1.一种酶法生产左旋多巴的转化及提取方法,其特征在于该方法所述的酪氨酸酚裂解酶的制备按如下步骤进行:
a.破壁:发酵液离心收集大肠杆菌,用发酵液体积10-20%的0.2m的磷酸缓冲液(ph7.2)重悬菌体,通过高压均质机进行破壁处理;
b.微滤:将a步骤获得的破壁液过陶瓷膜,陶瓷膜孔径为50-200nm,收集滤液;
c.超滤:将滤液过超滤膜,超滤膜截留分子量为100-150kd,收集截留液;
d.脱色:将c步骤获取的截留液经脱色树脂处理,流速为0.5-5bv,控制流出液t450大于95%,收集流出液,获得酪氨酸酚裂解酶。
2.根据权利要求1所述的酪氨酸酚裂解酶的制备,其特征在于a步骤所述的高压均质机破壁压力为500-1000bar,处理时间为10-40min。
3.根据权利要求1所述的酪氨酸酚裂解酶的制备,其特征在于c步骤所述的脱色树脂为离子交换型脱色树脂、大孔吸附型脱色树脂中的一种或者两种的树脂的混合。
4.一种酶法生产左旋多巴的转化及提取方法,其特征在于该方法所述的酶转化生产左旋多巴按照如下步骤进行:在反应体系中加入底料,按照3000-10000u/l加入酪氨酸酚裂解酶;每10-40min,每升转化液补加邻苯二酚1-5g、丙酮酸钠1-5g;每2-4h,每升转化液补加氯化铵5-30g;整个转化过程中通小量氮气保持正压,全程控制ph值为8.0-8.5,100-200rpm缓慢搅拌,控制温度为15-25℃,控制邻苯二酚残留浓度不超过5g/l。
5.根据权利要求4所述的酶转化生产左旋多巴,其特征在于反应体系中的底料为:邻苯二酚5-15g/l、丙酮酸钠5-15g/l、氯化铵30-50g/l、edta0.5-5g/l、亚硫酸钠0.5-5g/l、维生素c0.1-2g/l、plp0.1-0.2g/l。
6.根据权利要求4所述的酶转化生产左旋多巴,转化液中左旋多巴的终产量为120-150g/l,反应结束时间为连续两次测得邻苯二酚浓度降低至1g/l以下。
7.一种酶法生产左旋多巴的转化及提取方法,其特征在于该方法所述的左旋多巴的提取按照如下步骤进行:
a.用30-50%的h2so4调整转化液ph至3.0-4.0,4-8℃静置8-16h;
b.将转化液经5000-10000rpm离心1-5min,收集沉淀;
c.将沉淀用5-10倍质量的纯水打浆后,抽滤,重复此步骤2-5次;
d.抽干后用0.1-0.5倍质量的乙醇淋洗晶体1-5次,抽滤至干;
e.晶体置于40-80℃干燥1-4h,获得左旋多巴产品。
8.根据权利要求7所述的左旋多巴的提取,该方法适用于不同菌种来源的酪氨酸酚裂解酶、酪氨酸酶、转氨酶、酰基转移酶生产左旋多巴的提取过程。