铜-64标记DNA单链的方法与流程

本发明涉及生物医学领域，具体涉及一种铜-64标记dna单链的方法。

背景技术：

脱氧核糖核酸(deoxyribonucleicacid，dna)是所有已知生物和一些病毒的遗传信息载体。基于watson-crick碱基配对原则，dna分子之间发生相互作用，构成了dna多面体结构的可编程性及dna纳米技术的基础。通过dna纳米技术，dna分子能够自组装配成人工纳米结构，即dna多面体结构。这些dna多面体结构具有一些独特性质：明确定义的尺寸(纳米级)，几何形状(精确、复杂的三维空间结构)，生物相容性(由dna组成)，易于修饰(利用化学手段对组成dna多面体结构的单链dna进行修饰)。这些特性使得dna成为各种应用的理想选择，其可以单独使用或与其他材料组合用于多种生物学和生物医学应用。目前，一些dna多面体结构已被用于生物传感，分子成像或药物载带等方面。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供了一种铜-64标记dna单链的方法。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：

铜-64标记dna单链的方法，包括如下步骤：

s1、将ssdna与螯合剂p-scn-bn-nota进行偶联

首先对ssdna的5’端进行氨基修饰；然后将一定量的氨基修饰ssdna溶解于磷酸盐缓冲液中，配成0.1mm的ssdna溶液；再量取0.5mgp-scn-bn-nota粉末溶解在dmso中，将其加入ssdna溶液中，并使用碳酸钠缓冲液调节ph至8.5-9.0；

将反应溶液在室温下持续振荡2小时，反应结束后，利用nap-5脱盐柱对反应溶液进行纯化，1xpbs作为洗脱缓冲液，得到纯化后的偶联nota的ssdna，即为nota-ssdna；

s2、将2mci溶于0.1mhcl中溶液的铜-64，与100μl的醋酸钠溶液混匀，加入500μl的nota-ssdna后，在37℃下反应1小时，在反应期间，放射性标记率通过薄层色谱(thinlayerchromatography，tlc)检测，反应结束后，得到的混合物通过nap-5脱盐柱进行纯化，0.05m乙二胺四乙酸钠溶液用作流动相，得到纯化的目标产物⁶⁴cu-ssdna。

本发明所得的铜-64标记dna单链可用于制备基于dna多面体结构的pet分子探针，所得的pet分子探针使用的是正电子核素，能够同时发射两个背向光子，可实现病灶的精准定位，分辨率高，图像清楚。

本发明具有以下有益效果：

利用本发明所得的铜-64标记dna单链(⁶⁴cu-ssdna)，与不同结构的含有手臂链的dna多面体混合杂交，可以制备出不同结构的铜-64标记dna多面体。而所得的铜-64标记dna多面体可用于制备基于dna多面体的pet分子探针，所得的pet分子探针使用的是正电子核素，能够同时发射两个背向光子，可实现病灶的精准定位，分辨率高，图像清楚。

附图说明

图1为本发明实施例铜-64标记dna单链的制备方法的路线图。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进。这些都属于本发明的保护范围。

本发明实施例提供了铜-64标记dna单链的制备方法，如图1所示，首先将氨基修饰ssdna与双功能螯合剂p-scn-bn-nota进行偶联，得到nota-ssdna溶液；再将nota-ssdna溶液与铜-64溶液混匀，反应1h后tlc检测，放化标记率为66.4±2.85％(n＝3)；利用nap-5脱盐柱对反应溶液进行纯化，得到⁶⁴cu-ssdna溶液，放化纯度>95％。具体的：

为了对dna单链(ssdna)进行铜-64标记，需要先将ssdna与螯合剂p-scn-bn-nota进行偶联。首先对ssdna的5’端进行氨基修饰；然后将一定量的氨基修饰ssdna溶解于磷酸盐缓冲液(phosphatebufferedsaline，pbs)中，配成0.1mm的ssdna溶液；再量取0.5mgp-scn-bn-nota粉末溶解在dmso中，将其加入ssdna溶液中，并使用碳酸钠缓冲液调节ph至8.5-9.0。反应溶液在室温下持续振荡2小时。反应结束后，利用nap-5脱盐柱对反应溶液进行纯化，1xpbs作为洗脱缓冲液，得到纯化后的偶联nota的ssdna(nota-ssdna)。dna的浓度由uv-vis光谱仪(agilentcary60，agilenttechnologies，santaclara，ca，usa)测量，用于后续标记实验。

将2mci铜-64溶液(溶于0.1mhcl)与100μl的醋酸钠溶液(0.05m，ph5.5)混匀，加入500μl的nota-ssdna后，在37℃下反应1小时。在反应期间，放射性标记率通过薄层色谱(thinlayerchromatography，tlc)检测。反应结束后，得到的混合物通过nap-5脱盐柱进行纯化，乙二胺四乙酸钠溶液(0.05m)用作流动相，得到纯化的目标产物⁶⁴cu-ssdna。

以上对本发明的具体实施例进行了描述。需要理解的是，本发明并不局限于上述特定实施方式，本领域技术人员可以在权利要求的范围内做出各种变化或修改，这并不影响本发明的实质内容。在不冲突的情况下，本技术的实施例和实施例中的特征可以任意相互组合。

技术特征：

技术总结
本发明公开了一种铜‑64标记DNA单链的方法，包括如下步骤：将ssDNA与螯合剂p‑SCN‑Bn‑NOTA进行偶联；将2mCi溶于0.1M HCl溶液的铜‑64，与100μL的醋酸钠溶液混匀，加入500μL的NOTA‑ssDNA，在37℃下反应1小时，在反应期间，放射性标记率通过薄层色谱检测，反应结束后，得到的混合物通过NAP‑5脱盐柱进行纯化，0.05M的乙二胺四乙酸钠溶液用作流动相，得到纯化的目标产物64Cu‑ssDNA。利用本发明所得的铜‑64标记DNA单链与不同结构的含有手臂链的DNA多面体混合杂交，可以制备出不同结构的铜‑64标记DNA多面体，从而实现PET分子探针的制备。

技术研发人员：李剑波;段晓燕;都义日;翁兆平;王涛
受保护的技术使用者：李剑波
技术研发日：2019.06.05
技术公布日：2019.08.16