本发明应用于中药制剂
技术领域：
，具体涉及一种抗hp的黄连中药制剂制备方法及应用。
背景技术：
：小檗碱(berberine)，又称黄连素，是从黄连中提取的一种传统的天然抗菌活性物质，临床上主要用于肠道细菌性感染的治疗用药。近年来的药理研究发现，盐酸小檗碱及其某些结构衍生物具有抗菌，抗炎，抗肿瘤，降血糖和降血脂等多种药理活性，因此，对盐酸小檗碱药理作用的深入研究和结构改造工作已经引起广泛的兴趣。iwasa等的研究结果表明，在小檗碱分子中接入亲脂性基团后小檗碱衍生物的抑菌等生物活性可以增加。但是，到目前为止，小檗碱的8位引入烷基的衍生物多已有报道，如8-丁基小檗碱盐、8-己基小檗碱盐、8-辛基小檗碱盐等物质的合成及抗菌活性，但尚未见在小檗碱的9位引入烷基的衍生物再抗hp方面的研究报道。技术实现要素：本发明针对现有技术中存在的上述问题，提供一种9-烷氧基小檗碱盐、合成方法及应用，发现9-烷氧基小檗碱盐的抗菌活性，尤其是在抗hp上的活性。本发明解决其技术问题是采用以下技术方案实现的：一种9-烷氧基小檗碱盐，其分子结构如下：其中，x＝f-、cl-、br-、i-等阴离子；n＝2、4、6、8、10、12。一种上述9-烷氧基小檗碱盐的合成方法，包括如下步骤：(1)取盐酸小檗碱进行微波处理1～20min，得到小檗红碱；(2)在小檗红碱中加入n-dmf、卤代烷微波反应3～10min，然后冷却至室温；(3)减压浓缩成固体后加乙醚，过滤得晶体；(4)将步骤(3)所得晶体加乙醇重结晶2～4次，得到9-烷氧基小檗碱盐。进一步的，所述步骤(1)中微波处理的功率位300～900w。进一步的，所述卤代烷的量为所述盐酸小檗碱的1～10倍摩尔比。进一步的，所述步骤(2)中微波反应的微波功率为200～600w。一种上述9-烷氧基小檗碱盐在抗菌活性方面的用途。进一步的，一种上述9-烷氧基小檗碱盐在抗hp方面的用途。对提纯后的9-烷氧基小檗碱盐用perkinelmer2400型元素分析仪测定其元素组成；ir分析采用perkinelmerone型红外分光光度仪测定ir光谱图(kbr压片)；uv分析采用hitachiu-1800型紫外分光光度计测定紫外光谱；1hnmr，13cnmr分析采用bruker300型核磁共振仪测定化合物的氢谱和碳谱，溶剂均为dmso-d6，1hnmr测定的内标为tms。采用上述方法，以卤代烷对盐酸小檗碱盐进行结构修饰，获得各种9-烷氧基小檗碱盐的结构表征结构如下：9-o-乙基小檗碱盐酸盐的结构表征结果如下：2a(9-ethoxyberberine):yield:78.1％；mp(℃):289-302；rf:0.31；irv(cm-1):3433,3040,3008,2955,2924,2853,1633,1603,1568,1509,1481,1467,1404,1364,1300,1273,1232,1142,1102,1039,929,874,834,722,617,515,426；1hnmrδ(ppm):1.35(t,3h,-ch3),3.16(t,2h,5-ch2-),4.03(s,3h,-och3),4.30(q,2h,-och2-),4.93(t,2h,6-ch2-),6.15(s,2h,-och2o-),7.08(d,1h,11-ar-h),7.78(d,1h,12-ar-h),7.96(s,1h,4-ar-h),8.18(s,1h,1-ar-h),8.92(s,1h,13-ar-h),9.73(s,1h,8-ar-h)；13cnmrδ(ppm):14.76,26.43,55.42,57.16,70.03,102.17,105.52,108.50,120.31,120.54,121.75,123.36,126.83,130.79,133.14,137.55,142.99,145.36,147.78,149.91,150.48；esi-ms(m/z)[m-br]+forc21h20brno4:calcd:350.1323；found:350。9-o-丁基小檗碱盐酸盐的结构表征结果如下：(9-butoxyberberine):yield:66.3％；mp(℃):260-263；rf:0.35；irv(cm-1):3433,3040,3008,2955,2924,2853,1633,1603,1568,1509,1481,1467,1404,1364,1300,1273,1232,1142,1102,1039,929,874,834,722,617,515,426；1hnmrδ(ppm):0.96(t,3h,-ch3),1.49(m,2h,-ch2-),1.84(m,2h,-o-c-ch2-),3.16(t,2h,5-ch2-),4.03(s,3h,-och3),4.25(t,2h,-och2-),4.93(t,2h,6-ch2-),6.15(s,2h,-och2o-),7.08(d,1h,11-ar-h),7.78(d,1h,12-ar-h),7.96(s,1h,4-ar-h),8.18(s,1h,1-ar-h),8.92(s,1h,13-ar-h),9.73(s,1h,8-ar-h)；13cnmrδ(ppm):13.83,18.63,26.43,31.62,55.42,57.16,74.05,102.17,105.52,108.50,120.31,120.54,121.75,123.36,126.83,130.79,133.14,137.55,142.99,145.36,147.78,149.91,150.48；esi-ms(m/z)[m-br]+forc23h24brno4:calcd:378.1706；found:378。9-o-己基小檗碱盐酸盐的结构表征结果如下：(9-hexoxyberberine):yield:55.8％；mp(℃):233-236；rf:0.39；irv(cm-1):3433,3040,3008,2955,2924,2853,1633,1603,1568,1509,1481,1467,1404,1364,1300,1273,1232,1142,1102,1039,929,874,834,722,617,515,426；1hnmrδ(ppm):0.86(t,3h,-ch3),1.32(m,4h,-(ch2)2-),1.44(m,2h,-ch2-),1.84(m,2h,-o-c-ch2-),3.16(t,2h,5-ch2-),4.03(s,3h,-och3),4.25(t,2h,-och2-),4.93(t,2h,6-ch2-),6.15(s,2h,-och2o-),7.08(d,1h,11-ar-h),7.78(d,1h,12-ar-h),7.96(s,1h,4-ar-h),8.18(s,1h,1-ar-h),8.92(s,1h,13-ar-h),9.73(s,1h,8-ar-h)；13cnmrδ(ppm):14.02,22.15,25.24,26.43,29.56,31.32,55.42,57.16,74.25,102.17,105.52,108.50,120.31,120.54,121.75,123.36,126.83,130.79,133.14,137.55,142.99,145.36,147.78,149.91,150.48；esi-ms(m/z)[m-br]+forc25h28brno4:calcd:406.2019；found:406。9-o-辛基小檗碱盐酸盐的结构表征结果如下：(9-octoxyberberine):yield:48.0％；mp(℃):219-222；rf:0.43；irv(cm-1):3433,3040,3008,2955,2924,2853,1633,1603,1568,1509,1481,1467,1404,1364,1300,1273,1232,1142,1102,1039,929,874,834,722,617,515,426；1hnmrδ(ppm):0.85(t,3h,-ch3),1.26(m,8h,-(ch2)4-),1.46(m,2h,-ch2-),1.85(m,2h,-o-c-ch2-),3.16(t,2h,5-ch2-),4.03(s,3h,-och3),4.25(t,2h,-och2-),4.93(t,2h,6-ch2-),6.15(s,2h,-och2o-),7.08(d,1h,11-ar-h),7.78(d,1h,12-ar-h),7.96(s,1h,4-ar-h),8.18(s,1h,1-ar-h),8.92(s,1h,13-ar-h),9.73(s,1h,8-ar-h)；13cnmrδ(ppm):14.02,22.15,25.35,26.43,28.75,28.87,29.56,31.32,55.42,57.16,74.35,102.17,105.52,108.50,120.31,120.54,121.75,123.36,126.83,130.79,133.14,137.55,142.99,145.36,147.78,149.91,150.48；esi-ms(m/z)[m-br]+forc27h32brno4:calcd:434.2332；found:434。9-o-葵基小檗碱盐酸盐的结构表征结果如下：(9-decoxyberberine):yield:40.2％；mp(℃):214-216；rf:0.47；irv(cm-1):3433,3040,3008,2955,2924,2853,1633,1603,1568,1509,1481,1467,1404,1364,1300,1273,1232,1142,1102,1039,929,874,834,722,617,515,426；1hnmrδ(ppm):0.83(t,3h,-ch3),1.24(m,12h,-(ch2)6-),1.45(m,2h,-ch2-),1.85(m,2h,-o-c-ch2-),3.16(t,2h,5-ch2-),4.03(s,3h,-och3),4.25(t,2h,-och2-),4.93(t,2h,6-ch2-),6.15(s,2h,-och2o-),7.08(d,1h,11-ar-h),7.78(d,1h,12-ar-h),7.96(s,1h,4-ar-h),8.18(s,1h,1-ar-h),8.92(s,1h,13-ar-h),9.73(s,1h,8-ar-h)；13cnmrδ(ppm):14.02,22.15,25.35,26.43,28.75,28.80,28.82,28.87,29.56,31.32,55.42,57.16,74.35,102.17,105.52,108.50,120.31,120.54,121.75,123.36,126.83,130.79,133.14,137.55,142.99,145.36,147.78,149.91,150.48；esi-ms(m/z)[m-br]+forc29h36brno4:calcd:462.2645；found:462。9-o-十二烷基小檗碱盐酸盐的结构表征结果如下：(9-dodecoxyberberine):yield:31.7％；mp(℃):210-213；rf:0.52；irv(cm-1):3433,3040,3008,2955,2924,2853,1633,1603,1568,1509,1481,1467,1404,1364,1300,1273,1232,1142,1102,1039,929,874,834,722,617,515,426；1hnmrδ(ppm):0.81(t,3h,-ch3),1.22(m,16h,-(ch2)8-),1.45(m,2h,-ch2-),1.85(m,2h,-o-c-ch2-),3.16(t,2h,5-ch2-),4.03(s,3h,-och3),4.25(t,2h,-och2-),4.93(t,2h,6-ch2-),6.15(s,2h,-och2o-),7.08(d,1h,11-ar-h),7.78(d,1h,12-ar-h),7.96(s,1h,4-ar-h),8.18(s,1h,1-ar-h),8.92(s,1h,13-ar-h),9.73(s,1h,8-ar-h)；13cnmrδ(ppm):14.02,22.15,25.35,26.43,28.75,28.80,28.81,28.81,28.82,28.87,29.56,31.32,55.42,57.16,74.35,102.17,105.52,108.50,120.31,120.54,121.75,123.36,126.83,130.79,133.14,137.55,142.99,145.36,147.78,149.91,150.48；esi-ms(m/z)[m-br]+forc31h40brno4:calcd:490.2958；found:490。盐酸小檗碱的结构表征结果：rf＝0.43,uv(ch3oh)λmax:348(0.284),266(0.322)nm；1hnmr(dmso-d6)δ:3.21(t,2h,5-ch2),4.07,4.09(eachs,6h,-och3),4.93(d,2h,6-ch2),6.12(s,2h,-och2o-),7.091(s,1h,4-ch),7.80(s,1h,1-ch),8.00(d,1h,11-ch),8.21(d,1h,12-ch),8.94(s,1h,13-ch),9.89(s,1h,8-ch)；13cnmr(dmso-d6)δ：26.65,49.63,57.08,61.57,101.10,105.82,107.54,120.29,121.19,121.41,124.68，125.25,130.78,132.67,137.83,145.57,147.63,149.66,152.44,160.17.ir(kbr)v:3413,3017,3000,2946,2909,2846,1634,1619,1601,1567,1509,1480,1458cm-1。通过结构表征数据显示，以卤代烷对盐酸小檗碱盐进行结构修饰，获得的化合物为9-o-烷基小檗碱卤酸盐。对比盐酸小檗碱和9-烷氧基小檗碱盐的结构表征数据发现，修饰后的小檗碱分子中，盐酸小檗碱环上的质子峰没有受到影响，但是，修饰后的小檗碱分子中出现了明显的烷基峰特征。表明修饰并没有直接作用于环上，而是在9位增加了烷基，修饰的位点是9-o-烷基小檗碱盐。本发明化合物可以组合物的形式通过口服、注射或外用等给药的方式用于相关疾病的患者。用于口服时，可将其制成常规的固体制剂如片剂、粉剂、粒剂、胶囊等，制成液体制剂如水油悬浮剂或糖浆等；用于注射给药时，可将其制成注射用溶液或油悬浮剂等；用于外用可以制成贴膏或擦剂。以上各种剂型可以按照药学领域的常规生产方法制备。本发明化合物的施用量可根据用药途径、患者的年龄、体重、所治疗疾病的类型和严重程度等变化。发明人发现本类发明化合物具有比小檗碱盐具有更好的抗hp菌活性。将9-o-烷基小檗碱盐用0.5～3％的tween-80等乳化剂溶解后，稀释为1～100ppm的溶液，即可作为良好的抗hp的药物。当本发明作为抗hp的药物原料来制备药物时，是将治疗有效量的本发明化合物与一种或多种药学上可接受的载体进行组合。药学上可接受的载体是指药学领域常规的药物载体，例如：稀释剂如酒精或水等、赋形剂如水等，填充剂如蔗糖或淀粉等、粘合剂如明胶、崩解剂如海澡酸等、湿润剂如硬脂酸锌等，着色剂如蔗糖、矫味剂如山梨醇等，吸附剂如pvp等，药用高分子材料等、缓释材料等、缓控释材料等、乳化剂如吐温等，漂浮片制剂骨架材料如羟丙基甲基纤维素k15m、漂浮片制剂低密度助漂剂如十八醇、漂浮片制剂发泡剂如碳酸氢钠、漂浮片制剂释放调节剂如聚乙烯基吡咯烷酮k30等。与现有技术相比，本发明的有益效果在于：(1)本发明9-o-烷基小檗碱盐的抗hp活性明显高于小檗碱盐和小檗碱的其他衍生物。(2)本发明9-o-烷基小檗碱盐可以作为新型抗hp物质开发利用。(3)本发明合成的化合物收率高，价格低，具有极好的开发利用价值。具体实施方式以下结合具体实施例对本发明技术方案作进一步详细说明。应当理解，下列实施例仅为示例性地说明和解释本发明，而不应被解释为对本发明保护范围的限制。凡基于本发明上述内容所实现的技术均涵盖在本发明旨在保护的范围内。另外，除非另有特别说明，本发明中用到的各种原材料、试剂、仪器和设备均可通过市场购买获得或现有方法制备得到。实施例1：9-o-丁基小檗碱碘酸盐的制备(1)100g盐酸小檗碱放入微波炉，以300w功率微波处理1-20min，得小檗红碱91.6g；(2)取10g(0.3mol)小檗红碱，加100mln,n-dmf，加10ml碘代正丁烷，放入微波炉，以600w功率微波反应3min，然后冷却到室温；(3)减压回收溶剂，固形物加10倍乙醚充分提取，再过滤，得晶体；(4)晶体用1倍乙醇重结晶4次，得到9-o-丁基小檗碱碘酸盐10.6g，产率89.9％。实施例2：9-o-己基小檗碱盐酸盐的制备(1)100g盐酸小檗碱放入微波炉，以900w功率微波处理1min，得小檗红碱91.0g；(2)取10g(0.3mol)小檗红碱，加1000mln,n-dmf，加100ml氯代正己烷，放入微波炉，以200w功率微波反应10min，然后冷却到室温；(3)减压回收溶剂，固形物加1倍乙醚充分提取，再过滤，得晶体；(4)晶体用10倍乙醇重结晶2次，得到9-o-己基小檗碱盐酸盐11.6g，产率91.3％。实施例3：9-o-辛基小檗碱溴酸盐的制备(1)100g盐酸小檗碱放入微波炉，以600w功率微波处理5min，得小檗红碱91.1g；(2)取10g(0.3mol)小檗红碱，加500mln,n-dmf，加50ml溴代正辛烷，放入微波炉，以400w功率微波反应6min，然后冷却到室温；(3)减压回收溶剂，固形物加5倍乙醚充分提取，再过滤，得晶体；(4)晶体用5倍乙醇重结晶3次，得到9-o-辛基小檗碱盐酸盐12.3g，产率90.4％。实施例4：9-o-葵基小檗碱氟酸盐的制备(1)100g盐酸小檗碱放入微波炉，以400w功率微波处理7min，得小檗红碱90.2g；(2)取10g(0.3mol)小檗红碱，加200mln,n-dmf，加20ml溴代正葵烷，放入微波炉，以500w功率微波反应3min，然后冷却到室温；(3)减压回收溶剂，固形物加3倍乙醚充分提取，再过滤，得晶体；(4)晶体用3倍乙醇重结晶3次，得到9-o-葵基小檗碱氟酸盐12.5g，产率86.2％。实施例5：9-o-十二烷基小檗碱盐酸盐的制备(1)100g盐酸小檗碱放入微波炉，以600w功率微波处理3min，得小檗红碱90.9g；(2)取10g(0.3mol)小檗红碱，加600mln,n-dmf，加60ml氯代正十二烷，放入微波炉，以500w功率微波反应4min，然后冷却到室温；(3)减压回收溶剂，固形物加6倍乙醚充分提取，再过滤，得晶体；(4)晶体用6倍乙醇重结晶3次，得到9-o-十二烷基小檗碱盐酸盐13.3g，产率86.3％。实施例6：9-o-烷基小檗碱盐缓释胶囊的制备取10克9-o-烷基小檗碱盐(药物)，加入聚乙烯吡咯烷酮10克(辅料)、羟甲基淀粉钠20克(辅料)、乳糖(辅料)40克，玉米淀粉20克，总量100克。药物混合均匀后，用95％乙醇20毫升制粒，干燥，过16目筛，即为缓释颗粒药物。胶囊包装，每粒0.5克。即为每粒含原药50mg的缓释胶囊。口服，即可作为抗hp药物。实施例7：9-o-烷基小檗碱盐片剂的制备取10克9-o-烷基小檗碱盐(药物)，加入球粒状乳糖(辅料)70克、硬脂酸镁(辅料)15克、微晶纤维素(辅料)5克，混合均匀后压制成为0.5克一片的片剂。即为每片含药50mg。口服，即可作为即可作为抗hp药物。实施例8：9-o-烷基小檗碱盐漂浮片的制备取10克9-o-烷基小檗碱盐(药物)，加入羟丙基甲基纤维素60g、十八醇20g、碳酸氢钠10克，pvp-k305克，硬脂酸镁5克，混合均匀后压制成为0.1克一片的片剂。即为每片含药50mg。口服，即可作为即可作为抗hp药物。实施例9：9-o-烷基小檗碱盐与小檗碱盐酸盐、8-烷基小檗碱盐、3-烷氧基药根碱盐在抗hp方面的对比①实验材料。试验药:9-乙氧基小檗碱盐、9-丁氧基小檗碱盐、9-己氧基小檗碱盐、9-辛氧基小檗碱盐、9-癸氧基小檗碱盐、9-十二烷氧基小檗碱盐，分别配制为1000ppm。对照药物:小檗碱盐酸盐、8-己基小檗碱盐、3-己氧基药根碱盐，分别配制为1000ppm。②菌种：大肠杆菌、幽门螺旋杆菌(hp，11637)、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌③培养基：mh肉汤，mh琼脂均为售品。④mic检测：按照倍半稀释法测定(中国中医基础医学杂志,2017,23(03):405-407+422)有关药物的mbc。用mh琼脂培养基取100ul浓度为3×108cfu·ml-1的幽门螺旋杆菌液，用一次性涂布器均匀涂于mh琼脂培养基上，将试验药倍比稀释成浓度为800、400、200、100、50、25、12.5、6.25、3.1、1.56、0.78、0.39、0.198、0.099ug·ml-1，涂布于mh琼脂培养基上，同时以空白培养基作为对照，置三气培养箱中(85％n2，10％co2，5％o2)培养48～72h，观察细菌生长情况，以细菌数量的最低药物浓度为最小杀菌浓度(mic)。实验结果见表1。表1药物抗菌活性对比结果(μg/ml)菌种大肠杆菌金黄色葡萄球菌枯草杆菌幽门螺旋杆菌(11637)小檗碱盐酸盐200400400509-o-乙基小檗碱盐5010020012.59-o-丁基小檗碱盐25501003.19-o-己基小檗碱盐25251000.789-o-辛基小檗碱盐25251000.399-o-葵基小檗碱盐50502000.789-o-十二烷基小檗碱盐1001008001.568-己基小檗碱盐0.781.562003.13-o-己基药根碱盐3.16.251006.25从上述实验结果可以看到，8-己基小檗碱抗大肠杆菌的活性明显高于小檗碱的其他衍生物；9-o-烷基小檗碱盐(尤其是9-o-辛基小檗碱盐)的抗hp活性明显优于小檗碱的其他衍生物；小檗碱衍生物对于枯草杆菌的抑制活性有所提高，但是均不太明显；小檗碱衍生物对金黄色葡萄球菌的抑制活性与大肠杆菌相差不大。以上所述仅是本发明的优选实施方式，本发明的保护范围并不仅局限于上述实施例。对于本
技术领域：
的技术人员来说，在不脱离本发明技术构思前提下所作任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围。当前第1页12