用于检测5种血流感染病原体的引物组、试剂盒及建库方法与流程

文档序号:20278964发布日期:2020-04-07 14:55阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种用于检测5种血流感染病原体的引物组,其特征在于,所述5种血流感染病原体包括金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯菌、屎肠球菌;所述引物组包括:用于检测金黄色葡萄球菌的引物对seqidno:1~2、seqidno:3~4和seqidno:5~6中的至少之一,用于检测大肠杆菌的引物对seqidno:7~8、seqidno:9~10和seqidno:11~12中的至少之一,用于检测鲍曼不动杆菌的引物对seqidno:13~14、seqidno:15~16和seqidno:17~18中的至少之一,用于检测肺炎克雷伯菌的引物对seqidno:19~20、seqidno:21~22和seqidno:23~24中的至少之一,用于检测屎肠球菌的引物对seqidno:25~26、seqidno:27~28和seqidno:29~30中的至少之一,所述引物组用于在同一反应体系中,对所述5种血流感染病原体的特异序列进行多重pcr靶向扩增。

2.根据权利要求1所述的引物组,其特征在于,所述引物组包括:用于检测金黄色葡萄球菌的引物序列seqidno:1~6,用于检测大肠杆菌的引物序列seqidno:7~12,用于检测鲍曼不动杆菌的引物序列seqidno:13~18,用于检测肺炎克雷伯菌的引物序列seqidno:19~24,用于检测屎肠球菌的引物序列seqidno:25~30。

3.根据权利要求1或2所述的引物组,其特征在于,所述引物组还包括用作内参的引物对seqidno:31~32。

4.一种用于检测5种血流感染病原体的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括权利要求1至3中任一项所述的引物组;

优选地,所述试剂盒还包括靶向扩增试剂组分、末端修复试剂组分、接头连接试剂组分、文库pcr扩增试剂组分、阳性对照品试剂组分、阴性对照品试剂组分、纯化磁珠试剂组分中的一种或多种。

5.根据权利要求4所述的试剂盒,其特征在于,所述靶向扩增试剂组分包括靶向扩增缓冲液和靶向扩增酶,优选地,所述靶向扩增酶是taqdna聚合酶。

6.根据权利要求4所述的试剂盒,其特征在于,所述末端修复试剂组分包括末端修复缓冲液和末端修复酶,优选地,所述末端修复酶包括t4dna聚合酶、t4pnk和rtaq。

7.根据权利要求4所述的试剂盒,其特征在于,所述接头连接试剂组分包括连接缓冲液、连接酶和接头序列;优选地,所述连接酶是t4dna连接酶;优选地,所述接头序列如seqidno:33~34所示。

8.根据权利要求4所述的试剂盒,其特征在于,所述文库pcr扩增试剂组分包括pcr反应缓冲液、pcr反应聚合酶和pcr反应引物;优选地,所述pcr反应聚合酶是taqdna聚合酶;所述pcr反应引物如seqidno:35~36所示。

9.根据权利要求4所述的试剂盒,其特征在于,所述阳性对照品试剂组分包括选自所述5种血流感染病原体中至少一种的dna序列和人源细胞dna;优选地,选自所述5种血流感染病原体中至少一种的dna序列是金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的dna序列;所述人源细胞dna是hela细胞dna;

任选地,所述阴性对照品试剂组分是人源细胞dna,优选hela细胞dna;

任选地,所述纯化磁珠试剂组分包括磁珠和缓冲液;优选地,所述磁珠是agencourtampurexp磁珠;所述缓冲液是te缓冲液。

10.一种用于检测5种血流感染病原体的建库方法,其特征在于,所述方法包括采用权利要求1至3中任一项所述的引物组对血液样本核酸提取物进行多重pcr靶向扩增;然后对所述多重pcr靶向扩增的产物进行测序文库构建。


技术总结
一种用于检测5种血流感染病原体的引物组、试剂盒及建库方法,引物组包括检测金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯菌、屎肠球菌的引物对。本发明的引物组特异性较强,有效减少了非特异性扩增的情况,通过特异性引物扩增可以直接鉴定到细菌的种水平。采用本发明的引物组进行血流感染病原体的检测无需进行血培养操作,可直接对血液样本中的病原体进行检测,最快可在48h得到检测结果,大大缩短了检测周期。

技术研发人员:申奥;宫艳萍;李英镇;袁剑颖;吴红龙
受保护的技术使用者:深圳华大因源医药科技有限公司
技术研发日:2018.09.30
技术公布日:2020.04.07
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