一种精子外源基因转染方法与流程

文档序号:20916482发布日期:2020-05-29 13:35阅读:561来源:国知局

本发明涉及生物技术领域,尤其是一种精子外源基因转染方法。



背景技术:

近年来基因重组技术快速发展,其中通过转染方式进行基因重组是一种常用的方法。传统基因转染技术在形成稳定转染的效率上较低,如何提高转染效率成为了本领域亟待解决的技术问题之一。



技术实现要素:

本发明要解决的技术问题是提供一种精子外源基因转染方法,能够解决现有技术的不足,提高了稳定转染的效率。

为解决上述技术问题,本发明所采取的技术方案如下。

一种精子外源基因转染方法,步骤如下:

a、将载体与外源基因进行混合,制得载体与外源基因的复合物;

b、将奶牛精子放入氯化钙溶液中,缓慢搅拌15min;

c、将步骤a制得的复合物放入步骤b的氯化钙溶液中,进行转染1h;

d、在步骤c的氯化钙溶液中插入电击管,进行电击转染3h。

作为优选,步骤a中,载体包含有seqidno.1的核苷酸序列所表示的编码基因。

作为优选,步骤b中,氯化钙溶液的浓度为7wt%。

作为优选,步骤c中,复合物与奶牛精子的摩尔比为10∶1。

作为优选,步骤d中,电击管的电压为180v。

采用上述技术方案所带来的有益效果在于:

本发明通过使用高效率载体提高了转染的靶向性,同时配合优化后的转染操作步骤,实现载体与细胞的快速融合,从而实现提高转染效率的目的。

具体实施方式

一种精子外源基因转染方法,步骤如下:

a、将载体与外源基因进行混合,制得载体与外源基因的复合物;

b、将奶牛精子放入氯化钙溶液中,缓慢搅拌15min;

c、将步骤a制得的复合物放入步骤b的氯化钙溶液中,进行转染1h;

d、在步骤c的氯化钙溶液中插入电击管,进行电击转染3h。

步骤a中,载体包含有seqidno.1的核苷酸序列所表示的编码基因。步骤b中,氯化钙溶液的浓度为7wt%。步骤c中,复合物与奶牛精子的摩尔比为10∶1。步骤d中,电击管的电压为180v。

本发明可以将奶牛精子稳定转染的效率至少提高15%。

上述描述仅作为本发明可实施的技术方案提出,不作为对其技术方案本身的单一限制条件。



技术特征:

1.一种精子外源基因转染方法,其特征在于步骤如下:

a、将载体与外源基因进行混合,制得载体与外源基因的复合物;

b、将奶牛精子放入氯化钙溶液中,缓慢搅拌15min;

c、将步骤a制得的复合物放入步骤b的氯化钙溶液中,进行转染1h;

d、在步骤c的氯化钙溶液中插入电击管,进行电击转染3h。

2.根据权利要求1所述的精子外源基因转染方法,其特征在于:步骤a中,载体包含有seqidno.1的核苷酸序列所表示的编码基因。

3.根据权利要求2所述的精子外源基因转染方法,其特征在于:步骤b中,氯化钙溶液的浓度为7wt%。

4.根据权利要求3所述的精子外源基因转染方法,其特征在于:步骤c中,复合物与奶牛精子的摩尔比为10∶1。

5.根据权利要求4所述的精子外源基因转染方法,其特征在于:步骤d中,电击管的电压为180v。


技术总结
本发明公开了一种精子外源基因转染方法,包括以下步骤:A、将载体与外源基因进行混合,制得载体与外源基因的复合物;B、将奶牛精子放入氯化钙溶液中,缓慢搅拌15min;C、将步骤A制得的复合物放入步骤B的氯化钙溶液中,进行转染1h;D、在步骤C的氯化钙溶液中插入电击管,进行电击转染3h。本发明可以解决现有技术的不足,提高了稳定转染的效率。

技术研发人员:钱芳;张晓婷;李丽
受保护的技术使用者:新疆维吾尔自治区生殖健康医院
技术研发日:2020.02.13
技术公布日:2020.05.29
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