本发明涉及植物提取技术领域，尤其涉及一种从黑果腺肋花楸中提取花青素的方法。
背景技术：
黑果腺肋花楸是蔷薇科，腺肋花楸属灌木，高可达3m。根棕黄色，潜根系，根不具发枝能力。嫩枝无绒毛。树皮红棕色或灰褐色，具有明显的圆形皮孔，叶色深绿，单叶，互生；网状叶脉，叶片卵圆形或椭圆形至椭圆-倒披针形，叶尖锐或钝；梨果，果皮紫黑色，果肉暗红色，种子肾形，棕褐色，复伞房花序，花序柄上有绒毛，小花，花药为背着药，粉红色；花瓣白色，花萼片，离萼，绿色杯状；雌蕊子房上位，绵毛状，5月开花，6月-7月结果。
果实中花青素、黄酮(鲜果含量高达0.25％-0.35％)、多酚是已知植物中含量最高的。果实还含有多种维生素和矿质元素等物质。多酚是改善毛细血管和血管的结构与机能的非常重要的物质，还有助于刺激和改善循环系统。花青素和黄酮能够维持人的心脏和机体的健康。据《新英格兰医药杂志》(339卷，15期)报道，花青素和黄酮(及其糖苷)有助于保持尿道健康。
我国从国外成功地引进黑果腺肋花楸种苗，经过十余年的技术推广，目前已大面积种植。该树木不仅作为一种观赏树木，而且还作为一种经济作物。部分企业利用其果实开发出花楸果汁、果酒及果醋等深加工产品，取得良好的经济效益，且满足多样化的市场需求。然而，目前这些果实深加工后，果渣仅仅作为饲料或者肥料。该果渣没有被深加工，其附加值有限。值得一提的是，该果渣中含有丰富的花青素。因此，利用花楸果渣提取花青素，不仅提高相关生产企业的经济效益，提高果渣的附加值，而且满足国内外市场对高生物活性的花楸花青素相关产品的需求。
溶剂提取是花青素的常规提取方法,溶剂多选择甲醇、乙醇、丙酮、水或者混合溶剂等。为了防止提取过程中非酰基化的花青素降解,常在提取溶剂中加入一定浓度的盐酸或者甲酸,但在蒸发浓缩时这些酸又会导致酰基化的花青素部分或全部的水解。传统的溶剂提取方法多采用热溶剂(40～70℃)，大比例1：10～30倍加入溶剂，浸提1～3h的方式提取，此类工艺提取效率较低,浓缩体积大，能耗高，且热溶剂容易造成花青素降解以及生理活性的降低。
技术实现要素：
本发明提供一种从黑果腺肋花楸中提取花青素的方法，能够有效地实现黑果腺肋花楸果渣中所含花青素的释放，提取更加彻底，提取纯度高，使得黑果腺肋花楸果渣中花青素资源得到有效利用，提高黑果腺肋花楸果渣的附加值，原料成本低、易得，容易实现规模化生产。
为解决上述技术问题，本发明提供了一种从黑果腺肋花楸中提取花青素的方法，它包括以下步骤：
1)选果
经过人工挑选，去除霉变、变质坏粒及异物，挑选果粒饱满、色泽均一的新鲜黑果腺肋花楸果实；
2)脱脂处理：
将挑选的黑果腺肋花楸果实洗净晾干，然后在50℃条件下以料液比为1:3(g:ml)的石油醚回流脱脂，石油醚脱脂后的黑果腺肋花楸果实再以料液比为1:3(g:ml)的乙酸乙酯回流脱脂1次，室温干燥，使含水量控制在2-4％重量，得到预处理好的黑果腺肋花楸果实；
3)打浆分离：将经过脱脂处理的黑果腺肋花楸果实打浆，打浆后分离果汁与果渣，将分离出的果渣加入振动式超微粉碎机中，并添加体积为果渣1-3倍的去离子水后，超微粉碎20-40min；
4)混合酸提取：将步骤3)制备的黑果腺肋花楸果渣与混合酸按照按液料比(质量：体积)1：4-8进行混合，于室温条件下避光浸泡24-36h，过滤，获得滤液与滤渣，然后将滤渣再以液料比4：1(体积:质量)加入蒸馏水，调ph值至3-5，于避光条件下微波600w处理6-8min，再转移至水浴65℃提取1h，调ph值至1-3，过滤，将二次滤液合并，得到黑果腺肋花楸果实的提取液；
5)酶解：将步骤3)制备的提取液加入酶解罐中，将酶解罐加热至40-50℃，缓慢加入溶液质量浓度为0.05-0.25％的果胶酶，至提取液中没有果胶被检测出为止，得到酶解溶液，然后将酶解溶液离心分离，得到澄清溶液；
6)超声再提取：将步骤5)得到的澄清溶液放入超声波清洗器中，进行超声波提取；加入浓度为75％的乙醇溶液提取1-2h，离心，取上清液得到提取液；
7)蒸馏：将步骤6)得到的提取液蒸馏去除乙醇溶液，得到粗提取液；
8)洗脱：将步骤7)得到的粗提取液经树脂吸附，洗脱，得洗脱液；再将洗脱液进行真空抽滤，得到纯提取液；
9)浓缩、干燥：将纯提取液旋转蒸发后浓缩得到色素浓缩液，再将色素浓缩液经高速离心喷雾干燥得到一种从黑果腺肋花楸中提取的花青素成品。
进一步地，步骤8)中树脂为非极性大孔树脂，洗脱溶剂为丙酮水溶液。
进一步地，步骤4)中混合酸为乙酸与苹果酸按质量比1:2混合而成，混合酸的ph为2。
进一步地，它包括以下步骤：
1)选果
经过人工挑选，去除霉变、变质坏粒及异物，挑选果粒饱满、色泽均一的新鲜黑果腺肋花楸果实；
2)脱脂处理：
将挑选的黑果腺肋花楸果实洗净晾干，然后在50℃条件下以料液比为1:3(g:ml)的石油醚回流脱脂，石油醚脱脂后的黑果腺肋花楸果实再以料液比为1:3(g:ml)的乙酸乙酯回流脱脂1次，室温干燥，使含水量控制在2-4％重量，得到预处理好的黑果腺肋花楸果实；
3)打浆分离：将经过脱脂处理的黑果腺肋花楸果实打浆，打浆后分离果汁与果渣，将分离出的果渣加入振动式超微粉碎机中，并添加体积为果渣1倍的去离子水后，超微粉碎20min；
4)混合酸提取：将步骤3)制备的黑果腺肋花楸果渣与混合酸按照按液料比(质量：体积)1：4进行混合，于室温条件下避光浸泡24h，过滤，获得滤液与滤渣，然后将滤渣再以液料比4：1(体积:质量)加入蒸馏水，调ph值至3，于避光条件下微波600w处理6min，再转移至水浴65℃提取1h，调ph值至1，过滤，将二次滤液合并，得到黑果腺肋花楸果实的提取液；
5)酶解：将步骤3)制备的提取液加入酶解罐中，将酶解罐加热至40℃，缓慢加入溶液质量浓度为0.05％的果胶酶，至提取液中没有果胶被检测出为止，得到酶解溶液，然后将酶解溶液离心分离，得到澄清溶液；
6)超声再提取：将步骤5)得到的澄清溶液放入超声波清洗器中，进行超声波提取；加入浓度为75％的乙醇溶液提取1h，离心，取上清液得到提取液；
7)蒸馏：将步骤6)得到的提取液蒸馏去除乙醇溶液，得到粗提取液；
8)洗脱：将步骤7)得到的粗提取液经树脂吸附，洗脱，得洗脱液；再将洗脱液进行真空抽滤，得到纯提取液；
9)浓缩、干燥：将纯提取液旋转蒸发后浓缩得到色素浓缩液，再将色素浓缩液经高速离心喷雾干燥得到一种从黑果腺肋花楸中提取的花青素成品。
进一步地，它包括以下步骤：
1)选果
经过人工挑选，去除霉变、变质坏粒及异物，挑选果粒饱满、色泽均一的新鲜黑果腺肋花楸果实；
2)脱脂处理：
将挑选的黑果腺肋花楸果实洗净晾干，然后在50℃条件下以料液比为1:3(g:ml)的石油醚回流脱脂，石油醚脱脂后的黑果腺肋花楸果实再以料液比为1:3(g:ml)的乙酸乙酯回流脱脂1次，室温干燥，使含水量控制在3％重量，得到预处理好的黑果腺肋花楸果实；
3)打浆分离：将经过脱脂处理的黑果腺肋花楸果实打浆，打浆后分离果汁与果渣，将分离出的果渣加入振动式超微粉碎机中，并添加体积为果渣2倍的去离子水后，超微粉碎30min；
4)混合酸提取：将步骤3)制备的黑果腺肋花楸果渣与混合酸按照按液料比(质量：体积)1：6进行混合，于室温条件下避光浸泡30h，过滤，获得滤液与滤渣，然后将滤渣再以液料比4：1(体积:质量)加入蒸馏水，调ph值至4，于避光条件下微波600w处理7min，再转移至水浴65℃提取1h，调ph值至2，过滤，将二次滤液合并，得到黑果腺肋花楸果实的提取液；
5)酶解：将步骤3)制备的提取液加入酶解罐中，将酶解罐加热至45℃，缓慢加入溶液质量浓度为0.15％的果胶酶，至提取液中没有果胶被检测出为止，得到酶解溶液，然后将酶解溶液离心分离，得到澄清溶液；
6)超声再提取：将步骤5)得到的澄清溶液放入超声波清洗器中，进行超声波提取；加入浓度为75％的乙醇溶液提取1.5h，离心，取上清液得到提取液；
7)蒸馏：将步骤6)得到的提取液蒸馏去除乙醇溶液，得到粗提取液；
8)洗脱：将步骤7)得到的粗提取液经树脂吸附，洗脱，得洗脱液；再将洗脱液进行真空抽滤，得到纯提取液；
9)浓缩、干燥：将纯提取液旋转蒸发后浓缩得到色素浓缩液，再将色素浓缩液经高速离心喷雾干燥得到一种从黑果腺肋花楸中提取的花青素成品。
进一步地，它包括以下步骤：
1)选果
经过人工挑选，去除霉变、变质坏粒及异物，挑选果粒饱满、色泽均一的新鲜黑果腺肋花楸果实；
2)脱脂处理：
将挑选的黑果腺肋花楸果实洗净晾干，然后在50℃条件下以料液比为1:3(g:ml)的石油醚回流脱脂，石油醚脱脂后的黑果腺肋花楸果实再以料液比为1:3(g:ml)的乙酸乙酯回流脱脂1次，室温干燥，使含水量控制在4％重量，得到预处理好的黑果腺肋花楸果实；
3)打浆分离：将经过脱脂处理的黑果腺肋花楸果实打浆，打浆后分离果汁与果渣，将分离出的果渣加入振动式超微粉碎机中，并添加体积为果渣3倍的去离子水后，超微粉碎40min；
4)混合酸提取：将步骤3)制备的黑果腺肋花楸果渣与混合酸按照按液料比(质量：体积)1：8进行混合，于室温条件下避光浸泡36h，过滤，获得滤液与滤渣，然后将滤渣再以液料比4：1(体积:质量)加入蒸馏水，调ph值至5，于避光条件下微波600w处理8min，再转移至水浴65℃提取1h，调ph值至3，过滤，将二次滤液合并，得到黑果腺肋花楸果实的提取液；
5)酶解：将步骤3)制备的提取液加入酶解罐中，将酶解罐加热至50℃，缓慢加入溶液质量浓度为0.25％的果胶酶，至提取液中没有果胶被检测出为止，得到酶解溶液，然后将酶解溶液离心分离，得到澄清溶液；
6)超声再提取：将步骤5)得到的澄清溶液放入超声波清洗器中，进行超声波提取；加入浓度为75％的乙醇溶液提取2h，离心，取上清液得到提取液；
7)蒸馏：将步骤6)得到的提取液蒸馏去除乙醇溶液，得到粗提取液；
8)洗脱：将步骤7)得到的粗提取液经树脂吸附，洗脱，得洗脱液；再将洗脱液进行真空抽滤，得到纯提取液；
9)浓缩、干燥：将纯提取液旋转蒸发后浓缩得到色素浓缩液，再将色素浓缩液经高速离心喷雾干燥得到一种从黑果腺肋花楸中提取的花青素成品。
本发明的有益效果:本发明提供一种从黑果腺肋花楸中提取花青素的方法，通过选果、脱脂处理、打浆分离、混合液提取、酶解、超声再提取等步骤，能够有效地实现黑果腺肋花楸果渣中所含花青素的释放，经过混合液提取和超声再提取两个步骤的结合，使得提取更加彻底，经过脱脂、蒸馏以及洗脱步骤的相结合，使得提取纯度高，使得黑果腺肋花楸果渣中花青素资源得到有效利用，提高黑果腺肋花楸果渣的附加值，原料成本低、易得，容易实现规模化生产。
具体实施方式
为使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施方式，进一步阐述本发明。
实施例1一种从黑果腺肋花楸中提取花青素的方法
一种从黑果腺肋花楸中提取花青素的方法，它包括以下步骤：
1)选果
经过人工挑选，去除霉变、变质坏粒及异物，挑选果粒饱满、色泽均一的新鲜黑果腺肋花楸果实；
2)脱脂处理：
将挑选的黑果腺肋花楸果实洗净晾干，然后在50℃条件下以料液比为1:3(g:ml)的石油醚回流脱脂，石油醚脱脂后的黑果腺肋花楸果实再以料液比为1:3(g:ml)的乙酸乙酯回流脱脂1次，室温干燥，使含水量控制在2-4％重量，得到预处理好的黑果腺肋花楸果实；
3)打浆分离：将经过脱脂处理的黑果腺肋花楸果实打浆，打浆后分离果汁与果渣，将分离出的果渣加入振动式超微粉碎机中，并添加体积为果渣1倍的去离子水后，超微粉碎20min；
4)混合酸提取：将步骤3)制备的黑果腺肋花楸果渣与混合酸按照按液料比(质量：体积)1：4进行混合，于室温条件下避光浸泡24h，过滤，获得滤液与滤渣，然后将滤渣再以液料比4：1(体积:质量)加入蒸馏水，调ph值至3，于避光条件下微波600w处理6min，再转移至水浴65℃提取1h，调ph值至1，过滤，将二次滤液合并，得到黑果腺肋花楸果实的提取液；
5)酶解：将步骤3)制备的提取液加入酶解罐中，将酶解罐加热至40℃，缓慢加入溶液质量浓度为0.05％的果胶酶，至提取液中没有果胶被检测出为止，得到酶解溶液，然后将酶解溶液离心分离，得到澄清溶液；
6)超声再提取：将步骤5)得到的澄清溶液放入超声波清洗器中，进行超声波提取；加入浓度为75％的乙醇溶液提取1h，离心，取上清液得到提取液；
7)蒸馏：将步骤6)得到的提取液蒸馏去除乙醇溶液，得到粗提取液；
8)洗脱：将步骤7)得到的粗提取液经树脂吸附，洗脱，得洗脱液；再将洗脱液进行真空抽滤，得到纯提取液；
9)浓缩、干燥：将纯提取液旋转蒸发后浓缩得到色素浓缩液，再将色素浓缩液经高速离心喷雾干燥得到一种从黑果腺肋花楸中提取的花青素成品。
作为本发明的优先方案，本发明步骤8)中树脂为非极性大孔树脂，洗脱溶剂为丙酮水溶液。
作为本发明的优先方案，本发明步骤4)中混合酸为乙酸与苹果酸按质量比1:2混合而成，混合酸的ph为2。
实施例2一种从黑果腺肋花楸中提取花青素的方法
一种从黑果腺肋花楸中提取花青素的方法，它包括以下步骤：
1)选果
经过人工挑选，去除霉变、变质坏粒及异物，挑选果粒饱满、色泽均一的新鲜黑果腺肋花楸果实；
2)脱脂处理：
将挑选的黑果腺肋花楸果实洗净晾干，然后在50℃条件下以料液比为1:3(g:ml)的石油醚回流脱脂，石油醚脱脂后的黑果腺肋花楸果实再以料液比为1:3(g:ml)的乙酸乙酯回流脱脂1次，室温干燥，使含水量控制在3％重量，得到预处理好的黑果腺肋花楸果实；
3)打浆分离：将经过脱脂处理的黑果腺肋花楸果实打浆，打浆后分离果汁与果渣，将分离出的果渣加入振动式超微粉碎机中，并添加体积为果渣2倍的去离子水后，超微粉碎30min；
4)混合酸提取：将步骤3)制备的黑果腺肋花楸果渣与混合酸按照按液料比(质量：体积)1：6进行混合，于室温条件下避光浸泡30h，过滤，获得滤液与滤渣，然后将滤渣再以液料比4：1(体积:质量)加入蒸馏水，调ph值至4，于避光条件下微波600w处理7min，再转移至水浴65℃提取1h，调ph值至2，过滤，将二次滤液合并，得到黑果腺肋花楸果实的提取液；
5)酶解：将步骤3)制备的提取液加入酶解罐中，将酶解罐加热至45℃，缓慢加入溶液质量浓度为0.15％的果胶酶，至提取液中没有果胶被检测出为止，得到酶解溶液，然后将酶解溶液离心分离，得到澄清溶液；
6)超声再提取：将步骤5)得到的澄清溶液放入超声波清洗器中，进行超声波提取；加入浓度为75％的乙醇溶液提取1.5h，离心，取上清液得到提取液；
7)蒸馏：将步骤6)得到的提取液蒸馏去除乙醇溶液，得到粗提取液；
8)洗脱：将步骤7)得到的粗提取液经树脂吸附，洗脱，得洗脱液；再将洗脱液进行真空抽滤，得到纯提取液；
9)浓缩、干燥：将纯提取液旋转蒸发后浓缩得到色素浓缩液，再将色素浓缩液经高速离心喷雾干燥得到一种从黑果腺肋花楸中提取的花青素成品。
作为本发明的优先方案，本发明步骤8)中树脂为非极性大孔树脂，洗脱溶剂为丙酮水溶液。
作为本发明的优先方案，本发明步骤4)中混合酸为乙酸与苹果酸按质量比1:2混合而成，混合酸的ph为2。
实施例3一种从黑果腺肋花楸中提取花青素的方法
一种从黑果腺肋花楸中提取花青素的方法，它包括以下步骤：
1)选果
经过人工挑选，去除霉变、变质坏粒及异物，挑选果粒饱满、色泽均一的新鲜黑果腺肋花楸果实；
2)脱脂处理：
将挑选的黑果腺肋花楸果实洗净晾干，然后在50℃条件下以料液比为1:3(g:ml)的石油醚回流脱脂，石油醚脱脂后的黑果腺肋花楸果实再以料液比为1:3(g:ml)的乙酸乙酯回流脱脂1次，室温干燥，使含水量控制在4％重量，得到预处理好的黑果腺肋花楸果实；
3)打浆分离：将经过脱脂处理的黑果腺肋花楸果实打浆，打浆后分离果汁与果渣，将分离出的果渣加入振动式超微粉碎机中，并添加体积为果渣3倍的去离子水后，超微粉碎40min；
4)混合酸提取：将步骤3)制备的黑果腺肋花楸果渣与混合酸按照按液料比(质量：体积)1：8进行混合，于室温条件下避光浸泡36h，过滤，获得滤液与滤渣，然后将滤渣再以液料比4：1(体积:质量)加入蒸馏水，调ph值至5，于避光条件下微波600w处理8min，再转移至水浴65℃提取1h，调ph值至3，过滤，将二次滤液合并，得到黑果腺肋花楸果实的提取液；
5)酶解：将步骤3)制备的提取液加入酶解罐中，将酶解罐加热至50℃，缓慢加入溶液质量浓度为0.25％的果胶酶，至提取液中没有果胶被检测出为止，得到酶解溶液，然后将酶解溶液离心分离，得到澄清溶液；
6)超声再提取：将步骤5)得到的澄清溶液放入超声波清洗器中，进行超声波提取；加入浓度为75％的乙醇溶液提取2h，离心，取上清液得到提取液；
7)蒸馏：将步骤6)得到的提取液蒸馏去除乙醇溶液，得到粗提取液；
8)洗脱：将步骤7)得到的粗提取液经树脂吸附，洗脱，得洗脱液；再将洗脱液进行真空抽滤，得到纯提取液；
9)浓缩、干燥：将纯提取液旋转蒸发后浓缩得到色素浓缩液，再将色素浓缩液经高速离心喷雾干燥得到一种从黑果腺肋花楸中提取的花青素成品。
作为本发明的优先方案，本发明步骤8)中树脂为非极性大孔树脂，洗脱溶剂为丙酮水溶液。
作为本发明的优先方案，本发明步骤4)中混合酸为乙酸与苹果酸按质量比1:2混合而成，混合酸的ph为2。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其它形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。