一种人乳中的功能组分及其制备和应用的制作方法

文档序号:20874440发布日期:2020-05-26 16:17阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种人乳中的功能组分,其特征在于:含有唾液酸的游离寡糖混合物,唾液酸的游离寡糖其化学结构由以下单糖通过不同的组合和连接方式构成:

游离寡糖中包括:d-葡萄糖(glc)、d-半乳糖(gal)、n-乙酰葡萄糖胺(glcnac)和n-乙酰神经氨酸(唾液酸,neu5ac)和岩藻糖(fuc);

该组分包含的主要成分有:

3’-sialyllactose(3’-sl):neu5acα2-3galβ1-4glc

6’-sialyllactose(6’-sl):neu5acα2-6galβ1-4glc

3f-3’-sl:neu5acα2-3galβ1-4(fucα1-3)glc

lst-a:neu5acα2-3galβ1-3glcnacβ1-3galβ1-4glc

lst-b:galβ1-3(neu5acα2-6)glcnacβ1-3galβ1-4glc

lst-c:neu5acα2-6galβ1-4glcnacβ1-3galβ1-4glc

ds-lnt:neu5acα2-3galβ1-3(neu5acα2-6)glcnacβ1-3galβ1-4glc。

2.按照权利要求1所述人乳中的功能组分,其中所包含的主要成分有:3’-sl、6’-sl、lst-a、lst-b、lst-c、dslnt、6’-slnfpvi等,将人乳中的功能组分中3’-sl的量定为1,则该组分中6’-sl的相对含量在0.1-5.0、3f-3’-sl的相对含量在0.1-2、lst-a的相对含量在0.01-0.5、lst-b的相对含量在0.01-0.5、lst-c的相对含量在0.1-1、dslnt的相对含量在0.1-2、6’-slnfpv的相对含量在0.01-0.5之间。

3.一种人乳中的功能组分的制备方法,其特征是:人乳样品经过低温离心脱脂、过膜除蛋白、柱色谱分离,最终获得所需的功能组分。

4.按照权利要求3所述的制备方法,其特征是:低温离心脱脂步骤为:取人乳样品,于0-10℃条件下,500-50000g离心5-500分钟,除去上层脂质,离心1-5次后,取下层既得脱脂人乳样品。

5.按照权利要求3所述的制备方法,其特征是:过膜除蛋白步骤为:取脱脂人乳样品,加入0-5倍体积量的水溶解到脱脂人乳样品中,混匀,过膜,收集透过液,得到脱脂除蛋白的乳清液,过膜的材料可选择中空纤维膜、板框式膜包中的一种或两种,膜截留分子量为5-100kd。

6.按照权利要求3所述的制备方法,其特征是:柱色谱分离得到酸性寡糖的步骤为:取脱脂除蛋白样品,体积浓度20-80%有机溶剂水溶液溶解样品,样品经液相色谱方法进行分离,以亲水性填料为色谱柱固定相,以水和有机溶剂、或缓冲盐水溶液和有机溶剂为流动相,使用等度或梯度方法进行洗脱;

柱色谱分离得到酸性寡糖过程样品溶解液为有机溶剂甲醇、乙腈、乙醇、丙酮中的一种或两种以上,样品浓度为0.1-500mg/ml;亲水性填料为硅胶、两性离子、氨基或酰胺基等修饰的硅胶或聚合物,洗脱液中的有机溶剂有:甲醇,乙腈,乙醇,异丙醇,丙酮中的一种或几种。

7.按照权利要求6所述的制备方法,所选择缓冲盐类型及其于流动相中的浓度及ph如下:

a)甲酸铵缓冲盐,浓度0-200mm,ph2.0-7.0;

b)乙酸铵缓冲盐,浓度0-200mm,ph2.0-7.0;

c)碳酸氢铵缓冲盐,浓度0-200mm,ph6.0-9.0;

使用等度方法进行洗脱:流动相中水或缓冲盐水溶液与有机溶剂按体积比例为5/95~95/5作为洗脱液;

或使用线性梯度方法进行洗脱:流动相中水或缓冲盐水溶液的体积浓度从小到大变化,起始体积浓度为5-60%,终止体积浓度为40-95%;

或使用台阶梯度方法进行洗脱:按流动相中水或缓冲盐水溶液的体积比例从5%~95%中从小至大随机选取2个以上进行洗脱操作。

8.按照权利要求6或7所述的制备方法,其特征在于:柱色谱分离得到所需人乳组分的过程中,收集在0-3倍柱体积洗脱段的流出液,即为所需要的馏分。

9.一种权利要求3-8任一制备方法制备获得的人乳中的功能组分。

10.一种权利要求1、2或9所述人乳中的功能组分的应用,人乳中的功能组分可作为活性成份用物制备治疗和/或预防早产儿的坏死性小肠结肠炎的药物,其有很好的预防和修复作用。


技术总结
本发明涉及一种人乳中的功能组分及其制备方法。该组分的主要成分有3’‑SL、6’‑SL、LST‑a、LST‑b、LST‑c、DSLNT等,这些成分的结构中含有一个或两个以上的唾液酸分子,该组分对早产儿的坏死性小肠结肠炎有很好的预防和修复作用。该组分的制备方法是采用人乳样品经过低温离心脱脂,膜分离除蛋白后,获得乳清液,再经柱色谱方法进行分离,以两性离子、氨基、酰胺基等修饰的硅胶或聚合物的亲水性材料为色谱柱固定相,水和有机溶剂或缓冲盐水溶液和有机溶剂为流动相,使用等度或梯度方法进行洗脱,最终得到所需的酸性寡糖组分。

技术研发人员:梁鑫淼;闫竞宇;郭志谋;吉素志;张雯婷;屠文娟;李佳齐;金高娃
受保护的技术使用者:中国科学院大连化学物理研究所
技术研发日:2018.11.16
技术公布日:2020.05.26
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