专利名称：含花楸提取物并含有硒和/或锌添加的免疫刺激组合物的制作方法
含花楸提取物并含有硒和/或锌添加的免疫刺激组合物
本发明涉及免疫刺激试剂，尤其涉及用于刺激免疫系统的含有硒和花楸提取物的组合物，以及含有这些成分的药物组合物和营养组合物。
背景技术：
花楸(Aronia)属于蔷薇科落叶灌木。花楸属中的多种花楸品种及杂交种已经为人们所知，例如黑果腺肋花楸(Aronia melanocarpa)，红果腺肋花楸(Aronia arbutifolia)以及紫果腺肋花楸(Aronia χ primifolia)。花楸果实为小梨果类型，其果汁具有涩味并富含维生素C以及其他抗氧化剂。由于它们的果实具有明亮的色彩，所以花楸被用作饮料以及其他食品的着色剂， 例如US-P-6703056，WO 2005 058052和WO 2006 138419这些专利和专利申请中公开的实例。除此之外，花楸果的抗氧化性也引发了人们的兴趣。例如，黑果腺肋花楸富含酚类化合物，特别是花青素，这些花青素主要位于花楸果表皮，它们使果浆和种子免受UV辐射。这些花青素使黑果腺肋花楸具有卓越的抗氧化能力。氧自由基吸收能力(ORAC)是反映一种化合物或提取物对抗氧化压力的指标。花楸具有很高的ORAC值，因此其也被当作功能性食品或营养品，或作为它们的添加剂使用。例如专利申请US 2007 0020358公开了一种运动型饮料浓缩物，其含有用作营养成分的花楸。专利申请WO 2007 06 1900公开了一种功能性甜味剂组合物，其含有花楸提取物作为抗氧化剂，专利申请WO 2007 076857公开了一种含有花楸成分的咀嚼口香糖，其中花楸被用作抗氧化剂。进一步来说，此前的研究还发现花楸或其所含化合物可用于制备药物组合物或营养组合物以及食品添加剂。例如，专利申请DE 10 2004 029 887A1公开了一种以花楸果渣中所含的花楸果皮提取物为原料的膳食补充剂，这样的膳食补充剂被认为具有丰富的抗自由基保护因子。专利申请DE 10 2004 052 882A1公开了一种以特定选用的果实和豆类浓缩物为原料的膳食补充剂，其除了其它成分外还含有花楸果汁浓缩物。所述膳食补充剂被认为能够增强免疫系统，其中阐明了这些成分的相互组合可以协同影响这些成分的效果。专利申请WO 2001 01553公开了含花楸果实提取物的食品添加剂可用于抑制环氧合酶介导的炎症反应，也就是说公开了由于花楸提取物能够在C0X-2活性和C0K-1活性之间优先抑制C0X-2的活性，从而具有抗炎症反应的活性。专利申请DE 10 2005 046 474A1公开了使用花楸果皮提取物用于预防和治疗细菌、真菌和/或炎症疾病/症状。这种作用归结于该提取物具有抗菌和抗真菌活性。该提取物对于免疫系统的直接作用并未被阐明。此外，专利申请WO 2002 005827公开了使用花楸提取物来制备治疗脑癌的药物，
并进一步公开了用于治疗癌症的营养组合物，其含有一种或者多种来自花楸的黄酮类化合物以及微量营养素硒和锌。微量营养素为多种代谢过程所必需，例如可作为酶的辅基参与代谢，因此它们是食品中重要的成分。因此，如此前的研究表明，可以将微量营养素添加到不同种类的食品中例如添加到功能性食品中以取得或者改进特定的生理功能。对于免疫系统来说，研究表明微量营养素硒和锌除影响其他生理功能外，还影响免疫状态。其中硒是嗜中性粒细胞、巨噬细胞、NK细胞、T淋巴细胞以及一些其他免疫机制维持适当活性所必需的成分，如果人体对其摄入最不足会导致免疫系统能力减弱。而锌元素对于酶、蛋白质以及转录因子来说是一种重要的离子，因此参与了机体多种功能也包括免疫反应。如上所述，现有技术已提到了花楸抽提物与至少一种微量营养素特别是与硒和 /或锌的组合。但是，这通常是“偶然为之”。例如，专利申请WO 2005 058052和WO 2006 138419中公开了使用花楸作为着色剂，这些参考文献教导了锌和硒包含在稳定混合物用作食品。在其他一些实例中，现有技术教导的花楸提取物与硒和/或锌元素的组合可以看做仅是产品的必然成分。例如，专利申请US 2007 0020358公开了一种运动型饮料，其使用了花楸因为其具有高的ORAC值，并添加了硒和锌作为微量营养素。因此，现有技术并未教导将这些成分组合在一起以获得特定的效果，这些效果的取得是因为这些成分之间的相互作用而引起。特别地，现有技术并未说明，通过选择性地组合花楸提取物与硒和/或锌可以获得具有更好免疫刺激效果的组合物。虽然目前已发现了多种不同类型的免疫刺激剂，但是仍然需要一种具有更好效果的免疫刺激剂，特别是在当下，现代生活所带来的环境压力在持续增加，人类的免疫系统持续的暴露于各种各样的压力之下。天然试剂或者生物制剂相比于合成药品通常更具优势， 因为它们一方面更容易为病人或者消费者所接受，而另一方面其生产成本也更为低廉和经济有效，特别是在使用植物提取物本身的时候，这种情况下甚至不需要进行任何化学合成和/或对有效化合物进行纯化。
因此，综上可知，具有更好免疫刺激效果的物质或者组合物仍然具有相当的需求。发明概述在为本发明所进行的广泛研究中，发明人发现特定的微量营养素，即单独的硒或者其与锌的组合可以提高花楸提取物的效果。意外的发现，与仅含有天然花楸提取物的组合物相比，当向花楸提取物中加入特定含量的硒或者硒和锌组合时可以提高巨噬细胞的活性。因为可以提高巨噬细胞的活性所以本发明的组合物特别适用于治疗具有炎症反应的疾病或症状，细菌感染，真菌感染，病毒感染，寄生虫感染。因此上述的问题可通过使用含有至少约10 μ g/mg花楸提取物以及大约 0. 0001 μ g/mg至大约2. 0 μ g/mg硒的组合物来得以解决。应当知道这种情况下问题的解决是因为根据本发明向花楸提取物中添加了硒。换句话说，硒的含量或者硒和锌组合的含量高于它们在花楸提取物中的天然含量范围。本发明的一个实施方式中，该组合物进一步含有额外的锌，其优选的浓度范围是约 0. 0001mg/mg 至约 0. 5mg/mg。本发明另一实施方式中，该组合物进一步含有至少一种药学上可接受的或者营养学上可接受的赋形剂或者赋形剂的组合。本发明另一实施方式中，该组合物被配制成药物组合物，优选被配制成口服剂型例如适于经口、口腔含化、舌下、粘膜或者局部给药的剂型。本发明另一实施方式中，该组合物被配制成营养组合物或者补充的营养组合物， 优选被配制成含有溶解或者悬浮形式的活性成分的溶液或者悬浮液，或者被配制成固体给药形式例如片剂、胶囊、糖丸或者作为食品添加剂添加到日常食品中。
本发明的另一实施方式中，本发明的组合物用于制备药物，优选用于治疗炎症疾病或症状，细菌感染，真菌感染，病毒感染，寄生虫感染以及这些疾病和症状的组合。炎症疾病或症状优选为与以下疾病相关的疾病或症状自身免疫疾病，炎症性肠病，多发性硬化， 硬皮病，以及移植物抗宿主病相关的炎症疾病或症状。
图1和2显示，评估花楸提取物对于小鼠单核巨噬细胞白血病细胞系RAW264. 7中巨噬细胞活性的最佳浓度。可以观察到当浓度高于约40 μ g/ml的时候会降低巨噬细胞的活性。图3显示，硒对于RAW264. 7细胞系中巨噬细胞的免疫刺激活性。可以观察到当浓度高于大约8 μ g/ml的时候将会降低巨噬细胞的活性。图4显示，本发明组合物的免疫刺激作用与所添加的硒浓度的关系，该免疫刺激作用通过检测RAW264. 7细胞系中巨噬细胞的活性来确定。该组合物所含的花楸提取物的浓度为 4. 875 μ g/ml。发明详述本发明公开了一种含有花楸提取物与微量营养素硒的组合物。该组合物还可以进一步含有微量营养素锌，该组合物可用于刺激免疫系统。根据本发明，花楸提取物可以是来自一种药学上和营养学上可接受的花楸种，或者是药学上/营养学上可接受的不同花楸种的混合。可使用的花楸种包括但不限于，黑果腺肋花楸，红果腺肋花楸以及紫果腺肋花楸。本发明的一个优选实施方式中，使用的是黑果腺肋花楸。花楸提取物可取自整个果实或者果实的某些部分。例如，可以用果渣作为原料来制备。花楸提取物的制备可以使用本领域技术人员所公知的任何适宜方法来进行。该提取物可以通过鲜果、干果或者果汁来制备。如有需要，可以对提取物中的一种或者多种特定活性化合物进行选择性的富集。花楸提取物的制备方法属于本领域技术人员的常规技术。制备花楸提取物的适宜方法可参照例如专利DE102004029887和DE102005046474所公开的内容。但是应当知道的是，理论上每种植物提取物的制备方法都可以根据常规知识进行适当的变化以获取本发明的花楸提取物。分离植物原料的常规提取方法可以参见例如专利 FR2892933 以及 Ljubuncic P.等人的文献(J. Ethnopharmacol.，Oct 3,101 (1-3) (2005)， 153-61)中所公开的内容。花楸提取物可以使用整个果实作为起始原料来制备。果实用温度在30至50°C之间的水进行冲洗，优选40°C，然后使用例如菊粉酶优选果糖酶进行酶解处理，以获得部分裂解的或完全裂解的细胞。适用的酶以及适宜的反应条件为本领域技术人员所公知。挤压获得残留物然后使用亚硫酸钾水溶液(浓度约10-30w/v)在室温条件下(约21-24°C )提取 1-3小时。所得的提取物使用果胶降解酶例如果胶酶pectinex或pectinol进行处理，反应的PH值约为3-4，优选pH值为3，处理时间为0. 5至2小时。之后通过真空蒸馏处理提取物，蒸馏温度为大约40-58°C，优选为45-50°C，最终得到的花楸提取物中水分残留量为大约 30-40w/w。可选地，花楸提取物也可以通过乙醇萃取的方法来制备或者以干提取物进行制备。本发明组合物中花楸提取物的浓度范围为至少约10 μ g/mg至约990 μ g/mg,优选约20 μ g/mg至约950 μ g/mg。更优选约40 μ g/mg至约900 μ g/mg。更优 选的浓度范围为约50 μ g/mg至约800 μ g/mg。进一步优选的浓度范围为约60 μ g/mg至约800 μ g/mg。最优选的花楸提取物的浓度范围是约80 μ g/mg至约800 μ g/mg。在一个优选的实施方式中，本发明的液体组合物所含的花楸提取物的浓度范围为约10 μ g/mg至约200 μ g/mg,更优选的浓度范围为约60 μ g/mg至约150 μ g/mg,最优选的为约 80 μ g/mg。在另一个优选的实施方式，本发明的固体或者干燥组合物所含的花楸提取物的浓度范围为约100 μ g/mg至约990 μ g/mg,更优选为约300 μ g/mg至约800 μ g/mg,进一步优选为约400 μ g/mg至约700 μ g/mg,最优选为约600 μ g/mg。这里所给出的浓度值是指花楸提取物在本发明组合物中的最终浓度，也就是给予病人或者患者的浓度。本发明组合物中还含有微量营养素硒。本发明的一个实施方式中，该组合物含有花楸提取物和微量营养素硒和锌的组合。含有微量元素在此是指，除花楸提取物中已经存在的微量营养素外，额外添加的所述微量营养素。花楸提取物尤其是来自黑果腺肋花楸的提取物，天然地含有4mg/kg锌元素和大约20 μ g/kg硒元素。应当知道的是，这些天然含量的数值可以随着所用的果实以及生长条件而变化。经认证实验室进行的分析表明，这样的花楸提取物中这两种金属元素的含量如下 (精确度士20% )表 1.
权利要求
1.一种组合物，其含有至少约10 μ g/mg花楸提取物以及约0. OOO1 μ g/mg至约 2. 0 μ g/mg 硒。
2.根据权利要求1的组合物，其进一步含有额外的锌。
3.根据权利要求2的组合物，其所含锌的浓度为约0.0001mg/g至约0. 5mg/mg。
4.根据前述任一项权利要求的组合物，其中该组合物进一步含有至少一种药学上或者营养学上可接受的赋形剂或者它们的混合物。
5.根据权利要求4的组合物，其中该组合物被配制成药物组合物。
6.根据权利要求5的组合物，其被配制成用于经口/ 口服、口腔含服、舌下、粘膜或局部给药的剂型。
7.根据权利要求4的组合物，其中该组合物被配制成营养组合物或者补充的营养组合物。
8.根据权利要求7的组合物，其被配制成含有溶解形式或悬浮形式的活性成分的可消化的溶液或者悬浮液，或者被配制成固体给药形式，例如片剂、胶囊、糖丸或者作为食品添加剂添加到日常食品中。
9.根据权利要求1-5中任一项的组合物用于制备药品。
10.根据权利要求9中任一项的组合物，其用于治疗炎症疾病或症状，细菌感染，真菌感染，病毒感染，寄生虫感染以及它们的组合。
11.根据权利要求10的组合物，其中所述炎症疾病或症状与以下疾病有关自身免疫疾病，炎症性肠病，眼部炎症性疾病，多发性硬化，硬皮病，移植物抗宿主病。
12.根据权利要求11的组合物，其中所述炎症疾病选自以下组成的组克罗恩病，结肠炎，骨关节炎和类风湿关节炎，僵直性脊柱炎，银屑病关节炎，成人斯蒂尔病，葡萄膜炎，韦格纳肉芽肿，白塞病，干燥综合征，结节病以及结膜炎。
全文摘要
本发明涉及一种组合物，其含有至少约10μg/mg花楸提取物以及约0.0001μg/mg至约2.0μg/mg硒。该组合物可以进一步含有作为额外微量营养素的锌。该组合物可以被配制成药物组合物或者营养组合物。
文档编号A61K33/04GK102421446SQ201080020195
公开日2012年4月18日 申请日期2010年5月6日 优先权日2009年5月12日
发明者J·贝伊特, K·艾斯曼 申请人:乌尔萨法姆药物有限责任公司