一种三文鱼寡肽及其制备方法与流程

本发明涉及活性物质提取的
技术领域：
，尤其涉及一种源于三文鱼寡肽及其制备方法。
背景技术：
：三文鱼学名鲑鱼，又名撒蒙鱼或萨门鱼，是世界著名经济鱼类之一。三文鱼不仅富含不饱和脂肪酸，包含18种氨基酸（包括8种必需氨基酸），蛋白质含量明显高于其他鱼类，还含有ca，p，mg等多种矿质元素，被誉为“水中珍品”。市场上的三文鱼通常以新鲜或冷冻的切片方式出售，加工过程中产生大量的下脚料。三文鱼油脂含量高、色泽重、腥味大，给三文鱼下脚料的综合利用带来困难。本发明为解决这一问题，充分利用这一质优的资源,使三文鱼下脚料中的蛋白质得到充分地提取,主要的办法就是将其水解。目前,水解蛋白质的方法有酸法、碱法和酶水解等方法。与酸法或碱法相比,酶水解效率高,条件温和,在保留营养成分方面具有明显的优点。将鱼蛋白降解成小分子寡肽及氨基酸，有利于人体的吸收利用。据专家介绍，分子量小的寡肽可以比多肽具有更高皮肤渗透性，更容易被人体皮肤吸收，同时由于分子量小到了一定程度，生物活性就发生了质的飞跃。肽分子量越小，“氨基酸链”越短，越易被人体吸收和利用。传统的酶水解方法，将原料进行简单的处理后直接进行酶解，而且选用的原料大多是完整的鱼肉，经过整理清洗后用于制备寡肽产品。但是下脚料中的有鱼骨，鱼头，鱼内脏等，大约占了鱼的40％左右。这些下脚料中不仅含有大量的蛋白质，还含有脂肪和多种生物活性物质，如果将鱼肉单独分离浪费人力物力，所以通常目前无法分离的下脚料一般加工成饲料，或是当做废弃物处理，不仅造成了资源浪费，还破坏生态环境。因此鱼下脚料的开发和利用就显得尤为重要。目前国内鱼产品制备多肽产品工艺大体如下:原料-预处理捣碎匀浆-加酶水解-灭酶-离心-上清液抽滤调节值-吸附干燥-成品。这些工艺存在的问题是鱼资源没有得到充分的利用,其采用原料均是用鱼肉,下脚料比较多,浪费比较大,纯度不高而且能耗比较大。下脚料的全利用就显得尤为重要。并且在酶解过程中如何提高酶的水解效果也是目前研究的领域。技术实现要素：为了充分利用三文鱼下脚料，解决下脚料难以处理的问题，本发明提供了一种源于三文鱼寡肽及其制备方法。本发明除了对三文鱼进行酶的水解，还针对三文鱼的特点引入了微生物发酵方法处理三文鱼下脚料，使得不需三文鱼对下脚料过度处理就能得以利用，节省成本，提高了利用率，并且在酶解过程中提高了酶的水解效果。为了实现上述发明目的，本发明提供了一种源于三文鱼寡肽的制备方法，其特征在于制备该种寡肽的方法包括以下步骤:（1）微生物预处理：取适量三文鱼下脚料加入少量水剪碎，用搅碎机搅碎成糜状，取少量糜状样品，加入蒸馏水调节浓度，固液比为1:1，将样品进行震荡，使样品和水充分混合；（2）水解：将三文鱼下脚料微生物预处理基料加蒸馏水调节基料的浓度；（3）第一次酶解：将步骤（2）的基料加入胃蛋白酶，酶解，灭酶，冷却；（4）第二次酶解：将步骤（3）的酶解产物加入胰蛋白酶，酶解，灭酶；（5）离心：将第（4）步的酶解产物进行离心处理，得到上清液，调节ph值；（6）吸附干燥：将第（5）步的离心上清液进行活性炭吸附干燥，得到成品。优选地，加入缓冲剂，kh2po4、k2hpo4和caco3的混合物，缓冲剂的浓度为35g/l，缓冲剂的比例为kh2po4:k2hpo4:caco3：1.3:1.5:1，然后调节初始ph值至6.0-6.5；优选地，将样品进行加热灭菌处理，加入发酵菌种，其中环状芽孢杆菌：保藏号cgmccno.1.2411，嗜酸乳杆菌：保藏号：cgmccn0.1.2919优选地，发酵菌种为混合和菌种时，菌种的浓度为160g/l，环状芽孢杆菌与嗜酸乳杆菌的比例为4:2。优选地，将样品放入培养箱中，发酵温度为35-38度，发酵时间为40-45小时。优选地，最后加入活化后的菌种进行发酵处理，得到三文鱼下脚料微生物预处理基料；优选地，将三文鱼下脚料微生物预处理基料加蒸馏水调节基料的浓度，基料浓度调整至4.0-4.5%。优选地，将上述基料的ph值调节到6.9-7.2，加入胃蛋白酶，胃蛋白酶的浓度为3-5%，温度酶解温度为45-48度，酶解时间为1-1.5小时，然后进行灭酶处理，灭菌后冷却。优选地，将上述基料的ph值调节到1.5-3，加入胃蛋白酶，胃蛋白酶的浓度为3-5%，温度酶解温度为45-48度，酶解时间为1-1.5小时，然后进行灭酶处理，灭菌后冷却。优选地，将上述酶解产物的ph值调节到6.5-7.0，加入胰蛋白酶，胰蛋白酶的浓度为4-6%，酶解温度为48-52度，酶解时间为2-3小时，酶解后灭酶。优选地，将上述酶解产物的ph值调节到7.5-8.0，加入胰蛋白酶，胰蛋白酶的浓度为4-6%，酶解温度为35-40度，酶解时间为2-3小时，酶解后灭酶。优选地，将上述的酶解产物在4000～5000r/min条件下离心10～20分钟，得到上清液，调节上清液ph值到3-4；优选地，将离心上清液进行活性炭吸附干燥，上清液质量与活性炭颗粒的体积比为10-20:1，吸附时间10-20分钟，吸附后过滤即得三文鱼寡肽产品。本发明的有益效果是：提供了一种源于三文鱼寡肽及其制备方法，充分利用三文鱼下脚料，解决下脚料难以处理的问题。针对三文鱼的特点引入了微生物发酵方法处理三文鱼下脚料，使得不需对三文鱼下脚料过度处理就能得以利用，节省成本，提高了利用率。附图说明图1为本发明试验例1的基料浓度对水解度的影响；图2为本发明试验例2的酶用量对水解度的影响；图3为本发明试验例3的ph对于水解度的影响；图4为本发明试验例4的温度对水解度的影响；图5为本发明试验例6的酶用量对水解度的影响；图6为本发明试验例7的ph对于水解度的影响；图7为本发明试验例8的温度对水解度的影响。图8为本发明试验例10的基料浓度对水解度的影响；图9为本发明实施例11的酶用量对水解度的影响；图10为本发明试验例12的ph对于水解度的影响；图11为本发明试验例13的温度对水解度的影响；图12为本发明试验例15的酶用量对水解度的影响；图13为本发明试验例16的ph对于水解度的影响；图14为本发明试验例17的温度对水解度的影响。具体实施方式为能清楚说明本方案的技术特点，下面通过具体实施方式，对本方案进行阐述。蛋白酶能在温和的条件下水解食物类蛋白,不会造成大的环境污染，蛋白酶水解蛋白质也不会造成氨基酸构型的变化,较好的保存了氨基酸原有的功效，蛋白酶水解可以实现定位水解,易于实现水解进程的控制,从而使肽类的应用性和功能性变广,满足市场的需求。但是酶解蛋白质并不是一个简单的工艺过程,它涉及到很多步骤。第一步就是选合适的酶,因为酶不仅影响反应的速率、产物的得率,而且还直接影响到产品的风味、理化特性和生理活性,选择依据不仅与酶自身的作用位点的专一性有关,还与底物以及工艺条件有很大关系。蛋白质控制酶解与操作条件有很大关系,底物浓度、加酶量、水解时间、温度都影响着水解进程,而水解度就是蛋白质控制酶解的最直观指标。水解度是影响肽质量和产量的重要因素,水解度控制着肽段大小、游离氨基酸的相对含量。水解度小,则水解不充分,活性氨基酸残基不能断裂,相应的活性也就无法显现，水解过于完全,则短肽链进一步水解为游离氨基酸,一些具有活性的短肽也被水解,而游离氨基酸的生理活性不如短肽,从而导致活性明显降低,因此在合适的时间终止酶解反应来控制水解度是非常有必要的。1、氮利用率计算氮利用率（%）=酶解液中蛋白量/原料中总蛋白量x100%2、水解度计算方法dh（%）=水解中游离氨基氮含量-水解前游离氨基氮x100%原料中总氮含量-原料中非蛋白氮对比例1本发明实施例提供了一种源于三文鱼寡肽的制备方法，具体实施步骤如下：（1）预处理：取适量三文鱼下脚料加入少量水剪碎，用搅碎机搅碎成糜状，取少量糜状样品，加入蒸馏水调节浓度，固液比为1:1，将样品进行震荡，使样品和水充分混合。（2）水解：将三文鱼下脚料微生物预处理基料加蒸馏水调节基料的浓度，基料浓度调整至4.0%。（3）第一次酶解：将上述基料的ph值调节到6.9，加入胃蛋白酶，胃蛋白酶的浓度为3%，温度酶解温度为45度，酶解时间为1时，然后进行灭酶处理，灭菌后冷却。（4）第二次酶解：将上述酶解产物的ph值调节到6.5，加入胰蛋白酶，胰蛋白酶的浓度为4%，酶解温度为48度，酶解时间为2小时，酶解后灭酶。（5）离心：将上述的酶解产物在4000r/min条件下离心10分钟，得到上清液，调节上清液ph值到3；（6）吸附干燥：将第（5）步的离心上清液进行活性炭吸附干燥，上清液质量与活性炭颗粒的体积比为10:1，吸附时间10分钟，吸附后过滤即得三文鱼寡肽产品。实施例1本发明实施例提供了一种源于三文鱼寡肽的制备方法，具体实施步骤如下：（1）预处理：取适量三文鱼下脚料加入少量水剪碎，用搅碎机搅碎成糜状，取少量糜状样品，加入蒸馏水调节浓度，固液比为1:1，将样品进行震荡，使样品和水充分混合。然后加入缓冲剂，kh2po4、k2hpo4和caco3的混合物，缓冲剂的浓度为35g/l，缓冲剂的比例为kh2po4:k2hpo4:caco3：1.3:1.5:1，然后调节初始ph值至6.0。将上述样品进行加热灭菌处理，加入发酵菌种，菌种的浓度为160g/l；发酵菌种为环状芽孢杆菌，其保藏号为：cgmccno.1.2411；将上述样品放入培养箱中，发酵温度为35度，发酵时间为40小时。选择最后加入活化后的菌种进行发酵处理，得到三文鱼下脚料微生物预处理基料；（2）水解：将三文鱼下脚料微生物预处理基料加蒸馏水调节基料的浓度，基料浓度调整至4.0%。（3）第一次酶解：将上述基料的ph值调节到6.9，加入胃蛋白酶，胃蛋白酶的浓度为3%，温度酶解温度为45度，酶解时间为1时，然后进行灭酶处理，灭菌后冷却。（4）第二次酶解：将上述酶解产物的ph值调节到6.5，加入胰蛋白酶，胰蛋白酶的浓度为4%，酶解温度为48度，酶解时间为2小时，酶解后灭酶。（5）离心：将上述的酶解产物在4000r/min条件下离心10分钟，得到上清液，调节上清液ph值到3；（6）吸附干燥：将第（5）步的离心上清液进行活性炭吸附干燥，上清液质量与活性炭颗粒的体积比为10:1，吸附时间10分钟，吸附后过滤即得三文鱼寡肽产品。实施例2本发明实施例提供了一种源于三文鱼寡肽的制备方法，具体实施步骤,参照实施例1，但与实施例1不同之处在于，发酵菌种为嗜酸乳杆菌，保藏号为cgmccn0.1.2919；菌种的浓度为160g/l。实施例3本发明实施例提供了一种源于三文鱼寡肽的制备方法，具体实施步骤参照实施例1，但与实施例1不同之处在于，发酵菌种为比例为4:2的环状芽孢杆菌与嗜酸乳杆菌混合菌种，菌种的浓度为160g/l；其中，环状芽孢杆菌：保藏号cgmccno.1.2411，嗜酸乳杆菌：保藏号：n0.1.2919；实施例4本发明实施例提供了一种源于三文鱼寡肽的制备方法，具体实施步骤参照实施例3，但与实施例3不同之处在于，将上述样品放入培养箱中，发酵温度为37度，发酵时间为43小时。实施例5本发明实施例提供了一种源于三文鱼寡肽的制备方法，具体实施步骤参照实施例3，但与实施例3不同之处在于，将上述样品放入培养箱中，发酵温度为38度，发酵时间为45小时。通过以上对比例1和实施例1-5的比较得出如下结果：表1不同前处理方式对酶解效果的影响编号对比例1实施例1实施例2实施例3实施例4实施例5菌种未处理环状芽孢杆菌嗜酸乳杆菌混合菌种混合菌种混合菌种ph值-6.06.06.06.26.5发酵温度（度）-3535353738发酵时间（小时）-4040404345氮利用率%828586909289dh（%）111312151615从表1不同前处理方式对酶解效果的影响可以看出，经过微生物发酵处理的三文鱼下脚料在酶解过程中氮利用率和水解度都要好于未处理过的原料。其中采用混合菌种的要好于单一菌种。对ph值和发酵温度及时间的调整对酶解效果也有明显影响。实施例6本发明实施例提供了一种源于三文鱼寡肽的制备方法，具体实施步骤如下：（1）预处理：取适量三文鱼下脚料加入少量水剪碎，用搅碎机搅碎成糜状，取少量糜状样品，加入蒸馏水调节浓度，固液比为1:1，将样品进行震荡，使样品和水充分混合。然后加入缓冲剂，kh2po4、k2hpo4和caco3的混合物，缓冲剂的浓度为35g/l，缓冲剂的比例为kh2po4:k2hpo4:caco3：1.3:1.5:1，然后调节初始ph值至6.0。将上述样品进行加热灭菌处理，加入发酵菌种，发酵菌种为嗜酸乳杆菌，保藏号为cgmccn0.1.2919；菌种的浓度为160g/l；将上述样品放入培养箱中，发酵温度为37度，发酵时间为43小时。选择最后加入活化后的菌种进行发酵处理，得到三文鱼下脚料微生物预处理基料；（2）水解：将三文鱼下脚料微生物预处理基料加蒸馏水调节基料的浓度，基料浓度调整至4.0%。（3）第一次酶解：将上述基料的ph值调节到2.5，加入胃蛋白酶，胃蛋白酶的浓度为3%，温度酶解温度为45度，酶解时间为1时，然后进行灭酶处理，灭菌后冷却。（4）第二次酶解：将上述酶解产物的ph值调节到7.9，加入胰蛋白酶，胰蛋白酶的浓度为4%，酶解温度为37度，酶解时间为2小时，酶解后灭酶。（5）离心：将上述的酶解产物在4000r/min条件下离心10分钟，得到上清液，调节上清液ph值到3；（6）吸附干燥：将第（5）步的离心上清液进行活性炭吸附干燥，上清液质量与活性炭颗粒的体积比为10:1，吸附时间10分钟，吸附后过滤即得三文鱼寡肽产品。实施例7本发明实施例提供了一种源于三文鱼寡肽的制备方法，具体实施步骤,参照实施例6，但与实施例6不同之处在于，发酵菌种为嗜酸乳杆菌，保藏号为cgmccn0.1.2919；菌种的浓度为160g/l。实施例8本发明实施例提供了一种源于三文鱼寡肽的制备方法，具体实施步骤参照实施例6，但与实施例6不同之处在于，发酵菌种为比例为4:2的环状芽孢杆菌与嗜酸乳杆菌混合菌种，菌种的浓度为160g/l；其中，环状芽孢杆菌：保藏号cgmccno.1.2411，嗜酸乳杆菌：保藏号：n0.1.2919；实施例9本发明实施例提供了一种源于三文鱼寡肽的制备方法，具体实施步骤参照实施例8，但与实施例8不同之处在于，将上述样品放入培养箱中，发酵温度为35度，发酵时间为40小时。实施例10本发明实施例提供了一种源于三文鱼寡肽的制备方法，具体实施步骤参照实施例8，但与实施例8不同之处在于，将上述样品放入培养箱中，发酵温度为38度，发酵时间为45小时。通过以上对比例1和实施例6-10的比较得出如下结果：表2不同前处理方式对酶解效果的影响编号对比例1实施例6实施例7实施例8实施例9实施例10菌种未处理环状芽孢杆菌嗜酸乳杆菌混合菌种混合菌种混合菌种ph值-6.06.06.06.26.5发酵温度（度）-3737373738发酵时间（小时）-4343434345氮利用率%828688959091dh（%）111414171515从表2不同前处理方式对酶解效果的影响可以看出，经过微生物发酵处理的三文鱼下脚料在酶解过程中氮利用率和水解度都要好于未处理过的原料。其中采用混合菌种的要好于单一菌种。对ph值和发酵温度及时间的调整对酶解效果也有明显影响。对比例2本发明实施例提供了一种源于三文鱼寡肽的制备方法，具体实施步骤如下：1）预处理：取适量三文鱼下脚料加入少量水剪碎，用搅碎机搅碎成糜状，取少量糜状样品，加入蒸馏水调节浓度，固液比为1:1，将样品进行震荡，使样品和水充分混合。然后加入缓冲剂，kh2po4、k2hpo4和caco3的混合物，缓冲剂的浓度为35g/l，缓冲剂的比例为kh2po4:k2hpo4:caco3：1.3:1.5:1，然后调节初始6.2。将上述样品进行加热灭菌处理，加入发酵菌种，菌种的浓度为160g/l；其中，发酵菌种为比例为4:2的环状芽孢杆菌与嗜酸乳杆菌的混合菌种；环状芽孢杆菌：保藏号cgmccno.1.2411，嗜酸乳杆菌：保藏号：n0.1.2919。将上述样品放入培养箱中，发酵温度为37度，发酵时间为43小时。选择最后加入活化后的菌种进行发酵处理，得到三文鱼下脚料微生物预处理基料；（2）水解：将三文鱼下脚料微生物预处理基料加蒸馏水调节基料的浓度，基料浓度调整至4.0%。（3）第一次酶解：将上述基料的ph值调节到6.9，加入木瓜蛋白酶，对比蛋白酶的浓度为3%，温度酶解温度为45度，酶解时间为1时，然后进行灭酶处理，灭菌后冷却。（4）第二次酶解：将上述酶解产物的ph值调节到6.5，加入胰蛋白酶，胰蛋白酶的浓度为4%，酶解温度为48度，酶解时间为2小时，酶解后灭酶。（5）离心：将上述的酶解产物在4000r/min条件下离心10分钟，得到上清液，调节上清液ph值到3；（6）吸附干燥：将第（5）步的离心上清液进行活性炭吸附干燥，上清液质量与活性炭颗粒的体积比为10:1，吸附时间10分钟，吸附后过滤即得三文鱼寡肽产品。对比例3第一次酶解加入蛋白酶为风味蛋白酶。制备方法其它步骤同对比例2。对比例4第一次酶解加入蛋白酶为中性蛋白酶。制备方法其它步骤同对比例2。实施例11本发明实施例提供了一种源于三文鱼寡肽的制备方法，具体实施步骤如下：1）预处理：取适量三文鱼下脚料加入少量水剪碎，用搅碎机搅碎成糜状，取少量糜状样品，加入蒸馏水调节浓度，固液比为1:1，将样品进行震荡，使样品和水充分混合；然后加入缓冲剂，kh2po4、k2hpo4和caco3的混合物，缓冲剂的浓度为35g/l，缓冲剂的比例为kh2po4:k2hpo4:caco3：1.3:1.5:1，然后调节初始6.2；将上述样品进行加热灭菌处理，加入发酵菌种，菌种的浓度为160g/l；其中，发酵菌种为比例为4:2的环状芽孢杆菌与嗜酸乳杆菌的混合菌种；环状芽孢杆菌：保藏号cgmccno.1.2411，嗜酸乳杆菌：保藏号：n0.1.2919；；将上述样品放入培养箱中，发酵温度为37度，发酵时间为43小时；选择最后加入活化后的菌种进行发酵处理，得到三文鱼下脚料微生物预处理基料。（2）水解：将三文鱼下脚料微生物预处理基料加蒸馏水调节基料的浓度，基料浓度调整至4.0%。（3）第一次酶解：将上述基料的ph值调节到6.9，加入胃蛋白酶，胃蛋白酶的浓度为3%，温度酶解温度为45度，酶解时间为1时，然后进行灭酶处理，灭菌后冷却。（4）第二次酶解：将上述酶解产物的ph值调节到6.5，加入胰蛋白酶，胰蛋白酶的浓度为4%，酶解温度为48度，酶解时间为2小时，酶解后灭酶。（5）离心：将上述的酶解产物在4000r/min条件下离心10分钟，得到上清液，调节上清液ph值到3；（6）吸附干燥：将第（5）步的离心上清液进行活性炭吸附干燥，上清液质量与活性炭颗粒的体积比为10:1，吸附时间10分钟，吸附后过滤即得三文鱼寡肽产品。通过以上对比例2-4和实施例6的比较得出如下结果：表3第一次蛋白酶水解条件及影响名称基料浓度%酶的用量%ph值温度（度）时间（小时）氮利用率（%）dh（%）对比例2436.94517612实施例11436.94519216对比例3436.94516310对比例4436.94517211从表3第一次蛋白酶水解条件及影响可以看出，胃蛋白酶的水解效果较为突出，效果最好。对比例5第一次酶解加入蛋白酶为木瓜蛋白酶。制备方法其它步骤同对比例2，但不同之处在于，调节ph值为6，酶解温度为55℃。对比例6第一次酶解加入蛋白酶为风味蛋白酶。制备方法其它步骤同对比例2，但不同之处在于，调节ph值为6.5，酶解温度为53℃。对比例7第一次酶解加入蛋白酶为中性蛋白酶。制备方法其它步骤同对比例2，但不同之处在于，调节ph值为7，酶解温度为50℃。通过以上对比例5-7和实施例8的比较得出如下结果：表4第一次蛋白酶水解条件及影响名称基料浓度%酶的用量%ph值温度（度）时间（小时）氮利用率（%）dh（%）对比例54365518012实施例8432.54519517对比例6436.55316811对比例74375017512从表4第一次蛋白酶水解条件及影响可以看出，胃蛋白酶的水解效果较为突出，效果最好。对比例8本发明实施例提供了一种源于三文鱼寡肽的制备方法，具体实施步骤如下：1）预处理：取适量三文鱼下脚料加入少量水剪碎，用搅碎机搅碎成糜状，取少量糜状样品，加入蒸馏水调节浓度，固液比为1:1，将样品进行震荡，使样品和水充分混合。然后加入缓冲剂，kh2po4、k2hpo4和caco3的混合物，缓冲剂的浓度为35g/l，缓冲剂的比例为kh2po4:k2hpo4:caco3：1.3:1.5:1，然后调节初始6.2。将上述样品进行加热灭菌处理，加入发酵菌种，菌种的浓度为160g/l；其中，发酵菌种为比例为4:2的环状芽孢杆菌与嗜酸乳杆菌的混合菌种；环状芽孢杆菌：保藏号cgmccno.8864，嗜酸乳杆菌：保藏号：cgmccn0.2122；将上述样品放入培养箱中，发酵温度为37度，发酵时间为43小时。选择最后加入活化后的菌种进行发酵处理，得到三文鱼下脚料微生物预处理基料；（2）水解：将三文鱼下脚料微生物预处理基料加蒸馏水调节基料的浓度，基料浓度调整至4.2%。（3）第一次酶解：将上述基料的ph值调节到7，加入胃蛋白酶，胃蛋白酶的浓度为4.5%，温度酶解温度为47度，酶解时间为1时，然后进行灭酶处理，灭菌后冷却。（4）第二次酶解：将上述酶解产物的ph值调节到6.5，加入木瓜蛋白酶，胰蛋白酶的浓度为4%，酶解温度为48度，酶解时间为2小时，酶解后灭酶。（5）离心：将上述的酶解产物在4000r/min条件下离心10分钟，得到上清液，调节上清液ph值到3；（6）吸附干燥：将第（5）步的离心上清液进行活性炭吸附干燥，上清液质量与活性炭颗粒的体积比为10:1，吸附时间10分钟，吸附后过滤即得三文鱼寡肽产品。对比例9制备方法同对比例6，区别仅在于：第二次酶解加入蛋白酶为风味蛋白酶。对比例10制备方法同对比例6，区别仅在于：第一次酶解加入蛋白酶为中性蛋白酶。实施例12本发明实施例提供了一种源于三文鱼寡肽的制备方法，具体实施步骤如下：1）预处理：取适量三文鱼下脚料加入少量水剪碎，用搅碎机搅碎成糜状，取少量糜状样品，加入蒸馏水调节浓度，固液比为1:1，将样品进行震荡，使样品和水充分混合。然后加入缓冲剂，kh2po4、k2hpo4和caco3的混合物，缓冲剂的浓度为35g/l，缓冲剂的比例为kh2po4:k2hpo4:caco3：1.3:1.5:1，然后调节初始6.2。将上述样品进行加热灭菌处理，加入发酵菌种，菌种的浓度为160g/l；其中，发酵菌种为比例为4:2的环状芽孢杆菌与嗜酸乳杆菌的混合菌种；环状芽孢杆菌：保藏号cgmccno.8864，嗜酸乳杆菌：保藏号：cgmccn0.2122；将上述样品放入培养箱中，发酵温度为37度，发酵时间为43小时。选择最后加入活化后的菌种进行发酵处理，得到三文鱼下脚料微生物预处理基料；（2）水解：将三文鱼下脚料微生物预处理基料加蒸馏水调节基料的浓度，基料浓度调整至4.0%。（3）第一次酶解：将上述基料的ph值调节到7，加入胃蛋白酶，胃蛋白酶的浓度为4.5%，温度酶解温度为47度，酶解时间为1时，然后进行灭酶处理，灭菌后冷却。（4）第二次酶解：将上述酶解产物的ph值调节到6.5，加入胰蛋白酶，胰蛋白酶的浓度为4%，酶解温度为48度，酶解时间为2小时，酶解后灭酶。（5）离心：将上述的酶解产物在4000r/min条件下离心10分钟，得到上清液，调节上清液ph值到3；（6）吸附干燥：将第（5）步的离心上清液进行活性炭吸附干燥，上清液质量与活性炭颗粒的体积比为10:1，吸附时间10分钟，吸附后过滤即得三文鱼寡肽产品。通过以上对比例和实施例的比较得出如下结果：表5第二次蛋白酶水解条件及影响名称酶的用量%ph值温度（度）时间（小时）氮利用率（%）dh（%）对比例846.54827210实施例1246.54828915对比例946.54827513对比例1046.5482808从表5第二次蛋白酶水解条件及影响可以看出，胰蛋白酶的水解效果较为突出，效果最好。对比例11第二次酶解加入蛋白酶为木瓜蛋白酶。制备方法其它步骤同对实施例8，但不同之处在于，调节ph值为6，酶解温度为55℃。对比例12第二次酶解加入蛋白酶为风味蛋白酶。制备方法其它步骤同对实施例8，但不同之处在于，调节ph值为6.5，酶解温度为53℃。对比例13第二次酶解加入蛋白酶为中性蛋白酶。制备方法其它步骤同对实施例8，但不同之处在于，调节ph值为7，酶解温度为50℃。通过以上对比例和实施例的比较得出如下结果：表6第二次蛋白酶水解条件及影响名称酶的用量%ph值温度（度）时间（小时）氮利用率（%）dh（%）对比例11465527812实施例847.93729517对比例1246.55327914对比例13475028210从表6第二次蛋白酶水解条件及影响可以看出，胰蛋白酶的水解效果较为突出，效果最好。试验例1本试验例1实际包含了本发明的6个实施例；6个实施例分别提供了寡肽的6种制备方法，其具体步骤均与实施例4基本一致；不同之处仅在于部分参数的不同，具体的，6个实施例的第一次酶解条件均为：酶的用量：3%，ph值：6.9，温度：45度，时间：1小时；6个实施例的基料浓度分别为：4.0%、4.1%、4.2%、4.3%、4.4%、4.5%。通过试验例1包含的6个实施例，来考察第一次酶解时基料浓度对水解度的影响；试验结果如图1所示。从图1中可以看出，随着基料浓度的升高，水解度逐渐升高，当达到一定程度时开始下降。当基料浓度为4.2%时，水解的程度最高。当基料浓度为4.0%和4.5%时，水解的程度相对稍低，但依然能够使得胃蛋白酶水解程度满足要求。试验例2本试验例2实际包含了本发明的5个实施例；5个实施例分别提供了寡肽的5种制备方法；其具体步骤均与实施例4基本一致；不同之处仅在于部分参数的不同，具体的，5个实施例的第一次酶解条件均为：基料浓度：4.2%，ph值：6.9，温度45度，时间1小时；5个实施例第一次酶解时的酶用量分别为：3%，3.5%，4%，4.5%，5%。通过试验例2包含的5个实施例来考察第一次酶解的酶用量对水解度的影响；试验结果如图2所示。图2中表明，随着酶的用量，水解度逐渐上升，超过4%时，增加酶的用量，水解度没有明显变化。当酶用量为3.0%和4%时，水解的程度相对稍低，但依然能够使得胃蛋白酶水解程度满足要求。试验例3本试验例3实际包含了本发明的4个实施例；4个实施例分别提供了寡肽的4种制备方法；其具体步骤均与实施例4基本一致；不同之处仅在于部分参数的不同，具体的，4个实施例的第一次酶解条件均为：基料浓度：4.2%，酶用量：4.5%，温度45度，时间1小时；4个实施例第一次酶解时，对基料调节的ph值分别为：6.9，7.0，7.1，7.2。通过试验例3中的4个实施例来考察，第一次酶解时对基料调节ph对于水解度的影响；试验结果如图3所示；从图3中可以看出，ph值对水解度有重要影响，当ph为7.0时，水解程度最高。当ph值为6.9和7.2时，水解的程度相对稍低，但依然能够使得胃蛋白酶水解程度满足要求。试验例4本试验例4实际包含了本发明的4个实施例，4个实施例分别提供了寡肽的4种制备方法；其具体步骤均与实施例4基本一致；不同之处仅在于部分参数的不同，具体的，4个实施例的第一次酶解条件均为：基料浓度：4.2%，酶用量：4.5%，ph值：7.0，时间1小时；4个实施例第一次酶解时酶解温度分别为：45度，46度，47度，48度。通过试验例4的4个实施例来考察第一次酶解的酶解温度对水解度的影响；试验结果如图4所示。从图4中可以看出，水解温度对水解程度也有重要影响，水解温度为46度时，水解的效果最好。当酶解温度为45度和48度时，水解的程度相对稍低，但依然能够使得胃蛋白酶水解程度满足要求。试验例5制备方法同实施例4；区别在于：酶解条件为：基料浓度：4.2%，酶用量：4.5%，ph值：7.0；考察第一次酶解时间为：1小时，1.5小时。试验例6本试验例6实际包含了本发明的5个实施例，5个实施例分别提供了寡肽的5种制备方法；其具体步骤均与实施例12基本一致；不同之处仅在于部分参数的不同，具体的，5个实施例的第二次酶解条件均为：ph值：6.5，温度48度，时间2小时；5个实施例第二次酶解时酶用量分别为：4%，4.5%，5%，5.5%，6%。通过试验例6的5个实施例来考察第二次酶解时酶用量对水解度的影响；试验结果如图5所示。从图5中可以看出，随着基料浓度的升高，水解度逐渐升高，当达到一定程度时水解度变化不明显。当基料浓度为4.5%时，水解的程度趋于平稳。当酶用量为4.0%和6%时，水解的程度相对稍低，但依然能够使得胰蛋白酶水解程度满足要求。试验例7本试验例7实际包含了本发明的6个实施例，6个实施例分别提供了寡肽的6种制备方法；其具体步骤均与实施例12基本一致；不同之处仅在于部分参数的不同，具体的，6个实施例的第二次酶解条件均为：酶用量：4.5%，温度45度，时间2小时；6个实施例中第二次酶解时，对第一次酶解产物调节ph值分别为：6.5，6.6，6.7，6.8，6.9，7.0。通过试验例7的6个实施例来考察第二次酶解前对第一次酶解产物调节ph值不同对水解度的影响；试验结果如图6所示。从图6中可以看出，ph值对水解度有重要影响，当ph为6.7时，水解程度最高。当ph值为6.5和7.0时，水解的程度相对稍低，但依然能够使得胰蛋白酶水解程度满足要求。试验例8本试验例8实际包含了本发明的5个实施例，5个实施例分别提供了寡肽的5种制备方法；其具体步骤均与实施例12基本一致；不同之处仅在于部分参数的不同，具体的，5个实施例的第二次酶解条件均为酶用量：4.5%，ph值：6.7，时间2小时；5个实施例中第二次酶解时的酶解温度分别为：48度，49度，50度，51度，52度。通过试验例7的5个实施例来考察第二次酶解时酶解温度对水解度的影响，试验结果如图7所示。从图7中可以看出，水解温度对水解程度也有重要影响，水解温度为50度时，水解的效果最好。当酶解温度为48度和52度时，水解的程度相对稍低，但依然能够使得胰蛋白酶水解程度满足要求。试验例9酶解条件为：酶用量：4.5%，ph值：7.0；温度50度考察第二次酶解时间为：1小时，2.5小时，3小时制备方法其它步骤同实施例12。试验例10本试验例10实际包含了本发明的6个实施例；6个实施例分别提供了寡肽的6种制备方法，其具体步骤均与实施例8基本一致；不同之处仅在于部分参数的不同，具体的，6个实施例的第一次酶解条件均为：酶的用量：3%，ph值：2.5，温度：45度，时间：1小时；6个实施例的基料浓度分别为：4.0%、4.1%、4.2%、4.3%、4.4%、4.5%。通过试验例10包含的6个实施例，来考察第一次酶解时基料浓度对水解度的影响；试验结果如图8所示。从图8中可以看出，随着基料浓度的升高，水解度逐渐升高，当达到一定程度时开始下降。当基料浓度为4.2%时，水解的程度最高。当基料浓度为4.0%和4.5%时，水解的程度相对稍低，但依然能够使得胃蛋白酶水解程度满足要求。试验例11本试验例11实际包含了本发明的5个实施例；5个实施例分别提供了寡肽的5种制备方法；其具体步骤均与实施例8基本一致；不同之处仅在于部分参数的不同，具体的，5个实施例的第一次酶解条件均为：基料浓度：4.2%，ph值：2.5，温度45度，时间1小时；5个实施例第一次酶解时的酶用量分别为：3%，3.5%，4%，4.5%，5%。通过试验例11包含的5个实施例来考察第一次酶解的酶用量对水解度的影响；试验结果如图9所示。图9中表明，随着酶的用量，水解度逐渐上升，超过4%时，增加酶的用量，水解度没有明显变化。试验例12本试验例12实际包含了本发明的4个实施例；4个实施例分别提供了寡肽的4种制备方法；其具体步骤均与实施例8基本一致；不同之处仅在于部分参数的不同，具体的，4个实施例的第一次酶解条件均为：基料浓度：4.2%，酶用量：4.0%，温度45度，时间1小时；4个实施例第一次酶解时，对基料调节的ph值分别为：1.5，2，2.5，3。通过试验例12中的4个实施例来考察，第一次酶解时对基料调节ph对于水解度的影响；试验结果如图10所示；从图10中可以看出，ph值对水解度有重要影响，当ph为2.5时，水解程度最高。当ph值为1.5和3时，水解的程度相对稍低，但依然能够使得胃蛋白酶水解程度满足要求。试验例13本试验例13实际包含了本发明的4个实施例，4个实施例分别提供了寡肽的4种制备方法；其具体步骤均与实施例8基本一致；不同之处仅在于部分参数的不同，具体的，4个实施例的第一次酶解条件均为：基料浓度：4.2%，酶用量：4.0%，ph值：7.0，时间1小时；4个实施例第一次酶解时酶解温度分别为：45度，46度，47度，48度。通过试验例4的4个实施例来考察第一次酶解的酶解温度对水解度的影响；试验结果如图11所示。从图11中可以看出，水解温度对水解程度也有重要影响，水解温度为45度时，水解的效果最好。试验例14制备方法同实施例8；区别在于：酶解条件为：基料浓度：4.2%，酶用量：4.5%，ph值：2.5；考察第一次酶解时间为：1小时，1.5小时。试验例15本试验例15实际包含了本发明的5个实施例，5个实施例分别提供了寡肽的5种制备方法；其具体步骤均与实施例8基本一致；不同之处仅在于部分参数的不同，具体的，5个实施例的第二次酶解条件均为：ph值：7.9，温度37度，时间2小时；5个实施例第二次酶解时酶用量分别为：4%，4.5%，5%，5.5%，6%。通过试验例15的5个实施例来考察第二次酶解时酶用量对水解度的影响；试验结果如图12所示。从图12中可以看出，随着基料浓度的升高，水解度逐渐升高，当达到一定程度时水解度变化不明显。当基料浓度为4.5%时，水解的程度趋于平稳。当酶用量为4.0%和6%时，水解的程度相对稍低，但依然能够使得胰蛋白酶水解程度满足要求。试验例16本试验例16实际包含了本发明的6个实施例，6个实施例分别提供了寡肽的6种制备方法；其具体步骤均与实施例8基本一致；不同之处仅在于部分参数的不同，具体的，6个实施例的第二次酶解条件均为：酶用量：4.0%，温度37度，时间2小时；6个实施例中第二次酶解时，对第一次酶解产物调节ph值分别为：7.5，7.6，7.7，7.8，7.9，8.0。通过试验例16的6个实施例来考察第二次酶解前对第一次酶解产物调节ph值不同对水解度的影响；试验结果如图13所示。从图13中可以看出，ph值对水解度有重要影响，当ph为7.9时，水解程度最高。当ph值为7.5和8.0时，水解的程度相对稍低，但依然能够使得胰蛋白酶水解程度满足要求。试验例17本试验例17实际包含了本发明的6个实施例，6个实施例分别提供了寡肽的5种制备方法；其具体步骤均与实施例8基本一致；不同之处仅在于部分参数的不同，具体的，6个实施例的第二次酶解条件均为酶用量：4.0%，ph值：7.9，时间2小时；6个实施例中第二次酶解时的酶解温度分别为：35度，36度，37度，38度，39度,40度。通过试验例7的5个实施例来考察第二次酶解时酶解温度对水解度的影响，试验结果如图14所示。从图14中可以看出，水解温度对水解程度也有重要影响，水解温度为37度时，水解的效果最好。当酶解温度为35度和40度时，水解的程度相对稍低，但依然能够使得胰蛋白酶水解程度满足要求试验例18酶解条件为：酶用量：4.0%，ph值：7.9；温度37度考察第二次酶解时间为：1小时，2.5小时，3小时制备方法其它步骤同实施例8。本实验在之前设定了固定参数来测试在同等条件下其水解效果和相应的一些效果，其原因是为了减少影响因素，特别是第一次酶解根据三文鱼的特点，酶解要求，环境等因素，适当调高ph值，后期有进行可一些试验，做了一些参数上的调整，包括酶解的ph值，温度等条件，原因是每一种酶在其相对应的符合自身特点的环境条件下，是否能发挥出更好的效果，从试验数据看，确实与预期一致，得到了更好的酶解效果。本发明未经描述的技术特征可以通过或采用现有技术实现，在此不再赘述，当然，上述说明并非是对本发明的限制，本发明也并不仅限于上述举例，本
技术领域：
的普通技术人员在本发明的实质范围内所做出的变化、改型、添加或替换，也应属于本发明的保护范围。当前第1页12