本发明涉及生物技术领域,尤其是一种精子外源基因转染方法。
背景技术:
近年来基因重组技术快速发展,其中通过转染方式进行基因重组是一种常用的方法。传统基因转染技术在形成稳定转染的效率上较低,如何提高转染效率成为了本领域亟待解决的技术问题之一。
技术实现要素:
本发明要解决的技术问题是提供一种精子外源基因转染方法,能够解决现有技术的不足,提高了稳定转染的效率。
为解决上述技术问题,本发明所采取的技术方案如下。
一种精子外源基因转染方法,步骤如下:
a、将载体与外源基因进行混合,制得载体与外源基因的复合物;
b、将奶牛精子放入氯化钙溶液中,缓慢搅拌15min;
c、将步骤a制得的复合物放入步骤b的氯化钙溶液中,进行转染1h;
d、在步骤c的氯化钙溶液中插入电击管,进行电击转染3h。
作为优选,步骤a中,载体包含有seqidno.1的核苷酸序列所表示的编码基因。
作为优选,步骤b中,氯化钙溶液的浓度为7wt%。
作为优选,步骤c中,复合物与奶牛精子的摩尔比为10∶1。
作为优选,步骤d中,电击管的电压为180v。
采用上述技术方案所带来的有益效果在于:
本发明通过使用高效率载体提高了转染的靶向性,同时配合优化后的转染操作步骤,实现载体与细胞的快速融合,从而实现提高转染效率的目的。
具体实施方式
一种精子外源基因转染方法,步骤如下:
a、将载体与外源基因进行混合,制得载体与外源基因的复合物;
b、将奶牛精子放入氯化钙溶液中,缓慢搅拌15min;
c、将步骤a制得的复合物放入步骤b的氯化钙溶液中,进行转染1h;
d、在步骤c的氯化钙溶液中插入电击管,进行电击转染3h。
步骤a中,载体包含有seqidno.1的核苷酸序列所表示的编码基因。步骤b中,氯化钙溶液的浓度为7wt%。步骤c中,复合物与奶牛精子的摩尔比为10∶1。步骤d中,电击管的电压为180v。
本发明可以将奶牛精子稳定转染的效率至少提高15%。
上述描述仅作为本发明可实施的技术方案提出,不作为对其技术方案本身的单一限制条件。
1.一种精子外源基因转染方法,其特征在于步骤如下:
a、将载体与外源基因进行混合,制得载体与外源基因的复合物;
b、将奶牛精子放入氯化钙溶液中,缓慢搅拌15min;
c、将步骤a制得的复合物放入步骤b的氯化钙溶液中,进行转染1h;
d、在步骤c的氯化钙溶液中插入电击管,进行电击转染3h。
2.根据权利要求1所述的精子外源基因转染方法,其特征在于:步骤a中,载体包含有seqidno.1的核苷酸序列所表示的编码基因。
3.根据权利要求2所述的精子外源基因转染方法,其特征在于:步骤b中,氯化钙溶液的浓度为7wt%。
4.根据权利要求3所述的精子外源基因转染方法,其特征在于:步骤c中,复合物与奶牛精子的摩尔比为10∶1。
5.根据权利要求4所述的精子外源基因转染方法,其特征在于:步骤d中,电击管的电压为180v。