隆化。

实施例5：抗体制备和抗原表位鉴定

(1)抗体制备

正常6～8周龄的balb/c鼠腹腔注射液体石蜡0.5ml。一周后将培养的杂交瘤细胞吹打下来，1000转离心10min，弃去上清，用无血清培养液将杂交瘤悬浮混匀，并将细胞调至1×10⁸/ml，每只小鼠腹腔注射0.5ml。小鼠腹部明显膨大时处死小鼠，用注射器将腹水抽出。在3000转下离心10min，取上清液加50％甘油混匀，保存于-20℃冰箱保存。

(2)抗体鉴定

1)亚型鉴定

①抗原包被

用试剂盒内抗体包板，包被浓度为10μg/ml，将稀释好的抗原液于每个酶标板孔中加入100μl。37℃孵育1h后于4℃包被过夜。次日倒掉包被液，pbst洗涤3次，每次浸泡3min。

②封闭

加入封闭液(1％bsa-pbs，ph7.2)100ul/孔，室温1小时。弃去封闭液，洗涤3次。

③加入待检测细胞上清

将细胞上清，加入到酶标板中，每孔100μl。另外设置两组阳性对照(三免后小鼠血清)、阴性对照(sp2/0细胞上清)。加完后室温孵育1h。倒掉孔内液体，pbst洗涤3次，每次浸泡3min。

④加入羊抗鼠hrp抗体

加入各hrp-labeleddetectionantibody(ies)：

goatanti-mouseig,humanads-hrp；

goatanti-mouseiga-hrp；

goatanti-mouseigg1,humanads-hrp；

goatanti-mouseigg2a,humanads-hrp；

goatanti-mouseigg2b,humanads-hrp；

goatanti-mouseigg3,humanads-hrp；

goatanti-mouseigm,humanads-hrp；

goatanti-mousekappa-hrp；

goatanti-mouselambda-hrp；

比例为1:250(稀释液为pbst)，室温孵育1h，洗涤5次。

⑤加入底物溶液

每孔加入底物溶液100μl，用酶标仪测定酶标板各孔od405nm的值。

底物溶液配制：

abts储存液配制：15mgabts溶解于1ml双蒸水，2-8℃避光保存。

柠檬酸缓冲液：525mg柠檬酸溶解于50ml蒸馏水，用3nnaoh调节ph至4.0。

底物溶液：10ml柠檬酸缓冲液加入0.2mlabts储存液，加入10ul30％h2o2。

2)染色体分析

①取杂交瘤细胞，加入适量的秋水仙素溶液，使混合液终浓度至0.2μg/ml，放入培养箱培养3h。

②吹打细胞，移入离心管中，1500转离心10min，弃掉上清，向含有细胞的离心管中逐滴加37℃的0.075mol/lkcl溶液5ml，将细胞吹吸均匀，在37℃下作用20min。

③在管中加入1ml用冰醋酸新配制的甲醛固定液。1500转离心10min，然后弃掉上清；再加5ml的固定液，反复吸吹使细胞均匀，之后固定30min，重复一次，加5ml的固定液盖上管口后4℃过夜。

④离心弃掉上清，再加入固定液1.5ml，再次吸吹均匀。

⑤取冰冻的载玻片，向上面小心滴加1-2滴的细胞悬液，进行涂片，用giemsa溶液进行染色10min，后经流水冲洗并晾干。在油镜下观察。

3)特异性鉴定

用rop18重组蛋白、rop5重组蛋白、his单抗、弓形虫rh株、wh3、wh6虫株，疟原虫、血吸虫，进行western-blot方法特异性的鉴定。

4)抗体表位鉴定

采用肽扫描法抗原识别表位，初步定位根据genbank中rop18基因序列，采用dnastar(ver.7.2.1)软件对rop18编码的rep'蛋白基因中成熟肽氨基酸序列(98～554)，设计合成覆盖了该蛋白全部aa序列，以相互重叠6个aa的24个短肽，每段长度均为25aa(见表)。以合成肽作为包被抗原进行间接elisa测定。

具体方法：

①溶液多肽干粉

用无菌生理盐水稀释多肽干粉，于-20℃贮存。贮存浓度2mg/ml。

②elisa

a.抗原包被

用包被液(0.05mol/l的碳酸盐缓冲液，ph9.6)把多肽溶液稀释为50μg/ml，(实验设置2个复孔)将稀释好的抗原液于每个酶标板孔中加入100μl。37℃孵育1h后于4℃包被过夜。次日倒掉包被液，pbst洗涤6次，每次浸泡3min。

b.封闭

加入封闭液(0.5％bsa-pbs，ph7.2)100ul/孔，37℃1小时。弃去封闭液，洗涤6次同上

c.加入小鼠腹水

将腹水1：5000稀释后加100μl到包被好的酶标板中。另外设置阴性对照(sp2/0细胞上清)和阳性对照组(三免后小鼠血清)。加完后37℃孵育1h。倒掉孔内液体，pbst洗涤6次，每次浸泡3min

b.加酶标二抗

各孔加入稀释倍数为1:5000的酶标二抗(羊抗鼠)50μl，37℃孵育1h。洗涤同上。

c.显色

每孔各加tmb显色液100μl后将酶标板室温避光15min左右，当阴性对照孔显蓝绿色时终止。终止时每孔加入50μl的2mol/l浓硫酸。终止后迅速用酶标仪测定酶标板各孔od450的值。

实施例6：rop18单克隆抗体cdr序列鉴定

提取t2株杂交瘤细胞rna，逆转录成cdna。根据抗体重链和轻链的恒定区设计10对引物，分别进行pcr扩增，目的片段回收测序。

轻链碱基序列如下：

gacattgagctcacccagtctccagcaatcctgtctgcatctccaggggagaaggtcacaatgacttgcagggcc

agctcaagtgtaagttacatgcactggtaccagcagaagccagggtcctcccccaaaccctggatttatgccaca

tccaacctggcttctggagtccctgctcgcttcagtggcagtgggtctgggacctcttactctctcacaatcagc

agagtggaggctgaagatgctgccacttattactgccagcagtggagtagtaacccacccacgttcggctcggggacaaagttggaaataaaac

轻链氨基酸序列如下：

dieltqspailsaspgekvtmtcrasssvsymhwyqqkpgsspkpwiyatsnlasgvparfsgsgsgtsysltisrveaedaatyycqqwssnpptfgsgtkleik

抗体重链链测序结果：

重链碱基序列如下：

ctggaggagtctggccctgggatattgcagccctcccagaccctcagtctgacttgttctttctctgggttttca

ctgagcacttctggtatgggtgtgagctggattcgtcagccttcaggaaagggtctggagtggctggcacacatt

tactgggatgatgacaagcgctataacccatccctgaagagccggctcacaatctccaaggatacctccagcaac

caggtattcctcaagatcaccagtgtggacactgcagatactgccacatactactgtgctcgaagagggaggtat

ggtaaagattactatgctatggactactggggtcaaggaacctcagtcaccgtctcctca

重链氨基酸序列如下：

leesgpgilqpsqtlsltcsfsgfslstsgmgvswirqpsgkglewlahiywdddkrynpslksrltiskdtssnqvflkitsvdtadtatyycarrgrygkdyyamdywgqgtsvtvss

重链和轻链的cdr序列

序列表

<110>安徽医科大学

<120>一种弓形虫棒状体蛋白rop18的单克隆抗体、分泌该抗体的细胞株及其用途

<130>2018.7.12

<160>6

<170>siposequencelisting1.0

<210>1

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<212>prt

<213>toxoplasmagondii

<400>1

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1510

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15

<210>3

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151015

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15

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1

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15