一种慢病毒载体全封闭生产的方法及系统与流程

文档序号:19748824发布日期:2020-01-21 19:01阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种慢病毒载体全封闭生产的方法,其特征在于,包括以下步骤:

步骤1:慢病毒载体宿主细胞的培养增殖;步骤2:慢病毒载体宿主细胞的包装,将含有慢病毒载体基因组序列的质粒通过转染试剂转染入慢病毒载体宿主细胞,制得慢病毒载体培养细胞上清液并收集;

步骤3:慢病毒载体上清液的纯化,将慢病毒载体上清液依次进行澄清、酶切消化、超滤、层析柱纯化后制得慢病毒载体。

2.如权利要求1所述的一种慢病毒载体全封闭生产的方法,其特征在于,所述步骤1中的慢病毒载体宿主细胞需要在多层细胞培养瓶中进行预先封闭培养,预先封闭培养包括在封闭条件下对所述宿主细胞进行复苏、培养、消化、传代。

3.如权利要求2所述的一种慢病毒载体全封闭生产的方法,其特征在于,所述慢病毒载体宿主细胞为293t细胞。

4.如权利要求3所述的一种慢病毒载体全封闭生产的方法,其特征在于,所述转染试剂为氯化钙。

5.如权利要求4所述的一种慢病毒载体全封闭生产的方法,其特征在于,所述步骤3中使用囊式过滤器进行澄清,加入核酸酶进行酶切消化,使用中空纤维柱进行超滤。

6.一种用于慢病毒载体全封闭生产的系统,其特征在于,包括依次连接设置的宿主细胞增殖培养装置、慢病毒载体包装装置、慢病毒载体纯化装置。

7.如权利要求6所述的一种用于慢病毒载体全封闭生产的系统,其特征在于,所述宿主细胞增殖培养装置包括第一收集滚瓶以及分别连接于所述第一收集滚瓶的消化液培养输送组件、培养基料液输送组件、宿主细胞培养组件;

所述消化液培养输送组件包括消化液料液袋、消化液输送管路以及连接于所述消化液输送管路上的消化液第一无菌接管机、消化液第一无菌封管机、消化液多层细胞培养瓶、消化液第二无菌接管机、消化液第二无菌封管机,所述消化液输送管路的两端分别与所述消化液料液袋、所述第一收集滚瓶连通;

所述培养基料液输送组件包括培养基料液袋、培养基料液输送管路,所述培养基料液输送管路的两端分别与所述培养基料液袋、所述第一收集滚瓶连通,所述培养基料液输送管路由所述培养基料液袋向所述第一收集滚瓶连通的方向上依次安装有培养基料液无菌封管机、培养基料液无菌接管机;

所述宿主细胞培养组件包括宿主细胞输送管路、宿主细胞第一多层细胞培养瓶、宿主细胞第二多层细胞培养瓶,所述宿主细胞输送管路的两端分别与所述宿主细胞第一多层细胞培养瓶、所述第一收集滚瓶连通,所述宿主细胞输送管路上安装有宿主细胞无菌接管机,所述宿主细胞无菌接管机与所述宿主细胞第一多层细胞培养瓶之间的所述宿主细胞输送管路安装有连接于所述宿主细胞第二多层细胞培养瓶的宿主细胞输送支管,所述宿主细胞输送支管与所述宿主细胞输送管路的连接处连接有宿主细胞无菌封管机。

8.如权利要求6或7所述的一种用于慢病毒载体全封闭生产的系统,其特征在于,所述慢病毒载体包装装置包括第二收集滚瓶、转染试剂料液袋,所述转染试剂料液袋上安装有与所述第二收集滚瓶连通的转染试剂料液输送管路,所述转染试剂料液输送管路由所述转染试剂料液袋向所述第二收集滚瓶方向上依次安装有转染试剂无菌封管机、转染试剂无菌接管机,所述第二收集滚瓶上安装有与所述宿主细胞第一多层细胞培养瓶或所述宿主细胞第二多层细胞培养瓶连通的上清液输送管路,所述上清液输送管路由所述第二收集滚瓶向所述宿主细胞第一多层细胞培养瓶或所述宿主细胞第二多层细胞培养瓶方向上依次安装有上清液无菌封管机、上清液无菌接管机。

9.如权利要求6或7所述的一种用于慢病毒载体全封闭生产的系统,其特征在于,所述慢病毒载体纯化装置包括慢病毒载体输送管路以及依次安装于所述慢病毒载体输送管路上的病毒上清液料液袋、慢病毒载体第一无菌接管机、慢病毒载体第一无菌封管机、囊式过滤器、慢病毒载体第二无菌接管机、慢病毒载体第二无菌封管机、澄清样品料液袋、中空纤维柱、超滤样品料液袋、慢病毒载体第三无菌接管机、慢病毒载体第三无菌封管机、层析柱、纯化液料液袋,所述病毒上清液料液袋上安装有与所述宿主细胞第一多层细胞培养瓶或所述宿主细胞第二多层细胞培养瓶连通的上清液提取管路,所述上清液提取管路上安装有上清液无菌接管机,所述囊式过滤器进液口的一端设有与所述慢病毒载体输送管路连通的澄清管路。

10.如权利要求8所述的一种用于慢病毒载体全封闭生产的系统,其特征在于,所述慢病毒载体纯化装置包括慢病毒载体输送管路以及依次安装于所述慢病毒载体输送管路上的病毒上清液料液袋、慢病毒载体第一无菌接管机、慢病毒载体第一无菌封管机、囊式过滤器、慢病毒载体第二无菌接管机、慢病毒载体第二无菌封管机、澄清样品料液袋、中空纤维柱、超滤样品料液袋、慢病毒载体第三无菌接管机、慢病毒载体第三无菌封管机、层析柱、纯化液料液袋,所述病毒上清液料液袋上安装有与所述宿主细胞第一多层细胞培养瓶或所述宿主细胞第二多层细胞培养瓶连通的上清液提取管路,所述上清液提取管路上安装有上清液无菌接管机,所述囊式过滤器进液口的一端设有与所述慢病毒载体输送管路连通的澄清管路。

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