一种头孢米诺7β-甲氧基立体异构体的分离纯化方法与流程

一种头孢米诺7
β-甲氧基立体异构体的分离纯化方法
技术领域
1.本发明属于药物技术领域，具体涉及一种头孢米诺7β-甲氧基立体异构体的分离纯化方法。


背景技术：

2.头孢米诺是上世纪90年代进入中国市场的头霉素类。作为广谱抗菌药物，其对需氧革兰阴性菌、革兰阳性菌和脆弱拟杆菌等厌氧菌具有广谱抗菌作用，并对细菌产生的广谱β内酰胺酶和超广谱β内酰胺酶稳定，主要用于敏感菌所致的败血症、扁桃体炎、气管炎、肺炎、肺化脓症、肾盂肾炎、膀胱炎、胆囊炎、腹腔炎、盆腔炎、子宫附件炎、子宫内膜炎以及腹部手术后感染等。
3.由于合成头孢米诺（结构见图1）的工艺路线的不同，会产生与原研药不同的杂质7β-甲氧基头孢米诺酸（结构见图2），该杂质为头孢米诺7β-甲氧基立体异构体，根据仿制药注册申报要求，必须鉴别并提供该杂质的对照品，故本发明根据仿制药注册及工艺研究的需要，通过制备液相分离纯化制备了该7β-甲氧基立体异构体。
4.本发明以7-氨基-7-甲氧基-3-[(1-甲基-1h-四唑-5-基)硫甲基]-3-头孢烯-4-羧酸二苯甲酯为原料合成头孢米诺溶液，参考文献tetrahedron lett., 1982, 23，(29)：2977-2980。


技术实现要素：

[0005]
本发明目的在于提供一种头孢米诺7β-甲氧基立体异构体的分离纯化方法，以7-氨基-7-甲氧基-3-[(1-甲基-1h-四唑-5-基)硫甲基]-3-头孢烯-4-羧酸二苯甲酯为原料合成的头孢米诺反应液为基础，并通过制备液相纯化制备了头孢米诺7β-甲氧基立体异构体。
[0006]
一种头孢米诺异构体杂质的分离纯化方法，包括如下步骤：一种头孢米诺7β-甲氧基立体异构体的分离纯化方法，该分离纯化方法包括如下步骤：1）以7-氨基-7-甲氧基-3-[(1-甲基-1h-四唑-5-基)硫甲基]-3-头孢烯-4-羧酸二苯甲酯为原料合成头孢米诺溶液，利用旋转蒸发仪除去大部分溶剂，至粘稠状，得到含有头孢米诺7β-甲氧基立体异构体的粘稠状液体；2）用制备液相色谱对步骤1）所制得的含有头孢米诺7β-甲氧基立体异构体的粘稠状液体进行分离纯化，色谱柱为固定相十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为4%～8%的乙腈水，等度洗脱，流速为10～20ml/min，波长为190～400nm，将所述的含有头孢米诺7β-甲氧基立体异构体的粘稠状液体用流动相配制成质量浓度为5～15mg/ml的溶液，取该溶液5～15ml注入制备液相色谱进行分离纯化，根据色谱图收集头孢米诺7β-甲氧基立体异构体对应的洗脱流分，进行预冻后，放入真空冻干机中进行冻干，即得目标杂质物头孢米诺7β-甲氧基立体异构体。
[0007]
优选的，本发明所述的流动相4%～8%的乙腈水用质量百分含量为0.05%乙酸水和氨水调节ph至5.5。
[0008]
优选的，一种头孢米诺7β-甲氧基立体异构体的分离纯化方法，该分离纯化方法步骤为：1）以7-氨基-7-甲氧基-3-[(1-甲基-1h-四唑-5-基)硫甲基]-3-头孢烯-4-羧酸二苯甲酯为原料合成头孢米诺溶液，并利用旋转蒸发仪除去大部分溶剂，至粘稠状，得到含有头孢米诺7β-甲氧基立体异构体的粘稠状液体；2）制备液相的分离：用制备液相对步骤1）所制得的含有头孢米诺7β-甲氧基立体异构体的粘稠状液体进行分离纯化，色谱柱为固定相十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为6%乙腈水，等度洗脱，流速为15ml/min，波长为254nm，将所述的含有头孢米诺7β-甲氧基立体异构体的粘稠状液体用流动相配制成质量浓度为10mg/ml的溶液，取10ml注入制备液相进行分离纯化，并收集目标峰的流出液；3）按照步骤2）的方法将步骤1）所得的粘稠状液体全部分离纯化，并将全部目标峰的流出液合并得到溶液；4）将步骤3）所得溶液经过-20℃预冻后，直接放入真空冻干机中进行冻干，即得目标杂质物头孢米诺7β-甲氧基立体异构体。
[0009]
优选的，本发明一种头孢米诺7β-甲氧基立体异构体的分离纯化方法，该分离纯化方法步骤为：1）以7-氨基-7-甲氧基-3-[(1-甲基-1h-四唑-5-基)硫甲基]-3-头孢烯-4-羧酸二苯甲酯为原料合成头孢米诺的溶液，并利用旋转蒸发仪除去大部分溶剂，至粘稠状，得到含有头孢米诺7β-甲氧基立体异构体的粘稠状液体；2）制备液相的分离：用制备液相对步骤1）所制得的含有头孢米诺7β-甲氧基立体异构体的粘稠状液体进行分离纯化，色谱柱固定相十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为4%乙腈水，等度洗脱，流速为20ml/min，波长为254nm，将所述的含有头孢米诺7β-甲氧基立体异构体的粘稠状液体用流动相配制成质量浓度为10mg/ml的溶液，取10ml注入制备液相进行分离纯化，并收集目标峰的流出液；3）按照步骤2）的方法将步骤1）所得的粘稠状液体全部分离纯化，并将全部目标峰的流出液合并得到溶液；4）将步骤3所得溶液经过温度-20℃预冻后，直接放入真空冻干机中进行冻干，即得目标杂质物。
[0010]
优选的，本发明一种头孢米诺7β-甲氧基立体异构体的分离纯化方法，该分离纯化方法步骤为：1）以7-氨基-7-甲氧基-3-[(1-甲基-1h-四唑-5-基)硫甲基]-3-头孢烯-4-羧酸二苯甲酯为原料合成头孢米诺的溶液，并利用旋转蒸发仪除去大部分溶剂，至粘稠状，得到含有头孢米诺7β-甲氧基立体异构体的粘稠状液体；2）用制备液相对上述异构体的样品进行分离纯化，色谱柱为固定相十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为8%乙腈水，等度洗脱，流速为10ml/min，波长为254nm，将步骤1）中的粘稠状液体用流动相配制成10mg/ml的溶液，取10ml注入制备液相进行分离纯化，并收集目标峰的流出液；3）按照步骤2）的方法将步骤1）所得的粘稠状液体全部分离纯化，并将全部目标峰的流出液合并得到溶液；
4）将步骤3）所得溶液经过温度-20℃预冻后，直接放入真空冻干机中进行冻干，即得目标杂质物。
[0011]
本发明的技术优点在于：本发明以7-氨基-7-甲氧基-3-[(1-甲基-1h-四唑-5-基)硫甲基]-3-头孢烯-4-羧酸二苯甲酯为原料合成的头孢米诺反应液为基础，通过制备液相色谱分离纯化，经冷冻干燥得到头孢米诺异构体纯品。本发明方法步骤简单，工序节省，能够快速、简便得到杂质对照品，不需要危险，剧毒化学试剂，非常环保。本发明得到的头孢米诺纯品质量好、纯度高，液相纯度在98%以上。
附图说明
[0012]
图1为头孢米诺结构式。
[0013]
图2为7β-甲氧基头孢米诺酸结构式。
[0014]
图3为含有7β-甲氧基头孢米诺酸的粘稠状液体的分析色谱图。
[0015]
图4为7β-甲氧基头孢米诺酸制备液相色谱图。
[0016]
图5为实施案例1所得7β-甲氧基头孢米诺酸分析色谱图。
[0017]
图6为实施案例2所得7β-甲氧基头孢米诺酸分析色谱图。
[0018]
图7为实施案例3所得7β-甲氧基头孢米诺酸分析色谱图。
[0019]
图8为得到的目标纯品化合物7β-甲氧基头孢米诺酸的氢谱图。
[0020]
图9为得到的目标纯品化合物7β-甲氧基头孢米诺酸的碳谱图。
[0021]
图10为得到的目标纯品化合物7β-甲氧基头孢米诺酸的质谱图。
具体实施方式
[0022]
下面结合具体实施例对本发明的技术方案作进一步的描述，但本发明并不限于这些实施例。
[0023]
实施实例1一、实验材料制备液相：ht7100a分析液相：waters2996/2695制备色谱柱：rps-c18-50um（50um，15*460mm）分析色谱柱：ht-ods-p(5um，4.6*250 mm)实验材料：7-氨基-7-甲氧基-3-[(1-甲基-1h-四唑-5-基)硫甲基]-3-头孢烯-4-羧酸二苯甲酯。
[0024]
二、试验方法及结果1）以7-氨基-7-甲氧基-3-[(1-甲基-1h-四唑-5-基)硫甲基]-3-头孢烯-4-羧酸二苯甲酯为原料合成头孢米诺的溶液，利用旋转蒸发仪除去大部分溶剂，至粘稠状，得到含有头孢米诺7β-甲氧基立体异构体的粘稠状液体，其分析色谱图见图3，从图中可以看出该粘稠状液体中含有7β-甲氧基头孢米诺酸。
[0025]
2）制备液相的分离：用制备液相对上述含有7β-甲氧基头孢米诺酸的样品进行分离纯化，色谱柱为rps-c18-50um（50um，15*460mm），流动相为6%乙腈水（0.05%乙酸水，氨水
调节ph5.5），等度洗脱，流速为15ml/min，波长为254nm，将步骤1）中的粘稠状液体用流动相配制成10mg/ml的溶液，取10ml注入制备液相进行分离纯化，并收集目标峰的流出液，制备色谱图见图4。
[0026]
3）按照步骤2）的方法将步骤1）所得的粘稠液体全部分离纯化，并将全部目标峰的流出液合并。
[0027]
4）将步骤3）所得溶液进行-20℃预冻后，直接放入真空冻干机中进行冻干，即得目标杂质物，收率约为61.3%，hplc归一化纯度达到98.79%（见图5）。
[0028]
实施实例2一、实验材料制备液相：ht7100a分析液相：waters2996/2695制备色谱柱：rps-c18-50um（50um，15*460mm）分析色谱柱：ht-ods-p(5um，4.6*250 mm)实验材料：7-氨基-7-甲氧基-3-[(1-甲基-1h-四唑-5-基)硫甲基]-3-头孢烯-4-羧酸二苯甲酯。
[0029]
二、试验方法及结果1）同实施实例1，以7-氨基-7-甲氧基-3-[(1-甲基-1h-四唑-5-基)硫甲基]-3-头孢烯-4-羧酸二苯甲酯为原料合成头孢米诺的溶液，并利用旋转蒸发仪除去大部分溶剂，至粘稠状，得到含有头孢米诺7β-甲氧基立体异构体的粘稠状液体。
[0030]
2）用制备液相色谱对头孢米诺7β-甲氧基立体异构体的样品进行分离纯化，色谱柱为rps-c18-50um（50um，15*460mm），流动相为4%乙腈水（0.05%乙酸水，氨水调节ph5.5），等度洗脱，流速为20ml/min，波长为254nm，将步骤1）中的粘稠状液体用流动相配制成10mg/ml的溶液，取10ml注入制备液相进行分离纯化，并收集目标峰的流出液。
[0031]
3）按照步骤2）的方法将步骤1）所得的粘稠液体全部分离纯化，并将全部目标峰的流出液合并。
[0032]
4）将步骤3所得溶液进行-20℃预冻后，直接放入真空冻干机中进行冻干，即得目标杂质物，收率约为59.8%，hplc归一化纯度达到98.77%，见图6。
[0033]
实施实例3一、实验材料制备液相：ht7100a分析液相：waters2996/2695制备色谱柱：rps-c18-50um（50um，15*460mm）分析色谱柱：ht-ods-p(5um, 4.6x 250 mm)实验材料：7-氨基-7-甲氧基-3-[(1-甲基-1h-四唑-5-基)硫甲基]-3-头孢烯-4-羧酸二苯甲酯。
[0034]
二、试验方法及结果1）1）同实施实例1，以7-氨基-7-甲氧基-3-[(1-甲基-1h-四唑-5-基)硫甲基]-3-头孢烯-4-羧酸二苯甲酯为原料合成头孢米诺的溶液，利用旋转蒸发仪除去大部分溶剂，至粘稠状，得到含有头孢米诺7β-甲氧基立体异构体的粘稠状液体。
[0035]
2）用制备液相色谱对头孢米诺7β-甲氧基立体异构体的样品进行分离纯化，色谱柱为rps-c18-50um（50um，15*460mm），流动相为8%乙腈水（0.05%乙酸水，氨水调节ph5.5），等度洗脱，流速为10ml/min，波长为254nm，将步骤1中的粘稠状液体用流动相配制成10mg/ml的溶液，取10ml注入制备液相进行分离纯化，并收集目标峰的流出液。
[0036]
3）按照步骤2的方法将步骤1所得的粘稠液体全部分离纯化，并将全部目标峰的流出液合并。
[0037]
4）将步骤3所得溶液进行-20℃预冻后，直接放入真空冻干机中进行冻干，即得目标杂质物，收率约为60.1%，hplc归一化纯度达到97.97%，见图7。
[0038]
经结构鉴定，得到的纯品化合物确定为目标物7β-甲氧基头孢米诺酸，其结构鉴定数据下：1h-nmr（400mz，d2o）:δ5.15(s，1h，ch)，4.32-4.29（dd，1h，chn），4.06（s，3h，nh），4.00-3.98（dd，2h，ch2），3.78-3.47（dd，2h，ch2），3.54（s，3h，ch3），3.52（d，2h，ch2），3.24-3.15（dq，2h，ch2）。见图8。
[0039]
13
c-nmr（400mz，d2o）：δ173.1，172.4，167.2，159.7，153.4，130.5，119.1，92.3，63.2，53.5，53.0，36.3，34.9，34.1，32.9，26.4。见图9。
[0040] esi-ms（m/z）：558.03[m+k]+。见图10。
[0041]
以上所述的仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明创造构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。