一种沉香四醇的制备方法与流程

本发明涉及中药化学制备
技术领域：
，具体涉及一种沉香四醇的分离制备方法以及由该分离制备方法制得的高纯度的沉香四醇。
背景技术：
：沉香为瑞香科植物白木香aquilariasinensis(lour.)gilg含树脂的木材，名为沉香，其味辛、苦，性微温，具行气止痛、温中止呕、纳气平喘的功效，用于胸腹胀闷疼痛、胃寒呕吐呃逆、肾虚气逆喘急。现代药学研究表明，沉香具有缓泻、解痉、镇痛、抗过敏、抗肿瘤等活性。沉香中主要含有2-(2-苯乙基)色酮类、倍半萜类、芳香族类等成分。沉香醇提取物中主要成分为2-(2-苯乙基)色酮类衍生物，其中沉香四醇含量较高，与沉香质量的级别有着密切的关系，可以作为沉香中指标性成分。2015版《中国药典》一部将沉香四醇作为对照品收录。沉香四醇(agarotetrol)为白色粉末，化学名：(5s,6r,7r,8s)-5,6,7,8-tetrahydroxy-2-phen-ethyl-5,6,7,8-tetrahydro-chromen-4-one；分子式：c17h18o6；分子量：318.32；cas:69809-22-9。结构式如下：目前研究沉香的化学成分的专利和文献很多，但研究高纯度的沉香四醇的制备方法的专利和文献却很少。中国发明专利cn102070594a公开了一种高纯度的沉香四醇和4’-甲氧基沉香四醇的制备方法。该专利方法采用高速逆流色谱技术(high-speedcounter-currentchromatography，hsccc)从沉香中分离得到hplc纯度97％的沉香四醇和4’-甲氧基沉香四醇，主要步骤包括：1、制备沉香粗提物；2、配制构成固定相和流动相的两相溶剂体系；3、使高速逆流色谱仪分离柱中充满固定性；4、使主机转动，然后将流动相泵入柱内；5、进样，检测并接收样品；6、接收样品蒸干后用甲醇重结晶得到沉香四醇产品。该工艺的缺陷在于：1)处理量小。受高速逆流色谱仪的限制，每次仅能处理100g药材，只适用于实验室的研发，但并不适用于工业化生产，产品制备的效率低；2)色谱分离无法直接得到产品，还需要进行一步甲醇重结晶才能得到沉香四醇产品，溶剂耗费大，操作复杂费时；3)制得沉香四醇产品纯度较低且工艺不稳定，纯度只能达到97％以上，无法保证沉香四醇产品纯度都在99％以上。为了满足工业化生产的需要，但现有的公开报道的文献资料又有许多不足之处，我们开发了本发明的分离制备方法。技术实现要素：本发明所要解决的技术问题在于，提供一种沉香四醇的制备方法，该方法操作简单、溶剂消耗少、产品纯度高、制备通量大，适于工业化生产。该方法制得高纯度的沉香四醇可作为对照品使用。为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：一种沉香四醇的制备方法，包括以下步骤：(i)提取：将沉香药材粉碎，按每1kg沉香药材加入5～20l的提取溶剂；所述提取溶剂为体积分数50～80％的第一有机溶剂-水溶液；所述第一有机溶剂选自甲醇、乙醇中的一种或多种；提取时间为24～72h，提取温度为20～70℃；过滤，浓缩，得到沉香四醇提取物；(ii)：大孔吸附树脂柱粗分离：将步骤(i)得到的沉香四醇提取物用水稀释后加入到大孔吸附树脂中，静态吸附12-36h，过滤；装柱，洗脱方式为依次用水、体积分数5～15％的第二有机溶剂-水溶液、体积分数25～35％的第二有机溶剂-水溶液、体积分数55～65％的第二有机溶剂-水溶液进行洗脱，收集体积分数55～65％第二有机溶剂-水溶液部分的洗脱液，浓缩，得到沉香四醇粗品；所述第二有机溶剂选自甲醇、乙醇、乙腈中的一种或多种；(iii)正相柱层析分离：将步骤(ii)得到的沉香四醇粗品用正相柱层析分离，以第三有机溶剂和第四有机溶剂组成的溶剂体系进行梯度洗脱，得到沉香四醇半成品；所述梯度洗脱是以体积比第三有机溶剂：第四有机溶剂＝(8～15)：1为初始溶剂比例，逐渐降低为第三有机溶剂：第四有机溶剂＝(1～6)：1；所述正相柱填料为正相硅胶或聚酰胺；所述第三有机溶剂选自乙酸乙酯或氯仿中的一种或多种；所述第四有机溶剂选自甲醇、乙醇、丙酮中的一种或多种；(iv)中压制备柱分离：将步骤(iii)得到的沉香四醇半成品过中压制备柱进行分离，以体积分数30～50％的第五有机溶剂-水溶液洗脱，收集，得到沉香四醇样品；所述中压制备柱的填料为十八烷基硅烷键合硅胶、四烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶；所述第五有机溶剂选自甲醇、乙醇或乙腈中的一种或多种；(v)后处理：将步骤(iv)得到的沉香四醇样品的组分浓缩并干燥，即得到沉香四醇纯品。具体的，所述步骤(ii)中，大孔吸附树脂的填料选自d101树脂、ab-8树脂或xda-8树脂。具体的，所述步骤(ii)中，提取物先用水稀释后，再加入到大孔吸附树脂；其中，水的用量为提取物的2～5倍体积，大孔吸附树脂的用量为提取物的2～6倍体积。优选的，所述步骤(ii)中，静态吸附时间为18～30h；更优选为24h。优选的，所述步骤(ii)中，洗脱方式为依次用水、体积分数5～15％的第二有机溶剂-水溶液、体积分数25～35％的第二有机溶剂-水溶液、体积分数55～65％的第二有机溶剂-水溶液进行洗脱，收集体积分数55～65％的第二有机溶剂-水溶液部分的洗脱液。更优选的，所述步骤(ii)中，洗脱方式为依次用水、体积分数10％的第二有机溶剂-水溶液、体积分数30％的第二有机溶剂-水溶液、质量分数60％的第二有机溶剂-水溶液进行洗脱，收集体积分数60％的第二有机溶剂-水溶液部分的洗脱液。优选的，所述步骤(iii)中，梯度洗脱是以体积比第三有机溶剂：第四有机溶剂＝(8～10)：1为初始溶剂比例，逐渐降低为第三有机溶剂：第四有机溶剂＝(1～4)：1。具体的，所述步骤(iii)中，洗脱流速为50～70ml/min，并采用hplc检测，合并沉香四醇含量大于40％部分。优选的，合并沉香四醇含量大于50％部分。本发明还提供一种通过上述方法制备得到的沉香四醇。本发明提供的沉香四醇的纯度达99％以上。本发明提供的沉香四醇的制备方法提高了沉香四醇的产品质量，所制得沉香四醇的纯度高达99％以上，符合中国食品药品检定研究院的关于对照品要求，可以作为对照品使用。在更优选的实施方式中，沉香四醇的纯度高达99.5％以上。本发明提供的沉香四醇的制备方法，制得沉香四醇的收率高，每1kg沉香原料药材能制得9～13.0g沉香四醇，且纯度高达99％以上，相比现有技术显著提高。本发明提供的沉香四醇的制备方法，采用固体填充柱纯化，不依赖于特殊设备，易于投产，使用操作方便，工艺过程中的溶剂都可回收再利用。本发明提供的沉香四醇的制备方法，单批次处理样品量大，可处理100kg以上原料，工艺稳定可靠，重现性好，适用于高通量生产高纯度的沉香四醇；固体填充柱分离规模可根据生产需要进一步放大，不存在技术困难或设备局限，放大技术纯熟，成本低廉，有利于大规模的工业化生产。本发明是国内首次报道分离99％以上高纯度对照品级别的沉香四醇，具有较高的学术价值和应用价值。附图说明图1为本发明实施例1中所制得的沉香四醇产品的hplc图谱。具体实施方式下面将对本发明的技术方案进行清楚、完整的描述，显然，所描述的实施例是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。实施例1将3kg沉香药材粉碎，加入50％乙醇25l，在30℃条件下提取72小时，浓缩后得沉香四醇提取物。沉香四醇提取物用d101大孔吸附树脂静态吸附12h，装柱，依次用水、10％乙腈、25％乙腈、55％乙腈洗脱，收集55％乙腈水部分的洗脱液，浓缩，得到沉香四醇粗品。沉香四醇粗品用硅胶拌样并烘干，采用硅胶柱层析分离，以乙酸乙酯：甲醇由8:1(v/v)逐渐降低至1:1(v/v)进行梯度洗脱，hplc跟踪检测，合并沉香四醇含量大于50％部分，得到沉香四醇半成品。沉香四醇半成品采用十八烷基硅烷键合硅胶进行分离，以40％的乙醇水溶液为洗脱剂，hplc检测，收集沉香四醇含量大于98.5％的部分；浓缩并干燥，得到30g沉香四醇，hplc纯度为99.0％。实施例2将5kg沉香药材粉碎，加入70％甲醇40l，在40℃条件下提取24小时，浓缩后得沉香四醇提取物。沉香四醇提取物用d101大孔吸附树脂静态吸附24h，装柱，依次用水、15％乙醇、30％乙醇、55％乙醇洗脱，收集55％乙醇水部分的洗脱液，浓缩，得到沉香四醇粗品。沉香四醇粗品用硅胶拌样并烘干，采用硅胶柱层析分离，以乙酸乙酯：丙酮由12:1(v/v)逐渐降低至3:1(v/v)进行梯度洗脱，hplc跟踪检测，合并沉香四醇含量大于50％部分，得到沉香四醇半成品。沉香四醇半成品采用八烷基硅烷键合硅胶反复多次进行分离，以35％的乙醇水溶液为洗脱剂，hplc检测，收集沉香四醇含量大于98.5％的部分；浓缩并干燥，得到55g沉香四醇，hplc纯度为99.0％。实施例3将2kg沉香药材粉碎，加入80％乙醇20l，在70℃条件下提取24小时，浓缩后得沉香四醇提取物。沉香四醇提取物用ab-8大孔吸附树脂静态吸附36h，装柱，依次用水、10％甲醇、30％甲醇、60％甲醇洗脱，收集60％甲醇水部分的洗脱液，浓缩，得到沉香四醇粗品。沉香四醇粗品用硅胶拌样并烘干，采用硅胶柱层析分离，以氯仿:甲醇由10:1(v/v)逐渐降低至1:1(v/v)进行梯度洗脱，hplc跟踪检测，合并沉香四醇含量大于60％部分，得到沉香四醇半成品。沉香四醇半成品采用四烷基硅烷键合硅胶进行分离，以32％的乙腈水溶液为洗脱剂，hplc检测，收集沉香四醇含量大于98.5％的部分；浓缩并干燥，得到18g沉香四醇，hplc纯度为99.2％。实施例4将8kg沉香药材粉碎，加入60％甲醇100l，在40℃条件下提取48小时，浓缩后得沉香四醇提取物。沉香四醇提取物用xda-8大孔吸附树脂静态吸附18h，装柱，依次用水、10％乙醇、25％乙醇、60％乙醇洗脱，收集60％乙醇水部分的洗脱液，浓缩，得到沉香四醇粗品。沉香四醇粗品用聚酰胺拌样并烘干，采用聚酰胺柱层析分离，以乙酸乙酯：甲醇由15:1(v/v)逐渐降低至6:1(v/v)进行梯度洗脱，hplc跟踪检测，合并沉香四醇含量大于50％部分，得到沉香四醇半成品。沉香四醇半成品采用十八烷基硅烷键合硅胶反进行分离，以30％的乙腈水溶液为洗脱剂，hplc检测，收集沉香四醇含量大于98.5％的部分；浓缩并干燥，得到92g沉香四醇，hplc纯度为99.5％。实施例5将1kg沉香药材粉碎，加入60％乙醇10l，在40℃条件下提取40小时，浓缩后得沉香四醇提取物。沉香四醇提取物用d101大孔吸附树脂静态吸附24h，装柱，依次用水、10％乙醇、30％乙醇、60％乙醇洗脱，收集60％乙醇水部分的洗脱液，浓缩，得到沉香四醇粗品。粗品采用不同的填料、不同的流动相做正相柱层析方法筛选，具体实验数据如表1所示：表1正相柱层析工艺筛选试验将正相柱层析分离得到沉香四醇半成品采用不同的反相填料、不同的洗脱剂及比例做反相柱层析方法条件筛选，具体实验数据如表2所示：表2反相柱层析工艺筛选试验实验号上样量填料类型洗脱溶剂及比例纯品量及纯度工艺可行性10.5gc18甲醇-水(v/v)50:500.25g/98.9％可行20.5gc18乙醇-水(v/v)40:600.23g/98.7％可行30.5gc18乙腈-水(v/v)35:650.27g/99.1％可行40.5gc8甲醇-水(v/v)47:530.28g/99.0％可行50.5gc8乙醇-水(v/v)38:620.23g/99.5％可行60.5gc8乙腈-水(v/v)32:680.26g/98.9％可行70.5gc4甲醇-水(v/v)44:560.29g/99.2％可行80.5gc4乙醇-水(v/v)35:650.21g/99.8％可行90.5gc4乙腈-水(v/v)30:700.28g/99.5％可行综上所述，上述各实施例仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限定本发明的保护范围，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，皆应包含在本发明的保护范围内。当前第1页12