一种肺炎衣原体快速检测引物组、试剂盒的制作方法

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种肺炎衣原体快速检测引物组、试剂盒。

背景技术：

肺炎衣原体(chlamydiapneumoniae，cp)是20世纪80年代发现的一种衣原体种，革兰染色阴性，专性细胞内寄生的原核生物，是一种人类病原体。主要通过呼吸道飞沫传播。潜伏期为15-23天。进入人体后，产生内毒素，可引起上呼吸道感染，如鼻窦炎、中耳炎和咽炎，也可引起下呼吸道感染，如支气管炎和肺炎。近年来的调查显示，社区获得性肺炎(communityacquiredpneumonia，cap)病原体中，肺炎衣原体已是继肺炎链球菌和流感嗜血杆菌之后引起cap的主要病原体，且所占比重不断升高。在人口较为密集的地方很容易出现流行。大部分人群呈隐性感染，初期临床特征往往不明显，一旦不能及时发现容易造成治疗延误。疑似感染后根据其临床表现、x线检查等也很难得出准确的诊断结论。对于衣原体肺炎的治疗，较为有效药物主要包括大环内酯类、四环素类和氟喹诺酮类，但是四环素类和氟喹诺酮类不推荐在儿童中使用。此外，衣原体肺炎治疗反应比较慢，疗程较长，如治疗过早停止，症状容易复发。有研究表明，年老体弱、免疫力低下者较易感染肺炎衣原体，且易反复，不易控制，感染者中，老年人病死率达5％-10％，而我国老龄化的日益严重，这使得肺炎衣原体感染的早期诊断及控制更加重要。

目前，临床上检测肺炎衣原体的方法很多，主要有细胞培养分离法、血清学方法、核酸扩增法等。细胞培养分离法需要很长时间，灵敏度较低且操作繁复；血清学方法一般检测igm或igg抗体，而体内抗体的产生需要较长时间且容易受到干扰，不能做到早期筛查。核酸扩增法因其高灵敏度、耗时短等特点，逐渐成为主要的检测方法。目前常用于检测肺炎衣原体的分子检测技术包括实时荧光定量pcr、环介导核酸等温扩增技术(loop-mediatedisothermalamplificationmethod，lamp)等。而这些方法虽然灵敏度高，但需要变温循环或者65℃较高的恒温，容易产生气溶胶，具有污染的风险，这就使得特异度受到影响，此外这些方法要求配备昂贵精密的实时荧光pcr扩增仪，且操作繁杂，耗时较长，对操作人员有较高技术要求。如专利cn105567802a采用的是taqman探针，利用pcr的方法整个反应需要2小时。

为了克服以上困难，本发明针对肺炎衣原体外膜主要蛋白编码基因(momp)设计了多对引物进行筛选，最终得到的引物，可以特异结合momp基因，且由于引物较长，对碱基突变有一定的包容性，提高了检测的灵敏度；探针长度35bp，区别于taqman的两端标记，本发明中的探针标记处于序列中下游第26-28位，嵌于序列内部，这样的设计有助于荧光降噪，降低检测的假阳性、提高检测的特异度。配合常温核酸扩增技术(enzymesmediatedamplification，ema)，在37-45℃相对较低的恒温条件下，检测10-30分钟，可使本试剂盒有灵敏度高、特异度高、耗时短、操作简单、成本低、防污染等优点，使肺炎衣原体的快速检测试剂盒在分子诊断行业具有一定的竞争力。

技术实现要素：

针对以上问题，本发明提供一种肺炎衣原体快速检测引物组、试剂盒，灵敏度高、特异度高、操作简单、仪器成本低、不易污染，能够快速而准确地检测肺炎衣原体。

为达到上述目的，本发明的技术方案是：肺炎衣原体快速检测引物组，包含检测肺炎衣原体基因组momp基因保守序列的上、下游引物和探针，所述上游引物是：5’-actctacagcgttcaatctcgttggtt-3’；所述下游引物是：5’-cctttatagcccttgggtttgtttacaga-3’；所述探针是5’-aagttcttcaactttaggtttggac/i6-famdt//idsp//ibhq1dt/gcatattgga-3’c3spacer。

其中：“i6-famdt”指6-fam(6-羧基荧光素)荧光标记的dt核苷酸，“idsp”指碱基缺失，“ibhq1dt”指带有bhq1淬灭基团标记的dt核苷酸，“c3spacer”指3’羟基封闭。“i6-famdt”、“ibhq1dt”处于序列中下游第26、28位。

进一步的，所述上游引物可以是权利要求1所述上游引物序列的5’、3’端延伸或缩短10bp，所述下游引物可以是权利要求1所述下游引物序列的5’、3’端延伸或缩短10bp，所述探针可以是权利要求1所述探针序列的5’、3’端延伸或缩短10bp；或者，所述上、下游引物和探针可以是分别与权利要求1所述上、下游引物和探针的序列同源性大于85％的序列；或者，所述上、下游引物和探针可以是分别与权利要求1所述上、下游引物和探针的序列碱基反向互补的序列；或者，所述探针的6-fam、缺失或bhq1标记处于序列的第21-32位；或者，所述探针的6-fam、缺失或bhq1标记处于反向互补序列的第21-32位。

进一步的，所述探针长度有35bp，荧光、碱基缺失和淬灭修饰相邻，且处于序列中下游第26-28位。

本发明还提供一种肺炎衣原体快速检测试剂盒，所述试剂盒包括以下内容：

(1)裂解液

(2)复溶液；

(3)含引物探针的ema反应管；所述引物包含上、下游引物和探针；所述上游引物是：5’-actctacagcgttcaatctcgttggtt-3’；所述下游引物是：5’-cctttatagcccttgggtttgtttacaga-3’；所述探针是5’-aagttcttcaactttaggtttggac/i6-famdt//idsp//ibhq1dt/gcatattgga-3’c3spacer；

(4)阳性质控品；

(5)阴性质控品。

进一步的，所述上游引物可以是权利要求1所述上游引物序列的5’、3’端延伸或缩短10bp，所述下游引物可以是权利要求1所述下游引物序列的5’、3’端延伸或缩短10bp，所述探针可以是权利要求1所述探针序列的5’、3’端延伸或缩短10bp；或者，所述上、下游引物和探针可以是分别与权利要求1所述上、下游引物和探针的序列同源性大于85％的序列；或者，所述上、下游引物和探针可以是分别与权利要求1所述上、下游引物和探针的序列碱基反向互补的序列；或者，所述探针的6-fam、缺失或bhq1标记处于序列的第21-32位；或者，所述探针的6-fam、缺失或bhq1标记处于反向互补序列的第21-32位。

进一步的，所述探针长度有35bp，荧光、碱基缺失和淬灭修饰相邻，且处于序列中下游第26-28位。

优选的，所述裂解液含有终浓度为2-5％的np-40、20-50mg/ml的chelex-100、10-20mm的ph8.0的tris-ac以及超纯水；

优选的，所述复溶液含有终浓度为20-30mm的mgac2、90-100mm的tris-ac(ph8.0)、55-60mm的kac、10-15％的peg20000(w/v)及超纯水。

优选的，所述含引物探针的ema反应管的成分如下：每个反应管中含有终浓度为24-27ng/μl的单链dna结合蛋白、62-125pg/μl的atp再生蛋白、6-7.5ng/μl的dna解旋酶、2-3ng/μl的dna聚合酶、90-120pg/μl的dna限制性内切酶、300-400pg/μl的辅助蛋白、200-300nm的上游引物、200-300nm的下游引物、30-40nm的探针、20-30mm的磷酸肌酸钠、2-3mm的atp、100-150μm的dntp、50-60mm的tris-ac(ph8.0)、35-50μg/μl的海藻糖、100-120mm的kac、7.5-10ng/μl的甘露醇、1-5％的peg20000(w/v)。

优选的，所述阴性质控品为超纯水空白对照。

优选的，所述阳性质控品是含有目的序列的质粒，浓度是1*10⁴copies/μl。

本发明还提供所述肺炎衣原体快速检测引物组在制备肺炎衣原体快速检测试剂盒中的应用。

本发明还提供一种肺炎衣原体的检测方法，所述检测方法采用所述的肺炎衣原体快速检测试剂盒，所述检测方法不以疾病的诊断和治疗为目的；所述检测方法包括以下步骤：

(1)使用所述的肺炎衣原体快速检测试剂盒，将目标样本拭子放到500μl裂解液中并剪断，涡旋振荡30秒，5000转/分，离心1分钟，取100μl上清液转移到新的1.5ml离心管中，金属浴90℃加热裂解10分钟，随后冷却到室温，取上清进行检测；

(2)使用所述的肺炎衣原体快速检测试剂盒，取10μl复溶液及10μl样本裂解所得上清，加入到含引物探针的ema反应管中，充分混匀，另设置阳性及阴性对照；

(3)将复溶的ema反应管放入clicki核酸荧光检测仪中，37-45℃扩增10-30分钟，每30秒扫描荧光一次，采集荧光数据，绘制时间-荧光信号图；

(4)结果质控：阳性质控品ct值＜20，荧光曲线为典型“s”型，阴性质控品无ct值，以上条件均满足，本次实验有效，否则无效，需要排查原因并重新测试；

(5)结果判断：如果样本扫描荧光曲线为典型“s”型，且ct值＜30，则判断为阳性结果；反之，扫描荧光曲线为水平直线，无ct值，则为阴性结果。

本发明使用常温核酸扩增技术，通过dna解旋酶、单链dna结合蛋白、dna聚合酶等多个酶促反应，可在37-45℃相对较低的恒温条件下，10-30分钟内使目的dna扩增数百万倍，配合荧光检测技术，可以实现对待检dna的快速检测。

本发明的引物序列是这样得到的：通过国内外文献及genebank数据库比对筛选肺炎衣原体基因，最终确定以外膜主要蛋白编码基因(momp)为目的基因，该基因高度保守且具有肺炎衣原体种属特异性，通过检测该序列，即可以明确样本中是否含有肺炎衣原体。从genebank中下载肺炎衣原体momp基因序列(序列号kc512913.1)，通过primerpremier6软件设计3对引物和1条探针，以含目的序列的质粒为模板，37-45℃扩增，通过荧光检测的结果，筛选合适的引物和探针。筛选标准：扩增灵敏度至少到100copies/μl、阳性扩增曲线是典型“s”曲线、阴性扩增曲线是水平直线。

从而得到本发明的引物组：

上游引物是：5’-actctacagcgttcaatctcgttggtt-3’；

下游引物是：5’-cctttatagcccttgggtttgtttacaga-3’；

探针是5’-aagttcttcaactttaggtttggac/i6-famdt//idsp//ibhq1dt/gcatattgga-3’c3spacer。

本发明的试剂盒是采用筛选后得到的引物组，配合ema(enzymesmediatedamplification，多酶介导的核酸扩增技术，即常温核酸扩增技术)体系制备条件，调整引物及探针的最佳浓度，制备含引物探针的ema反应管、复溶液、裂解液、阴性质控品和阳性质控品，形成肺炎衣原体快速检测试剂盒。

本发明的有益效果包括：

1、本发明中引物序列较长，即便样本中靶序列存在1-3个突变，也可以正常扩增，从而增加了本发明的灵敏度。

2、本发明中探针序列较长，fam及bhq1标记在序列的内部且荧光、碱基缺失和淬灭修饰相邻，这样的设计增加了扩增体系的适应性，降低了背景荧光、同时减少了假阳性。若样本中靶序列存在突变，也不会影响到荧光探针与靶序列的退火及荧光信号的产生及释放，有助于增加本发明的准确度、灵敏度和特异性。

3、本发明中试剂盒含有裂解液，可以快速提取样本中肺炎衣原体的dna，无需额外提取试剂盒，降低成本并提高效率。

4、本试剂盒中ema反应管中的试剂经过冻干处理，可2-8℃保存和运输，降低了保存及冷链运输的设备要求，同时延长了有效期。

5、本发明中核酸扩增条件为37℃到45℃，对温度要求低，对机器要求低，同时减少气溶胶，降低污染的风险。

6、本发明的核酸扩增时间短，可在30分钟内报告结果。

本发明以肺炎衣原体的momp基因的保守序列为目的基因，筛选最佳引物及探针，并配合以通用的ema酶，形成最优的实验反应体系，使本发明试剂盒具有检测能力上的优势与特点，不仅检测简单易行，而且具有较高的灵敏度、准确度、精密度、特异性以及可重复性。

本发明针对肺炎衣原体外膜主要蛋白编码基因(momp)设计了多对引物进行筛选，最终得到的引物，可以特异结合momp基因，且由于引物较长，对碱基突变有一定的包容性，提高了检测的灵敏度；探针长度35bp，区别于taqman的两端标记，本发明中的探针标记处于序列中下游第26-28位，嵌于序列内部，这样的设计有助于荧光降噪，降低检测的假阳性、提高检测的特异度，因此本发明有很高的灵敏度、特异度和准确度。配合常温核酸扩增技术(enzymesmediatedamplification，ema)，在37-45℃相对较低的恒温条件下，检测10-30分钟，可使本试剂盒有灵敏度高、特异度高、耗时短、操作简单、成本低、防污染等优点，使肺炎衣原体的快速检测试剂盒在分子诊断行业具有一定的竞争力。

附图说明

图1是实施例1肺炎衣原体快速检测引物组的筛选结果。

图2是实施例2肺炎衣原体初筛引物的验证结果。

图3是实施例4交叉反应的检测结果。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明作进一步详细的说明，所选配方为试剂盒的优选配方，但并不用来限制本发明的范围。

本发明提供的肺炎衣原体快速检测引物组，包含检测肺炎衣原体momp基因保守序列的上、下游引物和探针，所述上游引物是：5’-actctacagcgttcaatctcgttggtt-3’；所述下游引物是：5’-cctttatagcccttgggtttgtttacaga-3’；所述探针是5’-aagttcttcaactttaggtttggac/i6-famdt//idsp//ibhq1dt/gcatattgga-3’c3spacer。

本发明还提供肺炎衣原体快速检测试剂盒，所述试剂盒包括以下内容：

(1)裂解液；

(2)复溶液；

(3)含引物探针的ema反应管；所述引物探针包含上、下游引物和探针；所述上游引物是：5’-actctacagcgttcaatctcgttggtt-3’；所述下游引物是：5’-cctttatagcccttgggtttgtttacaga-3’；所述探针是5’-aagttcttcaactttaggtttggac/i6-famdt//idsp//ibhq1dt/gcatattgga-3’c3spacer；

(4)阳性质控品；

(5)阴性质控品。

优选的，所述裂解液含有终浓度为2-5％的np-40、20-50mg/ml的chelex-100、10-20mm的ph8.0的tris-ac以及超纯水。

优选的，所述复溶液含有终浓度为20-30mm的mgac2、90-100mm的tris-ac(ph8.0)、55-60mm的kac、10-15％的peg20000(w/v)及超纯水。

优选的，所述含引物探针的ema反应管的成分如下：每个反应管中含有终浓度为24-27ng/μl的单链dna结合蛋白、62-125pg/μl的atp再生蛋白、6-7.5ng/μl的dna解旋酶、2-3ng/μl的dna聚合酶、90-120pg/μl的dna限制性内切酶、300-400pg/μl的辅助蛋白、200-300nm的上游引物、200-300nm的下游引物、30-40nm的探针、20-30mm的磷酸肌酸钠、2-3mm的atp、100-150μm的dntp、50-60mm的tris-ac(ph8.0)、35-50μg/μl的海藻糖、100-120mm的kac、7.5-10ng/μl的甘露醇、1-5％的peg20000(w/v)。

优选的，所述阴性质控品为超纯水空白对照。

优选的，所述阳性质控品是含有目的序列的质粒，浓度是1*10⁴copies/μl。

所述上游引物可以是权利要求1所述上游引物序列的5’、3’端延伸或缩短10bp，所述下游引物可以是权利要求1所述下游引物序列的5’、3’端延伸或缩短10bp，所述探针可以是权利要求1所述探针序列的5’、3’端延伸或缩短10bp；或者，所述上、下游引物和探针可以是分别与权利要求1所述上、下游引物和探针的序列同源性大于85％的序列；或者，所述上、下游引物和探针可以是分别与权利要求1所述上、下游引物和探针的序列碱基反向互补的序列；或者，所述探针的6-fam、缺失或bhq1标记处于序列的第21-32位；或者，所述探针的6-fam、缺失或bhq1标记处于反向互补序列的第21-32位。

本发明还提供一种肺炎衣原体的检测方法，所述检测方法采用所述的肺炎衣原体快速检测试剂盒，所述检测方法不以疾病的诊断和治疗为目的，所述检测方法包括以下步骤：

(1)使用所述的肺炎衣原体快速检测试剂盒，将目标样本拭子放到500μl裂解液中并剪断，涡旋振荡30秒，5000转/分，离心1分钟，取100μl上清液转移到新的1.5ml离心管中，金属浴90℃加热裂解10分钟，随后冷却到室温，取上清进行检测；

(2)使用所述的肺炎衣原体快速检测试剂盒，取10μl复溶液及10μ1样本裂解所得上清，加入到含引物探针的ema反应管中，充分混匀，另设置阳性及阴性对照；

(3)将复溶的ema反应管放入clicki核酸荧光检测仪中，37-45℃扩增10-30分钟，每30秒扫描荧光一次，采集荧光数据，绘制时间-荧光信号图；

(4)结果质控：阳性质控品ct值＜20，荧光曲线为典型“s”型，阴性质控品无ct值，以上条件均满足，本次实验有效，否则无效，需要排查原因并重新测试；

(5)结果判断：如果样本扫描荧光曲线为典型“s”型，且ct值＜30，则判断为阳性结果；反之，扫描荧光曲线为水平直线，无ct值，则为阴性结果。

实施例1、肺炎衣原体快速检测引物组的筛选

通过文献及genebank筛选了肺炎衣原体特异性序列，最终确定以外膜主要蛋白编码基因(momp)为目的基因，该基因高度保守且具有肺炎衣原体种属特异性，通过检测该序列，即可以明确样本中是否含有肺炎衣原体。从genebank上下载肺炎衣原体momp基因序列(序列号kc512913.1)，通过primerpremier6软件设计了3条上游引物、3条下游引物及1条探针(见表1)。采用ema酶及设计的探针，以含有momp基因序列的质粒(拷贝数为1×10⁴copies/μl)为模板，将设计的引物进行交叉配对，共9种组合，进行扩增，筛选引物。初筛标准：阳性扩增曲线是典型“s”曲线、阴性扩增曲线是水平直线、扩增曲线ct值尽量小。引物筛选初步结果见图1，引物对cpf1/cpr1、cpf1/cpr2、cpf1/cpr3、cpf2/cpr2、cpf2/cpr3、cpf3/cpr2，均能扩增出“s”曲线且阴性为水平直线，其他引物对均没有扩增出曲线，其中引物对cpf1/cpr2扩增曲线ct值靠前，所以选择这对引物进行验证检测限。

表1引物组序列

实施例2、肺炎衣原体初筛引物的验证

本实施例使用筛选到的引物及探针，制备含有引物探针ema反应管，该反应管中含有终浓度为24-27ng/μl的单链dna结合蛋白、62-125pg/μl的atp再生蛋白、6-7.5ng/μl的dna解旋酶、2-3ng/μl的dna聚合酶、90-120pg/μl的dna限制性内切酶、300-400pg/μl的辅助蛋白、200-300nm的上游引物、200-300nm的下游引物、30-40nm的探针、20-30mm的磷酸肌酸钠、2-3mm的atp、100-150μm的dntp、50-60mm的tris-ac(ph8.0)、35-50μg/μl的海藻糖、100-120mm的kac、7.5-10ng/μl的甘露醇、1-5％的peg20000(w/v)。进行冻干，存于2-8℃备用。

配制复溶液，溶液中含有终浓度为20-30mm的mgac2、90-100mm的tris-ac(ph8.0)、55-60mm的kac、10-15％的peg20000(w/v)及超纯水。

试剂验证：以含有momp基因序列的质粒为模板，并将模板以10倍梯度稀释，浓度范围是1×10⁶copies/μl到1copies/μl，进行扩增。扩增结果见图2。lcopies/μl浓度的模板没有扩增曲线，该引物组扩增的检测限在10copies/μl左右，能达到引物组筛选标准。

实施例3、设计肺炎衣原体快速检测试剂盒

本实施例基于ema技术(常温核酸扩增技术)，分别设计裂解液、复溶液、含引物探针的ema反应管。所述引物探针是实施例1最终筛选出的引物探针。

(1)裂解液

通过比较各提取试剂的组合、比例、裂解效果、裂解时间及对ema体系的干扰，最终选用的裂解液含有终浓度为2-5％的np-40(v/v)、20-50mg/ml的chelex-100、10-20mm的ph8.0的tris-ac以及超纯水。

(2)复溶液及含有引物探针的ema反应管

通过调整引物、探针的浓度等，形成了最佳的扩增体系：

选用的复溶液含有终浓度为20-30mm的mgac2、90-100mm的tris-ac(ph8.0)、55-60mm的kac、10-15％的peg20000(w/v)及超纯水。

选用的含有引物探针的ema反应管中含有终浓度为24-27ng/μl的单链dna结合蛋白、62-125pg/μl的atp再生蛋白、6-7.5ng/μl的dna解旋酶、2-3ng/μl的dna聚合酶、90-120pg/μl的dna限制性内切酶、300-400pg/μl的辅助蛋白、200-300nm的上游引物、200-300nm的下游引物、30-40nm的探针、20-30mm的磷酸肌酸钠、2-3mm的atp、100-150μm的dntp、50-60mm的tris-ac(ph8.0)、35-50μg/μl的海藻糖、100-120mm的kac、7.5-10ng/μl的甘露醇、1-5％的peg20000(w/v)。

(3)阴性质控品为超纯水空白对照。

(4)阳性质控品是含有目的序列的质粒，浓度是1*10⁴copies/μl。

肺炎衣原体荧光ema检测步骤如下：

第一步、样本dna的提取。将目标样本拭子放到500μl裂解液中并剪断，涡旋振荡30秒，5000转/分，离心1分钟，取100μl上清液转移到新的1.5ml离心管中，金属浴90℃加热裂解10分钟，随后冷却到室温，取上清进行检测；

第二步、取10μl复溶液及10μl样本裂解所得上清，加入到含引物探针的ema反应管中，充分混匀，另设置阳性及阴性对照；

第三步、将复溶的ema反应管放入clicki核酸荧光检测仪中，37-45℃扩增10-30分钟，每30秒扫描荧光一次，采集荧光数据，绘制时间-荧光信号图；

第四步、结果质控：阳性质控品ct值＜20，荧光曲线为典型“s”型，阴性质控品无ct值，以上条件均满足，本次实验有效，否则无效，需要排查原因并重新测试；

第五步、结果判断：如果样本扫描荧光曲线为典型“s”型，且ct值＜30，则判断为阳性结果；反之，扫描荧光曲线为水平直线，无ct值，则为阴性结果。

实施例4：交叉反应的检测：

选用部分人类感染常见病原体的核酸提取物，核酸浓度见表2，包括肺炎支原体、流感h1n1、合胞病毒a型、腺病毒3型、腺病毒7型、结核分枝杆菌、肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念球菌，以含有目的基因的质粒(1×10⁴copies/μl)为阳性对照，进行交叉反应的检测，结果显示除含有肺炎衣原体目的基因的质粒为阳性结果外(如图3的曲线)，其它样本结果均为阴性，证明本试剂盒与本实施例中其他病原体无交叉反应。

表2交叉反应样本列表

实施例5：临床样本的灵敏度、特异度检测

本实施例进行了小样本检测。样本是上海某医院呼吸道病原样本核酸，其中有17例检测确定为肺炎衣原体阳性样本，另外有9例结核阳性样本，5例合胞病毒a型阳性样本，14例阴性样本，共45例。利用实施例3制备的肺炎衣原体快速检测试剂盒，进行扩增检测。步骤如下：

第一步、取10μl复溶液及10μl样本核酸，加入到含引物探针的ema反应管中，充分混匀，另设置阳性及阴性对照；

第二步、将复溶的ema反应管放入clicki核酸荧光检测仪中，42℃扩增30分钟；

第三步、结果质控：阳性质控品ct值＜20，荧光曲线为典型“s”型，阴性质控品无ct值，以上条件均满足，本次实验有效，否则无效，需要排查原因并重新测试；

第四步：结果判断：如果样本扫描荧光曲线为典型“s”型，且ct值＜30，则判断为阳性结果；反之，扫描荧光曲线为水平直线，无ct值，则为阴性结果。

检测结果见表3、表4。表3是样本核酸医院标定结果和本发明检测结果。结果显示，本发明的灵敏度是100％，特异度是100％。

表3样本ct值结果

注：“/”表示未测项目；“-”表示阴性结果。

表4临床样本检测结果

本发明以肺炎衣原体的momp序列为目的基因，该基因高度保守且具有种属特异性。针对momp序列，设计并筛选最佳引物及探针，配合通用的ema酶，形成最优的实验反应体系，使本发明试剂盒具有检测能力上的优势与特点，不仅检测简单易行，而且具有较高的准确度、精密度、特异性以及可重复性。本发明操作简单、时间短、仪器要求低，非常适合用于肺炎衣原体的早期快速辅助诊断。

以上所述的仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明创造构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。

序列表

<110>苏州点晶生物科技有限公司

<120>肺炎衣原体快速检测引物组

<130>0

<141>2019-03-01

<160>3

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