本发明涉及生化检测技术领域，特别是涉及一种谷胱甘肽转移酶测定试剂校准品及制备方法。
背景技术：
血液中含有谷胱甘肽转移酶(gst)，需通过谷胱甘肽转移酶测定试剂来测定其含量。
在生产谷胱甘肽转移酶测定试剂的过程中，需采用校准品对其进行校准，校准品的值在一个校准函数中用于独立变量的参考物质，应具有定值和已知的测量不确定度，其目的应是校准某一测量系统，从而建立该系统测量结果的计量学溯源性。
目前市场上未有标准化的谷胱甘肽转移酶测定试剂校准品。
技术实现要素：
本发明的一个目的在于提出一种保存时间长的谷胱甘肽转移酶测定试剂校准品。
一种谷胱甘肽转移酶测定试剂校准品，包括以下组分的冻干品：
磷酸盐缓冲液50～250份；
nacl10～200份；
乙二胺四乙酸二钠1～10份；
牛血清20～80份；
谷胱甘肽转移酶0.1～0.5份；
稳定剂5～50份；
防腐剂1～2份。
本发明的有益效果是：磷酸盐缓冲液便于校准品的制备成型，nacl和牛血清能消除校准品与样本的基质效应差，防腐剂配合乙二胺四乙酸二钠、能延长校准品的保存期，稳定剂能防止谷胱甘肽转移酶在制备过程中活性降低或失效。
另外，根据本发明提供的谷胱甘肽转移酶测定试剂校准品，还可以具有如下附加的技术特征：
进一步地，所述磷酸盐缓冲液包括磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钾和磷酸二氢钾的组合物，所述磷酸盐缓冲液的ph为6.8～7.8。
进一步地，所述的稳定剂为蛋白质类稳定剂、糖类稳定剂中一种或几种混合物，所述蛋白质类稳定剂为hgg、bsa、hsa中的一种或几种，所述糖类稳定剂为蔗糖、甘露醇、海藻糖、山梨糖醇中的一种或几种。
进一步地，所述防腐剂包括叠氮盐和生物防腐剂，其中叠氮盐类防腐剂主要为nan3，生物防腐剂主要为proclin300。
本发明的另一个目的在于提出一种上述谷胱甘肽转移酶测定试剂校准品的制备方法，包括以下步骤：
取谷胱甘肽转移酶，加入所述磷酸盐缓冲液稀释，得校准品稀释液；
向校准品稀释液中加入稳定剂，搅拌均匀，温育30min，得第一制备液；
往第一制备液加所述牛血清，混合均匀，静置30min，得第二制备液；
往第二制备液加入剩余组分，混合均匀，静置，得冻干材料；
将冻干材料进行预冷冻，得初始冻干品；
将初始冻干品进行真空冷冻干燥，得谷胱甘肽转移酶测定试剂校准品。
进一步地，所述磷酸缓冲液的浓度为50～250mmol/l，所述nacl浓度为10～200mmol/l，所述乙二胺四乙酸二钠的浓度为1～10mmol/l，所述牛血清的浓度为20～80％。
进一步地，所述稀释液中谷胱甘肽转移酶的浓度为10～100u/l。
进一步地，蛋白质类稳定剂用量为5～15％(w/v)。
进一步地，糖类稳定剂用量为15～75g/l。
进一步地，所述防腐剂的用量为0.1～1g/l。
进一步地，所述向校准品稀释液中加入稳定剂，搅拌均匀，温育30min的步骤中，所述的温育温度为25～37℃。
进一步地，所述将所述冻干材料进行预冷冻，得初始冻干品的步骤中，所述预冷冻的步骤为：
将所述冻干材料置于-30～-40℃的冷冻环境下保持8～12小时；
对所述冷冻环境逐渐降温，降温幅度为2～5℃/s，直至所述冷冻环境的温度为-60～-70℃，保持8～12小时。
进一步地，所述将所述初始冻干品进行真空冷冻干燥的步骤包括：
将所述初始冻干品置于大气压为5pa的环境中，环境温度为-40～-60℃，保持24～36小时；
将所述初始冻干品置于大气压为15pa的环境中，环境温度为-20～-30℃，保持8～12小时。
本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
具体实施方式
为使本发明的目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合实施例对本发明的具体实施方式做详细的说明。实施例中给出了本发明的若干实施例。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容更加透彻全面。
实施例1
一种谷胱甘肽转移酶测定试剂校准品，包括以下组分的冻干品：
磷酸盐缓冲液50份，
nacl10份，
乙二胺四乙酸二钠1份，
牛血清20份，
谷胱甘肽转移酶0.1份，
稳定剂5份，
防腐剂1.5份。
本发明的优势在于，磷酸盐缓冲液便于校准品的制备成型，nacl和牛血清能消除校准品与样本的基质效应差，防腐剂配合乙二胺四乙酸二钠、能延长校准品的保存期，稳定剂能防止谷胱甘肽转移酶在制备过程中活性降低或失效。
具体的，所述磷酸盐缓冲液包括磷酸氢二钠和磷酸二氢钾的两种组合，ph为6.8。
具体的，所述的蛋白质类稳定剂为hgg，所述糖类稳定剂为蔗糖。
具体的，所述的防腐剂主要为nan3。
具体的，所述稀释液中谷胱甘肽转移酶的浓度为70u/l。
具体的，所述磷酸缓冲液的浓度为50mmol/l，所述nacl浓度为10mmol/l，所述乙二胺四乙酸二钠的浓度为1mmol/l，所述牛血清的浓度为20％，所述的蛋白质类稳定剂hgg用量为5％，所述的糖类稳定剂蔗糖用量为15g/l，所述防腐剂的用量为0.5g/l。
另外，上述谷胱甘肽转移酶测定试剂校准品的制备方法，包括以下步骤：
取谷胱甘肽转移酶，加入所述磷酸盐缓冲液稀释，得校准品稀释液；
向校准品稀释液中加入稳定剂，搅拌均匀，温育30min，得第一制备液；
往第一制备液加所述牛血清，混合均匀，静置30min，得第二制备液；
往第二制备液加入剩余组分，混合均匀，静置，得冻干材料；
将冻干材料进行预冷冻，得初始冻干品；
将初始冻干品进行真空冷冻干燥，得谷胱甘肽转移酶测定试剂校准品。
具体的，所述向校准品稀释液中加入稳定剂，搅拌均匀，温育30min的步骤中，所述的温育温度为25℃。
另外，预冷冻的步骤为：
i.将所述冻干材料置于-30℃的冷冻环境下保持8小时；
ii.对所述冷冻环境逐渐降温，降温幅度为2℃/s，直至所述冷冻环境的温度为-60℃，保持8小时。
更进一步地，真空冷冻干燥的步骤包括：
i.将所述初始冻干品置于大气压为5pa的环境中，环境温度为-40℃，保持24小时；
ii.将所述初始冻干品置于大气压为15pa的环境中，环境温度为-20℃，保持8小时。
在本实施例中，真空冷冻干燥采用fd-10型号的冷冻干燥机。
谷胱甘肽转移酶测定试剂校准品的使用方法为用水复溶后使用，复溶后为淡黄色澄清液体，无沉淀和悬浮物。
实施例2
一种谷胱甘肽转移酶测定试剂校准品，包括以下组分的冻干品：
磷酸盐缓冲液250份，
nacl200份，
乙二胺四乙酸二钠10份，
牛血清80份，
谷胱甘肽转移酶0.5份，
稳定剂50份，
防腐剂1.5份。
具体的，所述磷酸盐缓冲液包括磷酸氢二钾和磷酸二氢钠的两种组合，ph为7.8。
具体的，所述的蛋白质类稳定剂为bsa，所述糖类稳定剂为海藻糖。
具体的，所述的防腐剂主要为nan3。
具体的，所述稀释液中谷胱甘肽转移酶的浓度为70u/l。
具体的，所述磷酸缓冲液的浓度为250mmol/l，所述nacl浓度为200mmol/l，所述乙二胺四乙酸二钠的浓度为10mmol/l，所述牛血清的浓度为80％，所述的蛋白质类稳定剂bsa用量为5％，所述的糖类稳定剂海藻糖用量为20g/l，所述防腐剂的用量为0.5g/l。
另外，上述谷胱甘肽转移酶测定试剂校准品的制备方法，包括以下步骤：
取谷胱甘肽转移酶，加入所述磷酸盐缓冲液稀释，得校准品稀释液；
向校准品稀释液中加入稳定剂，搅拌均匀，温育30min，得第一制备液；
往第一制备液加所述牛血清，混合均匀，静置30min，得第二制备液；
往第二制备液加入剩余组分，混合均匀，静置，得冻干材料；
将冻干材料进行预冷冻，得初始冻干品；
将初始冻干品进行真空冷冻干燥，得谷胱甘肽转移酶测定试剂校准品。
具体的，所述向校准品稀释液中加入稳定剂，搅拌均匀，温育30min的步骤中，所述的温育温度为37℃。
另外，预冷冻的步骤为：
i.将所述冻干材料置于-40℃的冷冻环境下保持12小时；
ii.对所述冷冻环境逐渐降温，降温幅度为5℃/s，直至所述冷冻环境的温度为-70℃，保持12小时。
更进一步地，真空冷冻干燥的步骤包括：
i.将所述初始冻干品置于大气压为5pa的环境中，环境温度为-60℃，保持36小时；
ii.将所述初始冻干品置于大气压为15pa的环境中，环境温度为-30℃，保持12小时。
实施例3
一种谷胱甘肽转移酶测定试剂校准品，包括以下组分的冻干品：
磷酸盐缓冲液100份，
nacl50份，
乙二胺四乙酸二钠5份，
牛血清50份，
谷胱甘肽转移酶0.4份，
稳定剂30份，
防腐剂1.5份。
具体的，所述磷酸盐缓冲液包括磷酸氢二钠和磷酸二氢钾的两种组合，ph为7.2。
具体的，所述的蛋白质类稳定剂为hgg、bsa，所述糖类稳定剂为蔗糖、海藻糖。
具体的，所述的防腐剂主要为proclin300。
具体的，所述稀释液中谷胱甘肽转移酶的浓度为70u/l。
具体的，所述磷酸缓冲液的浓度为100mmol/l，所述nacl浓度为50mmol/l，所述乙二胺四乙酸二钠的浓度为5mmol/l，所述牛血清的浓度为50％，所述的蛋白质类稳定剂hgg用量为5％，bsa用量为5％，所述的糖类稳定剂蔗糖用量为15g/l，海藻糖用量为20g/l，所述防腐剂的用量为0.5g/l。
另外，上述谷胱甘肽转移酶测定试剂校准品的制备方法，包括以下步骤：
取谷胱甘肽转移酶，加入所述磷酸盐缓冲液稀释，得校准品稀释液；
向校准品稀释液中加入稳定剂，搅拌均匀，温育30min，得第一制备液；
往第一制备液加所述牛血清，混合均匀，静置30min，得第二制备液；
往第二制备液加入剩余组分，混合均匀，静置，得冻干材料；
将冻干材料进行预冷冻，得初始冻干品；
将初始冻干品进行真空冷冻干燥，得谷胱甘肽转移酶测定试剂校准品。
具体的，所述向校准品稀释液中加入稳定剂，搅拌均匀，温育30min的步骤中，所述的温育温度为,30℃。
另外，预冷冻的步骤为：
i.将所述冻干材料置于-35℃的冷冻环境下保持10小时；
ii.对所述冷冻环境逐渐降温，降温幅度为4℃/s，直至所述冷冻环境的温度为-65℃，保持10小时。
更进一步地，真空冷冻干燥的步骤包括：
i.将所述初始冻干品置于大气压为5pa的环境中，环境温度为-50℃，保持28小时；
ii.将所述初始冻干品置于大气压为15pa的环境中，环境温度为-25℃，保持10小时。
对照例1
本对照例与实施例1基本一致，不同之处在于：
本对照例组分中没有添加牛血清和稳定剂。
对照例2
本对照例与实施例2基本一致，不同之处在于：
本对照例中胱甘肽转移酶测定试剂校准品的制备没有按照实施例2的操作步骤，是所有组分称量后统一溶解配制。
对照例3
本对照例与实施例3基本一致，不同之处在于：
所述谷胱甘肽转移酶测定试剂校准品的制备方法中，未采用预冷冻步骤。
对照例4
本对照例与实施例3基本一致，不同之处在于：
所述谷胱甘肽转移酶测定试剂校准品的制备方法中，进行真空冷冻干燥的步骤为将所述初始冻干品置于大气压为5pa的环境中，环境温度为-40℃，保持38小时。
对照例5
本对照例与实施例3基本一致，不同之处在于：
本对照例没有冻干，为液态校准品。
取上述实施例和对照例所得的谷胱甘肽转移酶测定试剂校准品，开封，每天各取3g分成三组检测其gst活性，取平均值，连续检测7天，对冻干品按要求量加1ml去离子水复溶，结果见表1。活性值浮动越小，证明产品越稳定。
请参阅表1，对比实施例1、实施例2和实施例3，可以看出，实施例1～3所得结果均浮动较小，分别计算其变异系数cv为2.27％、2.42％和1.94％，在实际生产中，当cv<3％时即判断该产品为合格产品。
表1
根据表1，从对照例1可以看出，没有添加牛血清和稳定剂对谷胱甘肽转移酶测定试剂校准品的稳定性有影响，cv大于3％，不符合要求；
从对照例2可以看出，没有按照实施例的操作步骤规范制备对胱甘肽转移酶测定试剂校准品的稳定性有影响，cv大于3％，不符合要求；
从对照例3可以看出，由于未采用预冷冻步骤，所得产品的稳定性会有较大程度地变差，cv大于3％，不符合要求；
对比实施例3、对照例3和对照例4，可以看出，对预冷冻和真空冷冻的步骤采用分段冷冻能一定程度地提升产品的稳定性，其中对预冷冻采用分段冷冻产生的促进作用略大，而真空冷冻即使不采用分段冷冻，也能获得符合要求的产品，即cv<3％。
从对照例5可以看出，液态谷胱甘肽转移酶测定试剂校准品稳定性较差，cv值为11.76％，不符合要求。
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。