本公开一般涉及vmat2抑制剂化合物、与其相关的组合物和方法。
多巴胺能系统的调节异常对包括神经学和精神病学的疾病和病症在内的多种中枢神经系统(cns)病症而言是不可或缺的。这些神经学和精神病学的疾病和病症包括多动性运动障碍以及诸如精神分裂症和心境障碍等病况。转运蛋白囊泡单胺转运体2(vmat2)在突触前多巴胺释放中起重要作用，并且调节用于储存和释放的从细胞质到突触囊泡的单胺摄取。
3-异丁基-9,10-二甲氧基-1,3,4,6,7,11b-六氢-2h-吡啶并[2,1-a]-异喹啉-2-酮，也称为丁苯那嗪(tbz)，已经作为药物使用了数十年。四苯喹嗪是囊泡单胺转运体-2(vmat2)摄取儿茶酚胺的有效的、可逆的抑制剂(ic50＝3.2nm)(参见，例如，schermanetal.,proc.natl.acad.sci.usa,(1983)80:584-8)，并且现今用于治疗各种多动性障碍。与tbz相关的副作用包括镇静、抑郁、静坐不能以及帕金森症。tbz对vmat2的抑制导致体内脑单胺的耗竭(参见，例如，pettiboneetal.,eur.j.pharmacol.(1984)102:431-6)。tbz还抑制了大鼠脑中的突触前和突触后多巴胺受体(参见，例如，loginetal.,(1982)ann.neurology12:257-62；rechesetal.,j.pharmacol.exp.ther.(1983)225:515-521)。tbz的这种脱靶活性可能是观察到的副作用中的一些副作用的原因。
尽管在本领域已经取得了进展，但本领域中仍然需要改善的vmat2抑制剂，包括化合物、与其相关的组合物和方法。本公开满足了这些和其它需要，如参考以下公开内容所明示的
简要概述
提供了囊泡单胺转运体2(vmat2)抑制剂，以及与其相关的组合物和使用方法。
提供了化合物，其选自通式(i)化合物以及其药学上可接受的盐、溶剂化物和水合物：
其中：
r1和r2独立地是低级烃基、低级环烃基或低级环烃基烃基，其中每个低级烃基、低级环烃基和低级环烃基烃基独立地是未取代的或被一个或多个卤素、氰基或低级烃氧基取代；
r3是低级烃基；以及
r4是低级烃基或低级环烃基烃基。
还提供了包含一种或多种本文所述化合物与一种或多种药学上可接受的赋形剂和/或稀释剂组合的药物组合物。
还提供了用于治疗获益于抑制vmat2的疾病、病症或病况的方法。还提供了通过对有需要的个体施用药物有效量的一种或多种本文所述化合物或包含其的药物组合物来治疗有需要的个体的神经学和/或精神病学的疾病和病症的方法。
参考以下详细说明，本发明的这些和其它方面将变得显而易见。为此，本文列举了各种参考文献，它们更详细地描述了某些背景信息、过程、化合物和/或组合物，并且其全部内容各自通过援引并入本文。
详细说明
本文未特别定义的术语应被赋予本领域技术人员根据本公开内容和上下文所给出的含义。然而，除非作出相反说明，如说明书中所用，术语具有所指定的含义。
在以下的说明中，列举了某些具体细节以便提供对各种实施方案的全面透彻理解。然而，本领域技术人员会理解，本发明化合物可以不用这些细节来制备和使用。在其它情况下，未显示出或详细描述熟知的结构以避免实施方案的不必要的模糊描述。除非上下文另有要求，否则在说明书和其后的权利要求书通篇中，词语“包含(comprise)”及其变体，诸如“包含(comprises)”和“包含(comprising)”应解释为开放的、包括性涵义，即，解释为“包括，但不限于”。此外，术语“包含(comprising)”(以及相关术语，诸如“包含(comprise)”或“包含(comprising)”或“具有(having)”或“包括(including)”)并非旨在排除在其它某些实施方案中，例如，本文所述的物质、组合物、方法或工艺等的任何组合的实施方案可以由所述特征“组成”或“基本上组成”。本文提供的标题仅为了方便，并不解释所要求保护的实施方案的范围或含义。
在整个说明书中提及的“一个实施方案”或“实施方案”，意指结合该实施方案描述的具体特征、结构或特点包括在至少一个实施方案中。因此，在整个说明书的不同地方出现的短语“在一个实施方案中”或“在实施方案中”不必全部指同一实施方案。而且，具体的特征、结构或特点可以以任何适合的方式组合在一个或多个实施方案中。
此外，如在本说明书和所附权利要求中所用，单数形式“一个/一种(a)”、“一个/一种(a)”和“所述”包括复数指示物，除非上下文另外明确规定。因此，例如，关于“非人动物”可以指一种或多种非人动物或多个此类动物，并且关于“细胞”或“所述细胞”包括提及的一个或多个细胞以及本领域技术人员已知的其等同物(例如，多个细胞)等。当描述或要求保护方法的步骤，并且所述步骤被描述为以特定顺序发生时，第一步骤“优先于”(即，先于)第二步骤发生(或进行)的描述如果被改写为第二步骤“随后于”第一步骤发生(或进行)的陈述，那么它们具有相同的含义。当提及数字或数值范围时，术语“约”意指提及的数字或数值范围为实验变异内的近似值(或在统计实验误差内)，因此，数字或数值范围可以在所述数字或数值范围的1％至15％变化。还应当注意的是，术语“或者/或”通常采用包括“和/或”的含义，除非上下文另外明确规定。例如，当提及至少一种化合物或至少一种组合物时，术语“至少一种”具有与术语“一种或多种”相同的含义和理解。
如本说明书和所附权利要求书中所用，除非另有相反规定，否则以下术语具有所表明的含义。
“vmat2”是指人的囊泡单胺转运体同种型2，其是将单胺，特别是诸如多巴胺、去甲肾上腺素、5-羟色胺和组胺的神经递质从细胞胞质转运到突触囊泡中的整合膜蛋白。
术语“vmat2抑制剂”、“抑制vmat2”或“vmat2的抑制”是指本文公开的化合物改变vmat2功能的能力。vmat2抑制剂可通过在该抑制剂与vmat2之间形成可逆或不可逆共价键或者通过形成非共价结合的复合物来阻断或降低vmat2的活性。这种抑制可仅在特定细胞类型中显现，或者可能取决于特定的生物事件。术语“vmat2抑制剂”、“抑制vmat2”或“vmat2的抑制”还指通过降低在vmat2与天然底物之间形成复合物的可能性来改变vmat2的功能。
需要本文所述的组合物和方法的个体包括已经由医学和精神病学领域的技术人员诊断为患有神经学和/或精神病学疾病和病症的个体，所述疾病和病症包括多动性运动障碍(例如，迟发性运动障碍)。待治疗的个体(或患者)可以是哺乳动物，包括人或非人灵长类。哺乳动物可以是家养动物，诸如猫或狗。
如医学领域技术人员所了解的，术语“治疗(treat)”和“治疗(treatment)”是指个体(即，患者)的疾病、病症或病况的医学管理(参见，例如斯特德曼医学词典(stedman’smedicaldictionary))。术语“治疗(treatment)”和“治疗(treating)”涵盖防范性(即预防性)治疗或治疗性(即治愈性和/或姑息性)治疗。因此，术语“治疗(treatment)”和“治疗(treating)”包括对已经患有病况、特别是以显现出的形式患有病况的患者的治疗性治疗。治疗性治疗可以是对症治疗以便减轻具体适应症的症状，或者可以是病因治疗以便逆转或部分逆转适应症的病况或停止或减缓疾病的进展。因此，本文所述的组合物和方法可以用作例如一段时间内的治疗性治疗以及用于慢性治疗。另外，术语“治疗(treatment)”和“治疗(treating)”包括预防性治疗，即对处于患有上文提及的病况的风险的患者的治疗，从而降低了风险。
治疗性和/或预防性益处包括，例如改善的临床结果，治疗性治疗和预防性或防范性措施，其中目的是预防或减缓或延迟(减轻)不希望的生理变化或病症，或者预防或减缓或延迟(减轻)这种病症的扩展或严重程度。本文的组合物的预防性给药可以在用诸如精神安定药的多巴胺受体阻断药第一次治疗时开始。如本文所讨论的，来自治疗个体的有益的或期望的临床结果包括但不限于清除、减轻或缓解由待治疗的疾病、病况或病症引起的症状或与待治疗的疾病、病况或病症相关的症状；减少症状的发生；改善生活质量；更长的无病状态(即，减少个体出现据此进行疾病诊断的症状的可能性或倾向)；疾病程度的减小；稳定的(即，不恶化)病情；延迟或减缓疾病进展；改善或减轻疾病状态；和缓解(无论是部分还是全部)，无论是可检测的还是不可检测的；和/或总存活期。“治疗”还可以意指当与如果个体未接受治疗的预期生存期相比，生存期延长。需要治疗的个体包括已经患有所述病况或病症的个体，以及易于患有或处于患有所述疾病、病况或病症(例如，td或本文所述的其它病况或病症)风险中的个体，以及要预防所述疾病、病况或病症(即，降低疾病、病症或病况发生的可能性)的个体。本文所述的任何一种vmat2抑制剂的治疗有效量是为治疗的个体提供统计学上或临床上显著的治疗性和/或预防性益处的vmat2抑制剂的量。
测定用于治疗神经学和精神病学疾病和病症的治疗剂的有效性的方法是医学和临床领域技术人员常规使用的。通过举例说明的方式，可以通过异常不自主运动量表(abnormalinvoluntarymovementscale)(aims)来诊断、监测和评估患有多动性运动障碍的个体。aims是开发于1976年的结构化神经学检查，并且已经广泛用于运动性病症的评价。它由评分为零至四数值范围的七个不同的区域不自主身体运动评级组成，其中零被评为无，并且四被评为严重。
“单一疗法”是指将单一活性化合物或治疗性化合物向有需要的个体的给药。在一些实施方案中，单一疗法将包括治疗有效量的本文所述的化合物的给药。单一疗法可以与联合疗法相比，在联合疗法中，将多种活性化合物的组合给药，诸如该组合的各组分均以治疗有效量存在。
“维持疗法”是指给予患者治疗以使他们例如保持缓解状态，将他们的健康维持在无病状态或疾病受限状态。维持药物通常需要长时间段服用。
“辅助疗法”是指与主要治疗结合使用的治疗，并且其目的是辅助主要治疗。辅助疗法是共给药的疗法。例如，如果正在治疗强迫症，则主要疗法可以是例如抗抑郁药，并且本文所述的化合物的共给药可以认为是辅助疗法。
“低级烃基”是指仅由碳原子和氢原子组成的、饱和的或不饱和的直链或支链的烃链基团，其具有1至8个碳原子(c1-8)，或在更具体的实施方案中具有1至6个碳原子(c1-6)，或在更具体的实施方案中具有1至4个碳原子(c1-4)，并且其通过单键连接至分子的其余部分。完全饱和的低级烃基包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、新戊基、正己基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、2,3-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基等。不饱和的低级烃基包括但不限于在相邻的碳原子之间包含至少一个双键的任一个上文所列的饱和的低级烃基，诸如，乙烯基、丙-1烯基、丁-1-烯基、戊-1-烯基、戊-1,4-二烯基等。
“低级环烃基”是指仅由碳原子和氢原子组成的、饱和的或不饱和的非芳香族单环烃基团，其具有3至8个碳原子，或在更具体的实施方案中具有3至6个碳原子(c3-6)，或在更具体的实施方案中具有3个或4个碳原子(c3或c4)，并且其通过单键连接至分子的其余部分。此类基团包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基和环己基。
“低级环烃基烃基”是指如上文定义的低级烃基，其中氢原子被如上文定义的低级环烃基基团替代。此类基团包括但不限于-ch2-环丙基、-ch2-环丁基、-ch2-环戊基等。
“低级烃氧基”是指基团–o(低级烃基)，其中低级烃基如上文定义的。
“氰基”是指-cn基团。
“卤素”是指溴、氯、氟或碘。
关于立体异构体，本文所述的化合物具有多个手性(或不对称)中心，这会产生对映异构体、非对映异构体和按照绝对立体化学可以被定义为(r)-或(s)-的其它立体异构体形式。当本文所述的化合物含有烯属双键或其他几何不对称中心时，除非另有说明，否则所述化合物旨在包括e和z几何异构体二者(例如，顺式或反式)。同样地，除非另外表明，否则所有可能的异构体，以及它们的外消旋形式和光学纯形式，以及所有互变异构体形式也旨在包括在内。因此，可以预期，各种立体异构体及其混合物包括“对映异构体”，这是指两种立体异构体，其分子是彼此不可重叠的镜像。因此，化合物可以任何异构体形式存在，包括外消旋体、外消旋混合物，以及单独的对映异构体或非对映异构体。
因此，应理解，本发明涵盖本文公开的每个化合物和通式的每种非对映异构体、每种对映异构体及其混合物，就如同它们各自以针对每个手性碳的具体立体化学名称被单独公开那样。单独的异构体的分离(诸如，通过手性hplc，非对映异构体的混合物的重结晶等)或单独的异构体的选择性合成(诸如，通过对映异构体选择性合成等)是通过应用本领域从业者熟知的各种方法来完成的。
另外，本发明的各化合物和化学属涵盖其所有药学上可接受的盐、溶剂化物和水合物。
应理解，当提及本文所述的化合物时使用短语“多种药学上可接受的盐、多种溶剂化物和多种水合物”或短语“药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物”时，其涵盖了该化合物的药学上可接受的溶剂化物和/或水合物，该化合物的药学上可接受的盐，以及该化合物的药学上可接受的盐的药学上可接受的溶剂化物和/或水合物。还应理解，当提及本文所述的盐时使用短语“药学上可接受的多种溶剂化物和多种水合物”或短语“药学上可接受的溶剂化物或水合物”时，其涵盖此类盐的药学上可接受的溶剂化物和/或水合物。
本文所述的化合物通常可以用作游离酸或游离碱。可替代地，化合物可以以酸加成盐或碱加成盐的形式使用。游离氨基基团的酸加成盐可以通过本领域熟知的方法制备，并且可以由有机酸和无机酸形成。合适的有机酸包括马来酸、富马酸、苯甲酸、抗坏血酸、琥珀酸、甲磺酸、对甲苯磺酸、乙酸、三氟乙酸、草酸、丙酸、酒石酸、水杨酸、柠檬酸、葡萄糖酸、乳酸、扁桃酸、肉桂酸、天冬氨酸、硬脂酸、棕榈酸、乙醇酸、谷氨酸和苯磺酸。合适的无机酸包括盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸和硝酸。碱加成盐包括与羧酸根阴离子形成的那些盐，并且包括与有机阳离子和无机阳离子形成的盐，所述阳离子例如选自碱金属和碱土金属(例如，锂、钠、钾、镁、钡和钙)，以及铵离子及其取代的衍生物(例如，二苄基铵、苄基铵、2-羟基乙铵等)的那些。因此，“药学上可接受的盐”旨在涵盖任何的和所有的可接受的盐形式，包括单盐和二盐形式。
本文所述的化合物可以以从完全无定形到完全结晶的固态的连续体存在。此外，本文所述的化合物中的一些化合物可以以多晶型物存在。
另外，化合物中的一些化合物还可与水或其它有机溶剂形成溶剂化物。术语“溶剂化物”在本文中用于描述包含本文所述的化合物和一个或多个药学上可接受的溶剂分子的分子复合物。当溶剂分子是水时，分子复合物被称为“水合物”。此类水合物和溶剂化物同样地包括在本公开的范围内。
如本领域技术人员应理解的，本文所述的任何化合物均可引入同位素。因此，还提供了放射性标记的化合物，其不仅可用于放射成像，还可用于体外和体内测定中，用于定位和定量包括人在内的组织样本中的受体，以及通过抑制放射性标记的化合物的结合来鉴定受体配体。本发明的另一个目的是开发新的受体测定法，其包括这种放射性标记的化合物。
这些同位素标记的化合物在其他方面与本文所述的化合物相同，其中一个或多个原子被所具有的原子质量或质量数不同于自然界中通常发现的原子质量或质量数的原子替代。可引入这些化合物中的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、氟和氯的同位素，例如但不限于2h、3h、13c、14c、15n、18o、17o、18f和36cl。某些同位素标记的化合物，例如其中引入放射性同位素(诸如3h和14c)的那些化合物，也可用于药物或底物组织分布测定。特别优选氚化氢(3h)和碳-14(14c)同位素，因为它们易于制备和可检测性。用诸如氘(2h或d)的较重的同位素取代可以提供由较大的代谢稳定性而产生的某些治疗优势，例如增加的体内半衰期或降低的剂量要求，因此在某些情况下可能是优选的。同位素标记的化合物通常可以通过进行本领域常规实践的程序来制备。
本公开包括存在于本发明的化合物、中间体、盐和其晶体形式中的原子的所有同位素。同位素包括具有相同原子序数但不同质量数的那些原子。本发明的一个方面包括本发明的化合物、中间体、盐和其晶体形式中一个或多个原子被具有相同原子序数但不同质量数的原子取代的每种组合。一个这种实例是将一种本发明的化合物、中间体、盐和其晶体形式中存在的为自然丰度最大的同位素(诸如1h或12c)的原子用不是自然丰度最大的同位素(诸如2h或3h(取代1h)，或11c、13c或14c(取代12c))的不同原子取代。因此，本发明的一个方面包括本发明的化合物、中间体、盐和其晶体形式中的一个或多个氢原子被氘取代的每种组合。通常将已发生这种取代的化合物称为同位素标记的化合物。可以使用本领域普通技术人员已知的多种不同的合成方法中的任一种来完成本发明化合物、中间体、盐及其晶体形式的同位素标记，并且他们容易被认为理解合成方法并可获得进行这种同位素标记所需的试剂。举个普通实例，但不限于，氢的同位素包括2h(氘)和3h(氚)。碳的同位素包括11c、13c和14c。氮的同位素包括13n和15n。氧的同位素包括15o、17o和18c。氟的同位素包括18f。磷的同位素包括32p和33p。硫的同位素包括35s。氯的同位素包括36cl。溴的同位素包括75br、76br、77br和82br。碘的同位素包括123i、124i、125i和131i。
本发明的另一方面包括组合物，诸如在合成、预配制等过程中制备的那些，以及药物组合物，例如意欲在哺乳动物中用于治疗一种或多种本文所述病症而制备的那些，包含一种或多种本发明的化合物、中间体、盐及其晶体形式，其中同位素在组合物中的天然存在的分布受到干扰。本发明的另一方面包括包含如本文所述的化合物的组合物和药物组合物，其中该化合物在一个或多个位置上富集有不同于天然丰度最大的同位素的同位素。容易使用方法来测量这种同位素干扰或富集，诸如质谱；并且对于为放射性同位素的同位素，可以使用其他方法，诸如与hplc或gc联用的放射性检测器。
本发明的某些同位素标记的化合物可用于化合物和/或底物组织分布测定中。在一些实施方案中，放射性核素3h和/或14c同位素可用于这些研究中。此外，用较重的同位素诸如氘(即，2h)取代可以提供由较大的代谢稳定性而产生的某些治疗优势(例如，增加的体内半衰期或降低的剂量要求)，因此在某些情况下可以是优选的。本发明的同位素标记的化合物通常可以按照与实施例中公开的那些程序相似的程序通过用同位素标记的试剂代替未同位素标记的试剂来制备。下文讨论了其他有用的合成方法。此外，应当理解，本发明化合物中表示的所有原子可以是这种原子的最常见的同位素，也可以是较稀少的放射性同位素或非放射性同位素。
用于将放射性同位素引入有机化合物的合成方法适用于本发明的化合物，并且是本领域熟知的。例如，将活度水平的氚引入目标分子中的这些合成方法如下：
a.用氚气催化还原：该程序通常产生高比活度产物，并且需要卤代的或不饱和的前体。
b.用硼氢[3h]化钠还原：该程序相当便宜，并且需要含有诸如醛、酮、内酯、酯等可还原的官能团的前体。
c.用氢[3h]化铝锂还原：此程序提供了几乎理论上的比活度的产品。也需要含有诸如醛、酮、内酯、酯等可还原的官能团的前体。
d.氚气曝射标记：该程序包括在合适的催化剂存在下将含有可交换质子的前体曝射于氚气。
e.使用甲基碘[3h]进行n-甲基化：通常使用该程序通过用高比活度的甲基碘(3h)处理合适的前体来制备o-甲基或n-甲基(3h)产物。该方法通常允许较高的比活度，诸如例如，约70-90ci/mmol。
用于将活度水平的125i引入目标分子中的合成方法包括：
a.sandmeyer和类似的反应：该程序将芳基胺或杂芳基胺转化为重氮盐，诸如四氟硼酸重氮盐，随后使用na125i转化为125i标记的化合物。zhu,g-d.和同事在j.org.chem.,2002,67,943-948中报道了代表性程序。
b.苯酚的邻位125碘化：该程序允许在苯酚的邻位处引入125i，如collier,t.l.和同事在j.labelledcompd.radiopharm.,1999,42,s264-s266中报道的。
c.用125i与芳基溴化物和杂芳基溴化物交换：此方法通常是两步过程。第一步是使用例如pd催化的反应[即pd(ph3p)4]将芳基或杂芳基溴化物转化成相应的三烃基锡中间体，或者在三烃基锡卤化物或六烃基二锡[例如，(ch3)3snsn(ch3)3]的存在下，通过芳基或杂芳基锂进行转化。lebas,m.-d.和同事在j.labelledcompd.radiopharm.2001,44,s280-s282中报道了代表性程序。
提供了化合物，其选自通式(i)的化合物以及其药学上可接受的盐、溶剂化物和水合物：
其中：
r1和r2独立地是低级烃基、低级环烃基或低级环烃基烃基，其中每个低级烃基、低级环烃基和低级环烃基烃基独立地是未取代的或被一个或多个卤素、氰基或低级烃氧基取代；
r3是低级烃基；以及
r4是低级烃基或低级环烃基烃基。
在一些实施方案中，r1是低级烃基。在一些实施方案中，r1是c1-6饱和的烃基。在一些实施方案中，r1是未取代的低级烃基。在一些实施方案中，r1是甲基、乙基、正丙基、异丙基、异丁基、新戊基。
在一些实施方案中，r1是取代的低级烃基。
在一些实施方案中，r1是被卤素取代的低级烃基。在一些实施方案中，r1是被一个、两个或三个卤素基团取代的c1-4饱和的烃基。在一些实施方案中，一个、两个或三个卤素基团中的每个都是氟。
在一些实施方案中，r1是氟代烃基。在一些实施方案中，r1是-(ch2)3ch2f、-(ch2)2ch2f、-ch2ch2f、-(ch2)4cf3、-(ch2)3cf3、-(ch2)2cf3或–ch2cf3。
在一些实施方案中，r1是被低级烃氧基取代的低级烃基。在一些实施方案中，r1是被c1-4饱和的烃氧基取代的c1-4饱和的烃基。在一些实施方案中，r1是-ch2ch2och3。
在一些实施方案中，r1是被氰基取代的低级烃基。在一些实施方案中，r1是被氰基基团取代的c1-4饱和的烃基。在一些实施方案中，r1是-ch2ch2ch2cn。
在一些实施方案中，r1是环烃基。在一些实施方案中，r1是环丙基或环丁基。
在一些实施方案中，r1是环烃基烃基。在一些实施方案中，r1是低级环烃基烃基，其中低级环烃基烃基中的低级烃基部分是c1-4饱和的烃基并且低级环烃基烃基中的环烃基部分是环丙基、环丁基或环戊基。在一些实施方案中，r1是-ch2-环丙基、-ch2-环丁基或-ch2-环戊基。
在一些实施方案中，r1是取代的环烃基烃基。
在一些实施方案中，r1是被卤素取代的环烃基烃基。在一些实施方案中，r1是被卤素取代的低级环烃基烃基，其中低级环烃基烃基中的低级烃基部分是c1-4饱和的烃基并且低级环烃基烃基中的环烃基部分是环丙基、环丁基或环戊基，并且其中低级环烃基烃基基团的任一部分被卤素取代。在一些实施方案中，r1是：
在一些实施方案中，r2是低级烃基。在一些实施方案中，r2是c1-4饱和的烃基。在一些实施方案中，r2是甲基、乙基或丙基。在一些实施方案中，r2是甲基。
在一些实施方案中，r3是c1-6饱和的烃基。在一些实施方案中，r3是甲基、乙基、正丙基、异丙基、异丁基或新戊基。在一些实施方案中，r3是甲基。
在一些实施方案中，r4是低级烃基。在一些实施方案中，r4是c1-6饱和的烃基。在一些实施方案中，r4是异丁基或新戊基。
在一些实施方案中，r4是低级环烃基或低级环烃基烃基。在一些实施方案中，r4是环丙基、环丁基或-ch2-环丁基。在一些实施方案中，r4是低级环烃基烃基，其中低级环烃基烃基中的低级烃基部分是c1-4饱和的烃基并且低级环烃基烃基中的环烃基部分是环丙基或环丁基。
在一些实施方案中，vmat2抑制剂选自通式(ii)化合物以及其药学上可接受的盐、溶剂化物和水合物：
其中r1、r2、r3和r4如本文所述。
在一些实施方案中，vmat2抑制剂选自通式(iii)化合物以及其药学上可接受的盐、溶剂化物和水合物：
其中r1、r3和r4如本文所述。
在一些实施方案中，vmat2抑制剂选自通式(iv)化合物以及其药学上可接受的盐、溶剂化物和水合物：
其中r1如本文所述。
在一些实施方案中，vmat2抑制剂选自通式(v)化合物以及其药学上可接受的盐、溶剂化物和水合物：
其中r1如本文所述。
在一些实施方案中，vmat2抑制剂选自通式(vi)化合物以及其药学上可接受的盐、溶剂化物和水合物：
其中r1如本文所述。
在一些实施方案中，vmat2抑制剂在一个或多个位置处是氘化的。
在一些实施方案中，r1在一个或多个位置处是氘化的。在一些实施方案中，r1是-cd3或-cd2cd3。
在一些实施方案中，r2在一个或多个位置处是氘化的。在一些实施方案中，r2是-cd3或-cd2cd3。
在一些实施方案中，r1和r2中的每个在一个或多个位置处是氘化的。
在一些实施方案中，所述化合物选自以下化合物中的一种，以及其药学上可接受的盐、溶剂化物和水合物。
(3r,11bs)-2-乙基-9,10-二甲氧基-3-(2-甲基丙基)-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉；
(3r,11bs)-9,10-二甲氧基-2-甲基-3-(2-甲基丙基)-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉；
(3r,11bs)-9,10-二甲氧基-2,3-双(2-甲基丙基)-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉；
(3r,11br)-2-乙基-9,10-二甲氧基-3-(2-甲基丙基)-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉；
(3r,11br)-9,10-二甲氧基-2-甲基-3-(2-甲基丙基)-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉；
(3r,11br)-9,10-二甲氧基-2,3-双(2-甲基丙基)-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉；
(3r,11bs)-9-乙氧基-10-甲氧基-2-甲基-3-(2-甲基丙基)-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉；
(3r,11bs)-10-甲氧基-2-甲基-3-(2-甲基丙基)-9-(丙-2-基氧基)-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉；
(3r,11bs)-9-(3-氟丙氧基)-10-甲氧基-2-甲基-3-(2-甲基丙基)-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉；
(3r,11bs)-9-(2-氟乙氧基)-10-甲氧基-2-甲基-3-(2-甲基丙基)-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉；
(3r,11bs)-9-环丙氧基-10-甲氧基-2-甲基-3-(2-甲基丙基)-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉；
(3r,11bs)-10-甲氧基-2-甲基-3-(2-甲基丙基)-9-丙氧基-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉；
(3r,11bs)-9-(环戊基氧基)-10-甲氧基-2-甲基-3-(2-甲基丙基)-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉；
(3r,11bs)-10-甲氧基-2-甲基-3-(2-甲基丙基)-9-(丙-2-烯-1-基氧基)-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉；
(3r,11bs)-10-甲氧基-2-甲基-9-(2-甲基丙氧基)-3-(2-甲基丙基)-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉；
(3r,11bs)-10-甲氧基-9-(2-甲氧基乙氧基)-2-甲基-3-(2-甲基丙基)-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉；
(3r,11bs)-9-(环丁基甲氧基)-10-甲氧基-2-甲基-3-(2-甲基丙基)-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉；
4-{[(3r,11bs)-10-甲氧基-2-甲基-3-(2-甲基丙基)-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉-9-基]氧基}丁腈；
(3r,11bs)-10-甲氧基-2-甲基-3-(2-甲基丙基)-9-(4,4,4-三氟丁氧基)-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉；
(3r,11bs)-9-(4-氟丁氧基)-10-甲氧基-2-甲基-3-(2-甲基丙基)-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉；
(3r,11bs)-9-(环丙基甲氧基)-10-甲氧基-2-甲基-3-(2-甲基丙基)-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉；
(3r,11bs)-9-环丁氧基-10-甲氧基-2-甲基-3-(2-甲基丙基)-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉；
(3r,11bs)-10-甲氧基-2-甲基-3-(2-甲基丙基)-9-(2,2,2-三氟乙氧基)-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉；
(3r,11bs)-9-[(2,2-二氟环丙基)甲氧基]-10-甲氧基-2-甲基-3-(2-甲基丙基)-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉；
(3r,11bs)-10-甲氧基-2-甲基-3-(2-甲基丙基)-9-(3,3,3-三氟丙氧基)-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉；
(3r,11br)-10-甲氧基-2-甲基-3-(2-甲基丙基)-9-(丙-2-基氧基)-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉；
(3r,11br)-9-(3-氟丙氧基)-10-甲氧基-2-甲基-3-(2-甲基丙基)-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉；
(3r,11br)-9-(2-氟乙氧基)-10-甲氧基-2-甲基-3-(2-甲基丙基)-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉；
(3r,11br)-9-环丙氧基-10-甲氧基-2-甲基-3-(2-甲基丙基)-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉；
(3r,11bs)-3-(环丁基甲基)-9-(3-氟丙氧基)-10-甲氧基-2-甲基-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉；
(3r,11bs)-3-(环丁基甲基)-10-甲氧基-2-甲基-9-(2,2,2-三氟乙氧基)-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉；
(3r,11bs)-3-(环丁基甲基)-9-[(2,2-二氟环丙基)甲氧基]-10-甲氧基-2-甲基-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉；
(3r,11bs)-3-(环丁基甲基)-9-(2-氟乙氧基)-10-甲氧基-2-甲基-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉；
(3r,11bs)-3-(环丁基甲基)-9-(环丙基甲氧基)-10-甲氧基-2-甲基-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉；
(3r,11bs)-9-(环丁基甲氧基)-3-(环丁基甲基)-10-甲氧基-2-甲基-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉；
(3r,11bs)-3-(环丁基甲基)-10-甲氧基-2-甲基-9-(4,4,4-三氟丁氧基)-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉；
(3r,11bs)-3-(环丁基甲基)-9-(4-氟丁氧基)-10-甲氧基-2-甲基-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉；
(3r,11br)-3-(环丁基甲基)-9-(3-氟丙氧基)-10-甲氧基-2-甲基-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉；
(3r,11bs)-3-(2,2-二甲基丙基)-9-(3-氟丙氧基)-10-甲氧基-2-甲基-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉；
(3r,11bs)-3-(2,2-二甲基丙基)-9,10-二甲氧基-2-甲基-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉；
(3r,11bs)-3-(2,2-二甲基丙基)-10-甲氧基-2-甲基-9-(2,2,2-三氟乙氧基)-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉；
(3r,11bs)-9-[(2,2-二氟环丙基)甲氧基]-3-(2,2-二甲基丙基)-10-甲氧基-2-甲基-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉；
(3r,11bs)-3-(2,2-二甲基丙基)-10-甲氧基-2-甲基-9-(3,3,3-三氟丙氧基)-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉；
(3r,11bs)-3-(2,2-二甲基丙基)-9-(2-氟乙氧基)-10-甲氧基-2-甲基-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉；
(3r,11bs)-9-(环丙基甲氧基)-3-(2,2-二甲基丙基)-10-甲氧基-2-甲基-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉；
(3r,11bs)-9-(环丁基甲氧基)-3-(2,2-二甲基丙基)-10-甲氧基-2-甲基-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉；
(3r,11bs)-3-(2,2-二甲基丙基)-10-甲氧基-2-甲基-9-(4,4,4-三氟丁氧基)-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉；
(3r,11bs)-3-(2,2-二甲基丙基)-9-(4-氟丁氧基)-10-甲氧基-2-甲基-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉；
(3r,11bs)-3-(2,2-二甲基丙基)-10-甲氧基-9-(2-甲氧基乙氧基)-2-甲基-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉；
(3r,11bs)-3-(2,2-二甲基丙基)-9-乙氧基-10-甲氧基-2-甲基-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉；
(3r,11bs)-3-(2,2-二甲基丙基)-10-甲氧基-2-甲基-9-(丙-2-基氧基)-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉；
(3r,11bs)-3-(2,2-二甲基丙基)-9-(乙氧基-d5)-10-甲氧基-2-甲基-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉；
(3r,11bs)-3-(2,2-二甲基丙基)-9,10-双(甲氧基-d3)-2-甲基-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉；
(3r,11br)-3-(2,2-二甲基丙基)-9-(3-氟丙氧基)-10-甲氧基-2-甲基-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉；以及
(3r,11br)-3-(2,2-二甲基丙基)-9,10-二甲氧基-2-甲基-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉。
在一些实施方案中，化合物选自3-(2,2-二甲基丙基)-9,10-二甲氧基-2-甲基-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉以及其药学上可接受的盐、溶剂化物和水合物。在一些实施方案中，化合物在一个或多个位置处具有氘。
在一些实施方案中，化合物选自(3r,11bs)-3-(2,2-二甲基丙基)-9,10-二甲氧基-2-甲基-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉以及其药学上可接受的盐、溶剂化物和水合物。在一些实施方案中，化合物在一个或多个位置处具有氘。
在一些实施方案中，化合物选自9-环丙氧基-10-甲氧基-2-甲基-3-(2-甲基丙基)-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉以及其药学上可接受的盐、溶剂化物和水合物。在一些实施方案中，化合物在一个或多个位置处具有氘。
在一些实施方案中，化合物选自(3r,11bs)-9-环丙氧基-10-甲氧基-2-甲基-3-(2-甲基丙基)-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉以及其药学上可接受的盐、溶剂化物和水合物。在一些实施方案中，化合物在一个或多个位置处具有氘。
在一些实施方案中，化合物选自3-(2,2-二甲基丙基)-10-甲氧基-2-甲基-9-(2,2,2-三氟乙氧基)-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉以及其药学上可接受的盐、溶剂化物和水合物。在一些实施方案中，化合物在一个或多个位置处具有氘。
在一些实施方案中，化合物选自(3r,11bs)-3-(2,2-二甲基丙基)-10-甲氧基-2-甲基-9-(2,2,2-三氟乙氧基)-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉以及其药学上可接受的盐、溶剂化物和水合物。在一些实施方案中，化合物在一个或多个位置处具有氘。
在一些实施方案中，化合物选自3-(2,2-二甲基丙基)-9-乙氧基-10-甲氧基-2-甲基-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉以及其药学上可接受的盐、溶剂化物和水合物。在一些实施方案中，化合物在一个或多个位置处具有氘。
在一些实施方案中，化合物选自(3r,11bs)-3-(2,2-二甲基丙基)-9-乙氧基-10-甲氧基-2-甲基-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉以及其药学上可接受的盐、溶剂化物和水合物。在一些实施方案中，化合物在一个或多个位置处具有氘。
在一些实施方案中，化合物选自9,10-双(甲氧基-d3)-2-甲基-3-新戊基-1,3,4,6,7,11b-六氢-2h-吡嗪并[2,1-a]异喹啉以及其药学上可接受的盐、溶剂化物和水合物。在一些实施方案中，化合物在一个或多个另外位置处具有氘。
在一些实施方案中，化合物选自(3r,11bs)-9,10-双(甲氧基-d3)-2-甲基-3-新戊基-1,3,4,6,7,11b-六氢-2h-吡嗪并[2,1-a]异喹啉以及其药学上可接受的盐、溶剂化物和水合物。在一些实施方案中，化合物在一个或多个另外位置处具有氘。
在一些实施方案中，化合物选自10-甲氧基-2-甲基-3-(2-甲基丙基)-9-(2,2,2-三氟乙氧基)-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉以及其药学上可接受的盐、溶剂化物和水合物。在一些实施方案中，化合物在一个或多个位置处具有氘。
在一些实施方案中，化合物选自(3r,11bs)-10-甲氧基-2-甲基-3-(2-甲基丙基)-9-(2,2,2-三氟乙氧基)-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉以及其药学上可接受的盐、溶剂化物和水合物。在一些实施方案中，化合物在一个或多个位置处具有氘。
在一些实施方案中，化合物选自10-甲氧基-2-甲基-3-(2-甲基丙基)-9-(3,3,3-三氟丙氧基)-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉以及其药学上可接受的盐、溶剂化物和水合物。在一些实施方案中，化合物在一个或多个位置处具有氘。
在一些实施方案中，化合物选自(3r,11bs)-10-甲氧基-2-甲基-3-(2-甲基丙基)-9-(3,3,3-三氟丙氧基)-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉以及其药学上可接受的盐、溶剂化物和水合物。在一些实施方案中，化合物在一个或多个位置处具有氘。
在一些实施方案中个，化合物选自3-(2,2-二甲基丙基)-9-(3-氟丙氧基)-10-甲氧基-2-甲基-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉以及其药学上可接受的盐、溶剂化物和水合物。在一些实施方案中，化合物在一个或多个位置处具有氘。
在一些实施方案中，化合物选自(3r,11bs)-3-(2,2-二甲基丙基)-9-(3-氟丙氧基)-10-甲氧基-2-甲基-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉以及其药学上可接受的盐、溶剂化物和水合物。在一些实施方案中，化合物在一个或多个位置处具有氘。
在一些实施方案中个，化合物选自3-(2,2-二甲基丙基)-10-甲氧基-2-甲基-9-(3,3,3-三氟丙氧基)-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉以及其药学上可接受的盐、溶剂化物和水合物。在一些实施方案中，化合物在一个或多个位置处具有氘。
在一些实施方案中，化合物选自(3r,11bs)-3-(2,2-二甲基丙基)-10-甲氧基-2-甲基-9-(3,3,3-三氟丙氧基)-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉以及其药学上可接受的盐、溶剂化物和水合物。在一些实施方案中，化合物在一个或多个位置处具有氘。
通常，在本文所述的反应中使用的化合物可以根据本领域技术人员已知的有机合成技术，从可商购的化学品和/或从化学文献中描述的化合物开始制备。“可商购的化学品”可以获得自标准的商业来源，包括acrosorganics(pittsburghpa)、aldrichchemical(milwaukeewi,includingsigmachemicalandfluka)、apinchemicalsltd.(miltonparkuk)、avocadoresearch(lancashireu.k.)、bdhinc.(toronto,canada)、bionet(cornwall,u.k.)、chemserviceinc.(westchesterpa)、crescentchemicalco.(hauppaugeny)、eastmanorganicchemicals、eastmankodakcompany(rochesterny)、fisherscientificco.(pittsburghpa)、fisonschemicals(leicestershireuk)、frontierscientific(loganut)、icnbiomedicals,inc.(costamesaca)、keyorganics(cornwallu.k.)、lancastersynthesis(windhamnh)、maybridgechemicalco.ltd.(cornwallu.k.)、parishchemicalco.(oremut)、pfaltz&bauer,inc.(waterburycn)、polyorganix(houstontx)、piercechemicalco.(rockfordil)、riedeldehaenag(hanover,germany)、spectrumqualityproduct,inc.(newbrunswick,nj)、tciamerica(portlandor)、transworldchemicals,inc.(rockvillemd)和wakochemicalsusa,inc.(richmondva)。
本领域普通技术人员已知的方法可以通过各种参考书籍和数据库确定。详解在制备本公开的vmat2抑制剂中使用的反应物的合成或者提供描述所述制备的文章的参考文献的合适的参考书籍和专著包括，例如“syntheticorganicchemistry,”johnwiley&sons,inc.,newyork；s.r.sandleretal.,“organicfunctionalgrouppreparations,”2nded.,academicpress,newyork,1983；h.o.house,“modernsyntheticreactions”,2nded.,w.a.benjamin,inc.menlopark,calif.1972；t.l.gilchrist,“heterocyclicchemistry”,2nded.,johnwiley&sons,newyork,1992；j.march,“advancedorganicchemistry:reactions,mechanismsandstructure,”4thed.,wiley-interscience,newyork,1992。详解在制备本公开的vmat2抑制剂中使用的反应物的合成或者提供描述所述制备的文章的参考文献的另外的合适的参考书籍和专著包括，例如fuhrhop,j.andpenzling.“organicsynthesis:concepts,methods,startingmaterials”,second,revisedandenlargededition(1994)johnwiley&sonsisbn:3-527-29074-5；hoffman,r.v.“organicchemistry,anintermediatetext”(1996)oxforduniversitypress,isbn0-19-509618-5；larock,r.c.“comprehensiveorganictransformations:aguidetofunctionalgrouppreparations”2ndedition(1999)wiley-vch,isbn:0-471-19031-4；march,j.“advancedorganicchemistry:reactions,mechanisms,andstructure”4thedition(1992)johnwiley&sons,isbn:0-471-60180-2；otera,j.(editor)“moderncarbonylchemistry”(2000)wiley-vch,isbn:3-527-29871-1；patai,s.“patai's1992guidetothechemistryoffunctionalgroups”(1992)interscienceisbn:0-471-93022-9；quin,l.d.etal.“aguidetoorganophosphoruschemistry”(2000)wiley-interscience,isbn:0-471-31824-8；solomons,t.w.g.“organicchemistry”7thedition(2000)johnwiley&sons,isbn:0-471-19095-0；stowell,j.c.,“intermediateorganicchemistry”2ndedition(1993)wiley-interscience,isbn:0-471-57456-2；“industrialorganicchemicals:startingmaterialsandintermediates:anullmann'sencyclopedia”(1999)johnwiley&sons,isbn:3-527-29645-x,in8volumes；“organicreactions”(1942-2000)johnwiley&sons,inover55volumes；和“chemistryoffunctionalgroups”johnwiley&sons,in73volumes。
具体的和类似的反应物也可以通过由美国化学学会的化学文摘服务准备的已知化学品的索引来确定，其可在大多数公共图书馆和大学图书馆中获得，也可以通过在线数据库获得(可以联系美国化学学会，washington，d.c.以获得更多细节)。在目录中已知的但不是可商购的化学品可以由定制化学品合成机构制备，其中许多标准化学品供应机构(例如，上文列出的那些)提供定制合成服务。用于本公开的药用盐的制备和选择的参考文献是p.h.stahl&c.g.wermuth“handbookofpharmaceuticalsalts,”verlaghelveticachimicaacta,zurich,2002。
本文所述的vmat2抑制剂可以通过已知的有机合成技术制备，包括下文方案中描述的以及在实施例中更详细描述的方法。
反应方案1
胺i与受保护的氨基酸偶联，然后脱保护以产生ii。通过用二甲氧基缩醛进行还原性脱氨基反应形成结构iii。结构iii在酸性条件下环化，然后还原酰胺羰基，得到iv。烃基化得到v。
还提供了制备通式v化合物的方法，其包括将通式iv化合物烃基化以产生通式v化合物。
在一些实施方案中，使通式iv化合物烃基化包括将通式iv化合物与通式r3-x化合物反应，其中x是离去基团，诸如碘。在一些实施方案中，在碱如碳酸钾的存在下进行烃基化。在一些实施方案中，在极性非质子溶剂如dmf、thf、1,4-二噁烷、乙腈、dmso或其混合物中进行烃基化。在一些实施方案中，极性非质子溶剂是dmf。在一些实施方案中，使用至少一个当量的通式r3-x化合物。在一些实施方案中，使用过量的通式r3-x化合物。
在一些实施方案中，将通式iv化合物烃基化包括在碱的存在下，将通式iv化合物与二碳酸二叔丁酯反应以产生相应的羧酸酯，然后用还原剂还原，例如用氢化铝锂(lah)还原，以产生通式v化合物。在一些实施方案中，碱是有机碱，例如三甲胺。在一些实施方案中，在极性非质子溶剂如二氯甲烷或四氢呋喃中进行烃基化。在一些实施方案中，使用至少一个当量的二碳酸二叔丁酯。在一些实施方案中，使用过量的二碳酸二叔丁酯。在一些实施方案中，在极性非质子溶剂如四氢呋喃或乙醚中进行还原。在一些实施方案中，使用过量的还原剂。
反应方案2
胺i与受保护的氨基酸偶联，然后脱保护以产生ii。通过用二甲氧基缩醛进行还原性脱氨基反应形成结构iii。通过用多聚甲醛进行还原性脱氨基反应形成结构iv。在酸性条件下环化结构iv，得到v。还原酰胺羰基，得到vi。
还提供了制备通式vi化合物的方法，其包括还原通式v化合物以产生通式vi化合物。在一些实施方案中，使用还原剂如lah或二异丁基氢化铝试剂进行还原。在一些实施方案中，使用过量的还原剂。在一些实施方案中，使用极性非质子溶剂。在一些实施方案中，溶剂是thf。
反应方案3
胺i与受保护的氨基酸偶联以产生ii。用r1将醇ii烃基化以产生iii。iii脱保护产生结构iv。通过用二甲氧基缩醛进行还原性脱氨基反应形成结构v。通过用多聚甲醛进行还原性脱氨基反应形成结构vi。在酸性条件下环化结构vi得到vii。还原酰胺羰基得到viii。
还提供了制备通式viii化合物的方法，其包括还原通式vii化合物以产生通式vi化合物。在一些实施方案中，使用还原剂进行还原，所述还原剂例如二烃基硼烷、例如9-硼双环[3.3.1]壬烷(9-bbn)，或氨基硼氢化物，例如二甲基氨基硼氢化锂。在一些实施方案中，使用过量的还原剂。在一些实施方案中，使用极性非质子溶剂。在一些实施方案中，溶剂是thf或甲基四氢呋喃。
还提供了通过本文所述的任何方法制备的vmat2抑制剂。通常，那些方法包括环化以形成三环环结构，还原羰基官能团(如果存在)以及将氮烃基化以引入r3的步骤，如下文反应方案1中所示。在反应方案2和3中，引入r3，接着环化，然后还原环羰基。在一些实施方案中，所述方法还包括拆分非对映异构体混合物以产生所需异构体富集的混合物的步骤。在一些实施方案中，所述方法还可任选地还包括形成盐。
在一些实施方案中，所述方法是安全、有效、成本有效和/或可扩展规模的。在一些实施方案中，所述方法适合于vmat2抑制剂的大规模或商业化产品。
在一些实施方案中，通过本文提供的方法制备的vmat2抑制剂具有的纯度按重量计不小于约95％，按重量计不小于约96％，按重量计不小于约97％，按重量计不小于约98％，按重量计不小于约98.5％，按重量计不小于约99％，按重量计不小于约99.5％，按重量计不小于约99.6％，按重量计不小于约99.7％，按重量计不小于约99.8％，或按重量计不小于约99.9％。
在一些实施方案中，本文提供的方法的总产率不小于约30％，不小于约40％，不小于约50％，不小于约55％，不小于约60％，不小于小于约65％，不小于约70％，不小于约75％，不小于约80％，不小于约85％，不小于约90％或不小于约95％，其中产率是基于起始原料计算的。
在某些实施方案中，通过本文提供的方法制备的vmat2抑制剂的干燥失重(lod)按重量计不大于约5％，按重量计不大于约4％，按重量计不大于约3％，按重量计不大于约2％，按重量计不大于约1％，按重量计不大于约0.9％，按重量计不大于约0.8％，按重量计不大于约0.7％，按重量计不大于约0.6％，按重量计不大于约0.5％，按重量计不大于约0.4％，按重量计不大于约0.3％，按重量计不大于约0.2％，或按重量计不大于约0.1％。
在某些实施方案中，通过本文提供的方法制备的vmat2抑制剂中的总杂质按重量计不大于约5％，按重量计不大于约4％，按重量计不大于约3％，按重量计不大于约2.5％，按重量计不大于约2％，按重量计不大于约1.5％，按重量计不大于约1％，按重量计不大于约0.5％，或按重量计不大于约0.1％。
在某些实施方案中，vmat2抑制剂是对映体富集的，所以一种对映体以大于50％的量存在。在某些实施方案中，vmat2抑制剂基本上不含其他立体异构体。如本文所用，短语“基本上不含其他立体异构体”意指组合物包含≤15％，例如≤10％，例如≤5％或≤1％的其它立体异构体。在某些实施方案中，可通过hplc(高效液相色谱法)检测杂质。
在某些实施方案中，杂质是挥发性有机化合物。在某些实施方案中，杂质是有机溶剂。在某些实施方案中，杂质是dmf、四氢呋喃或二氯甲烷。
在某些实施方案中，杂质是基于金属的杂质。
在某些实施方案中，杂质包括但不限于通式r3-x化合物，其中x是离去基团，诸如碘，反应方案1的通式i、ii、iii和/或iv的化合物，反应方案2的通式i、ii、iii、iv或v的化合物，或反应方案3的通式i、ii、iii、iv、v、vi或vii的化合物。
还提供了用于制备组合物的方法，其包括将本文所述的vmat2抑制剂与一种或多种药学上可接受的赋形剂和/或稀释剂混合。
本文所述的vmat2抑制剂可通过抑制人单胺转运体同种型2(vmat2)来减少中枢神经系统中单胺的供应。因此，这些vmat2抑制剂可在广泛的治疗应用中具有实用性，并可用于治疗由抑制人单胺转运体同种型2引起的或与之相关的多种病症。这些病症包括神经学和精神病学病症，特别是多动性运动障碍、精神分裂症和心境障碍。
多动性运动障碍代表一类神经学疾病，其特征在于不希望的和不可控制的或可控制性差的无意运动。这些病症的现象学变化很大，涵盖舞蹈病、震颤、肌张力障碍、肌阵挛、抽搐症、其他运动障碍、痉挛和颤抖。多动性运动障碍包括共济失调、舞蹈病、肌张力障碍、偏侧面肌痉挛、亨廷顿病、与亨廷顿病相关的舞蹈病、肌阵挛、不宁腿综合征、迟发性运动障碍、抽搐症、图雷特氏综合征和震颤。
心境障碍代表一类根本问题主要影响人的持续情绪状态(他们的情绪)的精神病症。心境障碍包括：重度抑郁症(也被称为重度抑郁)、双相障碍、持续抑郁症(长期性轻度抑郁)、躁郁性气质(双相障碍的轻度形式)、紧张性抑郁、产后抑郁、狂躁和季节性情感病症(sad)。心境障碍包括物质诱导的情绪病症和由于医学病况(例如，甲状腺功能减退或帕金森氏病)引起的心境障碍。
双相障碍(也被称为双相性情感病症或狂躁-抑郁病)，是特征为一段时间的高涨情绪和一段时间的抑郁的精神病症。根据其严重性或是否存在精神病，高涨情绪的时间被称为狂躁或轻度狂躁。狂躁或狂躁发作的症状包括：长时间地感觉“高涨”或过度高兴或外向活泼的情绪，极度易怒，说话非常快速，思维奔驰，从一个想法跳跃至另一个想法，容易分心，活动增多，过度不安，失眠，对个人能力具有不切实际的相信，冲动行为，以及沉浸于快乐中，高风险行为。抑郁或抑郁发作的症状包括：过长时间的悲伤或绝望，对活动失去兴趣，感觉劳累，专心或记忆问题，难以做出决定，不安或易怒，改变饮食或睡眠习惯，以及自杀意念。患有双相障碍的患者具有高的自杀和自我伤害的风险。双相障碍的原因尚未完全了解，但认为遗传因素和环境因素均起作用。环境因素包括长期压力和儿童虐待史。
用于治疗双相障碍的狂躁、精神病或抑郁方面的药物通常包括情绪稳定剂、非典型抗精神病药或抗抑郁药，结合心理疗法。睡眠药物也可用于帮助睡眠障碍。对于药物和心理疗法不起作用的严重情况，可使用电休克疗法。双相障碍通常是终身疾病，并且如果未经治疗可能恶化。需要长期、连续的治疗以控制症状，甚至在适当治疗的情况下仍可能发生情绪改变。在找到帮助控制症状的药物之前，患者经常需要尝试多种不同的药物。考虑到与这些药物(尤其是抗精神病药物)相关的令人不快的和潜在的严重副作用，存在研发用于治疗情绪病症中的狂躁及其相关症状的新型疗法的需要。
精神分裂症影响大约1％的成年群体，并通过该病症对自我护理和身体健康的影响以及通过自杀而使预期寿命降低了平均20年至25年。目前，对精神分裂症的病因机制了解甚少。基于以下方面对精神分裂症进行临床诊断：精神病的特征性症状，错乱和所谓的“阴性”症状(表现为情感表达的范围减少、言语的产生减少和缺乏意志力/积极性)；疾病持续时间；受损的功能；并且排除诸如孤独症和双相障碍的其他病症。对于临床医生，鉴定哪些精神病患者患有精神分裂症需要临床敏锐性并且熟悉dsm-iv或icd-10诊断手册[参见，例如，corvin,bmcbiol.2011；9:77]。
分裂情感障碍是心理健康病况，其主要特征在于精神分裂症的症状，诸如幻觉或妄想，以及心境障碍的症状，诸如躁狂和抑郁。由于精神分裂症和心境障碍的症状都存在，诊断可能很困难，所以许多人被错误地诊断为患有精神分裂症或心境障碍。分裂情感障碍的治疗包括药物，通常是抗精神病药和抗抑郁药以及心理疗法。
抗精神病药物疗法是精神分裂症治疗的支柱。这些抗精神病药也称为精神安定药，通常引起精神分裂症的“阳性”症状的减轻，所述‘阳性’症状即精神病、思维障碍和行为紊乱。抗精神病药通常对认知和疾病的“阴性”症状影响较小，“阴性”症状包括缺乏积极性和情绪，社会退缩，对日常活动缺乏兴趣以及计划或执行活动的能力下降。
强迫症(ocd)是特征在于导致了为缓解由强迫性思想引起的苦恼的重复行为(强制)的复发性和持续性引发焦虑的思想(强迫)的焦虑症。患者可能认识到或未认识到强迫和强制是不合理的，并且这些思想和行为可变得耗时且损害功能。
ocd通常使用心理疗法、药物或两者进行治疗。认知行为疗法(cbt)向人们教导了思考、行为和对情况反应的不同方式，这帮助他们感觉到更少的焦虑或恐惧，而不具有强迫性思想或强制行动(认知重构和暴露反应预防)。然而，cbt需要付出努力和练习来学习健康的方式以应对焦虑。也可使用药物来治疗ocd。最常用的处方药物是抗焦虑药和抗抑郁药。抗焦虑药立即起效，但不应长时间服用。抗抑郁药可花费10至12周来起效，并且可引起副作用，例如头痛、恶心、睡眠障碍和性欲降低。也可使用非典型抗精神病药。在找到控制ocd症状的药物之前，ocd患者不得不尝试多种药物是很常见的。
然而，即使当ocd被适当地诊断并治疗，很多ocd患者是“抗治疗的”或“难治的”，并且不充分响应标准疗法。估计10％至40％的ocd患者是难治的(bystritsky,mol.psychiatry11:805-814)。治疗抗性通常是指尽管进行了多次充分且适当的治疗试验，但缺乏足够的改善。对于情绪病症，其可定义为，尽管进行了≥2次充分的抗抑郁药试验但未能减轻或没有临床反应(50％的症状减少)，或者尽管在多种神经递质类别中进行了充分的药物试验但没有临床反应。pallanti和quercioli(neuropsychopharmacol.biol.psychiatry30:400-412)提出，将强迫症治疗反应分类成一定范围内的多个阶段，从完全恢复(或缓解)至完全或部分响应至无响应(或完全难治的)。无论使用哪一种定义，具有焦虑症治疗抗性的患者尽管有多次适当的治疗暴露，但经历了最小限度的功能恢复。促成ocd中治疗抗性的因素包括但不限于：疾病严重性、医学共患病、精神病学共患病、治疗非依从性、文化因素、童年压力源、长期持续的压力源、生命阶段以及临床医生/健康系统的限制(khalsaetal.,curr.psychiatry,2011,10:45-52)。为具有最强的治疗抗性的患者保留了侵入性疗法，包括一些不可逆的侵入性疗法，例如电休克疗法、迷走神经刺激、重复经颅磁刺激和手术方法。因此需要更有效的治疗来治疗难治性ocd的相关症状。
莱希-尼亨综合征的特征在于，神经功能紊乱、认知障碍和行为障碍以及尿酸过度产生，并且具有1:380,000的患病率。患有这种综合征的患者具有认知缺陷、运动病症和自我伤害行为。莱希-尼亨综合征最常呈现的特征是在生命的第一年期间发育迟缓；肌张力减退和延迟的动作技能通常在3-6个月龄变得明显。患有莱希-尼亨综合征的儿童通常不能坐、爬行和行走，并且最终受限于轮椅。即使对症状进行了有效控制，多数受影响的个体只存活至20年或30年。
莱希-尼亨综合征以x-连锁隐性方式遗传，并且由于缺乏次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(hprt)而引起，所述酶在磷酸核糖焦磷酸存在下催化次黄嘌呤转化为肌苷一磷酸(肌苷酸，imp)以及鸟嘌呤转化为鸟嘌呤一磷酸(鸟苷酸，gmp)。为治疗高尿酸血症并由此降低肾结石、尿酸盐肾病、痛风性关节炎和痛风石的风险，使用别嘌呤醇(其阻断了由黄嘌呤氧化酶催化的次黄嘌呤和黄嘌呤代谢成为尿酸)来控制尿酸的过度产生。
对于控制存在的疾病的神经行为学方面尚无一致有效的干预。自我伤害和其他有害行为通常通过物理治疗、行为治疗和医学治疗的组合来控制。实际上所有受影响的个体需要物理约束来防止自我伤害。这些个体经常在他们自己的要求下受约束超过75％的时间。没有药物对于控制疾病的动作特征始终有效。因此需要更加有效的治疗来控制与莱希-尼亨综合征有关的病况。
阿尔茨海默病中的激动是指与该疾病有关的多种行为症状的组。激动随着疾病进展而发展，并且除认知损失之外还发生上述激动。症状组包括焦虑、抑郁、易怒和躁动不安(motorrestlessness)(例如踱步、徘徊、持续活动)。可发生的其他症状包括睡眠障碍、妄想、幻觉、强制行为、侵略性和一般的情绪苦恼。所有患有阿尔茨海默病的个体中有半数可发生激动。激动与具有差的生活质量、恶化的家庭关系和恶化的专业看护的患者有关，最终导致入住居住的看护机构。
患有阿尔茨海默病并表现出激动的患者已使用非典型抗精神病药(例如，利培酮、奥氮平)和典型抗精神病药(例如，氟哌啶醇)治疗，仅有中等的成功并且具有严重副作用的风险。因此，存在鉴定和研发用于治疗阿尔茨海默病患者的激动的更有效治疗剂的需要。
脆性x综合征(也被称为martin-bell综合征)是引起一些列发育问题的遗传病况，所述发育问题包括学习障碍和认知损害。通常，相比女性，男性受到该病症的影响更加严重。脆性x综合征以x-连锁显性方式遗传。脆性x综合征以约4,000名男性中1名和8,000名女性中1名出现。这种综合征由脆性x精神迟钝蛋白(fmrp)的损失而引起，通常是由于来自fmr1基因的5'非翻译区中的cgg重复扩增的转录沉默(参见，例如，verkerketal.,cell65:905-14(1991))。
受影响的个体在2岁年龄时通常具有讲话和语言的延迟发育。多数患有脆性x综合征的男性具有轻度至中度的智力障碍，同时受影响的女性约三分之一具有智力障碍。患有脆性x综合征的儿童也可表现出行为问题，包括焦虑、注意力缺陷、焦虑和活动过度行为(例如烦躁或冲动行为)。患有脆性x综合征并具有注意力缺陷的儿童可被诊断为注意力缺失症(add)，其包括受损的保持注意力的能力，以及难以集中在具体的工作任务上。患有脆性x综合征的个体约三分之一具有影响交流和社交的自闭症谱系障碍的特征，例如，焦虑和重复的规癖性行为(即，行为规癖(sterotypies))。在患有该综合征的约15％的男性和约5％的女性中发生癫痫。
患有脆性x综合征的患者中cgg重复扩增发生超过200次。当所述重复扩增以较少的程度(即，约50-200次)发生时，fmr1基因置换发生，并且fmrp产生至一定程度。fmr1基因置换可导致另一遗传病况，其被称为脆性x相关的震颤-共济失调综合征(fxtas)。fxtas的特征在于运动困难和认知问题。fxtas是晚发性病症，通常在50岁之后出现；症状随年龄恶化。这种病况同样是相比女性更加频繁且严重地影响男性，约3000名男性中有1名受影响。
fxtas的特性包括协调和平衡的问题(共济失调)和意向性震颤，所述意向性震颤是当受影响的个体尝试进行主动运动(例如伸向物体)时肢体的颤抖或抖动。最常见的是，首先发展意向性震颤，几年后发展共济失调。不是所有患有fxtas的人均具有两种特征。很多受影响的个体发展了其他的运动问题，例如帕金森症(parkinsonism)，其包括未运动时的震颤(静止性震颤)、肌强直(rigidity)以及经常缓慢运动(运动徐缓)。另外，受影响的个体可在下肢具有感觉减退(reducedsensation)、麻木或麻刺感、疼痛、或肌无力。一些患有fxtas的人经历了自主神经系统的问题，导致不能控制膀胱或肠。
fmr1基因具有前突变的女性具有原发性卵巢功能不全(脆性x相关的原发性卵巢功能不全)的较高风险，并且具有孕育患脆性x综合征儿童的较高风险。脆性x相关的原发性卵巢功能不全是不孕和早绝经的原因。
对于控制存在的脆性x综合征或fxtas的神经行为学方面尚无一致有效的干预。因此需要更有效的治疗来控制与这些遗传疾病有关的病况。
自闭症谱系障碍(asd)是一系列复杂的神经发育病症，其特征在于：社交损害；交流困难；以及受限的、重复的规癖性行为模式(刻板症)。自闭性病症，有时也称为自闭症谱系症或经典asd，是最严重的asd形式。其他病况包括被称为asperger综合征的轻度形式、儿童崩解症、不另外指明的广泛性发育病症(通常被称为pdd-nos)。虽然asd在特性和严重性上具有很大的不同，但其在所有的人种和社会经济群体中出现，并且影响每一年龄群。根据目前的数据，专家估计约每70名8岁儿童中有1名会患有asd。男性患asd可能性是女性的4-5倍。
asd的标志特征是受损的社交。很多患有asd的儿童表现出重复运动，例如摇摆和快速转动，或表现出自我虐待行为，例如咬或头部撞击。
尚未获得对asd的治愈。疗法和行为干预被设计为纠正特定的症状，并且可带来显著的改善。医生可开出用于治疗特定自闭症谱系症相关症状如焦虑、抑郁或强迫症的药物。抗精神病药物用于治疗严重的行为问题，并且可使用一种或多种抗惊厥药物来治疗癫痫。用于治疗患注意力缺失症的人的药物，可有效地用于帮助降低冲动和活动过度。考虑到与这些药物(尤其是抗精神病药物)有关的副作用，需要研发用于治疗asd及其相关症状的新疗法。
抑郁是精神疾病的普遍特征，无论其性质和来源。具有任何严重精神病症历史的人，与过去患有重度抑郁本身的人具有几乎同样高的机会发展重度抑郁。美国人口的约20％在给定的月中报导出至少一种抑郁症状，并且12％在一年内报导出两种或更多种抑郁症状。情绪病症代表这样一类精神病症，其中根本问题主要影响人的持续情绪状态(他们的情绪)。双相障碍更加罕见，以一般人口的1％的比例发生，但一些人认为诊断经常被忽视，因为狂躁的情绪高涨极少作为疾病报导。双相障碍是涉及一种或多种严重的狂躁和抑郁发作的疾病。有时人可能仅经历狂躁的症状。如果人仅经历悲伤的感觉，则其被认为是抑郁。在双相障碍发作期间，人的情绪可能从过度“高涨”和/或易怒转向悲伤和绝望，其间具有一段时间的正常情绪。
重度抑郁症是最常见的精神疾病之一。抑郁使人失去日常生活的快乐，可使其他医学病况复杂化，并且甚至可能足够严重以导致自杀。抑郁可在任何人、任何年龄，以及任何人种或种族群体中出现。通常使用药物、心理疗法、或两者的结合来治疗抑郁。用于重度抑郁症的药物落入多种药物类别，包括三环抗抑郁药、单胺氧化酶抑制剂、选择性血清素再摄取抑制剂，以及非典型抗抑郁药。然而，多数抗抑郁药需要至少4-6周来起效，并且很多抗抑郁药具有令人不快的副作用。此外，多至三分之二的抑郁患者经历了使用第一抗抑郁药的治疗失败，并且多至三分之一的抑郁患者不响应多种治疗尝试。考虑到与这些药物有关的令人不快的和可能严重的副作用，需要研发用于治疗情绪病症中的抑郁及其相关症状的新疗法。
雷特氏综合征(rtt)，最初被称为大脑萎缩性高氨血症，是罕见的大脑灰质的遗传性出生后神经病症，其影响女性和男性患者且女性患者居多。雷特氏综合征引起了负责认知、感觉、情绪、运动和自主功能的大脑功能问题。发生的最频繁的问题包括涉及学习、讲话、感觉、情绪、运动、呼吸、心脏功能、咀嚼、吞咽和消化的那些问题。其特征在于正常的早期生长和发育，然后发育减缓，失去有目的地使用手，与众不同的手部运动，减缓的脑和头部生长，行走问题，癫痫以及智力障碍。特别地，重复的规癖性手部运动，例如扭动(wringing)和/或反复地将手放入口中，是通常的症状。失用症—不能进行运动功能—可能是雷特氏综合征的最严重的致残特征，干扰着每一个身体运动，包括注视和讲话。患有雷特氏综合征的儿童在早期阶段经常表现出自闭样的行为(http://www.ninds.nih.gov/disorders/rett/detail_rett.htm)。
几乎所有情况的雷特氏综合征由甲基cpg结合蛋白2或mecp2基因的突变引起。mecp2基因含有被称为甲基胞嘧啶结合蛋白2(mecp2)的蛋白质合成指令，所述甲基胞嘧啶结合蛋白2是大脑发育所需要的，并且充当可增加基因表达或告诉其他基因何时关闭并停止产生其自身唯一蛋白的多种生化开关之一。因为mecp2基因未在患有雷特氏综合征的个体中适当地运作，产生了不足量的或结构异常形式的蛋白质，并且可引起其他基因异常地表达。然而，不是每个mecp2突变的人都患有雷特氏综合征。尽管雷特氏综合征是遗传病症，但在记录的情况中有少于1％是遗传的或是从一代传递至下一代的。多数情况是自发的，这意味着突变随机发生。估计雷特氏综合征在每10,000至15,000名生存的新生女性中影响1名，并且影响世界范围的所有人种和种族群体。
目前，尚无雷特氏综合征的治愈。对该病症的治疗是症状性的—主要针对症状的控制—并且是支持性的，需要多学科的方法。作为多巴胺激动剂的溴隐亭和卡比多巴-左旋多巴，已尝试作为对患雷特氏综合征的人的运动功能紊乱的治疗。然而，益处既不是实质性的也不是长期持续的。因此，需要研发用于治疗雷特氏综合征及其相关症状的新疗法。
舞蹈病-棘状红细胞增多症(chac)是影响身体很多部分的运动的神经学病症。舞蹈病是指患有这种病症的人产生的无意识震摇运动。患有这种病况的人也具有异常的星形红细胞(棘状红细胞增多症)。这种病症是涉及神经问题和异常红细胞的被称为神经棘状红细胞增多的病况组之一。临床特征为具有进行性神经症状的亨廷顿病样表型，所述症状包括运动障碍、精神病临床表现和认知障碍。舞蹈病也可能与亨廷顿病有关，并且本文提供的方法和组合物可用于治疗该疾病。
舞蹈病-棘状红细胞增多症的患病率和发病率是未知的，但估计世界范围内存在约1,000例病况。在成年早期发作，并且最初的表现经常是轻微的认知症状或精神病症状。在疾病的过程中，多数患者发展了特性表型，包括舞蹈病。多数患者发展了一般性舞蹈病和一定程度的帕金森症。记忆和执行功能的损害是频繁的。精神病临床表现是常见的，并且可表现为精神分裂症样精神病或强迫症(ocd)。舞蹈病-棘状红细胞增多症通常缓慢发展持续15-30年，但可发生推测由癫痫或自主参与引起的突然死亡。
舞蹈病-棘状红细胞增多症由编码舞蹈素(chorein)的vps13a基因中的各种突变引起。未观察到明显的基因型-表型相关性。这种病况以常染色体隐性方式遗传，这意味着每个细胞中基因的两份拷贝均具有突变。具有常染色体隐性病况的个体的双亲各自携带一份突变基因的拷贝，但他们通常不显示出病况的迹象和症状。目前无法获得治愈性或疾病改善的治疗，并且控制纯粹是症状性的。因此，需要研发用于治疗舞蹈病-棘状红细胞增多症及其相关症状的新疗法。
因此，在如本文公开的各种实施方案中，还提供了通过对有需要的个体施用药物有效量的本文所述的vmat2抑制剂或包含该vmat2抑制剂的药物组合物来治疗有需要的个体中的多动性运动障碍的方法。在一个实施方案中，多动性运动障碍是迟发性运动障碍、图雷特氏综合征、亨廷顿病、与亨廷顿病相关的舞蹈病，或抽搐症。在其他实施方案中，多动性运动障碍是共济失调、舞蹈病、肌张力障碍、偏侧面肌痉挛、肌阵挛、不宁腿综合征或震颤。
在其它实施方案中，还提供了通过对有需要的个体施用药物有效量的本文所述的vmat2抑制剂或包含该vmat2抑制剂的药物组合物来治疗有需要的个体中的神经学和/或精神病学疾病和病症的方法。
在一个实施方案中，神经学和/或精神病学疾病或病症是多动性运动障碍、心境障碍、双相障碍、精神分裂症、分裂情感障碍、心境障碍中的躁狂症、心境障碍中的抑郁症、难治性强迫症、与莱希-尼亨综合征有关的神经功能障碍、与阿尔茨海默氏病相关的激动、脆性x综合征或脆性x相关的震颤-共济失调综合征、自闭症谱系障碍、雷特氏综合征或舞蹈病-棘状红细胞增多症。
在一些实施方案中，神经学或精神病学疾病或病症是多动性运动障碍。
在一些实施方案中，多动性运动障碍是迟发性运动障碍。
在一些实施方案中，多动性运动障碍是图雷特综合征。
在一些实施方案中，多动性运动障碍是亨廷顿病。
在一些实施方案中，多动性运动障碍是抽搐症。
在一些实施方案中，多动性运动障碍是亨廷顿病相关的舞蹈病。
在一些实施方案中，多动性运动障碍是共济失调、舞蹈病、肌张力障碍、偏侧面肌痉挛、亨廷顿病、肌阵挛、不宁腿综合征或震颤。
在一些实施方案中，神经学或精神病学疾病或病症是与自闭症谱系障碍(asd)有关的受限的并重复的行为。
在一些实施方案中，神经学或精神病学疾病或病症是患有强迫症(ocd)的部分响应者和无响应者(或完全难治型)的强迫性思维和强制性行为。在一些实施方案中，神经学或精神病学疾病或病症是患有强迫症(ocd)的部分响应者和无响应者(或完全难治型)的强迫性思维和强制性行为，并且本文所述化合物作为辅助疗法给药。在一些实施方案中，本文所述的化合物作为辅助疗法给药，而主要疗法是使用抗抑郁药进行治疗。
在一些实施方案中，神经学或精神病学疾病或病症是双相i型障碍。在一些实施方案中，本文所述的化合物作为单一疗法给药以治疗双相i型障碍。在一些实施方案中，本文所述的化合物作为维持疗法给药以治疗双相i型障碍。在一些实施方案中，本文所述的化合物作为单一疗法维持疗法给药以治疗双相i型障碍。
在另一实施方案中，本文所述的vmat2抑制剂可在哺乳动物体内水解成可抑制人单胺转运体同种型2的化合物。因此，这些vmat2抑制剂可以在改变哺乳动物中代谢物的体内性质(诸如最大作用浓度或作用持续时间)方面具有另外的实用性。
在另一实施方案中，公开了包含一种或多种单胺再摄取抑制剂(即，vmat2抑制剂)的药物组合物。为了给药的目的，本文所述的vmat2抑制剂可以被配制成药物组合物。药物组合物包含一种或多种本文所述的单胺再摄取抑制剂和一种或多种药学上可接受的赋形剂和/或稀释剂。vmat2抑制剂以有效治疗特定病症的量存在于组合物中，即足以减少中枢神经系统中单胺供应并且优选对患者具有可接受的毒性的量。合适的浓度和剂量可由本领域技术人员容易地确定。
可以使用本文所述和本领域中的方法来确定本文所述的任何vmat2抑制剂的表征。例如，可以使用自主活动(lma)测定法确定多巴胺耗竭。另一种体内动物模型包括条件性回避反应(car)测试，该测试已显示出是用于评估化合物的抗精神病活性的有效且可靠的临床前模型。
还提供了用于生产用于治疗神经学或精神病学疾病或病症的药物的本文所述的vmat2抑制剂。
还提供了用于通过疗法治疗人或动物身体的方法中的如本文所述的vmat2抑制剂或如本文所述的药物组合物。
还提供了如本文所述的vmat2抑制剂或如本文所述的药物组合物，其用于通过疗法治疗人或动物身体中神经学或精神病学疾病或病症的方法中。
本公开还提供了包含一种或多种本文所述的化合物以及一种或多种药学上可接受的赋形剂和/或稀释剂的药物组合物，其用于治疗神经学病症和疾病如多动性运动障碍的方法中。
药学上可接受的赋形剂和/或稀释剂是本领域技术人员熟悉的。对于配制为液体溶液的组合物，可接受的载体和/或稀释剂包括盐水和无菌水，并且可以任选地包括抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和其它常见的添加剂。还可将组合物配制为除vmat2抑制剂之外还包含稀释剂、分散剂和表面活性剂、粘结剂和润滑剂的丸剂、胶囊剂、颗粒剂或片剂。本领域技术人员还可以以合适的方式并根据公认的实践诸如在remington'spharmaceuticalsciences,gennaro,ed.,mackpublishingco.,easton,pa1990中公开的那些来配制vmat2抑制剂。
本文提供的药物组合物可以被配制成速释剂型或调节释放剂型，包括延迟释放、持续释放、脉冲释放、受控释放、靶向释放和程序化释放形式。药物组合物也可以被配制成悬浮液、固体、半固体或触变液体，以作为植入的储库给药。
本文提供的药物组合物可以以单位剂型或多剂量形式提供。如本文使用的，单位剂型是指如本领域已知适于向人和动物对象施用并单独包装的物理离散单位。各个单位剂量含有预定量的足以产生期望治疗效果的活性成分并结合所需的药物载体或赋形剂。单位剂型的实例包括安瓿、注射器以及单独包装的片剂和胶囊。单位剂型可以其一部分或其倍数施用。多剂量形式是多个包装于单一容器的多个相同的单位剂型，其以分离的单位剂型施用。多剂量形式的实例包括小瓶、片剂或胶囊的瓶，或品脱或加仑的瓶。
本文提供的药物组合物可以单独给药，或与本文提供的一种或多种其他化合物，一种或多种其他活性成分联合给药。本文提供的药物组合物可以被配制成各种剂型用于口服、肠胃外和局部给药。药物组合物也可被配制为调节释放剂型，包括延迟释放、延长释放、长期释放、持续释放、脉冲释放、受控释放、加速释放和快速释放、靶向释放、程序化释放以及胃滞留的剂型。这些剂型可根据本领域技术人员已知的常规方法和技术来制备。本文提供的药物组合物可以一次给药或以一定时间间隔多次给药。应当理解，精确的剂量和治疗持续时间可以随所治疗的患者的年龄、体重和状况而变化，并且可以使用已知的测试方案或通过从体内或体外测试或诊断数据外推而凭经验确定。还应理解，对于任何特定的个体，应根据个体需要和施用制剂或指导制剂给药的人的专业判断，随时调整具体的剂量方案。
口服给药
本文提供的药物组合物可用固体、半固体或液体剂型提供以用于口服施用。如本文使用的，口服施用也包括口含、舌部和舌下施用。适合的口服剂型包括但不限于：片剂、胶囊、丸剂、锭剂、糖锭剂(lozenges)、软锭剂(pastilles)、扁囊剂、微丸(pellets)、含药物咀嚼胶、颗粒、散装粉末、泡腾的或非泡腾的粉末或颗粒、溶液、乳液、悬浮液、溶液、薄片、喷洒剂、酏剂和糖浆剂。除了活性成分之外，药物组合物可含有一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂，包括但不限于:粘合剂、填充剂、稀释剂、崩解剂、润湿剂、润滑剂、助流剂、着色剂、染料迁移抑制剂、甜味剂和矫味剂。
粘合剂或制粒剂赋予片剂粘结性，以确保片剂在压制后保持完整。适合的粘合剂或制粒剂包括但不限于：淀粉如玉米淀粉、马铃薯淀粉和预胶化淀粉(例如，starch1500)；明胶；糖如蔗糖、葡萄糖、右旋糖、糖蜜以及乳糖；天然和合成的胶如阿拉伯胶、海藻酸、海藻酸盐、爱尔兰苔藓(irishmoss)的提取物、panwar胶、印度树胶(ghattigum)、车前子壳的粘液、羧甲基纤维素、甲基纤维素、聚乙烯基吡咯烷酮(pvp)、veegum、落叶松阿拉伯半乳聚糖、粉末状黄芪胶以及瓜尔胶；纤维素如乙基纤维素、乙酸纤维素、羧甲基纤维素钙、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟乙基纤维素(hec)、羟丙基纤维素(hpc)、羟丙基甲基纤维素(hpmc)；微晶纤维素如avicel-ph-101、avicel-ph-103、avicelrc-581、avicel-ph-105(fmccorp.,marcushook,pa)；以及其混合物。适合的填充剂包括但不限于：滑石、碳酸钙、微晶纤维素、粉末状纤维素、葡萄糖结合剂(dextrates)、高岭土、甘露醇、硅酸、山梨醇、淀粉、预胶化淀粉以及它们的混合物。在本文提供的药物组合物中，粘合剂或填充剂可存在约50％至约99％重量。
适合的稀释剂包括但不限于：磷酸二钙、硫酸钙、乳糖、山梨醇、蔗糖、肌醇、纤维素、高岭土、甘露醇、氯化钠、干燥淀粉以及粉末状糖。某些稀释剂如甘露醇、乳糖、山梨醇、蔗糖和肌醇，当以足够的量存在时，可赋予一些压制片剂允许通过咀嚼在口中崩解的特性。此类压制片剂可用作可咀嚼片剂。
适合的崩解剂包括但不限于：琼脂；膨润土；纤维素如甲基纤维素和羧甲基纤维素；木质产品；天然海绵；阳离子交换树脂；海藻酸；胶如瓜尔胶和veegumhv；柑桔浆；交联纤维素如交联羧甲纤维素；交联聚合物如交聚维酮；交联淀粉；碳酸钙；微晶纤维素如羟基乙酸淀粉钠；波拉克林钾；淀粉如玉米淀粉、马铃薯淀粉、木薯淀粉以及预胶化淀粉；黏土；藻胶；以及它们的混合物。本文提供的药物组合物中的崩解剂的量根据制剂的类型而变化，并且是本领域普通技术人员容易辨别的。本文提供的药物组合物可含有约0.5％至约15％重量、或约1％至约5％重量的崩解剂。
适合的润滑剂包括但不限于：硬脂酸钙；硬脂酸镁；矿物油；轻质矿物油；甘油；山梨醇；甘露醇；二醇如甘油山嵛酸酯和聚乙二醇(peg)；硬脂酸；硫酸月桂酸钠；滑石；氢化植物油，包括花生油、棉籽油、向日葵油、芝麻油、橄榄油、玉米油以及豆油；硬脂酸锌；油酸乙酯；月桂酸乙酯；琼脂；淀粉；石松子；二氧化硅或硅胶如
应理解，很多载体和赋形剂可提供多种功能，即使在同一制剂内。本文提供的药物组合物可作为压制片剂、片剂磨碎物、可咀嚼糖锭剂、快速溶解片剂、多重压制片剂、或肠溶包衣片剂、包糖或包膜片剂来提供。肠溶包衣片剂是使用抵抗胃酸作用但在肠内溶解或崩解的物质来包衣的压制片剂，由此在胃的酸性环境下保护活性成分。肠溶包衣包括但不限于：脂肪酸、脂肪、水杨酸苯酯、蜡、虫胶、氨化虫胶以及邻苯二甲酸乙酸纤维素。包糖片剂是被糖包衣包围的压制片剂，所述糖包衣可有利于掩盖讨厌的味道或气味，并且保护片剂免于氧化。包膜片剂是使用水溶性材料的薄层或薄膜覆盖的压制片剂。膜包衣包括但不限于：羟乙基纤维素、羧甲基纤维素钠、聚乙二醇4000以及邻苯二甲酸乙酸纤维素。膜包衣赋予了与糖包衣相同的一般特性。多重压制片剂是通过多于一次的压制循环所制备的压制片剂，其包括层状片剂以及压制包衣或干包衣的片剂。
可由粉末状、晶体或颗粒形式的活性成分单独地或结合一种或多种本文描述的载体或赋形剂来制备片剂剂型，所述载体或赋形剂包括：粘合剂、崩解剂、受控释放聚合物、润滑剂、稀释剂、和/或着色剂。增味剂和甜味剂在可咀嚼的片剂和糖锭剂的制剂中是特别有用的。
本文提供的药物组合物可作为软胶囊或硬胶囊提供，所述软胶囊或硬胶囊可由明胶、甲基纤维素、淀粉或草酸钙制成。硬明胶胶囊，也被称为干填充胶囊(dfc)，由两个部分组成，一个部分包裹另一个部分，由此完全包封活性成分。软弹性胶囊(sec)是软的球状壳如明胶壳，其通过添加甘油、山梨醇或类似的多元醇来增塑。软明胶壳可含有防腐剂以防止微生物生长。适合的防腐剂为本文描述的那些防腐剂，包括对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯，以及山梨酸。本文提供的液体、半固体和固体剂型可包封于胶囊中。适合的液体和半固体剂型包括在碳酸丙烯酯、植物油或甘油三酯中的溶液和悬浮液。胶囊也可按本领域技术人员已知的进行包衣，以便调节或维持活性成分的溶解。
本文提供的药物组合物可用液体和半固体剂型提供，包括乳液、溶液、悬浮液、酏剂和糖浆剂。乳液是两相系统，其中一种液体以小珠的形式分散于另一种液体中，其可为水包油或油包水的。乳液可包括药学上可接受的非水性液体或溶剂、乳化剂和防腐剂。悬浮液可包括药学上可接受的悬浮剂和防腐剂。水性醇溶液可包括药学上可接受的缩醛，如低级烃基醛的二(低级烃基)缩醛，例如，乙醛二乙基缩醛；以及具有一个或多个羟基的水溶性溶剂，如丙二醇和乙醇。酏剂是透明、变甜且水醇性的溶液。糖浆剂是浓缩的糖(例如，蔗糖)的水溶液，并且也可含有防腐剂。对于液体剂型，例如在聚乙二醇中的溶液，可用足够量的药学上可接受的液体载体(例如，水)稀释，以便于测量用于施用。
其他有用的液体和半固体剂型包括但不限于，含有本文提供的活性成分以及二烃基化的单亚烃基二醇或聚亚烃基二醇的那些液体和半固体剂型，所述二烃基化的单亚烃基二醇或聚亚烃基二醇包括：1,2-二甲氧基甲烷、二甘醇二甲醚、三甘醇二甲醚、四甘醇二甲醚、聚乙二醇-350-二甲醚、聚乙二醇-550-二甲醚、聚乙二醇-750-二甲醚，其中350、550和750是指聚乙二醇的近似平均分子量。这些制剂还可包含一种或多种抗氧化剂，如丁基羟基甲苯(bht)、丁基羟基苯甲醚(bha)、没食子酸丙酯、维生素e、对苯二酚、羟基香豆素、乙醇胺、卵磷脂、脑磷脂、抗坏血酸、苹果酸、山梨醇、磷酸、亚硫酸氢盐、焦亚硫酸钠、硫代二丙酸及其酯，以及二硫代氨基甲酸酯。
用于口服施用的本文提供的药物组合物，也可用脂质体、胶束、微球或纳米系统的形式提供。
本文提供的药物组合物可作为待于液体剂型中重组的非泡腾或泡腾的颗粒和粉末来提供。用于非泡腾颗粒或粉末的药学上可接受的载体和赋形剂，可包括稀释剂、甜味剂和润湿剂。用于泡腾颗粒或粉末的药学上可接受的载体和赋形剂，可包括有机酸和二氧化碳源。
着色剂和增味剂可用于所有上述剂型。本文提供的药物组合物可配制为速释或调节释放的剂型，包括延迟释放、持续释放、脉冲释放、受控释放、靶向释放和程序化释放的形式。
本文提供的药物组合物与不损害期望的治疗作用的其他活性成分或与增补期望的作用的物质共同配制，所述增补期望的作用的物质如抗酸剂、质子泵抑制剂和h2-受体拮抗剂。
本文提供的药物组合物可通过注射、输注或植入肠胃外来施用，以便局部施用或全身施用。如本文使用的，肠胃外施用包括：静脉内、动脉内、腹膜内、鞘内、心室内、尿道内、胸骨内、颅内、肌内、滑膜内和皮下的施用。
肠胃外给药
本文提供的药物组合物可以任何适于肠胃外施用的剂型来配制，所述剂型包括溶液、悬浮液、乳液、胶束、脂质体、微球、纳米系统，以及适于在注射前配成溶液或悬浮液液体的固体形式。此类剂型可根据药物科学领域技术人员已知的常规方法来制备。
用于肠胃外施用的药物组合物可包括一种或多种药学上可接受的载体和赋形剂，包括但不限于：水性媒介物、水溶性媒介物、非水性媒介物、对抗微生物生长的抗微生物剂或防腐剂、稳定剂、溶解度增强剂、等渗剂、缓冲剂、抗氧化剂、局部麻醉剂、助悬剂和分散剂、润湿剂或乳化剂、络合剂、掩蔽剂或螯合剂、冷冻保护剂、冻干保护剂、增稠剂、ph调节剂以及惰性气体。
适合的水性媒介物包括但不限于：水、盐水、生理盐水或磷酸盐缓冲盐水(pbs)、氯化钠注射液、林格氏注射液、等渗右旋糖注射液、无菌水注射液、右旋糖和乳酸林格氏注射液。非水性媒介物包括但不限于：植物原料的固定油、蓖麻油、玉米油、棉籽油、橄榄油、花生油、薄荷油、红花油、芝麻油、豆油、氢化植物油、氢化豆油、和椰子油的中链甘油三酯以及棕榈籽油。水溶性媒介物包括但不限于：乙醇、1,3-丁二醇、液体聚乙二醇(例如，聚乙二醇300和聚乙二醇400)、丙二醇、甘油、n-甲基-2-吡咯烷酮、二甲基乙酰胺以及二甲基亚砜。
适合的抗微生物剂或防腐剂包括但不限于：酚、甲酚、水银剂、苄醇、氯丁醇、对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯、硫柳汞、苯扎氯铵、苄索氯铵、对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯以及山梨酸。适合的等渗剂包括但不限于：氯化钠、甘油和右旋糖。适合的缓冲剂包括但不限于：磷酸盐和柠檬酸盐。适合的抗氧化剂是本文描述的那些抗氧化剂，包括亚硫酸氢盐和焦亚硫酸钠。适合局部麻醉剂包括但不限于普鲁卡因盐酸盐。适合的悬浮剂和分散剂是本文描述的那些悬浮剂和分散剂，包括羧甲基纤维素钠、羟丙基甲基纤维素以及聚乙烯基吡咯烷酮。适合的乳化剂包括本文描述的那些乳化剂，包括聚氧乙烯山梨醇酐单月桂酸酯、聚氧乙烯山梨醇酐单油酸酯80以及油酸三乙醇胺。适合的掩蔽剂或螯合剂包括但不限于edta。适合的ph调节剂包括但不限于：氢氧化钠、盐酸、柠檬酸和乳酸。适合的络合剂包括但不限于环糊精，包括α-环糊精、β-环糊精、羟丙基-β-环糊精、磺丁基醚-β-环糊精以及磺丁基醚7-β-环糊精(
本文提供的药物组合物可配制为单剂量施用或多剂量施用。单剂量制剂包装在安瓿、小瓶或注射器中。多剂量肠胃外制剂必须含有细菌抑制或真菌抑制浓度的抗微生物剂。所有肠胃外制剂必须是无菌的，如本领域已知和实践的。
在某些实施方案中，药物组合物作为即用型无菌溶液提供。在某些实施方案中，药物组合物作为无菌干燥的可溶产品提供，包括在使用前待与媒介物重组的冻干粉末和皮下注射片剂。在某些实施方案中，药物组合物作为即用型无菌悬浮液提供。在某些实施方案中，药物组合物作为在使用前待与媒介物重组的无菌干燥的不可溶产品来提供。在某些实施方案中，药物组合物作为即用型无菌乳液提供。
本文提供的药物组合物可配制为速释或调节释放的剂型，包括延迟释放、持续释放、脉冲释放、受控释放、靶向释放和程序化释放的形式。
药物组合物可配制为悬浮液、固体、半固体、或触变性液体，以便作为植入储库施用。在某些实施方案中，本文提供的药物组合物散布于固体内部基质中，所述固体内部基质被在体液中不可溶但允许药物组合物中的活性成分扩散通过的外部聚合物膜包围。
适合的内部基质包括：聚甲基丙烯酸甲酯、聚甲基丙烯酸丁酯、增塑或未增塑的聚氯乙烯、增塑的尼龙、增塑的聚对苯二甲酸乙二醇酯、天然橡胶、聚异戊二烯、聚异丁烯、聚丁二烯、聚乙烯、乙烯-乙酸乙烯酯共聚物、硅酮橡胶、聚二甲基硅氧烷、硅酮碳酸酯共聚物、亲水聚合物如丙烯酸和甲基丙烯酸的酯的水凝胶、胶原、交联聚乙烯醇，以及交联的部分水解的聚乙酸乙烯酯。
适合的外部聚合物膜包括：聚乙烯、聚丙烯、乙烯/丙烯共聚物、乙烯/丙烯酸乙酯共聚物、乙烯/乙酸乙烯酯共聚物、硅酮橡胶、聚二甲基硅氧烷、氯丁橡胶、氯化聚乙烯、聚氯乙烯、与乙酸乙烯酯的氯乙烯共聚物、偏二氯乙烯、乙烯和丙烯、离聚物聚对苯二甲酸乙二酯、丁基橡胶、表氯醇橡胶、乙烯/乙烯醇共聚物、乙烯/乙酸乙烯酯/乙烯醇三元聚合物，以及乙烯/乙烯基氧基乙醇共聚物。
局部施用
本文提供的药物组合物可局部施用至皮肤、孔穴或粘膜。如本文使用的，局部施用包括：真皮(真皮内)、结膜、角膜内、眼内、经眼、经耳、经皮、经鼻、阴道、尿道、呼吸道和直肠施用。
本文提供的药物组合物可配制为任何适于局部施用以得到局部或全身效果的剂型，包括乳液、溶液、悬浮液、乳膏、凝胶、水凝胶、软膏、扑粉、敷料、酏剂、洗液、悬浮液、酊剂、糊剂、泡沫、膜、气溶胶、灌水、喷雾、栓剂、绷带、真皮贴片。本文提供的药物组合物的局部制剂，也可包含脂质体、胶束、微球、纳米系统和它们的混合物。
适用于本文提供的局部制剂的药学上可接受的载体和赋形剂，包括但不限于：水性媒介物、水溶性媒介物、非水性媒介物、对抗微生物生长的抗微生物剂或防腐剂、稳定剂、溶解度增强剂、等渗剂、缓冲剂、抗氧化剂、局部麻醉剂、悬浮剂和分散剂、润湿剂或乳化剂、络合剂、掩蔽剂或螯合剂、渗透增强剂、冷冻保护剂、冻干保护剂、增稠剂以及惰性气体。
药物组合物也可通过以下方式局部施用：电穿孔、离子导入法、超声透入疗法、超声促渗和微针或无针注射如powderjecttm(chironcorp.,emeryville,ca)以及biojecttm(biojectmedicaltechnologiesinc.,tualatin,or)。
本文提供的药物组合物可用软膏、乳膏和凝胶的形式提供。适合的软膏媒介物包括油质或碳水化合物基质，包括如猪油、苯甲酸化猪油、橄榄油、棉籽油以及其他油、白凡士林；可乳化基质或吸收基质，如亲水凡士林、硫酸羟基硬脂精以及无水羊毛脂；可除水基质如亲水软膏；水溶性软膏基质，包括不同分子量的聚乙二醇；乳液基质，油包水(w/o)乳液或水包油(o/w)乳液，包括十六醇、甘油单硬脂酸酯、羊毛脂以及硬脂酸。这些媒介物是软化剂但通常需要加入抗氧化剂和防腐剂。
适合的乳膏基质可为水包油或油包水的。乳膏媒介物可为可水洗的，并且含有油相、乳化剂和水相。油相也称为“内部”相，其通常由凡士林和脂肪醇(如十六醇或硬脂醇)组成。水相通常(但不一定)在体积上超过油相，并且通常含有湿润剂。乳膏制剂中的乳化剂可为非离子的、阴离子的、阳离子的或两性的表面活性剂。
凝胶是半固体的悬浮液型系统。单相凝胶含有充分均匀地在液体载体中分布的有机大分子。适合的胶凝剂包括：交联丙烯酸聚合物，如卡波姆、羧基聚亚烃基、
本文提供的药物组合物可采用栓剂、子宫帽、探条、膏状药或泥罨剂、糊剂、粉末、敷料、乳膏、膏药、避孕药、软膏、溶液、乳液、悬浮液、棉球、凝胶、泡沫、喷雾、或灌肠剂的形式，经直肠、尿道、阴道或阴道周围施用。这些剂型可使用常规方法来制造。
直肠、尿道和阴道栓剂是用于插入身体孔穴的固体物体，其在普通温度下为固体，但在体温下熔化或软化以便在孔穴内侧释放活性成分。用于直肠和阴道栓剂的药学上可接受的载体，包括媒介物如硬化剂，当与本文提供的药物组合物配制时，其产生了在体温附近的熔点；以及本文描述的抗氧化剂，包括亚硫酸氢盐和焦亚硫酸钠。适合的媒介物包括但不限于：可可脂(可可油)、甘油-明胶、碳蜡(聚乙二醇)、鲸蜡、石蜡、白蜡和黄蜡、以及脂肪酸的甘油单酯、甘油二酯和甘油三酯适当的混合物，水凝胶如聚乙烯醇、甲基丙烯酸羟乙酯、聚丙烯酸；甘油化明胶。可使用各种媒介物的组合。可通过压制方法或模塑来制备直肠和阴道栓剂。直肠和阴道栓剂的典型重量为约2-3g。
本文提供的药物组合物可用溶液、悬浮液、软膏、乳液、凝胶形成溶液、用于溶液的粉末、凝胶、眼插入物以及植入物的形式经眼施用。
本文提供的药物组合物可通过吸入至呼吸道鼻内施用。药物组合物可用气溶胶或溶液的形式提供，从而单独地或结合适合的推进剂(如1,1,1,2-四氟乙烷或1,1,1,2,3,3,3-七氟丙烷)，使用加压容器、泵、喷雾、喷雾器(如使用电流体动力学产生细雾的喷雾器)或雾化器进行递送。药物组合物也可作为用于吹入的干燥粉末单独地或结合诸如乳糖或磷脂的惰性载体来提供；以及作为鼻滴液提供。对于鼻内施用，粉末可包含生物粘附剂，包括壳聚糖或环糊精。
用于加压容器、泵、喷雾、喷雾器或雾化器的溶液或悬浮液，可配制为含有乙醇、乙醇水溶液，或用于分散、增溶或扩展释放本文提供的活性成分的适合的替代性试剂，作为溶剂的推进剂；和/或表面活性剂，如去水山梨糖醇三油酸酯、油酸或低聚乳酸。
本文提供的药物组合物可微粒化至适于吸入递送的尺寸，例如50微米或更小，或10微米或更小。此类尺寸的颗粒可使用本领域技术人员已知的粉碎方法来制备，如螺旋喷射研磨、流化床喷射研磨、形成纳米颗粒的超临界流体加工，高压均质化或喷雾干燥。
用于吸入器或吹入器的胶囊、泡罩和盒，可配制为含有以下物质的粉末混合物：本文提供的药物组合物；适合的粉末基质，如乳糖或淀粉；以及性能改性剂，例如l-亮氨酸、甘露醇或硬脂酸镁。乳糖可为无水的，或是一水合物的形式。其他的适合的赋形剂包括：右旋糖酐、葡萄糖、麦芽糖、山梨醇、木糖醇、果糖、蔗糖以及海藻糖。用于吸入/鼻内施用的本文提供的药物组合物，还可包含适合的增味剂如薄荷醇和左薄荷醇，或甜味剂如糖精或糖精钠。
用于局部施用的本文提供的药物组合物，可配制为速释或调节释放，包括延迟释放、持续释放、脉冲释放、受控释放、靶向释放以及程序化释放。
调节释放
本文提供的药物组合物可配制为调节释放的剂型。如本文使用的，术语“调节释放”是指其中活性成分释放的速率或位置不同于使用相同途径施用的速释剂型的剂型。调节释放剂型包括：延迟释放、延长释放、长期释放、持续释放、搏动或脉冲释放、受控释放、加速释放和快速释放、靶向释放、程序化释放以及胃滞留剂型。
调节释放剂型的药物组合物可使用多种调节释放装置和本领域技术人员已知的方法来制备，包括但不限于：基质受控释放装置、渗透性受控释放装置、多微粒受控释放装置、离子交换树脂、肠溶包衣、多层包衣、微球、脂质体以及它们的组合。活性成分的释放速率也可通过改变活性成分的粒径和多态性来调整。
可以使用本领域技术人员已知的基质控释装置来制备调节释放剂型的本文提供的药物组合物。
在某些实施方案中，调节释放剂型的本文提供的药物组合物，使用易蚀基质装置来配制，所述装置是遇水膨胀的、易蚀的、或可溶聚合物包括合成聚合物，以及天然存在的聚合物和衍生物如多糖和蛋白质。
适用于形成易蚀基质的材料，包括但不限于：几丁质、壳聚糖、右旋糖酐和支链淀粉；琼脂胶、阿拉伯胶、刺梧桐胶、刺槐豆胶、黄芪胶、角叉菜胶、印度树胶、瓜尔胶、黄原胶以及硬葡聚糖；淀粉如糊精和麦芽糖糊精；亲水胶体如果胶；磷脂如卵磷脂；海藻酸酯；海藻酸丙二醇酯；明胶；胶原；以及纤维素类，如乙基纤维素(ec)、甲基乙基纤维素(mec)、羧甲基纤维素(cmc)、cmec、羟乙基纤维素(hec)、羟丙基纤维素(hpc)、乙酸纤维素(ca)、丙酸纤维素(cp)、丁酸纤维素(cb)、乙酸丁酸纤维素(cab)、cap、cat、羟丙基甲基纤维素(hpmc)、hpmcp、hpmcas、羟丙基甲基纤维素乙酸偏苯三酸酯(hpmcat)，以及乙基羟基乙基纤维素(ehec)；聚乙烯基吡咯烷酮；聚乙烯醇；聚乙酸乙烯酯；甘油脂肪酸酯；聚丙烯酰胺；聚丙烯酸；乙基丙烯酸或甲基丙烯酸的共聚物(
在某些实施方案中，药物组合物使用不易蚀基质装置来配制。将活性成分溶解或散布于惰性基质，并且主要通过在施用时扩散通过惰性基质来释放。适于用作不易蚀基质装置的材料，包括但不限于：不可溶塑料，如聚乙烯、聚丙烯、聚异戊二烯、聚异丁烯、聚丁二烯、聚甲基丙烯酸甲酯、聚甲基丙烯酸丁酯、氯化聚乙烯、聚氯乙烯、丙烯酸甲酯-甲基丙烯酸甲酯共聚物、乙烯-乙酸乙烯酯共聚物、乙烯/丙烯共聚物、乙烯/丙烯酸乙酯共聚物、与乙酸乙烯酯的氯乙烯共聚物、偏二氯乙烯、乙烯和丙烯、离聚物聚对苯二甲酸乙二酯、丁基橡胶、表氯醇橡胶、乙烯/乙烯醇共聚物、乙烯/乙酸乙烯酯/乙烯醇三元聚合物、以及乙烯/乙烯基氧基乙醇共聚物、聚氯乙烯、增塑的尼龙、增塑的聚对苯二甲酸乙二醇酯、天然橡胶、硅酮橡胶、聚二甲基硅氧烷、硅酮碳酸酯共聚物，以及；亲水聚合物，如乙基纤维素、乙酸纤维素、交聚维酮、以及部分交联的水解的聚乙酸乙烯酯；以及脂肪化合物，如巴西棕榈蜡、微晶蜡和甘油三酯。
在基质受控释放系统中，可通过例如，使用的聚合物类型、聚合物粘度、聚合物和/或活性成分的粒径、活性成分与聚合物的比例以及组合物中其他的赋形剂来控制所期望的释放动力学。
调节释放剂型的本文提供的药物组合物可通过本领域技术人员已知的方法来制备，包括直接压片、干法或湿法制粒后进行压片，熔融制粒后进行压片。
可使用渗透性受控释放装置来配制调节释放剂型的本文提供的药物组合物，所述装置包括单室系统、双室系统、不对称膜技术(amt)，以及挤压核芯系统(ecs)。通常，此类装置具有至少两个组件：(a)含有活性成分的核芯；以及(b)具有至少一个递送口的半透膜，其包封所述核芯。半透膜控制水从使用的水性环境流入所述核芯，以便使药物通过挤出所述递送口来释放。
除了活性成分之外，渗透装置的核芯任选地包括渗透剂，其产生驱动力用于将水从使用的环境传输至装置的核芯中。一类渗透剂是水可溶胀性亲水聚合物，其也被称为“渗透聚合物”和“水凝胶”，包括但不限于：亲水的乙烯基聚合物和丙烯酸聚合物、多糖如海藻酸钙、聚环氧乙烷(peo)、聚乙二醇(peg)、聚丙二醇(ppg)、聚(2-甲基丙烯酸羟乙酯)、聚(丙烯酸)、聚(甲基丙烯酸)、聚乙烯基吡咯烷酮(pvp)、交联pvp、聚乙烯醇(pva)、pva/pvp共聚物、pva/pvp与疏水单体(如甲基丙烯酸甲酯和乙酸乙烯酯)的共聚物、含有大peo嵌段的亲水性聚氨酯、交联羧甲纤维素钠、角叉菜胶、羟乙基纤维素(hec)、羟丙基纤维素(hpc)、羟丙基甲基纤维素(hpmc)、羧甲基纤维素(cmc)和羧乙基纤维素(cec)、海藻酸钠、聚卡波非、明胶、黄原胶以及羟基乙酸淀粉钠。
另一类渗透剂是能够吸入水来影响跨周围包衣屏障的渗透压梯度的渗透原(osmogens)。适合的渗透原包括但不限于：无机盐，如硫酸镁、氯化镁、氯化钙、氯化钠、氯化锂、硫酸钾、磷酸钾、碳酸钠、亚硫酸钠、硫酸锂、氯化钾以及硫酸钠；糖，如右旋糖、果糖、葡萄糖、肌醇、乳糖、麦芽糖、甘露醇、棉子糖、山梨醇、蔗糖、海藻糖以及木糖醇；有机酸，如抗坏血酸、苯甲酸、富马酸、柠檬酸、马来酸、癸二酸、山梨酸、己二酸、依地酸、谷氨酸、对甲苯磺酸、琥珀酸以及酒石酸；尿素；以及它们的混合物。
不同溶解速率的渗透剂可用于影响活性成分最初从剂型递送的快慢。例如，无定形糖如mannogemeez(spipharma,lewes,de)，可用于提供在最初两个小时的较快递送，以迅速地产生期望的治疗效果，并且逐步且连续地释放剩余的量，以保持期望的治疗水平或治疗效果持续很长的时间。在这种情况下，活性成分以这样的速率释放以便替代代谢和排泄的活性成分的量。
所述核芯还可包括很多种本文描述的其他赋形剂和载体，以增强剂型的性能或提高稳定性或促进加工。
适用于形成半透膜的材料包括各种等级的丙烯酸类、乙烯类、醚、聚酰胺、聚酯和纤维素衍生物，它们在生理学相关的ph下是水可渗透的和不溶于水的或者易于通过化学改变(例如交联)而变得不溶于水的纤维素。适用于形成包衣的适合的聚合物实例，包括增塑的、未增塑的和增强的乙酸纤维素(ca)、二乙酸纤维素、三乙酸纤维素、ca丙酸酯、硝酸纤维素、乙酸丁酸纤维素(cab)、ca氨基甲酸乙酯、cap、ca氨基甲酸甲酯、ca琥珀酸酯、乙酸偏苯三酸纤维素(cat)、ca二甲基氨基乙酸酯、ca碳酸乙酯、ca氯乙酸酯、ca草酸乙酯、ca磺酸甲酯、ca磺酸丁酯、ca对甲苯磺酸酯、琼脂乙酸酯、直链淀粉三乙酸酯、β葡聚糖乙酸酯、β葡聚糖三乙酸酯、乙醛二甲基乙酸酯、刺槐豆胶的三乙酸酯、羟基化的乙烯-乙酸乙烯酯、ec、peg、ppg、peg/ppg共聚物、pvp、hec、hpc、cmc、cmec、hpmc、hpmcp、hpmcas、hpmcat、聚(丙烯酸)和聚(丙烯酸酯)以及聚(甲基丙烯酸)和聚(甲基丙烯酸酯)以及其共聚物、淀粉、右旋糖酐、糊精、壳聚糖、胶原、明胶、聚亚烃基、聚醚、聚砜、聚醚砜、聚苯乙烯、聚卤乙烯、聚乙烯基酯和聚乙烯基醚、天然蜡以及合成蜡。
半透膜还可为疏水性微孔膜，其中所述孔基本上填充有气体，并且不被水性介质润湿但对水是可渗透的，如美国专利第5,798,119号所公开。此类疏水的但可渗透水的膜通常由疏水性聚合物组成，所述疏水性聚合物如聚烯烃、聚乙烯、聚丙烯、聚四氟乙烯、聚丙烯酸衍生物、聚醚、聚砜、聚醚砜、聚苯乙烯、聚乙烯醇卤化物、聚偏二氟乙烯、聚乙烯基酯和聚乙烯基醚、天然蜡以及合成蜡。可通过机械或激光钻孔在包衣后形成半透膜上的递送口。递送口也可通过对水溶性材料的塞进行侵蚀来原位形成，或者通过在核芯中凹痕上方的膜的较薄部分的破裂来原位形成。另外，可以在包衣过程中形成递送口。
基本上可通过半透膜的厚度和孔隙率、核芯的组成以及递送口的数量、尺寸和位置来调节释放的活性成分的总量和释放速率。
渗透控释剂型的药物组合物还可包含本文描述的另外的常规赋形剂以提高制剂的性能或促进制剂的加工。
渗透控释剂型可根据本领域技术人员已知的常规方法和技术来制备。
在某些实施方案中，本文提供的药物组合物被配制为amt控释剂型，其包含不对称的渗透膜，该不对称的渗透膜包覆含有活性成分和其他药学上可接受的赋形剂的核芯。amt控释剂型可根据本领域技术人员已知的常规方法和技术来制备，包括直接压片、干法制粒、湿法制粒以及浸涂法。
在某些实施方案中，本文提供的药物组合物被配制为esc控释剂型，其包含渗透膜，该渗透膜包覆含有活性成分、羟乙基纤维素和其他药学上可接受的赋形剂的核芯。
调节释放剂型的本文提供的药物组合物可以被配制成多元颗粒控释装置，其包含多种多样的微粒、颗粒或小丸，直径为约10pm至约3mm，约50pm至约2.5mm，或约100pm至1mm。这样的多元颗粒可以通过本领域技术人员已知的方法制备，包括湿法制粒和干法制粒、挤出/滚圆、辊压、熔融冷凝以及通过喷涂种芯来制备。
可以将本文所述的其他赋形剂与药物组合物掺混以帮助加工和形成所述多元颗粒。得到的颗粒本身可以构成多元装置，或者可以被各种成膜材料包衣，所述成膜材料例如肠溶聚合物、水可溶胀性聚合物和水溶性聚合物。可以将多元颗粒进一步加工成胶囊剂或片剂。
靶向递送
本文提供的药物组合物也可以配制成靶向待治疗的个体的特定组织、受体或身体的其他区域，包括基于脂质体的递送系统、基于重新封闭的红细胞的递送系统以及基于抗体的递送系统。
全身递送
在另一实施方案中，本文提供了用于治疗中枢或周围神经系统的病症的方法。如本文所使用的，全身给药包括口服和肠胃外给药方法。对于口服给药，合适的药物组合物包括散剂、颗粒剂、丸剂、片剂和胶囊剂以及液体剂、糖浆剂、悬浮剂和乳剂。这些组合物也可以包含矫味剂、防腐剂、助悬剂、增稠剂和乳化剂以及其它药学可接受的添加剂。对于肠胃外给药，可以将本文所述的vmat2抑制剂制备为水性注射液，除了vmat2抑制剂之外，其还可以包含缓冲剂、抗氧化剂、抑菌剂以及此类溶液中常用的其它添加剂。
剂量
在治疗、预防或改善抽动障碍或与vmat2抑制相关的其他病况、病症或疾病的一种或多种症状时，合适的剂量水平通常为每天每千克患者体重约0.001至100mg(mg/kg/天)，约0.01至约80mg/kg/天，约0.1至约50mg/kg/天，约0.5至约25mg/kg/天或约1至约20mg/kg/天，其可以以单剂量或多剂量给药。在这个范围内，剂量可以是0.005至0.05、0.05至0.5、或0.5至5.0、1至15、1至20或1至50mg/kg/天。在某些实施方案中，剂量水平是约0.001至100mg/kg/天。
在某些实施方案中，剂量水平是约25至100mg/kg/天。在某些实施方案中，剂量水平是约0.01至约40mg/kg/天。在某些实施方案中，剂量水平是约0.1至约80mg/kg/天。在某些实施方案中，剂量水平是约0.1至约50mg/kg/天。在某些实施方案中，剂量水平是约0.1至约40mg/kg/天。在某些实施方案中，剂量水平是约0.5至约80mg/kg/天。在某些实施方案中，剂量水平是约0.5至约40mg/kg/天。在某些实施方案中，剂量水平是约0.5至约25mg/kg/天。在某些实施方案中，剂量水平是约1至约80mg/kg/天。在某些实施方案中，剂量水平是约1至约75mg/kg/天。在某些实施方案中，剂量水平是约1至约50mg/kg/天。在某些实施方案中，剂量水平是约1至约40mg/kg/天。在某些实施方案中，剂量水平是约1至约25mg/kg/天。
在某些实施方案中，剂量水平是约5.0至150mg/天，并且在某些实施方案中，剂量水平是10至100mg/天。在某些实施方案中，剂量水平是约80mg/天。在某些实施方案中，剂量水平是约40mg/天。
用于口服给药，药物组合物可以片剂的形式提供，所述片剂包含1.0至1,000mg的活性成分，特别是约1、约5、约10、约15、约20、约25、约30、约40、约45、约50、约75、约80、约100、约150、约200、约250、约300、约400、约500、约600、约750、约800、约900和约1,000mg的活性成分用于对待治疗的患者对症调整剂量。在某些实施方案中，药物组合物可以以片剂的形式提供，所述片剂包含约100mg的有效成分。在某些实施方案中，药物组合物可以以片剂的形式提供，所述片剂包含约80mg的有效成分。在某些实施方案中，药物组合物可以以片剂的形式提供，所述片剂包含约75mg的有效成分。在某些实施方案中，药物组合物可以以片剂的形式提供，所述片剂包含约50mg的有效成分。在某些实施方案中，药物组合物可以以片剂的形式提供，所述片剂包含约40mg的有效成分。在某些实施方案中，药物组合物可以以片剂的形式提供，所述片剂包含约25mg的有效成分。组合物可以以每天1至4次的方案给药，包括每天一次、每天两次、每天三次和每天四次。
但是，应当理解，对于任何特定患者的具体剂量水平和剂量的频率可以变化，并且取决于多种因素，包括所用具体化合物的活性、该化合物的代谢稳定性和作用时长、年龄、体重、一般健康状况、性别、饮食、给药方式和时间、排泄率、药物组合、特定病况的严重程度以及治疗的宿主。
本文提供的化合物还可以与其他药剂组合或联用，所述药剂可用于治疗、预防或改善本文提供的化合物所用于的疾病或病况的一种或多种症状。
这种其他药剂或药物可以通过其通常使用的途径和量与本文提供的化合物同时或相继给药。当本文提供的化合物与一种或多种其他药物同时使用时，可以使用除了本文提供的化合物之外还包含这种其他药物的药物组合物，但不是必需的。因此，本文提供的药物组合物包括除本文提供的化合物之外还包含一种或多种其他活性成分或治疗剂的那些药物组合物。
本文提供的化合物与第二活性成分的重量比可以变化，并且将取决于每种成分的有效剂量。通常，使用每种成分的有效剂量。因此，例如，当本文提供的化合物与第二药物联用时，或药物组合物含有这种其他药物时，颗粒与第二药物的重量比可以为约1,000：1至约1：1000，或约200：1至约1：200。
本文提供的颗粒与其他活性成分的组合通常也在上述范围内，但是在每种情况下，应使用有效剂量的每种活性成分。
在以下实施例中提供本公开的实施方案的实例。以下实施例仅以示例性说明的方式给出，以帮助普通技术人员使用本公开。所述实施例不旨在以任何方式另行限制本公开的范围。
实施例
分析方法-高效液相色谱法(uplc-ms)
平台：agilent1260系列uplc：配备有自动进样器、uv检测器(220nm和254nm)、柱温箱、ms检测器(电喷雾)；
柱：watersxbridgebehc18xp，2.5微米，3x50mm；
流动相：a＝水，0.025％tfa；b＝乙腈，0.025％tfa；
流速：1.5ml/min；
梯度：1.5min内10％b/90％a至90％b/10％a，然后保持0.3min，返回初始条件0.5min；总运行时间2.5min；
为了简化目的，在以下实施例中写出了一些氮原子和/或氧原子而没有伴随它们的氢原子，诸如单价“-n”代替“-nh2”和“-o”代替“-oh”，以及二价“-n-”代替“-nh-”。本领域的技术人员将容易认识并理解这种缩写名称的含义。
实施例1
1b的合成：
将(2r)-2-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}-4-甲基戊酸(5.7g，24.4mmol)和2-(3,4-二甲氧基苯基)乙-1-胺(5.3g，29.3mmol，1.2当量)溶解在二氯甲烷(100ml)中，并加入乙基双(丙-2-基)胺(16.0ml，97.6mmol，4.0当量)，然后加入hatu(11.1g，29.3mmol，1.2当量)。将反应在室温下搅拌2小时，然后再用二氯甲烷稀释，并用饱和nh4cl洗涤然后用饱和nahco3洗涤。将合并的有机层经mgso4干燥并且真空浓缩。使用二氯甲烷将硅胶柱(40g)上样，并且在20分钟内以etoac(0-70％)/己烷的递增梯度运行，以定量产率得到n-[(1r)-1-{[2-(3,4-二甲氧基苯基)乙基]氨基甲酰基}-3-甲基丁基]氨基甲酸叔丁酯1a(9.7g，24.4mmol)。将n-[(1r)-1-{[2-(3,4-二甲氧基苯基)乙基]氨基甲酰基}-3-甲基丁基]氨基甲酸叔丁酯1a(6.5g，16.0mmol)溶解在二氯甲烷(100ml)中并且加入三氟乙酸(20ml)。一旦反应完成，就将混合物浓缩，重新溶解在二氯甲烷(100ml)中，并用饱和nahco3使其成碱性。合并的有机层经mgso4干燥并且真空浓缩，以定量产率得到(2r)-2-氨基-n-[2-(3,4-二甲氧基苯基)乙基]-4-甲基戊酰胺1b(4.6g，16.0mmol)，为黄色油。
1c的合成：
将(2r)-2-氨基-n-[2-(3,4-二甲氧基苯基)乙基]-4-甲基戊酰胺1b(4.6g，16.0mmol)溶解在甲醇(100ml)中并加入2,2-二甲氧基乙醛(60wt.％的水溶液)(3.2ml，18.0mmol，1.1当量)。加入乙酸直至中和，然后加入催化量的10％钯/碳，并且将反应混合物用氢气吹扫并且搅拌整个周末。将混合物经硅藻土过滤并且真空浓缩。使用二氯甲烷将硅胶柱(40g)上样，并且在20分钟内以甲醇(0-10％)/二氯甲烷的递增梯度运行，得到(2r)-2-[(2,2-二甲氧基乙基)氨基]-n-[2-(3,4-二甲氧基苯基)乙基]-4-甲基戊酰胺1c(5.8g，15.0mmol)，为黄色油，产率94％。
1d和1d.1的合成：
将浓硫酸(10ml)冷却至0℃并且逐滴加入溶解在甲醇(10ml)中的(2r)-2-[(2,2-二甲氧基乙基)氨基]-n-[2-(3,4-二甲氧基苯基)乙基]-4-甲基戊酰胺(5.8g，15.0mmol)。将反应升温至室温并且搅拌过夜。观察起始原料，因此将反应加热至60℃，持续2小时并且反应完成。通过加入冰使反应混合物冷却，然后用10％naoh使其成碱性。真空去除甲醇并且用二氯甲烷(3x100ml)萃取化合物。合并的有机层经mgso4干燥并且真空浓缩。使用二氯甲烷将硅胶柱(80g)上样，并且在40分钟内以甲醇(0-5％)/二氯甲烷的递增梯度运行，得到(3r,11bs)-9,10-二甲氧基-3-(2-甲基丙基)-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉-4-酮1d(1.7g，5.3mmol)和(3r,11br)-9,10-二甲氧基-3-(2-甲基丙基)-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉-4-酮1d.1(2.1g，6.6mmol)。
1-1和1-2的合成：
将(3r,11bs)-9,10-二甲氧基-3-(2-甲基丙基)-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉-4-酮1d(0.6g，1.9mmol)溶解在无水thf(4ml)中并且加入2mlah(2.9ml，5.6mmol，3当量)。将反应混合物用甲醇(1ml)淬灭并且真空浓缩。将混合物重新溶解在二氯甲烷(10ml)中并且用盐水萃取。合并的有机层经mgso4干燥并且真空浓缩，得到(3r,11bs)-9,10-二甲氧基-3-(2-甲基丙基)-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉1-1(0.5g，1.64mmol)，产率87％。
(3r,11br)-9,10-二甲氧基-3-(2-甲基丙基)-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉1-2也使用此程序制备。
实施例2
2-1的合成：
将(3r,11bs)-9,10-二甲氧基-3-(2-甲基丙基)-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉1-1(10mg，0.03mmol)溶解在dmf(0.5ml)中，并且加入k2co3(14mg，0.1mmol，3当量)，然后加入碘乙烷(2.6μl，0.3mmol，1当量)。2小时后反应完成，然后过滤并且用meoh稀释至总体积为1ml，并且直接用于制备色谱，产生(3r,11bs)-2-乙基-9,10-二甲氧基-3-(2-甲基丙基)-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉2-1。
下文表2提供了2-1和其他代表性化合物的观察到的(obs)离子m/z比，所述其他代表性化合物根据本实施例所述程序制备。
表2
实施例3
3-1的合成：
将(3r,11br)-9,10-二甲氧基-3-(2-甲基丙基)-2h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉1-2(10mg，0.03mmol)溶解在dmf(0.5ml)中，并且加入k2co3(14mg，0.1mmol，3当量)，然后加入碘乙烷(2.6μl，0.3mmol，1当量)。2小时后反应完成，然后过滤并且用meoh稀释至总体积为1ml，并且直接用于制备色谱，产生(3r,11br)-2-乙基-9,10-二甲氧基-3-(2-甲基丙基)-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉3-1。
下文表3提供了3-1和其他代表性化合物的观察到的(obs)离子m/z比，所述其他代表性化合物根据本实施例所述程序制备。
表3
实施例4
4b的合成：
将(2r)-2-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}-4-甲基戊酸(3.0g，13.0mmol，1.2当量)和5-(2-氨基乙基)-2-甲氧基苯酚盐酸盐(2.2g，11.0mmol)溶解在二氯甲烷(50ml)中，并且加入三乙胺(4.5ml，33mmol，3.0当量)，然后加入hatu(4.9g，13.0mmol，1.2当量)。将反应在室温下搅拌过夜，然后再用二氯甲烷稀释，并用饱和nh4cl洗涤然后用饱和nahco3洗涤。合并的有机层经mgso4干燥并且真空浓缩。使用二氯甲烷将硅胶柱(40g)上样，并且在20分钟内以etoac(0-100％)/己烷的递增梯度运行，得到n-[(1r)-1-{[2-(3-羟基-4-甲氧基苯基)乙基]氨基甲酰基}-3-甲基丁基]-氨基甲酸叔丁酯(3.9g，10.4mmol)，产率95％。将该中间体溶解在二氯甲烷(50ml)中并且加入三氟乙酸(10ml)。一旦反应完成，就将混合物浓缩，重新溶解在二氯甲烷(100ml)中，并用饱和nahco3使其成碱性。合并的有机层经mgso4干燥并且真空浓缩，以定量产率得到(2r)-2-氨基-n-[2-(3-羟基-4-甲氧基苯基)乙基]-4-甲基戊酰胺4b(2.9g，10.4mmol)，为黄色油。
4c的合成：
将中间体4b(2.9g，10.4mmol)溶解在甲醇(20ml)中并加入2,2-二甲氧基乙醛(60wt.％的水溶液，2.0ml，11.5mmol，1.1当量)。加入乙酸直至中和，然后加入催化量的10％钯/碳，并且将反应混合物用氢气吹扫并且搅拌过夜。将混合物经硅藻土过滤并且真空浓缩。使用二氯甲烷将硅胶柱(40g)上样，并且在20分钟内以甲醇(0-10％)/二氯甲烷的递增梯度运行，以定量产率得到(2r)-2-[(2,2-二甲氧基乙基)氨基]-n-[2-(3-羟基-4-甲氧基苯基)乙基]-4-甲基戊酰胺4c(3.9g，10.4mmol)，为黄色油。
4d和4d.1的合成：
将浓硫酸(15ml)冷却至0℃并且逐滴加入溶解在甲醇(10ml)中的4c(3.9g，10.7mmol)。反应升温至室温并且搅拌整个周末。通过加入冰使反应混合物冷却，然后用10％naoh使其正好成碱性。真空去除甲醇并且用二氯甲烷(3x100ml)萃取化合物。合并的有机层经mgso4干燥并且真空浓缩。使用二氯甲烷将硅胶柱(80g)上样，并且在40分钟内以甲醇(0-5％)/二氯甲烷的递增梯度运行，得到(3r,11bs)-9-羟基-10-甲氧基-3-(2-甲基丙基)-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉-4-酮4d(0.96g，3.2mmol)和(3r,11br)-9-羟基-10-甲氧基-3-(2-甲基丙基)-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉-4-酮4d.1(1.1g，3.6mmol)。
4-1和4-2的合成：
将中间体4d(0.33g，1.1mmol)溶解在二氯甲烷(5ml)中并且加入三乙胺(0.18ml，1.3mmol，1.2当量)，然后加入二碳酸二叔丁酯(0.28g，1.3mmol，1.2当量)。将反应搅拌过夜，然后真空浓缩。使用二氯甲烷将硅胶柱(24g)上样，并且在15分钟内以乙酸乙酯(0-65％)/己烷的递增梯度运行，以定量产率得到(3r,11bs)-9-羟基-10-甲氧基-3-(2-甲基丙基)-4-氧代-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉-2-羧酸叔丁酯(0.44g，1.1mmol)。将该中间体(0.62g，1.53mmol)溶解在无水thf(10ml)中，并且加入2mlah(3.8ml，7.7mmol，5当量)。将反应混合物在室温下搅拌2小时，然后加热至70℃并过夜。将混合物用水(1ml)淬灭并且用etoac(20ml)稀释。用etoac(3x25ml)将产物从罗谢尔盐(rochelle’ssalt)(10ml)中萃取。合并的有机层经mgso4干燥并且真空浓缩，得到(3r,11bs)-10-甲氧基-2-甲基-3-(2-甲基丙基)-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉-9-醇4-1(0.45g，1.48mmol)，产率96％。
(3r,11br)-10-甲氧基-2-甲基-3-(2-甲基丙基)-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉-9-醇4-2也使用该程序制备。
实施例5
5-1的合成：
将(3r,11bs)-10-甲氧基-2-甲基-3-(2-甲基丙基)-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉-9-醇4-1(8.0mg，0.026mmol)溶解在丙酮(0.5ml)中并加入cs2co3(25.0mg，0.078mmol，3当量)，然后加入溴乙烷(2.0μl，0.029mmol，1.1当量)。将反应混合物加热至50℃并过夜。过滤粗混合物，用meoh稀释至1ml，并直接用于制备色谱，产生(3r,11bs)-9-乙氧基-10-甲氧基-2-甲基-3-(2-甲基丙基)-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉5-1。
下文表5提供了5-1和其他代表性化合物的观察到的(obs)离子m/z比，所述其他代表性化合根据本实施例所述程序制备。
表5
实施例6
6-1的合成：
将(3r,11br)-10-甲氧基-2-甲基-3-(2-甲基丙基)-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉-9-醇4-2(10.0mg，0.033mmol)溶解在丙酮(0.5ml)中并加入cs2co3(32.0mg，0.099mmol，3当量)，然后加入2-溴丙烷(4.7μl，0.050mmol，1.5当量)。将反应混合物加热至50℃并过夜。过滤粗混合物，用meoh稀释至1ml，并直接用于制备色谱，产生(3r,11br)-10-甲氧基-2-甲基-3-(2-甲基丙基)-9-(丙-2-基氧基)-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉6-1。
下文表6提供了6-1和其他代表性化合物的观察到的(obs)离子m/z比，所述其他代表性化合根据本实施例所述程序制备。
表6
实施例7
7b的合成：
将(2r)-2-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}-3-环丁基丙酸(0.86g，3.54mmol，1.0当量)和5-(2-氨基乙基)-2-甲氧基苯酚盐酸盐(0.72g，3.54mmol)溶解在二氯甲烷(20ml)中，并且加入三乙胺(2.0ml，14.2mmol，4.0当量)，然后加入hatu(1.6g，4.24mmol，1.2当量)。将反应在室温下搅拌过夜，然后再用二氯甲烷稀释，并用饱和nh4cl洗涤然后用饱和nahco3洗涤。合并的有机层经mgso4干燥并且真空浓缩。使用二氯甲烷将硅胶柱(24g)上样，并且在20分钟内以etoac(0-100％)/己烷的递增梯度运行，得到(r)-(3-环丁基-1-((3-羟基-4-甲氧基苯乙基)氨基)-1-氧代-丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(1.0g，2.57mmol)，产率73％。将该产物(1.0g，2.57mmol)溶解在二氯甲烷(20ml)中并且加入三氟乙酸(3ml)。一旦反应完成，就将混合物浓缩，并且重新溶解在二氯甲烷(50ml)中，并用饱和nahco3使其成碱性。合并的有机层经mgso4干燥并且真空浓缩，得到(2r)-2-氨基-3-环丁基-n-[2-(3-羟基-4-甲氧基苯基)乙基]丙酰胺7b(0.68g，2.33mmol)，为黄色油，产率91％。
7c的合成：
将中间体7b(0.68g，2.33mmol)溶解在甲醇(10ml)中并加入2,2-二甲氧基乙醛(60wt.％的水溶液)(0.42ml，2.33mmol，1.0当量)。加入乙酸直至中和，然后加入催化量的10％钯/碳，并且将反应混合物用氢气吹扫并且搅拌过夜。将混合物经硅藻土过滤并且真空浓缩。使用二氯甲烷将硅胶柱(24g)上样，并且在20分钟内以甲醇(0-10％)/二氯甲烷的递增梯度运行，得到(2r)-3-环丁基-2-[(2,2-二甲氧基乙基)氨基]-n-[2-(3-羟基-4-甲氧基苯基)乙基]丙酰胺7c(0.80g，2.1mmol)，为黄色油，产率90％。
7d和7d.1的合成：
将浓硫酸(5ml)冷却至0℃并且逐滴加入溶解在甲醇(3ml)中的7c(0.80g，2.1mmol)。将反应升温至室温并且搅拌过夜。通过加入冰使反应混合物冷却，然后用10％naoh使其正好成碱性。真空去除甲醇并且用二氯甲烷(3x50ml)萃取化合物。合并的有机层经mgso4干燥并且真空浓缩。使用二氯甲烷将硅胶柱(40g)上样，并且在40分钟内以甲醇(0-5％)/二氯甲烷的递增梯度运行，得到(3r,11bs)-3-(环丁基甲基)-9-羟基-10-甲氧基-1,2,3,6,7,11b-六氢-4h-吡嗪并[2,1-a]异喹啉-4-酮7d(0.28g，0.88mmol)和(3r,11br)-3-(环丁基甲基)-9-羟基-10-甲氧基-1,2,3,6,7,11b-六氢-4h-吡嗪并[2,1-a]异喹啉-4-酮7d.1(0.25g，0.79mmol)。
7-1和7-2的合成：
将中间体7d(0.28g，0.88mmol)溶解在二氯甲烷(5ml)中，并且加入三乙胺(0.18ml，1.3mmol，1.5当量)，然后加入二碳酸二叔丁酯(0.12g，0.97mmol，1.1当量)。将反应搅拌过夜，然后真空浓缩。使用二氯甲烷将硅胶柱(12g)上样，并且在15分钟内以乙酸乙酯(0-65％)/己烷的递增梯度运行，得到(3r,11bs)-3-(环丁基甲基)-9-羟基-10-甲氧基-4-氧代-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉-2-羧酸叔丁酯(0.28g，0.67mmol)，产率76％。将该产物(0.28g，0.67mmol)溶解在无水thf(5ml)中，并且加入2mlah(1.7ml3.4mmol，5当量)。将反应混合物在室温下搅拌2小时，然后加热至70℃并过夜。将混合物用水(1ml)淬灭并且用etoac(20ml)稀释。用etoac(3x25ml)将产物从罗谢尔盐(10ml)中萃取。合并的有机层经mgso4干燥，并且真空浓缩，得到(3r,11bs)-3-(环丁基甲基)-10-甲氧基-2-甲基-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉-9-醇7-1(0.17g，1.48mmol)，产率80％。
(3r,11br)-3-(环丁基甲基)-10-甲氧基-2-甲基-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉-9-醇7-2也使用该程序制备。
实施例8
8-1的合成：
将产物7-1(8.0mg，0.026mmol)溶解在丙酮(0.5ml)中，并且加入cs2co3(25.0mg，0.078mmol，3当量)，然后加入1-溴-3-氟丙烷(11mg，0.075mmol，3.0当量)。将反应混合物加热至50℃，持续一小时。过滤粗混合物，用meoh稀释至1ml，并直接用于制备色谱，产生(3r,11bs)-3-(环丁基甲基)-9-(3-氟丙氧基)-10-甲氧基-2-甲基-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉8-1。
下文表8提供了8-1和其他代表性化合物的观察到的(obs)离子m/z比，所述其他代表性化合根据本实施例所述程序制备。
表8
实施例9
9-1的合成：
将(3r,11br)-3-(环丁基甲基)-10-甲氧基-2-甲基-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉-9-醇7-2(8.0mg，0.026mmol)溶解在丙酮(0.5ml)中，并加入cs2co3(25.0mg，0.078mmol，3当量)，然后加入1-溴-3-氟丙烷(11mg，0.075mmol，3.0当量)。将反应混合物加热至50℃，持续一小时。过滤粗混合物，用meoh稀释至1ml，并直接用于制备色谱，产生(3r,11br)-3-(环丁基甲基)-9-(3-氟丙氧基)-10-甲氧基-2-甲基-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉9-1(观察到的离子m/z比377.1)。
实施例10
10b的合成：
将(2r)-2-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}-4,4-二甲基戊酸(0.77g，3.14mmol，1.0当量)和5-(2-氨基乙基)-2-甲氧基苯酚盐酸盐(0.50g，2.99mmol)溶解在二氯甲烷(20ml)中，并且加入三乙胺(1.7ml，12mmol，4.0当量)，然后加入hatu(1.4g，3.6mmol，1.2当量)。将反应在室温下搅拌过夜，然后再用二氯甲烷稀释，并用饱和nh4cl洗涤然后用饱和nahco3洗涤。合并的有机层经mgso4干燥并且真空浓缩。使用二氯甲烷将硅胶柱(24g)上样，并且在20分钟内以etoac(0-100％)/己烷的递增梯度运行，以定量产率得到(r)-(1-((3-羟基-4-甲氧基苯乙基)氨基)-4,4-二甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯(1.2g，3.0mmol)。将该产物(1.2g，3.0mmol)溶解在二氯甲烷(20ml)中，并且加入三氟乙酸(3ml)。一旦反应完成，就将混合物浓缩，并且重新溶解在二氯甲烷(50ml)中，并用饱和nahco3使其成碱性。合并的有机层经mgso4干燥，并且真空浓缩，得到(2r)-2-氨基-n-[2-(3-羟基-4-甲氧基苯基)乙基]-4,4-二甲基戊酰胺10b(0.60g，2.04mmol)，为黄色油，产率68％。
10c的合成：
将中间体10b(0.60g，2.04mmol)溶解在甲醇(10ml)中，并且加入2,2-二甲氧基乙醛(60wt.％的水溶液)(0.40ml，2.04mmol，1.0当量)。加入乙酸直至中和，然后加入催化量的10％钯/碳，并且将反应混合物用氢气吹扫并且搅拌过夜。将混合物经硅藻土过滤并且真空浓缩。使用二氯甲烷将硅胶柱(24g)上样，并且在20分钟内以甲醇(0-10％)/二氯甲烷的递增梯度运行，以定量产率得到(2r)-2-[(2,2-二甲氧基乙基)氨基]-n-[2-(3-羟基-4-甲氧基苯基)乙基]-4,4-二甲基戊酰胺10c(0.79g，2.04mmol)，为黄色油。
10d和10d.1的合成：
将浓硫酸(5ml)冷却至0℃，并且逐滴加入溶解在甲醇(3ml)中的10c(0.80g，2.1mmol)。将反应升温至室温并且搅拌过夜。通过加入冰使反应混合物冷却，然后用10％naoh使其正好成碱性。真空去除甲醇并且用二氯甲烷(3x50ml)萃取化合物。合并的有机层经mgso4干燥并且真空浓缩。使用二氯甲烷将硅胶柱(40g)上样，并且在40分钟内以甲醇(0-5％)/二氯甲烷的递增梯度运行，得到(3r,11bs)-3-(2,2-二甲基丙基)-9-羟基-10-甲氧基-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉-4-酮10d(0.15g，0.47mmol)和(3r,11br)-3-(2,2-二甲基丙基)-9-羟基-10-甲氧基-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉-4-酮10d.1(0.21g，0.65mmol)。
10-1和10-2的合成：
将中间体10d(0.15g，0.47mmol)溶解在二氯甲烷(5ml)中，并且加入三乙胺(0.08ml，0.56mmol，1.2当量)，然后加入二碳酸二叔丁酯(0.11g，0.51mmol，1.1当量)。将反应搅拌过夜，然后真空浓缩。使用二氯甲烷将硅胶柱(12g)上样，并且在15分钟内以乙酸乙酯(0-70％)/己烷的递增梯度运行，得到(3r,11bs)-3-(2,2-二甲基丙基)-9-羟基-10-甲氧基-4-氧代-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉-2-羧酸叔丁酯(0.14g，0.33mmol)，产率71％。将该产物(0.14g，0.33mmol)溶解在无水thf(5ml)中，并且加入2mlah(0.84ml1.7mmol，5当量)。将反应混合物在室温下搅拌2小时，然后加热至70℃并过夜。将混合物用水(1ml)淬灭并且用etoac(20ml)稀释。用etoac(3x25ml)将产物从罗谢尔盐(10ml)中萃取。合并的有机层经mgso4干燥，并且真空浓缩，得到(3r,11bs)-3-(2,2-二甲基丙基)-10-甲氧基-2-甲基-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉-9-醇10-1(0.09g，0.3mmol)，产率90％。
(3r,11br)-3-(2,2-二甲基丙基)-10-甲氧基-2-甲基-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉-9-醇10-2也使用该程序制备。
实施例11
11-1的合成：
将产物10-1(8.0mg，0.025mmol)溶解在丙酮(0.5ml)中，并且加入cs2co3(21.0mg，0.063mmol，2.5当量)，然后加入1-溴-3-氟丙烷(5.4mg，0.038mmol，1.5当量)。将反应混合物加热至50℃，持续一小时。过滤粗混合物，用meoh稀释至1ml，并直接用于制备色谱，产生(3r,11bs)-3-(2,2-二甲基丙基)-9-(3-氟丙氧基)-10-甲氧基-2-甲基-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉11-1。
下文表11提供了11-1和其他代表性化合物的观察到的(obs)离子m/z比，所述其他代表性化合根据本实施例所述程序制备。
表11
此外，化合物11-2和11-3分别根据一般方案2和3制备。
11b的合成：
将2-(3,4-二甲氧基苯基)乙-1-胺([40g，221mmol])溶解在dcm([400ml])中。将溶液冷却并且加入(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-4,4-二甲基戊酸([59.6g，243mmol，1.1当量])。加入dmap(7.3g，60mmol，0.27当量)，然后分批加入edac(74.1g，386mmol，1.75当量)，产生不均匀的混合物。将混合物升温至室温并且搅拌直至完成。一旦完成，用柠檬酸将反应淬灭。相分离，并且用dcm对水相进行反萃取。用盐水洗涤合并的有机物并且蒸馏以得到(r)-(1-((3,4-二甲氧基苯乙基)氨基)-4,4-二甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯11a。将11a(90g，221mmol)溶解在dcm(315ml)中。在加入三氟乙酸(135ml)前将溶液冷却。将反应升温至室温并且搅拌直至完成。一旦完成，就将反应冷却，用水和dcm稀释，然后用氢氧化钠淬灭。相分离，并且用dcm对水相进行反萃取。用盐水洗涤合并的有机物，并且在thf中蒸馏以得到(r)-2-氨基-n-(3,4-二甲氧基苯乙基)-4,4-二甲基戊酰胺11b。
11c的合成：
将11b(66g，214mmol)溶解在thf(528ml)中。加入乙酸(64.3g，1070mmol，5当量)和60％的2,2-二甲氧基乙醛水溶液(39g，225mmol，1.05当量)，并且在室温下搅拌1小时。将反应冷却，然后分批加入氰基硼氢化钠(26.9g，428mmol，2当量)。一旦完成，就将反应用水稀释并且用氢氧化钠淬灭。脱去thf并且用etoac替换。相分离，并且用etoac对水相进行反萃取。用盐水洗涤合并的有机物，并且在meoh中蒸馏以得到(r)-2-((2,2-二甲氧基乙基)氨基)-n-(3,4-二甲氧基苯乙基)-4,4-二甲基戊酰胺11c。
11d的合成：
将11c(84.9g，214mmol)溶解在meoh(1.25l)中。加入多聚甲醛(38.6g，1285mmol，6当量)和乙酸(84.9g，1413mmol，6.6当量)。在室温下分批加入氰基硼氢化钠(33.6g，535mmol，2.5当量)。将反应缓慢加热以控制放热。一旦完成，就将反应用水稀释并且用氢氧化钠淬灭。脱去meoh并且用etoac替换。相分离，并且用etoac对水相进行反萃取。用盐水洗涤合并的有机物，并且在dcm中进行溶剂交换以得到(r)-2-((2,2-二甲氧基乙基)(甲基)氨基)-n-(3,4-二甲氧基苯乙基)-4,4-二甲基戊酰胺11d。
11e非对映异构体混合物的合成：
将浓硫酸(11.9g，122mmol，5当量)溶解/悬浮于dcm(50ml)中并且冷却。将11d(10g，24.4mmol)溶解在dcm(25ml)中，并且快速加入到所述酸溶液中，同时剧烈搅拌。一旦完成，就将反应用水稀释并且用氢氧化铵淬灭。相分离，并且用dcm对水相进行反萃取。用盐水洗涤合并的有机物，并且在thf中进行溶剂交换以得到(3r)-9,10-二甲氧基-2-甲基-3-新戊基-1,2,3,6,7,11b-六氢-4h-吡嗪并[2,1-a]异喹啉-4-酮11e。
11-2非对映异构体混合物的合成：
将11e(8.45g，24.4mmol)溶解在无水thf(101ml)中，并且冷却。加入氢化铝锂，2m，(36.6ml，73.2mmol，3当量)，并且加热反应。一旦完成，就以费舍尔(feiser)方式淬灭lah。过滤所沉淀的铝盐并且洗涤。将滤液脱去thf，并且用甲基叔丁醚替换。相分离，并且用mtbe对水相进行反萃取。用盐水洗涤合并的有机物，并且在meoh中进行溶剂交换以得到(3r)-3-(2,2-二甲基丙基)-9,10-二甲氧基-2-甲基-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉11-2非对映异构体混合物。
11-2二磷酸盐的合成：
将11-2非对映异构体混合物(20g，60.2mmol)溶解在meoh(160ml)中。过滤溶液并且加热至50℃。加入磷酸(7.25g，1.05当量.)。将溶液加热至60℃，并且在1小时内加入第二当量的磷酸(7.25g，1.05当量.)，并在60℃下搅拌10分钟，然后在4小时内冷却至20℃。过滤悬浮液并且用meoh洗涤固体。将固体在真空干燥箱中于50℃干燥3天，得到11-2，(3r,11bs)-9,10-二甲氧基-2-甲基-3-新戊基-1,3,4,6,7,11b-六氢-2h-吡嗪并[2,1-a]异喹啉，也称为(3r,11bs)-3-(2,2-二甲基丙基)-9,10-二甲氧基-2-甲基-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉，为二磷酸盐。
11f的合成：
将(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-4,4-二甲基戊酸(62g，252mmol，1.05当量)和5-(2-氨基乙基)-2-甲氧基苯酚盐酸盐(40.2g，240mmol)溶解在dmf(400ml)中，并且将混合物冷却至0℃。加入hatu(96g，252mmol，1.05当量)，然后在10分钟内加入diea(93.2g，721mmol，3.0当量)。将混合物在0℃搅拌60分钟，然后加入到水(1000ml)和etoac(1000ml)中。将混合物转移至分液漏斗，分离并且用etoac萃取水相。用盐水和水洗涤合并的有机物，然后经mgso4干燥并且真空浓缩，得到(r)-(1-((3-羟基-4-甲氧基苯乙基)氨基)-4,4-二甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯11f，为粘稠油。
11g的合成：
将化合物11f(90g，228mmol)和k2co3(94.5g，684mmol，3.0当量)溶解在丙酮(630ml)中并且缓慢加入2,2,2-三氟乙基三氟甲磺酸酯(79.4g，342mmol，1.5当量)。将反应升温至50℃并且搅拌5小时。冷却至室温后，将混合物用水(450ml)稀释。浓缩混合物以去除丙酮，并且加入etoac(450ml)。相分离，并且用etoac萃取水层。用盐水和水洗涤合并的有机物，然后经mgso4干燥并且真空浓缩，得到(r)-(1-((4-甲氧基-3-(2,2,2-三氟乙氧基)苯乙基)氨基)-4,4-二甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯11g，为粘稠油。
11h的合成：
将化合物11g(96.5g，203mmol)溶解在dcm(290ml)中并且冷却至0℃，然后加入tfa(193ml)。将混合物搅拌10分钟，然后升温至室温并且搅拌6小时。然后将反应冷却至0℃，并且用水和dcm稀释。在剧烈搅拌下加入50％w/wnaoh溶液直至达到ph为13。分层，并且用盐水洗涤有机物，并且真空浓缩，得到(r)-2-氨基-n-(4-甲氧基-3-(2,2,2-三氟乙氧基)苯乙基)-4,4-二甲基戊酰胺11h，为粘稠油。
11i的合成：
将化合物11h(5.0g，13.3mmol)溶解在mtbe(35ml)中，并且将反应混合物用氮气吹扫，并且冷却至0℃。在0℃加入乙酸(4.0g，66.4mmol，5.0当量)，并保持在0℃。加入60％的2,2-二甲氧基乙醛水溶液(4.61g，26.6mmol，2.0当量)，并且将反应混合物用氮气吹扫。将反应在0℃搅拌90分钟。在10分钟内分批加入nabh4(1.0g，26.6mmol，2.0当量)，然后将反应混合物在0℃搅拌60分钟。加入水(25ml)。加入4mk2co3溶液直至达到ph为11。分层。用盐水洗涤有机物，并且真空浓缩，得到(r)-2-((2,2-二甲氧基乙基)氨基)-n-(4-甲氧基-3-(2,2,2-三氟乙氧基)苯乙基)-4,4-二甲基戊酰胺11i。
11j的合成：
将化合物11i(6.2g，13.3mmol)溶解在mtbe(18ml)和etoh(9ml)中，用氮气吹扫，并且冷却至0℃。加入乙酸(4.0g，66.4mmol，5.0当量)和福尔马林(5.4g，66.4mmol，5.0当量)，并且在0℃搅拌90分钟。在5分钟内分批加入na(aco)3bh(8.5g，40.0mmol，3.0当量)，并且在0℃搅拌30分钟。在0℃加入水(25ml)，然后加入4mk2co3溶液直至ph为11。分层。用盐水洗涤有机物，并且真空浓缩，得到(r)-2-((2,2-二甲氧基乙基)(甲基)氨基)-n-(4-甲氧基-3-(2,2,2-三氟乙氧基)苯乙基)-4,4-二甲基戊酰胺11j。
11k的合成：
将化合物11j(22.9g，49.3mmol)溶解在dcm(57ml)中，并且在2分钟内加入到-30℃的h2so4(24.2g，247mmol，5.0当量)的dcm(115ml)溶液中。在添加期间，将反应混合物升温至0℃，然后搅拌30分钟。在0℃，加入水(69ml)，然后在剧烈搅拌下加入nh4oh直至达到ph为10。相分离，并且用盐水洗涤有机层，然后经mgso4干燥，并且真空干燥，得到(3r)-10-甲氧基-2-甲基-3-新戊基-9-(2,2,2-三氟乙氧基)-1,2,3,6,7,11b-六氢-4h-吡嗪并[2,1-a]异喹啉-4-酮11k。
11-3非对映异构体混合物的合成：
将化合物11k(12.5g，30.2mmol)溶解在2-甲基四氢呋喃(87.5ml)中，并且分批加入9-bbn(14.7g，2当量的二聚体固体)。将反应混合物加热至50℃，持续2小时。然后将反应混合物冷却至室温，并且加入庚烷(87.5ml)和hcl(1n，62.5ml)以达到ph约为2。将反应混合物搅拌60分钟，并且分离相。用37.5ml的1nhcl洗涤有机相。将mtbe(62.5ml)和2mk2co3(62.5ml)加入到合并的水相中以达到ph为9-10。将混合物搅拌30分钟，并且分离相。用mtbe(62.5ml)洗涤水层。用盐水洗涤合并的有机物，并且真空浓缩以得到11-3及其非对映异构体，为混合物。
11-3l-dbta盐的合成：
将含有11-3(5.12g，12.8mmol)的非对映异构体混合物溶解在乙腈(30ml)中，并且加入二苯甲酰基-l-酒石酸(l-dbta，4.59g，1.0当量)。将反应混合物加热至50℃。加入水(12.5ml)，将温度保持在40-50℃。3小时内将混合物冷却至室温。过滤混合物，然后用6:2.5的乙腈:水洗涤，得到(3r,11bs)-10-甲氧基-2-甲基-3-新戊基-9-(2,2,2-三氟乙氧基)-1,3,4,6,7,11b-六氢-2h-吡嗪并[2,1-a]异喹啉的l-dbta盐11-3l-dbta盐。
11-3和11-3二-hcl盐的合成：
将(3r,11bs)-10-甲氧基-2-甲基-3-新戊基-9-(2,2,2-三氟乙氧基)-1,3,4,6,7,11b-六氢-2h-吡嗪并[2,1-a]异喹啉的l-dbta盐11-3l-dbta盐(30.0g，39.5mmol)悬浮在水(300ml)和乙酸异丙酯(300ml)中。加入naoh(50％水溶液)直至ph是13。相分离，并且用盐水(90ml)洗涤有机物。浓缩有机层，得到15.9g的11-3，为游离碱，将其溶解在乙酸乙酯(80ml)中。过滤溶液并加入水(6.4ml)。将溶液加热至35℃，并且在5分钟内加入37％hcl(3.4ml，1.05当量)。在5分钟内加入第二批的hcl(3.4ml，1.05当量)。将混合物冷却至30℃，并且用晶种使其冷凝。将浆液搅拌90分钟，然后缓慢冷却至室温。过滤固体，并且用乙酸乙酯(16ml)洗涤。在真空干燥箱中于50℃干燥湿滤饼，得到(3r,11bs)-10-甲氧基-2-甲基-3-新戊基-9-(2,2,2-三氟乙氧基)-1,3,4,6,7,11b-六氢-2h-吡嗪并[2,1-a]异喹啉，为二盐酸盐，11-3二-hcl盐。
11m的合成：
将多巴胺盐酸盐(15g，79.1mmol)和2-[[(1,1-二甲基乙氧基)羰基]甲基氨基]-4,4-二甲基-(2r)-戊酸(21.5g，83.1mmol，1.05当量)溶解在dmf(150ml)中，并且冷却至0℃。加入hatu(31.6g，83.1mmol，1.05当量)，然后加入diea(30.7g，237mmol，3.0当量)。将混合物在0℃搅拌2小时，然后加入到水(300ml)和etoac(300ml)中。将混合物转移至分液漏斗中，分离并且用etoac萃取水相。用盐水和水洗涤合并的有机物，并且真空浓缩，得到(r)-(1-((3,4-二羟基苯乙基)氨基)-4,4-二甲基-1-氧代戊-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯11m，为粘稠油。
11n的合成：
将化合物11m(31.2g，79.1mmol)溶解在丙酮(218ml)中。加入k2co3(32.8g，237mmol，3.0当量)，然后加入碘甲烷-d3(25.2g，174mmol，2.2当量)。将反应升温至50℃并且搅拌26小时。冷却至室温后，将混合物用水(220ml)稀释。浓缩混合物以去除丙酮。加入etoac(156ml)。相分离，并且用etoac萃取水层。用盐水洗涤合并的有机物，经mgso4干燥并且真空浓缩，得到(r)-(1-((3,4-双(甲氧基-d3)苯乙基)氨基)-4,4-二甲基-1-氧代戊-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯11n，为粘稠油。
11o的合成：
将化合物11n(17.0g，39.7mmol)溶解在dcm(60ml)中并且冷却至0℃，然后加入tfa(34ml)。将混合物搅拌10分钟，然后升温至室温并且搅拌21小时。然后将反应冷却至0℃，并且用水和dcm稀释。在剧烈搅拌下加入50％w/wnaoh溶液直至达到ph为13。分层，并且用dcm萃取水层。用盐水洗涤合并的有机物，并且真空浓缩，得到(r)-n-(3,4-双(甲氧基-d3)苯乙基)-4,4-二甲基-2-(甲基氨基)戊酰胺11o，为粘稠油。
11p的合成：
将11o(13.0g，39.6mmol)溶解在thf(104ml)中。加入乙酸(11.4ml，200mmol，5当量)和60％的2,2-二甲氧基乙醛水溶液(10.3g，59.4mmol，1.5当量)，并且在室温下搅拌2小时。将反应冷却，然后分批加入氰基硼氢化钠(5.2g，83.4mmol，2当量)。为了完成反应需要再两次同时加入2,2-二甲氧基乙醛和氰基硼氢化钠(0.4当量和0.3当量)。一旦完成，就将反应冷却至0℃，用水稀释并且用10％氢氧化钠淬灭直至ph>10。脱去thf并且用etoac替换。相分离，并且用etoac对水相进行反萃取。用盐水洗涤合并的有机物，并且真空浓缩，得到(r)-n-(3,4-双(甲氧基-d3)苯乙基)-2-((2,2-二甲氧基乙基)(甲基)氨基)-4,4-二甲基戊酰胺11p。
11q的合成：
将浓硫酸(10.6ml，199mmol，5当量)溶解/悬浮于dcm(83ml)中并且冷却至-20℃。将11p(16.5g，39.6mmol)溶解在dcm(41ml)中，并且快速加入到所述酸溶液中，同时剧烈搅拌，保持反应低于0℃。一旦完成，就将反应用水(50ml)稀释并且用氢氧化铵淬灭至ph9。相分离，并且用dcm对水相进行反萃取。用盐水洗涤合并的有机物，并且真空浓缩，得到非对映异构体的混合物。用正相硅胶柱色谱法实现非对映异构体的分离，用己烷和乙酸乙酯洗脱，得到(3r,11bs)-9,10-双(甲氧基-d3)-2-甲基-3-新戊基-1,2,3,6,7,11b-六氢-4h-吡嗪并[2,1-a]异喹啉-4-酮11q。
11-15的合成：
将11q(6.9g，19.6mmol)溶解在无水thf(103ml)中，并且冷却至0℃。缓慢加入氢化铝锂，2.4m，(32.5ml，78mmol，4当量)并且在2小时内将反应加热至40℃。一旦完成，就以费舍尔(feiser)方式淬灭lah。过滤所沉淀的铝盐并且用thf洗涤。将滤液脱去thf，并且用甲基叔丁醚替换。相分离，并且用mtbe对水相进行反萃取。用盐水洗涤合并的有机物，并且真空浓缩，得到(3r,11bs)-3-(2,2-二甲基丙基)-9,10-双(甲氧基-d3)-2-甲基-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉，也称为(3r,11bs)-9,10-双(甲氧基-d3)-2-甲基-3-新戊基-1,3,4,6,7,11b-六氢-2h-吡嗪并[2,1-a]异喹啉11-15。
实施例12
12-1的合成：
将产物10-2(8.0mg，0.025mmol)溶解在丙酮(0.5ml)中，并且加入cs2co3(21.0mg，0.063mmol，2.5当量)，然后加入1-溴-3-氟丙烷(5.4mg，0.038mmol，1.5当量)。将反应混合物加热至50℃，持续1小时。过滤粗混合物，用meoh稀释至1ml，并直接用于制备色谱，产生(3r,11br)-3-(2,2-二甲基丙基)-9-(3-氟丙氧基)-10-甲氧基-2-甲基-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-哌嗪并[2,1-a]异喹啉12-1。
下文表12提供了12-1和其他代表性化合物的观察到的(obs)离子m/z比，所述其他代表性化合根据本实施例所述程序制备。
表12
实施例13
vmat2抑制剂诱导的自主活动的减少
使用自主活动(lma)测定，测量vmat2抑制剂对多巴胺耗竭的作用。在60分钟的预处理时间后，将雄性sprague-dawley大鼠(200-250g)放置在透明的笼子中，该笼子被光电池检测器(sandiegoinstruments)包围。通过光电池光束的中断来检测大鼠自主活动，并且将活动定义为30分钟内光束中断的次数。数据通过单因素方差分析(anova；sigmastatversion3.0.1,spss,chicago,il)进行分析，然后通过studentnewmankeuls事后检验进行显著性分析。
实施例14
抗精神病活性的条件性回避反应测定
条件性回避反应(car)测试已经显示是用于评估化合物的抗精神病活性的有效且可靠的临床前模型。在car范例中，将大鼠在两室穿梭箱中进行训练以通过负强化响应于条件刺激(听觉)。如果动物在听觉刺激呈现时未能移动至另一个室，向大鼠所处侧施加轻微的足部电击。大鼠学会在启动听觉信号时通过移动至另一室而避免轻微的足部电击，这被称为条件性回避反应。在施加电击期间横越至另一室则被称为逃避反应。如果大鼠即使在施加足部电击时也未能移动至另一室，则大鼠被认为是逃避失败。大量研究已经表明，典型抗精神病药物和非典型抗精神病药物选择性地抑制car，因此使其成为筛选可能的抗精神病化合物的理想测定(参见，例如，wadenberg等人，biobehav.rev.1999,23:851-62)。
将雄性wistar大鼠每天进行训练持续3周至4周。在训练期间，将大鼠置于car双向穿梭箱中并且随即进行20次试验的训练周期。试验由呈现10秒80db白噪声然后进行杂乱的0.6ma足部电击持续长达20秒组成。试验间的间隔为20秒-60秒。当条件刺激呈现时，大鼠通过从一个隔室移动至另一个隔室学会避免电击(条件性回避反应)。如果大鼠避免了在条件刺激时所呈现的20次试验中的至少19次电击，则认为大鼠已充分受训。不使用未通过这些标准的大鼠。
在测试当天，使受训动物在测试前在测试室中适应30分钟。然后给它们服用化合物并且置于car双向穿梭箱中。在测试中，对每只大鼠进行20次试验。在每次试验中，施加条件刺激(呈现10秒80db白噪声)，然后施加足部电击(不规则的0.6ma足部电击持续长达20秒)。如果动物在条件刺激呈现时移动至另一室，则评定为条件性回避反应。如果动物在足部电击呈现时移动至另一室，则评定为逃避。如果动物在足部电击呈现时未能移动至另一室，则评定为逃避失败。通过逃避次数的增加，抗精神病药的功效是明显的。通过方差分析(anova)分析数据，随后在适当时用bonferroni检验进行事后比较。如果p<0.05，则认为效果是显著的。检测定义为高于或低于平均值的两个标准差的异常值并且从所有分析中去除。
实施例15
测定化合物的vmat2抑制活性的方法
以下提供了测定化合物抑制vmat2的能力的技术的实施例。该程序修改自先前所述的程序(参见，例如，near,(1986),mol.pharmacol.30:252-57；teng等人，j.neurochem.71,258-65,1998)。如先前所述(参见，例如hoare等人，(2003)peptides24：1881-97)，通过均质化，然后通过离心洗涤来制备来自人血小板或sprague-dawley大鼠前脑的匀浆。在总体积为0.2ml的低结合的96孔板(corning#3605)中，十二种浓度的测试化合物与6nm3h-二氢丁苯那嗪(americanradiolabeledchemicals，kd2.6nm)在vmat2结合缓冲液(dulbecco氏磷酸盐缓冲盐水，1mmedta，ph7.4)中的大鼠前脑匀浆(每孔100μg膜蛋白)或人血小板均浆(每孔50μg膜蛋白)上竞争。在25℃下孵育两小时后，通过使用unifilter-96收集器(perkinelmer)快速过滤到gf/b玻璃纤维过滤器上来收集结合的放射性配体。将过滤板用0.1％聚乙烯亚胺预处理10分钟，并且在收集后，用800μlvmat2结合缓冲液洗涤过滤板。使用topcountnxt(perkinelmer)通过闪烁计数来定量结合的放射性配体。
使用下文所示的稍作修改的程序来测定表15-1中列出的化合物的人ki值(请参见标题为“kinm”的列中的数据)。在总体积为0.15ml的低结合的96孔板(corning#3605)中，十二种浓度的测试化合物与10nm3h-二氢丁苯那嗪(americanradiolabeledchemicals，kd2.6nm)在vmat2结合缓冲液(dulbecco氏磷酸盐缓冲盐水，1mmedta，ph7.4)中的大鼠前脑匀浆(每孔100μg膜蛋白)或人血小板匀浆(每孔15μg膜蛋白)上竞争。在25℃下孵育90分钟后，通过使用unifilter-96收集器(perkinelmer)快速过滤到gf/b玻璃纤维过滤器上来收集结合的放射性配体。将过滤板用0.1％聚乙烯亚胺预处理，并允许干燥过夜，并且在收集后，用800μlvmat2结合缓冲液洗涤过滤板。使用topcountnxt(perkinelmer)通过闪烁计数来定量结合的放射性配体。在表15-1中，ki小于10nm的化合物被鉴定为“+++”，ki为10nm至500nm的化合物被鉴定为“++”，并且ki大于500nm的化合物被鉴定为“+”(nt＝未测试的)。
表15-1
以下提供了可以常规进行以测定化合物抑制vmat2的能力的另一技术。以下程序修改自先前所述的方法(参见teng等人，j.neurochem.71,258-65,1998)。
大鼠纹状体囊泡的制备：合并来自三只大鼠的大鼠纹状体并在0.32m蔗糖中均质化。然后将匀浆在4℃、2,000xg下离心10min并将所得上清液在4℃、10,000xg下离心30min。通过添加7ml蒸馏水对所得的含有富集突触小体部分的沉淀(2ml)进行渗透冲击，随后将悬浮液均质化。通过添加0.9ml0.25mhepes和0.9ml1.0m中性l-(+)-酒石酸二钾盐缓冲液(ph7.5)恢复渗透性，然后离心20min(在4℃下，20,000xg)。然后将上清液离心60min(在4℃下，55,000xg)并将所得上清液离心45min(在4℃下，100,000xg)。将所得沉淀重悬浮于25mmhepes、100mml-(+)-酒石酸二钾盐、5mmmgcl2、10mmnacl、0.05mmegta、ph7.5中直至蛋白浓度为1-2mg/ml，并且在-80℃下储存长达3周而结合活性没有明显的损失。使用前，立即将最终沉淀重悬浮于结合缓冲液(25mmhepes、100mml-(+)-酒石酸二钾盐、5mmmgcl2、10mmnacl、0.05mmegta、0.1mmedta、1.7mm抗坏血酸、ph7.4)中。
[3h]-二氢丁苯那嗪(dhtbz)结合：将等份的囊泡悬浮液(0.16ml，15μg蛋白/ml)与竞争化合物(10-6m至10-12m)和2nm[3h]-二氢丁苯那嗪(htbz；比活性：20ci/mmol，americanradiolabeledchemicals，inc.)在室温下孵育1h，总体积为0.5ml。通过使用brandel细胞收集器将样品快速过滤到whatmangf/f过滤器上来终止反应。使用20μm丁苯那嗪(tbz)测定非特异性结合。预先用冰冷的聚乙烯亚胺(0.5％)将过滤器浸泡2h。在用冰冷的缓冲液将过滤器洗涤三次以后，将它们置于具有10ml闪烁混合液的闪烁管中。通过闪烁光谱法测定结合放射性。
可将以上所述的各实施方案进行组合，以提供其它实施方案。将本说明书中参考的和/或申请数据表中列出的所有美国专利、美国专利申请公开、美国专利申请、外国专利、外国专利申请以及非专利出版物通过引用整体并入本文。本申请还要求享有于2017年4月19日提交的美国临时专利申请第62/487,413号和2018年4月4日提交的美国临时专利申请第62/652,837号的权益，并且将它们通过援引以其整体并入本文。如果必要，可对实施方案的方面进行修改，以采用不同专利、申请和出版物中的概念，从而提供其它实施方案。
可以根据以上详细描述，对实施方案作出这些和其它改变。一般而言，在下述权利要求中，使用的术语不应被解释为将权利要求限制为本说明书和权利要求书中公开的具体实施方案，而应被解释为包括所有可能的实施方案以及被授权的此权利要求的等同物的全部范围。因此，权利要求不受本公开的限制。