一种毛蜂窝菌菌油的提取方法及应用与流程

本发明涉及菌油的提取技术及应用领域，特别涉及一种毛蜂窝菌菌油的提取方法及应用。

背景技术：

毛蜂窝菌，拉丁学名为hexagoniaapiaria(pers.)fr.，别名为龙眼梳，是一种隶属担子菌门(basidiomycota)、非褶菌目(aphyllophorales)、多孔菌科(polyporaceae)、蜂窝菌属(hexagona)的珍稀药用真菌。广泛分布于热带及亚热带地区，主要生长于阔叶树树干上。依据《中华草本》记载，毛蜂窝菌微苦、涩、微温，具宜肠、理气止痛、健胃之功效。李浩华等研究发现毛蜂窝菌发酵液的乙酸乙酯提取物能够明显抑制肺癌细胞nci-h460、中枢神经系统癌细胞sf-268及乳腺癌细胞mcf-7的活性。但至今仍未见有关于毛蜂窝菌菌油的相关报道以及相关产品。

可见，现有技术还有待改进和提高。

技术实现要素：

鉴于上述现有技术的不足之处，本发明的目的在于提供一种毛蜂窝菌菌油的提取方法及应用，旨在提供一种毛蜂窝菌菌油的提取方法以及提出毛蜂窝菌菌油在制备保健品方面的用途。

为了达到上述目的，本发明采取了以下技术方案：

一种毛蜂窝菌菌油的提取方法，包括：

取毛蜂窝菌子实体，干燥后粉碎，加入溶剂50℃下连续回流渗漉提取，收集提取液，50℃下水浴蒸馏回收溶剂后得粗制菌油；

粗制菌油通过吸附层析柱，用洗脱剂洗脱，收集洗脱液，50℃下真空旋转蒸馏回收溶剂后得所述毛蜂窝菌菌油。

所述的毛蜂窝菌菌油的提取方法中，所述提取过程的物料比为1∶20。

所述的毛蜂窝菌菌油的提取方法中，所述提取时间为20～25h。

所述的毛蜂窝菌菌油的提取方法中，所述提取液包括石油醚、乙醚、二硫化碳、戊烷、己烷、环己烷、丙酮、氯仿、乙酸乙酯中的一种或几种。

所述的毛蜂窝菌菌油的提取方法中，所述洗脱液包括石油醚、乙醚、二硫化碳、戊烷、己烷、环己烷、乙酸乙酯中的一种或几种。

所述的毛蜂窝菌菌油的提取方法中，所述吸附层析柱的吸附剂包括硅胶、活性炭或氧化铝中的一种。

毛蜂窝菌菌油应用于制备抗氧化保健品。

所述的毛蜂窝菌菌油的应用中，所述毛蜂窝菌菌油的有效成分包括反亚油酸甲酯、甘油三亚油酸酯、亚油酸甲酯、顺-10-十四烯-1-醇醋酸酯、亚油酸乙酯、邻苯二甲酸二异辛酯、棕榈酸甲酯、油酸、(z,z)-2-甲基-3,13-十八碳二烯醇、(z)-油酸甲酯、邻苯二甲酸丁基庚-2-基酯。

有益效果：

本发明提供了一种毛蜂窝菌菌油的提取方法及应用，所述毛蜂窝菌菌油野生资源丰富，并且可以通过人工栽培，其菌油具有有效的抗氧化活性，本发明提供了一种有效提取毛蜂窝菌菌油的方法，操作简单，易于实施，提取效率高，所用溶剂可以循环利用；所述方法提取的菌油有效成分种类多，并且不会破坏其活性，为毛蜂窝菌菌油的应用提供了一个很好的前提的条件。本发明还提供了所述菌油在制备抗氧化保健品中的应用，为推广毛蜂窝菌菌油的应用提供了良好的途径。

附图说明

图1为所述毛蜂窝菌菌油gc-ms分析的总离子流图。

图2为所述毛蜂窝菌菌油清除dpph自由基的效果图。

具体实施方式

本发明提供一种毛蜂窝菌菌油的提取方法及应用，为使本发明的目的、技术方案及效果更加清楚、明确，以下参照附图并举实施例对本发明进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

一种毛蜂窝菌菌油的提取方法，包括：

取毛蜂窝菌子实体，干燥后粉碎，以料液比1∶20加入溶剂，50℃下连续回流渗漉提取20～25h，收集提取液，50℃下水浴蒸馏回收溶剂后得粗制菌油；

粗制菌油通过吸附层析柱，用洗脱剂洗脱，收集洗脱液，50℃下真空旋转蒸馏回收溶剂后得所述毛蜂窝菌菌油。

针对于毛蜂窝菌菌油的有效成分以及采用的溶剂来说，50℃下提取和回收溶剂不仅能够加快菌油析出的效率，加速溶剂的挥发，而且不会破坏产物的结构。提取后的粗制菌油中含有一些极性较大的杂质，通过吸附洗脱后，将极性较大的杂质吸附在吸附层析柱中，能够有效将杂质去掉。

具体的，所述提取液包括石油醚、乙醚、二硫化碳、戊烷、己烷、环己烷、丙酮、氯仿、乙酸乙酯中的一种或几种。上述溶液与所述菌油的相容性好，而且与菌油中的有效成分的极性接近。

优选方案中，所述提取液为乙醚。乙醚的沸点低，极性小，大多数非极性或低极性脂类化合物都溶于乙醚，而极性较大的化合物难溶于乙醚；有助于提高菌油的提取率，减少粗制菌油中的极性化合物杂质；而且提取后的提取液容易回收。

所述洗脱液包括石油醚、乙醚、二硫化碳、戊烷、己烷、环己烷、乙酸乙酯中的一种或几种。上述溶剂的极性低，洗脱粗制菌油时能够将低极性的油脂类化合物洗脱下来，而将极性较高的化合物保留在吸附层析柱中。

优选的方式中，所述洗脱液为体积比为9∶1的正己烷-乙酸乙酯。

所述吸附层析柱的吸附剂包括硅胶、活性炭或氧化铝中的一种，吸附效果好，不对菌油的有效成分产生影响。

毛蜂窝菌菌油应用于制备抗氧化保健品。所述毛蜂窝菌菌油具有优良的抗氧化性能，能够有效地清除自由基，并且来源丰富，适用于作为抗氧化保健品的有效成分。

所述保健品的剂型包括片剂、糖衣丸、明胶胶囊、可饮用混悬剂或可崩解糊剂中的一种或几种；其可口服或外用涂抹。

所述的毛蜂窝菌菌油的应用中，所述毛蜂窝菌菌油的有效成分包括反亚油酸甲酯、甘油三亚油酸酯、亚油酸甲酯、顺-10-十四烯-1-醇醋酸酯、亚油酸乙酯、邻苯二甲酸二异辛酯、棕榈酸甲酯、油酸、(z,z)-2-甲基-3,13-十八碳二烯醇、(z)-油酸甲酯、邻苯二甲酸丁基庚-2-基酯。

下面提供一些实施例对毛蜂窝菌菌油的制备方法及其在抗氧化性能方面作进一步的说明。

实施例1毛蜂窝菌菌油的制备

材料：毛蜂窝菌hexagoniaapiaria(pers.)fr.于2018年10月27日采自广东省佛山市三水区南丹山风景区的枯龙眼树枝上。

乙醚：分析纯；

正己烷：分析纯；

乙酸乙酯：分析纯。

取上述自然风干后的野生毛蜂窝菌，粉碎，以料液比1∶20用乙醚于50℃下连续回流渗漉提取24小时，收集提取液，50℃下水浴蒸馏回收溶剂后得粗制菌油；

粗制菌油通过硅胶柱层析纯化，用体积比为9∶1的正己烷-乙酸乙酯洗脱，收集洗脱液，50℃下真空旋转蒸馏回收溶剂后得所述毛蜂窝菌菌油。

上述提取后的毛蜂窝菌菌油的得油率为0.26％。

发明人还试验过使用石油醚、二硫化碳、戊烷、己烷、环己烷、丙酮、氯仿、乙酸乙酯的一种或多种的混合作为提取液，石油醚、乙醚、二硫化碳、戊烷、己烷、环己烷、乙酸乙酯的一种或多种以一定的比例混合作为洗脱液，所得到的毛蜂窝菌菌油的得油率均在0.20％～0.24％之间，在此不一一阐述。

实施例2毛蜂窝菌菌油化学成分的分析

2.1.所使用的仪器和材料

实施例1中乙醚提取经纯化后的毛蜂窝菌菌油；

安捷伦7890a气相色谱串联安捷伦5975c质谱联用仪。

2.2.分析条件和方法

1)色谱条件：色谱柱采用hp-5ms石英毛细管柱(30m×250μm×0.25μm)；用程序升温：起始温度40℃，以5℃/min速度升温至150℃，再以10℃/min速度升温至280℃，恒温10min；进样口温度280℃，进样量1μl；分流比20∶1；载气为氦气。

2)质谱条件：ei离子源，离子源温度280℃，电子能量70ev，扫描范围35～500m/z。

3)定性定量方法：采用峰面积归一法确定所述菌油中各组分峰的相对含量。获取的质谱数据适用美国nist08.l谱库进行分析。

2.3分析结果

所述毛蜂窝菌菌油的gc-ms总离子流图如附图1所示，gc-ms联用技术和nist0.8l谱库分析结果如表1所示。

表1毛蜂窝菌菌油化学成分gc-ms分析结果

gc-ms分析结果表明，毛蜂窝菌菌油特征化学成分主要为反亚油酸甲酯、甘油三亚油酸酯、亚油酸甲酯、顺-10-十四烯-1-醇醋酸酯、亚油酸乙酯、邻苯二甲酸二异辛酯、棕榈酸甲酯、油酸、(z,z)-2-甲基-3,13-十八碳二烯醇、(z)-油酸甲酯、邻苯二甲酸丁基庚-2-基酯，上述化合物的峰面积相对含量占菌油的26.276％。这些成分中以亚油酸酯类化合物为主，而亚油酸具有降低血胆固醇及血脂和防治动脉粥样硬化症的功效。

实施例3毛蜂窝菌菌油抗氧化活性评价

3.1材料

试剂：1,1-二苯基-2-苦肼基(dpph)、抗坏血酸、无水乙醇；

样品：实施例1所述方法制备的毛蜂窝菌菌油；

3.2毛蜂窝菌菌油清除dpph自由基实验

采用酶标仪测定不同浓度样品溶液的体外清除dpph自由基的能力。使用移液枪精准吸取0、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50μl的样品溶液(初始浓度为10mg/ml)分别加入到96孔酶标板，再加入无水乙醇稀释，使每孔总体积为50μl，然后用移液枪精确吸取现配好的dpph溶液(0.2mmol/l)100μl分别加入样品溶液中，最后加入无水乙醇使每孔总体积为150μl。将96孔酶标板盖盖好放进酶标仪，启动，震荡混匀，于恒温37℃下避光反应1h，出板，取出板盖后进板，以150μl无水乙醇为空白对照，在517nm波长下测其吸光度。并计算dpph自由基的清除率。根据dpph自由基的清除率对应的样品溶液的浓度作图，并由图计算出当dpph清除率为50％时，样品溶液的浓度，即为dpph自由基的半数清除浓度(ec50)。以抗坏血酸为阳性对照。每组实验重复三次。

dpph自由基清除率的计算公式为：

dpph自由基清除率(％)＝[1-(asample-ablank)/addph]*100；式中，asample为菌油无水乙醇溶液清除dpph自由基后的吸光度；ablank为菌油无水乙醇溶液的吸光度；addph为加入dpph自由基无水乙醇溶液的吸光度。

毛蜂窝菌菌油清除dpph的活性随浓度变化的效果如图2所示。试验结果表明，毛蜂窝菌菌油清除dpph自由基的活性在受试范围内随着样品浓度升高而升高，呈现正相关，最高清除率为95.66±0.29％。当菌油浓度达到8mg/ml后，再增加菌油的浓度，清除率上升不明显。

经计算，毛蜂窝菌菌油的dpph自由基半数清除浓度(ec50)为4.3540mg/ml。结果表明，毛蜂窝菌菌油有较好的抗氧化活性，且无毒无害，可用于制备抗氧化保健品。

可以理解的是，对本领域普通技术人员来说，可以根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，而所有这些改变或替换都应属于本发明所附的权利要求的保护范围。