一种稳定保存血液中游离DNA的采血管的制备方法与流程

文档序号:24368101发布日期:2021-03-23 11:01阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种稳定保存血液中游离dna的采血管的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:

1)制备血液游离dna稳定剂,所述血液游离dna稳定剂包括以6类试剂:一种或多种核酸酶抑制剂,一种或多种生长代谢抑制剂,一种或多种防降解的试剂,一种或多种防止细胞凝集的试剂,一种或多种维持细胞渗透压平衡的试剂,一种或多种调节试剂ph值的试剂;

2)从z个空的塑料采血管中随机抽取至少u个空的塑料采血管抽真空,并进行空管性能测试,所述空管性能测试包括保水性测试和保气性测试;

3)判断所述至少u个空管性能测试的结果是否合格,若是,则进行步骤4),当所述保水性测试和所述保气性测试结果均合格,表示所述空管性能测试的结果是合格;

4)将制备完成的血液游离dna稳定剂分别注入所述z个空的塑料采血管后抽真空。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述空管性能测试中测试时间根据如下公式确定:

测试时间=实际天数/老化因子[(老化温度—实际温度)/10]

3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述老化因子为2,所述老化温度为45,所述实际温度为25,所述实际天数为365。

4.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述保水性测试包括:

取y支抽真空后的所述空的塑料采血管,依次贴上标签样本1,样本2,至样本y,y≥u;

用万分天平依次称量抽真空后空的所述样本1至样板y采血管的质量并记录an,n为序号;

依次给所述样本1至样板y采血管中注入300ul纯水,所述纯水温度为18℃~25℃;

放入老化箱中,在所述测试时间内进行保水性测试。

5.根据权利要求4所述的方法,其特征在于,每间隔15天将所述样本1至样本y从所述老化箱中取出,用万分天平依次称量质量并记录,直至达到所述测试时间为止;将每次记录的数据与其的应对的抽真空后空的所述样本采血管质量an相减,得到质量差;将每个样本获得的多个质量差求平均值,样本质量差平均值bn,n为序号;根据相对偏差nn=(bn-m)/m*100%,n为序号,m为300ul,得到每个样本的相对偏差n1至nn;所述相对偏差值nn(n取1至y)小于等于±10%,则证明保水性测试合格。

6.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述保气性测试包括:

取j支抽真空后的所述空的塑料采血管,放入老化箱中;每间隔15天重复以下操作,直至达到所述测试时间为止:

从所述老化箱中任意取出w支空的样本采血管(w≥2),用万分天平依次称量质量并记录为cn,n为序号;在取出的w支空的样本采血管中注入纯水,直至无法注入为止,所述纯水的温度为18℃~25℃,用万分天平依次称量质量并记录为dn,n为序号;将每次记录的数据dn与其的应对的抽真空后空的所述样本采血管质量cn相减,得到每个样本采血管中水的质量en,n为序号;根据相对偏差mn=(en-x)/x*100%,x为标准水质量,n为序号;所述相对偏差值mn(n取1至j)小于等于±10%,则证明保气性测试合格;

15*j≥测试天数*w。

7.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述核酸酶抑制剂可以是:焦磷酸二乙酯,和/或异硫氰酸胍,和/或氧钒核糖核昔复合物,和/或十二烷基磺酸钠,和/或尿素,和/或硅藻土;

所述生长代谢抑制剂可以是:金精三羧酸,和/或嘌呤霉素,和/或放线菌酮,和/或放线菌素d,和/或d-甘油醛,和/或道诺红菌素,和/或氟化钠,和/或亚得里亚霉素,和/或l-甘油醛,和/或dl-甘油醛,和/或氟化钠;

所述防降解的试剂可以是:苯甲酸钠,和/或山梨酸钠,和/或山梨酸钾,和/或对羟基苯甲酸甲酯,和/或乙酯,和/或丙酯,和/或丁酯,和/或硫酸铵,和/或咪唑烷基脲,和/或重氮咪唑烷基脲,和/或羟甲基甘氨酸钠,和/或二羟甲基脲,和/或碘代丙炔基丁基甲氨酸酯,和/或1,3-二甲羟甲基二甲基乙内酰脲,和/或对羟基苯甲酸甲酯,和/或硫酸铵;

所述防止细胞凝集的试剂可以是:柠檬酸,和/或柠檬酸三钠,和/或柠檬酸二钠,和/或乙二胺四乙酸,和/或乙二胺四乙酸三钾,和/或乙二胺四乙酸二钾,和/或肝素钠,和/或枸橼酸钠,和/或草酸钠,和/或水蛭素,和/或氟化钾,和/或葡萄糖;

所述维持细胞渗透压平衡的试剂可以是:氯化钙,和/或氯化钠,和/或氯化钾,和/或磷酸二氢钾,和/或磷酸二氢钠,和/或磷酸氢二钾,和/或磷酸氢二钠;

所述调节试剂ph值的试剂可以是:浓盐酸,和/或浓硫酸,和/或氢氧化钠。

8.根据权利要求1所述的所述的方法,其特征在于,所述制备血液游离dna稳定剂包括:

依次称量所述6类试剂,放入试剂瓶并搅拌均匀,配置完成后用真空泵进行过滤纯化,质检后得到制备完成的血液游离dna稳定剂。

9.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤2)中,所述塑料采血管的材质为塑料材质,是通过聚氯乙烯或者聚对笨二甲酸乙二醇酯材料制作而成。


技术总结
本发明提供了一种稳定保存血液中游离DNA的采血管的制备方法,包括以下步骤:1)制备血液游离DNA稳定剂;2)从Z个空的塑料采血管中随机抽取至少U个空的塑料采血管抽真空,并进行空管性能测试;3)判断所述至少U个空管性能测试的结果是否合格,若是,则进行步骤4),当所述保水性测试和所述保气性测试结果均合格,表示所述空管性能测试的结果是合格;4)将制备完成的血液游离DNA稳定剂分别注入所述Z个空的塑料采血管后抽真空。塑料采血管的材质为塑料,通过本方法制备的采血管,可有效防止人静脉血中有核细胞破裂,释放基因组DNA以及游离DNA的降解,为血浆游离DNA提供稳定环境。克服了玻璃采血管运输易碎,保气保水性不足,可支持高速离心。

技术研发人员:林晓煜;何金松;苏贵士;黄文树;沈志勇
受保护的技术使用者:厦门希吉亚生物科技有限公司
技术研发日:2019.09.22
技术公布日:2021.03.23
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