本发明属于中药植物原料药制备工艺，尤其涉及一种积雪草总苷含量高的积雪草提取物的制备方法。
背景技术：
积雪草[centellaasiatica(l.)urban]为《中国药典》收载的常用中药，为伞形科积雪草属植物积雪草的干燥全草，始载于《神农本草经》，列为中品，具有清热利湿、解毒消肿的功效。积雪草的化学成分复杂，主要有三萜类、黄酮类、挥发油类、多炔烯类等。目前认为，积雪草的主要活性成分为积雪草总苷，积雪草总苷是一种混合物，主要由三萜烷酸形成的糖苷组成，包括积雪草苷b、羟基积雪草苷和积雪草苷，它们都具有五环三萜结构和糖苷支链，仅在三萜环上的羟基数目和位置存在着差异。尽管其结构及其相似，但其生物活性却不尽相同，其中羟基积雪草苷具有消炎和治疗风湿性关节炎等活性；积雪草苷能够促进伤口的愈合，对烧伤性瘢痕有明显的治愈作用，常作为评价积雪草药理活性的标识性成分；由于积雪草苷b纯品难以获得，关于它的药理活性未有相关报道。积雪草苷、羟基积雪草苷和积雪草苷b结构式如下：
中国发明专利申请文件cn110179841a公开了一种高含量水溶性积雪草总苷的工业化提取方法，用碱性乙醇进行回流提取、浓缩后，水沉，再取上清液用大孔树脂进行富集，活性炭脱色，最后采用醋酸乙酯重结晶技术，提取出含量为95％以上的高含量水溶性积雪草总苷，该方法只用到活性炭脱色，效果较差，且需使用有毒易挥发的有机溶剂重结晶，易造成环境污染和危害。中国发明专利申请文件cn106176848a公开了一种从积雪草中提取粉碎后的积雪草总皂苷的方法，用乙醇回流提取、浓缩后，加稀土盐混合溶解，过x-5型号大孔树脂，用乙醇洗脱，回收乙醇，干燥得到积雪草总皂苷，该方法中使用的稀土盐无法重复使用，生产成本较高，不易工业化生产。基于此，找出一种脱色效果好且易于产业化的积雪草总苷含量高的积雪草提取物的制备方法具有重要意义。
技术实现要素：
本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出一种积雪草总苷含量高的积雪草提取物的制备方法，脱色效果好且易于工业化生产。
根据本发明实施例的制备方法，包括以下步骤：
s1、取粉碎后的积雪草，用ph在9～11之间且体积浓度为50～95％乙醇溶液回流提取，将提取液过滤后浓缩得到浓缩液；
s2、将所述步骤s1制得的浓缩液过大孔树脂柱后，水洗至无色，再用体积浓度为40～70％的乙醇洗脱，收集洗脱液浓缩得浸膏；
s3、将浸膏用水稀释后，添加al2o3脱色，过滤，收集滤液；将滤液过阴离子交换树脂柱，用纯水洗脱，收集洗脱液，浓缩干燥后即得所述积雪草提取物。
根据本发明的一些实施例，所述步骤s1中，乙醇的用量为积雪草重量的10～15倍，回流提取1～3次，每次1～2h。
根据本发明的一些实施例，所述步骤s1中，当回流提取次数为2次以上，则每次回收后的浓缩液的ph与用于提取的乙醇溶液一致。
根据本发明的一些实施例，所述步骤s2中的大孔树脂柱选自非极性大孔树脂柱或中极性大孔树脂柱；优选地，所述非极性大孔树脂柱为d101树脂柱；所述中极性大孔树脂柱为ab-8树脂柱。
根据本发明的一些实施例，所述步骤s2中，浓缩液上柱流速为0.5～1bv/h，乙醇用量为2～4bv，洗脱速度为1～2bv/h。
根据本发明的一些实施例，所述步骤s3中，使用的al2o3为中性al2o3；优选地，中性al2o3的添加量为浸膏重量的1～5％。
根据本发明的一些实施例，所述步骤s3中，脱色操作在60～65℃下进行，处理时间为0.5～1h。
根据本发明的一些实施例，所述步骤s3中，所述阴离子交换树脂柱选自弱碱性阴离子树脂柱；优选地，所述弱碱性阴离子树脂柱选自d301弱碱性阴离子树脂柱、201×7弱碱性阴离子树脂柱或d941弱碱性阴离子树脂柱。
根据本发明的一些实施例，所述步骤s3中，纯水用量为4～6bv，洗脱速度为1～2bv/h。
根据本发明实施例的制备方法，至少具有如下有益效果：本发明方案制得的积雪草总皂苷纯度高，工艺简单，使用溶剂单一，脱色效果好，易于工业化生产；制备过程中仅使用乙醇一种有机溶剂，单一环保；使用中性氧化铝和离子交换树脂进行双重脱色，得到的积雪草总苷颜色较浅，制得的积雪草总苷纯度高达90％以上，收率也可达90％以上；步骤s1中使用ph在9～11之间的乙醇溶液提取，使得酚类色素被提取后在碱性条件下形成溶于水盐，使得色素在过大孔树脂柱时不被树脂吸附；采用中性氧化铝与离子交换树脂组合脱色，使得脱色效果更好，中性氧化铝利用物理吸附脱色，阴离子交换树脂去除阴离子色素及弱极性色素，两者结合，使得制得的积雪总苷颜色更浅，此外，本发明的方案的脱色产品可反复使用，损耗少。
本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
附图说明
图1为本发明实施例3及对比例1～2制得的积雪草提取物的实物图；
图2为本发明实施例1及对比例3～4制得的积雪草提取物的实物图。
具体实施方式
为详细说明本发明的技术内容、所实现目的及效果，以下结合实施方式并配合附图予以说明。
本发明的实施例一为：一种积雪草总苷含量高的积雪草提取物的制备方法，包括以下步骤：
1)将积雪草粉碎后，加入ph为9的10倍体积且浓度为80％乙醇溶液回流提取3次，每次1.5h，每次提取完后都将提取液过滤收集滤液，从滤液中回收溶剂，得浓缩液，调节ph至9；
2)将回收后的浓缩液过d941大孔树脂柱，上柱速度为1bv/h，先水洗至无色，然后用浓度为70％乙醇洗脱，乙醇的用量为2bv，洗脱速度为2bv/h，收集乙醇洗脱液，回收乙醇，得到浸膏；
3)将浸膏用10倍水稀释，添加1％的中性al2o3，60℃水浴下搅拌0.5h后过滤，收集洗滤液；
4)滤液过d941离子交换树脂柱，用纯水洗脱，纯水用量为4bv，纯水洗脱流速为1bv/h收集洗脱液，浓缩，干燥即得含有高纯度积雪草总苷的积雪草提取物。
经hplc分析，积雪草总苷的收率为93.45％，纯度高达91.28％。
本发明的实施例二为：一种积雪草总苷含量高的积雪草提取物的制备方法，包括以下步骤：
1)将积雪草粉碎，加入ph为10的15倍体积浓度为70％乙醇溶液回流提取1次，提取时长为2h，将提取液过滤，滤液回收溶剂，得浓缩液，调节ph至10；
2)将回收后的浓缩液过d101大孔树脂柱，上柱速度为0.5bv/h，先水洗至无色，然后用浓度为60％乙醇洗脱，乙醇的用量为3bv，洗脱速度为1.5bv/h，收集乙醇洗脱液，回收乙醇，得到浸膏；
3)将浸膏用8倍水稀释，添加2.5％的中性al2o3，60℃水浴搅拌1h，过滤，收集洗滤液；
4)滤液过d941离子交换树脂柱，用纯水洗脱，纯水用量为6bv，纯水洗脱流速为2bv/h收集洗脱液，浓缩，干燥即得含有高纯度积雪草总苷的积雪草提取物。
经hplc分析，积雪草总苷的收率为92.30％，纯度高达93.25％。
本发明的实施例三为：一种积雪草总苷含量高的积雪草提取物的制备方法，包括以下步骤：
1)将积雪草粉碎，加入ph为11的10倍体积浓度60％乙醇溶液回流提取2次，每次2h，将提取液过滤，滤液回收溶剂，得浓缩液，调节ph至11；
2)将回收后的浓缩液过d101大孔树脂柱，上柱速度为0.5bv/h，先水洗至无色，然后用体积浓度为50％乙醇洗脱，乙醇的用量为4bv，洗脱速度为1bv/h，收集乙醇洗脱液，回收乙醇，得到浸膏；
3)将浸膏用8倍水稀释，添加5％的中性al2o3，60℃水浴搅拌1h，过滤，收集洗滤液；
4)滤液过离子交换树脂柱，用纯水洗脱，纯水用量为4bv，纯水洗脱流速为2bv/h收集洗脱液，浓缩，干燥即得含有高纯度积雪草总苷的积雪草提取物。
经hplc分析，积雪草总苷的收率为90.18％，纯度高达90.03％。
本发明的对比例一为：一种积雪草提取物的制备方法，包括以下步骤：除步骤1)中ph调节至12，其他参数与实施例3相同。
所得产品，经hplc分析，积雪草总苷的收率为74.18％，纯度83.25％。
本发明的对比例二为：一种积雪草提取物的制备方法，包括以下步骤：除步骤1)中ph调节至8，其他参数与实施例3相同。
所得产品，经hplc分析，积雪草总苷的收率为82.37％，纯度80.17％。
与实施例3相对比，对比例1和对比例2的积雪草总苷收率和纯度均明显降低，且粉末颜色要深；主要是由于对比例1的碱性乙醇ph过高，尽管积雪草苷在碱性条件下较稳定，然而过高的ph会导致其水解；而对比例2中的ph较低，部分酚类色素杂质提取出来后未形成盐，使得对比例1、2的积雪草总苷的收率和纯度降低。制得的积雪草提取物的实物图如图1所示，图1中从左至右依次为实施例3制得的积雪草提取物、对比例1制得的积雪草提取物和对比例2制得的积雪草提取物，从图中可以看出，从左至右制得的积雪草提取物的粉末颜色依次加深且粉质均一度也逐步降低。
本发明的对比例三为：一种积雪草提取物的制备方法，包括以下步骤：除步骤3)中未过阴离子树脂，其他参数与实施例1相同。
所得产品，经hplc分析，积雪草总苷的收率为95.63％，纯度73.54％。
本发明的对比例四为：一种积雪草提取物的制备方法，包括以下步骤：除步骤3)中添加的是1％的活性炭且未过阴离子树脂，其他参数与实施例1相同。
所得产品，经hplc分析，积雪草总苷的收率为93.54％，纯度69.37％。
对比实施例1与对比例3可以看出，不过阴离子树脂，制得的积雪草总苷的纯度显著降低；实施例1和对比例3、4得到的积雪草提取物实物图如图2所示，图2中从左至右依次为实施例1制得的产品、对比例3制得的产品和对比例4制得的产品，从图2中可以明显看出，通过中性氧化铝和离子交换树脂进行双重脱色得到的积雪草提取物的颜色明显浅于单一使用中性氧化铝或活性炭得到的积雪草提取物且粉质均一度也显著降低，对比实施例1与对比例4可以看出，相比于现有技术常规脱色方法，本发明实施例方案的脱色效果得到了极大的改善。
上述实施例或对比例中，若无特殊说明，所称“浓度”均为体积百分数；上述实施例和对照例中hplc测定的条件一致且均为常规参数。
以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书及附图内容所作的等同变换，或直接或间接运用在相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。