一种从月季花中提取广寄生苷的方法与流程

本发明属于植物提取分离技术领域，具体涉及一种从月季花中有效、快速提取广寄生苷的方法。

背景技术：

月季花为蔷薇科蔷薇属植物月季rosachinensisjacq.的干燥花。月季花主要成分有黄酮类化合物如槲皮素、山奈酚；其他甾体类成分如齐墩果酸、β-谷甾醇、菜油甾醇、环桉烯醇等以及挥发油成分如没食子酸等。月季花具有多种药理作用，包括抑制血小板聚集作用、降低血管通透性、抗真菌和抗病毒、抗氧化、增强机体免疫力等功效。

目前，尚无关于从月季花中提取分离广寄生苷的报道。

技术实现要素：

本发明目的在于克服现有技术缺陷，提供一种从月季花中有效、快速提取广寄生苷的方法，该方法广寄生苷提取产率高。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种从月季花中提取广寄生苷的方法，其包括如下步骤：

1）取干燥月季花，粉碎，在室温下用石油醚冷浸脱脂，残渣挥干石油醚，再加入乙醇，冷浸提取，提取液浓缩，得乙醇总浸膏；

2）将乙醇总浸膏用甲醇溶解并拌样，通过d101大孔树脂柱依次用水、20％乙醇、40％乙醇进行洗脱，挥干溶剂，得到40％乙醇洗脱组分；

3）40％乙醇洗脱组分通过常压硅胶柱色谱用二氯甲烷-甲醇进行梯度洗脱，以硅胶薄层色谱检测合并，得到12个组分，按照所得组分极性由小到大依次标记为组分fr.4-1至fr.4-12；

4）第4个组分fr.4-4经凝胶柱色谱、高效液相色谱纯化得到1个纯组分，经核磁共振谱图，参考文献数据，及与标准品对照，可知此纯品是广寄生苷。

进一步的，为了获得较好的浸渍提取效果，步骤1）优选按照下述参数条件进行：

步骤1）中，石油醚冷浸脱脂2-4次，每次冷浸脱脂时间为2-4天，干燥月季花与石油醚的添加比范围为1kg：4-7l。

步骤1）中，加入的乙醇体积分数为60-80%，残渣与乙醇的添加比范围为1kg：4-7l，冷浸提取3次，每次冷浸提取时间分别为6-8天、2-4天、2-4天。

进一步的，为了获得较好的纯化分离效果，步骤3）和4）优选按照下述参数条件进行：

步骤3）中，用体积比为10:1、8:1、5:1、3:1、2:1的二氯甲烷-甲醇进行梯度洗脱。

步骤4）中，凝胶柱色谱用甲醇洗脱；

高效液相色谱的色谱条件为：采用rp-18endcapped色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相为甲醇（a）-水（b）；梯度洗脱：0～30min，40%～90%a，60%～10%b；流速：0.8ml/min；检测波长：254nm；进样体积：20μl。

本发明通过对月季花乙醇总浸膏的提取分离，经过大孔树脂柱色谱、硅胶柱色谱、凝胶柱色谱、高效液相色谱等分离纯化手段，将月季花中所含的广寄生苷快速、有效的提取分离出来，且广寄生苷提取产率高。和现有技术相比，本发明方法的有益效果：

1）目前，尚未有从植物月季花中提取获得广寄生苷的报道，本发明提供了一种从月季花中提取分离广寄生苷的方法，有利于更好的开发利用月季花这一药用植物；

2）本发明提取得到的化合物广寄生苷有广泛的生物活性，本发明提供了一种广寄生苷的提取方法，便于对其进行深入的研究；

3）本发明使用到的分离材料有大孔树脂、硅胶、凝胶柱色谱，不溶于水和任何溶剂，无毒无味，化学性质稳定，对有机物选择性较好，不受无机盐类及强离子低分子化合物存在的影响，并且易于洗脱再生，有益于多次利用。在纯化过程中所使用的制备型高效液相的分离，则是目前最流行的新型分离方法，省时省力，能够大大提高样品的产率。

附图说明

图1为实施例1提取获得产品的¹h-nmr谱图；

图2为实施例1提取获得产品的¹³c-nmr谱图。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明的技术方案作进一步地详细介绍，但本发明的保护范围并不局限于此。

实施例1

一种从月季花中提取广寄生苷的方法，其包括如下步骤：

1）取干燥月季花2kg，粉碎，在室温下用石油醚冷浸脱脂3次，每次冷浸脱脂时间为3天，残渣挥干石油醚，再加入体积分数为70%的乙醇，冷浸提取3次，每次冷浸提取时间分别为7天、3天、3天，合并提取液并浓缩，得乙醇总浸膏600g；其中，干燥月季花与石油醚的添加比为1kg：5l，残渣与乙醇的添加比为1kg：5l；

2）将乙醇总浸膏（600g）用适量甲醇溶解并用d101大孔树脂柱（600g）拌样，经d101大孔树脂柱层析，依次用水、20％乙醇、40％乙醇进行洗脱，挥干溶剂，得到40％乙醇洗脱组分；

3）40％乙醇洗脱组分通过常压硅胶柱色谱用体积比为10:1、8:1、5:1、3:1、2:1的二氯甲烷-甲醇进行梯度洗脱，以硅胶薄层色谱检测合并，得到12个组分，按照所得组分极性由小到大依次标记为组分fr.4-1至fr.4-12；

4）第4个组分fr.4-4（1g）经凝胶柱色谱、高效液相色谱纯化得到1个纯组分（150mg），黄色粉末，经高效液相检测纯度为99.388%，经核磁共振谱图，参考文献数据，及与标准品对照，可知此纯品是广寄生苷。

步骤4）中，凝胶柱色谱用纯甲醇洗脱；高效液相色谱的色谱条件为：采用rp-18endcapped色谱柱；流动相为甲醇（a）-水（b）；梯度洗脱：0～30min，40%～90%a，60%～10%b；流速：0.8ml/min；检测波长：254nm；进样体积：20μl；tr=14.455min。

上述实施例1提取获得的化合物经结构鉴定，化合物结构式如下：

。

仪器材料：紫外在uv-210a紫外光谱测定仪上测定；¹h-nmr，¹³c-nmr图谱由brukeram-400mhz核磁共振仪测定。测定条件及结果：黄色粉末(dmso),分子式：c20h18o11,esi-msm/z:457[m＋na]⁺.¹h-nmr(dmso-d6,400mhz)δ:12.64(1h,s,5-oh),7.48(1h,d,j=1.5hz,h-2′),7.56(1h,dd,j=8.5,1.5hz,h-6′),6.85(1h,d,j=8.5hz,h-5′),6.41(1h,d,j=2.0hz,h-8),6.20(1h,d,j=2.0hz,h-6),5.58(1h,d,j=1.2hz,h-1″)；¹³c-nmr(100mhz,dmso)δ:177.7(c-4),164.2(c-7),161.2(c-5),157.0(c-9),156.4(c-2),148.5(c-4′),145.1(c-3′),133.4(c-3),121.7(c-6′),120.9(c-1′),115.6(c-5′),115.5(c-2′),107.8(c-1″),104.0(c-10),98.7(c-6),93.6(c-8),85.8(c-4″),82.1(c-2″),76.9(c-3″),60.6(c-5″)；具体图谱见图1和2。

实施例2

一种从月季花中提取广寄生苷的方法，其包括如下步骤：

1）取干燥月季花2kg，粉碎，在室温下用石油醚冷浸脱脂4次，每次冷浸脱脂时间为4天，残渣挥干石油醚，再加入体积分数为75%的乙醇，冷浸提取2次，每次冷浸提取时间分别为8天、3天，合并提取液并浓缩，得乙醇总浸膏510g；其中，干燥月季花与石油醚的添加比为1kg：6l，残渣与乙醇的添加比为1kg：6l；

2）将乙醇总浸膏（510g）用适量的甲醇溶解并用d101大孔树脂柱（510g）拌样，经d101大孔树脂柱层析，依次用水、20％乙醇、40％乙醇进行洗脱，挥干溶剂，得到40％乙醇洗脱组分；

3）40％乙醇洗脱组分通过常压硅胶柱色谱用体积比为10:1、8:1、5:1、3:1、2:1的二氯甲烷-甲醇进行梯度洗脱，以硅胶薄层色谱检测合并，得到12个组分，按照所得组分极性由小到大依次标记为组分fr.4-1至fr.4-12；

4）第4个组分fr.4-4（500mg）经凝胶柱色谱、高效液相色谱纯化得到1个纯组分（68mg），黄色粉末，经高效液相检测纯度为97.899%，即为广寄生苷。

步骤4）中，凝胶柱色谱用甲醇洗脱；高效液相色谱的色谱条件为：采用rp-18endcapped色谱柱；流动相为甲醇（a）-水（b）；梯度洗脱：0～30min，40%～90%a，60%～10%b；流速：0.8ml/min；检测波长：254nm；进样体积：20μl；tr=14.455min。