一种含1,3,4-噻二唑新型曲酸衍生物及其应用的制作方法

本发明涉及一种含1,3,4-噻二唑新型曲酸衍生物即一类新型的(e)-n-(5-((5-羟基-4-氧代-4h-吡喃-2-基)甲硫基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-3-芳基丙烯酰胺类化合物，为新的酪氨酸酶抑制剂，作为黑色素抑制剂或美白剂应用于医药、食品、日用化工领域。更具体而言，本发明提供作为酪氨酸酶抑制剂的(e)-n-(5-((5-羟基-4-氧代-4h-吡喃-2-基)甲硫基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-3-芳基丙烯酰胺类化合物的制备方法和包含它们的药物组合物。

背景技术：

酪氨酸酶(ec1.14.18.1,tyrosinase)是一种含铜的金属酶，广泛分布于微生物、动植物及人体中。酪氨酸酶主要参与两个反应过程：催化l-酪氨酸羟基化转变为l-多巴和氧化l-多巴形成多巴醌，多巴醌经一系列反应后，形成黑色素。酪氨酸酶在生物体中具有重要的生理功能，同时，它也与人体雀斑、褐斑等黑色素过度沉积等疾病的发生有关，并与昆虫的蜕皮和果蔬的褐化有很大关系。在自然界的各种生物体内，含有许多种类的酚类化合物，这些酚类化合物在酪氨酸酶催化下发生一系列化学反应，最终导致水果、蔬菜产品的变色。因此，通过抑制酪氨酸酶的催化活性可以改善皮肤的色素沉着以及防止水果、蔬菜的褐变。

曲酸(kojicacid)又名曲菌酸。近十多年来国外许多研究及试验结果证实,曲酸对人体皮肤黑色素的生成有很强的抑制作用而且安全、无毒,不会产生白斑后遗症。因而,配入化妆水、面膜、乳液、霜中,制得了能有效治疗雀斑、老人斑、色素沉着、粉刺的美白化妆品,并成为国际时兴的高级美容品,深受消费者,特别是有色斑患疾年青女性的喜爱。但是,由于曲酸不稳定,对光、热敏感,在空气中易被氧化,另外,曲酸易与很多金属离子鳌合,尤其是与fe鳌合会产生黄色复合物,这使得用曲酸配制的皮肤美白产品在放置使用过程中常逐渐变为黄棕色。而许多研究结果表明,一些曲酸的衍生物不仅具有较好的稳定性,不易发生氧化变色,而且其抑制酪氨酸酶活性的能力比曲酸更为显著。因此各种曲酸衍生物的研究开发便成为了科学家们的研究热点。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种含1,3,4-噻二唑新型曲酸衍生物,这类化合物对酪氨酸酶具有一定的抑制活性，应用于防治色斑、雀斑、老年斑等皮肤的色素沉着和美白。本发明的目的也包括提供含有该类新化合物的组合物。

本发明的上述目的是通过以下方案予以实现的：一种含1,3,4-噻二唑新型曲酸衍生物,其结构式如式（i）所示：

式(i)中，取代基r是h,-ch3,-cf3,-ch2ch3,-och3,f,cl,br,-coch3,-oh,-cooh,-so3h,-c6h5或取代苯基。

所述的一种含1,3,4-噻二唑新型曲酸衍生物的制备方法，反应通式为：

具体步骤如下：

(1)将装有曲酸的反应瓶置于冰浴中，然后缓慢滴加二氯亚砜到反应瓶中并磁力搅拌，tlc跟踪反应进程。反应结束后，往反应液中加入石油醚，析出大量固体，过滤，烘干固体后用乙醇重结晶即可得到中间产物2-氯甲基-5-羟基-4h-吡喃-4-酮1。

(2)将上述中间产物2-氯甲基-5-羟基-4h-吡喃-4-酮1与2-氨基-5巯基-1,3,4-噻二唑溶于乙醇中,逐滴加入三乙胺，加热回流，tcl跟踪反应进程。反应结束后，冷却至室温,析出固体,固体用n,n-二甲基甲酰胺和乙醚重结晶既得中间产物5-(5-羟基-4-氧代-吡喃-2-基)甲硫基-2-氨基-1,3,4-噻二唑2。

(3)将上述中间产物5-(5-羟基-4-氧代-吡喃-2-基)甲硫基-2-氨基-1,3,4-噻二唑2加入反应瓶中，同时加入取代肉桂酸、1-羟基苯并三氮唑(hobt)和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(edci),在冰浴下溶于n,n-二甲基甲酰胺,磁力搅拌，待所有固体溶解后，滴加n-甲基吗啉，然后在室温下继续反应，tcl判断反应终点。反应结束后加入蒸馏水,析出固体，固体经柱层析分离纯化，得到目标产物(e)-n-(5-((5-羟基-4-氧代-4h-吡喃-2-基)甲硫基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-3-芳基丙烯酰胺衍生物(i)，即一种含1,3,4-噻二唑新型曲酸衍生物。

所述的一种含1,3,4-噻二唑新型曲酸衍生物在制备美白化妆品方面的应用。

所述的一种含1,3,4-噻二唑新型曲酸衍生物在制备美白药品方面的应用。

本发明的有益效果:通过实验证明，本发明的一种含1,3,4-噻二唑新型曲酸衍生物具有一定的酪氨酸酶抑制活性，它们中的一种或组合物可用于制备美白化妆品和药品。并且合成方法简单，材料易得，为解决美白的化妆品和医药品提供了一种新的开发途径。

具体实施方式

下面通过合成实验实例及活性实验实例对本发明作进一步详细的描述。

为了更好的理解本发明，现给出制备(e)-n-(5-((5-羟基-4-氧代-4h-吡喃-2-基)甲硫基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-3-芳基丙烯酰胺类化合物的实施例，本发明包括但不仅限于此制备方法。该(e)-n-(5-((5-羟基-4-氧代-4h-吡喃-2-基)甲硫基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-3-芳基丙烯酰胺类化合物即所述的一种含1,3,4-噻二唑新型曲酸衍生物。

实施例1：

(e)-n-(5-((5-羟基-4-氧代-4h-吡喃-2-基)甲硫基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-3-(对甲苯基)丙烯酰胺(ia)的合成。

先将装有曲酸(21.0mmol)的反应瓶置于冰浴中，然后缓慢滴加40ml二氯亚砜到反应瓶中并磁力搅拌，tlc跟踪反应进程。反应结束后，往反应液中加入石油醚，析出大量固体，过滤，烘干固体后用乙醇重结晶即可得到中间产物2-氯甲基-5-羟基-4h-吡喃-4-酮1。

称取上述中间体12-氯甲基-5-羟基-4h-吡喃-4-酮（10mmol）和2-氨基-5巯基-1,3,4-噻二唑（10mmol）溶于30ml乙醇中，然后滴加三乙胺（12mmol），加热回流，tcl跟踪反应进程。反应结束后冷却到室温，析出固体，此固体用n,n-二甲基甲酰胺和乙醚重结晶后得中间产物5-(5-羟基-4-氧代-吡喃-2-基)甲硫基-2-氨基-1,3,4-噻二唑2。

再将上述中间体5-(5-羟基-4-氧代-吡喃-2-基)甲硫基-2-氨基-1,3,4-噻二唑2(2.0mmol)溶于15mln,n-二甲基甲酰胺中，在冰浴下，加入对甲苯基丙烯酸(2.0mmol)、1-羟基苯并三氮唑(hobt)（2.0mmol）和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(edci)(2.0mmol),磁力搅拌，待所有固体溶解后，滴加n-甲基吗啉(6.0mmol)，继续在冰浴下反应1h,然后在室温下继续反应12h，tcl跟踪反应进程。反应结束后往反应液中加入蒸馏水,析出白色固体，过滤，柱层析分离得到目标产物(e)-n-(5-((5-羟基-4-氧代-4h-吡喃-2-基)甲硫基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-3-(对甲苯基)丙烯酰胺，其化学结构式如式（ia）所示,产率：75.2%。

¹hnmr(500mhz,dmso)δ:8.60(s,1h),7.81(d,j=16.0hz,1h),7.70(d,j=8.0hz,2h),7.44(s,2h),7.27(d,j=8.0hz,2h),6.79(d,j=16.0hz,1h),6.47(s,1h),4.28(s,2h),2.35(s,3h);¹³cnmr(125mhz,dmso)δ:172.11,171.28,165.02,163.90,150.08,147.91,147.69,141.76,140.87,131.46,130.12,129.27,115.73,115.25,35.94,21.57;ir(kbr)v:3290,3104,1729,1668,1629,1514,1412,1361,1322,1207,1157cm^-1;hrms(esi,m/z)calcdfor[c18h16n3o4s2]⁺(m+h)⁺402.0577,found402.0572.

实施例2：

(e)-n-(5-((5-羟基-4-氧代-4h-吡喃-2-基)甲硫基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-3-(4-甲氧苯基)丙烯酰胺(ib)的合成。

本实施例的制备方法除用对甲氧苯基丙烯酸代替对甲苯基丙烯酸外，其余同实施例1，最后得白色固体(e)-n-(5-((5-羟基-4-氧代-4h-吡喃-2-基)甲硫基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-3-(4-甲氧苯基)丙烯酰胺，其化学结构式如式（ib）所示，产率：77.1%。

¹hnmr(500mhz,dmso)δ:8.59(s,1h),7.81(s,1h),7.77(d,j=8.5hz,2h),7.44(s,2h),7.02(d,j=8.5hz,2h),6.70(d,j=15.5hz,1h),6.47(s,1h),4.28(s,2h),3.34(s,3h);¹³cnmr(125mhz,dmso)δ:172.17,171.27,164.97,164.04,162.15,150.05,147.71,140.90,131.17,126.80,115.72,114.97,113.53,55.87,35.94;ir(kbr)v:3349,3110,1733,1653,1504,1418,1328,1255,1201,1128,1030cm^-1;hrms(esi,m/z)calcdfor[c18h16n3o5s2]⁺(m+h)⁺418.0526,found418.0527.

实施例3：

(e)-n-(5-((5-羟基-4-氧代-4h-吡喃-2-基)甲硫基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-3-(3-氟苯基)丙烯酰胺(ic)的合成。

本实施例的制备方法除用3-氟苯基丙烯酸代替对甲苯基丙烯酸外，其余同实施例1，最后得白色固体(e)-n-(5-((5-羟基-4-氧代-4h-吡喃-2-基)甲硫基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-3-(3-氟苯基)丙烯酰胺，其化学结构式如式（ic）所示，产率：74.8%。

¹hnmr(500mhz,dmso)δ:8.63(s,1h),7.85(d,j=16.0hz,1h),7.75(d,j=10.0hz,1h),7.65(d,j=8.0hz,1h),7.50(q,j=8.0hz,1h),7.45(s,2h),7.31(td,j=8.5,2.0hz,1h),6.96(d,j=16.5hz,1h),6.48(s,1h),4.29(s,2h);¹³cnmr(125mhz,dmso)δ:171.99,171.28,165.09,163.86,163.58,161.92,150.12,147.68,146.47,140.81,136.68,136.61,131.48,131.41,125.77,118.34,118.17,118.06,115.74,115.42,115.24,35.94;ir(kbr)v:3287,3079,1736,1644,1631,1583,1505,1409,1239,1195,1136cm^-1;hrms(esi,m/z)calcdfor[c17h13fn3o4s2]⁺(m+h)⁺406.0326,found406.0329.

实施例4：

(e)-n-(5-((5-羟基-4-氧代-4h-吡喃-2-基)甲硫基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-3-(3-甲氧苯基)丙烯酰胺(id)的合成。

本实施例的制备方法除用3-甲氧苯基丙烯酸代替对甲苯基丙烯酸外，其余同实施例1，最后得白色固体(e)-n-(5-((5-羟基-4-氧代-4h-吡喃-2-基)甲硫基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-3-(3-甲氧苯基)丙烯酰胺，其化学结构式如式（id）所示，产率：78.2%。

¹hnmr(500mhz,dmso)δ:8.62(s,1h),7.82(d,j=16.0hz,1h),7.45(s,2h),7.41(s,1h),7.37(d,j=5.0hz,2h),7.05(s,1h),6.91(d,j=16.0hz,1h),6.48(s,1h),4.29(s,2h),3.33(s,3h);¹³cnmr(125mhz,dmso)δ:172.05,171.27,165.05,163.78,160.12,150.10,147.84,147.69,140.84,135.56,130.51,121.89,117.68,116.79,115.74,113.81,55.76,35.93;ir(kbr)v:3317,3125,1709,1651,1605,1518,1417,1281,1193,1126,929cm^-1;hrms(esi,m/z)calcdfor[c18h16n3o5s2]⁺(m+h)⁺418.0526,found418.0529.

实施例5：

(e)-n-(5-((5-羟基-4-氧代-4h-吡喃-2-基)甲硫基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-3-(4-氟苯基)丙烯酰胺(ie)的合成。

本实施例的制备方法除用4-氟苯基丙烯酸代替对甲苯基丙烯酸外，其余同实施例1，最后得白色固体(e)-n-(5-((5-羟基-4-氧代-4h-吡喃-2-基)甲硫基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-3-(4-氟苯基)丙烯酰胺，其化学结构式如式（ie）所示，产率：73.6%。

¹hnmr(500mhz,dmso)δ:8.62(s,1h),7.90(dd,j=8.0,5.5hz,2h),7.87(d,j=16.0hz,1h),7.45(s,2h),7.30(t,j=8.5hz,2h),6.85(d,j=16.0hz,1h),6.48(s,1h),4.29(s,2h);¹³cnmr(125mhz,dmso)δ:172.06,171.27,165.14,165.05,163.74,163.16,150.09,147.69,146.66,140.84,131.70,130.85,116.63,116.45,116.28,115.74,35.94;ir(kbr)v:3298,3109,1733,1644,1631,1508,1409,1320,1201,1146,835cm^-1;hrms(esi,m/z)calcdfor[c17h13fn3o4s2]⁺(m+h)⁺406.0326,found406.0332.

实施例6：

(e)-n-(5-((5-羟基-4-氧代-4h-吡喃-2-基)甲硫基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-3-(4-三氟甲基苯基)丙烯酰胺(if)的合成。

本实施例的制备方法除用4-三氟甲基苯基丙烯酸代替对甲苯基丙烯酸外，其余同实施例1，最后得白色固体(e)-n-(5-((5-羟基-4-氧代-4h-吡喃-2-基)甲硫基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-3-(4-三氟甲基苯基)丙烯酰胺，其化学结构式如式（if）所示，产率：65.1%。

¹hnmr(500mhz,dmso)δ:8.64(s,1h),8.05(d,j=8.0hz,2h),7.94(d,j=16.0hz,1h),7.81(d,j=8.5hz,2h),7.45(s,2h),7.04(d,j=16.5hz,1h),6.49(s,1h),4.29(s,2h);¹³cnmr(125mhz,dmso)δ:171.95,171.28,165.12,163.42,150.13,147.67,146.00,140.79,138.11,129.86,126.26,119.36,115.75,35.94;ir(kbr)v:3287,3097,1728,1640,1513,1411,1326,1203,1130,1068,941,832cm^-1;hrms(esi,m/z)calcdfor[c18h13f3n3o4s2]⁺(m+h)⁺456.0294,found456.0298.

实施例7：

(e)-n-(5-((5-羟基-4-氧代-4h-吡喃-2-基)甲硫基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-3-(2-溴苯基)丙烯酰胺(ig)的合成。

本实施例的制备方法除用2-溴苯基丙烯酸代替对甲苯基丙烯酸外，其余同实施例1，最后得白色固体(e)-n-(5-((5-羟基-4-氧代-4h-吡喃-2-基)甲硫基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-3-(2-溴苯基)丙烯酰胺，其化学结构式如式（ig）所示，产率：69.6%。

¹hnmr(500mhz,dmso)δ:8.65(s,1h),8.05(dd,j=12.0,3.5hz,2h),7.76(d,j=8.0hz,1h),7.49-7.40(m,4h),6.94(d,j=15.5hz,1h),6.49(s,1h),4.29(s,2h);¹³cnmr(125mhz,dmso)δ:171.44,170.78,164.62,162.87,149.69,147.15,144.53,140.26,133.33,132.85,132.68,128.77,128.40,125.00,119.07,115.26,35.45;ir(kbr)v:3286,3094,1738,1643,1512,1410,1316,1203,1153,941,754cm^-1;hrms(esi,m/z)calcdfor[c17h13brn3o4s2]⁺(m+h)⁺465.9525,found465.9527.

实施例8：

(e)-n-(5-((5-羟基-4-氧代-4h-吡喃-2-基)甲硫基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-3-苯基丙烯酰胺(ih)的合成。

本实施例的制备方法除用苯基丙烯酸代替对甲苯基丙烯酸外，其余同实施例1，最后得白色固体(e)-n-(5-((5-羟基-4-氧代-4h-吡喃-2-基)甲硫基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-3-苯基丙烯酰胺，其化学结构式如式（ih）所示，产率：75.1%。

¹hnmr(500mhz,dmso)δ:8.62(s,1h),7.85(d,j=16.0hz,1h),7.81(d,j=7.5hz,2h),7.47(s,2h),7.46(s,1h),7.45(s,2h),6.87(d,j=16.0hz,1h),6.48(s,1h),4.29(s,2h);¹³cnmr(125mhz,dmso)δ:172.06,171.28,165.04,163.77,150.10,147.90,147.69,140.85,134.15,131.58,129.49,129.25,116.43,115.75,35.94;ir(kbr)v:3286,3083,1734,1629,1502,1405,1197,1132cm^-1;hrms(esi,m/z)calcdfor[c17h14n3o4s2]⁺(m+h)⁺388.0420,found388.0422.

实施例9：

(e)-n-(5-((5-羟基-4-氧代-4h-吡喃-2-基)甲硫基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-3-(3-甲苯基)丙烯酰胺(ii)的合成。

本实施例的制备方法除用3-甲苯基丙烯酸代替对甲苯基丙烯酸外，其余同实施例1，最后得白色固体(e)-n-(5-((5-羟基-4-氧代-4h-吡喃-2-基)甲硫基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-3-(3-甲苯基)丙烯酰胺，其化学结构式如式（ii）所示，产率：76.4%。

¹hnmr(500mhz,dmso)δ:8.62(s,1h),7.80(d,j=16.0hz,1h),7.63(s,1h),7.60(d,j=7.0hz,1h),7.45(s,2h),7.35(t,j=7.5,1h),7.29(d,j=7.0hz,1h),6.84(d,j=16.0hz,1h),6.48(s,1h),4.29(s,2h),2.34(s,3h);¹³cnmr(125mhz,dmso)δ:172.07,171.27,165.03,163.80,150.10,148.03,147.68,140.85,138.79,134.08,132.30,129.68,129.37,126.49,116.19,115.74,35.94,21.30;ir(kbr)v:3296,3087,1734,1665,1631,1502,1411,1314,1197,1132cm^-1;hrms(esi,m/z)calcdfor[c18h16n3o4s2]⁺(m+h)⁺402.0577,found402.0581.

实施例10：

(e)-n-(5-((5-羟基-4-氧代-4h-吡喃-2-基)甲硫基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-3-(4-氯苯基)丙烯酰胺(ij)的合成。

本实施例的制备方法除用4-氯苯基丙烯酸代替对甲苯基丙烯酸外，其余同实施例1，最后得白色固体(e)-n-(5-((5-羟基-4-氧代-4h-吡喃-2-基)甲硫基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-3-(4-氯苯基)丙烯酰胺，其化学结构式如式（ij）所示，产率：76.2%。

¹hnmr(500mhz,dmso)δ:8.62(s,1h),7.86(s,1h),7.84(d,j=6.0hz,2h),7.52(d,j=8.5hz,2h),7.45(s,2h),6.90(d,j=16.0hz,1h),6.48(s,1h),4.29(s,2h);¹³cnmr(125mhz,dmso)δ:172.01,171.27,165.07,163.64,150.10,147.68,146.47,140.82,136.15,133.12,130.97,129.54,117.24,115.74,35.94;ir(kbr)v:3294,3101,1730,1641,1513,1407,1315,1203,1150,1093,941,817cm^-1;hrms(esi,m/z)calcdfor[c17h13cln3o4s2]⁺(m+h)⁺422.0031,found422.0040.

实施例11：

(e)-n-(5-((5-羟基-4-氧代-4h-吡喃-2-基)甲硫基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-3-(3-溴苯基)丙烯酰胺(ik)的合成。

本实施例的制备方法除用3-溴苯基丙烯酸代替对甲苯基丙烯酸外，其余同实施例1，最后得白色固体(e)-n-(5-((5-羟基-4-氧代-4h-吡喃-2-基)甲硫基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-3-(3-溴苯基)丙烯酰胺，其化学结构式如式（ik）所示，产率：70.3%。

¹hnmr(500mhz,dmso)δ:8.63(s,1h),8.08(s,1h),7.83(t,j=8.0hz,2h),7.66(d,j=7.0hz,1h),7.45(s,2h),7.41(t,j=8.0hz,1h),6.97(d,j=16.0hz,1h),6.48(s,1h),4.29(s,2h);¹³cnmr(125mhz,dmso)δ:171.98,171.27,165.08,163.54,150.12,147.66,146.20,140.80,136.63,134.02,131.70,131.49,128.17,122.86,118.14,115.75,35.94;ir(kbr)v:3410,3271,3105,1735,1655,1616,1514,1413,1307,1200,1135,939,777cm^-1;hrms(esi,m/z)calcdfor[c17h13brn3o4s2]⁺(m+h)⁺465.9525,found465.9528.

实施例12：

(e)-n-(5-((5-羟基-4-氧代-4h-吡喃-2-基)甲硫基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-3-(3-氯苯基)丙烯酰胺(il)的合成。

本实施例的制备方法除用3-氯苯基丙烯酸代替对甲苯基丙烯酸外，其余同实施例1，最后得白色固体(e)-n-(5-((5-羟基-4-氧代-4h-吡喃-2-基)甲硫基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-3-(3-氯苯基)丙烯酰胺，其化学结构式如式（il）所示，产率：72.1%。

¹hnmr(500mhz,dmso)δ:8.63(s,1h),7.96(s,1h),7.84(d,j=16.0hz,1h),7.79(d,j=8.0hz,1h),7.53(d,j=8.0hz,1h),7.49(d,j=8.0hz,1h),7.46(d,j=7.5hz,2h),6.98(d,j=16.5hz,1h),6.48(s,1h),4.29(s,2h);¹³cnmr(125mhz,dmso)δ:171.49,170.78,164.58,163.05,149.62,147.18,145.75,140.31,135.87,133.81,130.74,130.62,128.28,127.36,117.67,115.25,35.44;ir(kbr)v:3406,3166,3271,1731,1648,1496,1412,1308,1203,1153cm^-1;hrms(esi,m/z)calcdfor[c17h13cln3o4s2]⁺(m+h)⁺422.0031,found422.0037.

实施例13：

(e)-n-(5-((5-羟基-4-氧代-4h-吡喃-2-基)甲硫基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-3-(4-溴苯基)丙烯酰胺(im)的合成。

本实施例的制备方法除用4-溴苯基丙烯酸代替对甲苯基丙烯酸外，其余同实施例1，最后得白色固体(e)-n-(5-((5-羟基-4-氧代-4h-吡喃-2-基)甲硫基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-3-(4-溴苯基)丙烯酰胺，其化学结构式如式（im）所示，产率：69.9%。

¹hnmr(500mhz,dmso)δ:8.62(s,1h),7.83(d,j=16.0hz,1h),7.78(d,j=8.5hz,2h),7.66(d,j=8.0hz,2h),7.45(s,2h),6.92(d,j=16.0hz,1h),6.48(s,1h),4.29(s,2h);¹³cnmr(125mhz,dmso)δ:171.51,170.77,164.57,163.14,149.60,147.17,146.08,140.32,132.94,131.97,130.66,124.57,116.80,115.24,35.44;ir(kbr)v:3290,3096,1731,1643,1511,4109,1315,1202,1145,1070,940,816cm^-1;hrms(esi,m/z)calcdfor[c17h13brn3o4s2]⁺(m+h)⁺465.9525,found465.9530.

下面给出上述化合物的活性实验方法和结果。

将一定量活力为6680u/mg的酪氨酸酶溶于ph=6.8的0.1m的磷酸盐缓冲溶液中，加入不同浓度的化合物振荡约一分钟后，于30℃下恒温20分钟，加入底物l-3,4-二羟基苯丙氨酸(l-dopa)，混合均匀后测试λ=475nm处od475时间进程曲线，由曲线计算酶活性：酶的相对活性=k/k0*100%.

利用专业数据处理软件microcaloriginprofessional处理实验数据，以反应进程线的直线斜率为反应速度，将该反应抑制率设为纵坐标，以抑制剂浓度为横坐标作图，可得到的抑制剂对酪氨酸酶的抑制ic50值，k0为不加抑制剂时的反应进程线的直线斜率。测试结果见表1。

从表1可以看出，曲酸硫醚类衍生物(e)-n-(5-((5-羟基-4-氧代-4h-吡喃-2-基)甲硫基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-3-取代丙烯酰胺对酪氨酸酶均具有一定的抑制活性。其中(e)-n-(5-((5-羟基-4-氧代-4h-吡喃-2-基)甲硫基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-3-(2-溴苯基)丙烯酰胺;(e)-n-(5-((5-羟基-4-氧代-4h-吡喃-2-基)甲硫基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-3-(4-氯苯基)丙烯酰胺;(e)-n-(5-((5-羟基-4-氧代-4h-吡喃-2-基)甲硫基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-3-(3-溴苯基)丙烯酰胺;(e)-n-(5-((5-羟基-4-氧代-4h-吡喃-2-基)甲硫基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-3-(3-氯苯基)丙烯酰胺和(e)-n-(5-((5-羟基-4-氧代-4h-吡喃-2-基)甲硫基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-3-(4-溴苯基)丙烯酰胺对酪氨酸酶的抑制活性效果均好于阳性对照物曲酸，它们的ic50值分别为11.32μm，14.90μm，6.49μm，8.48μm,9.54μm。