[0001]
本发明属于农产品深加工技术领域。更具体地，涉及一种柑橘黄酮的纯化精制方法。
背景技术：
[0002]
柑橘果实历来是我国传统的中药材，其中的黄酮类物质含量丰富。其黄酮主要存在于柑橘属植物果实的外皮中。研究表明，黄酮类化合物有多重生物学作用，如抗炎抑菌、抗氧化、降血糖、降血脂、抗癌、抗肿瘤及增强免疫力等作用，其安全、无毒，已在医药、食品加工等方面得到广泛应用。近年来国内外有关柑橘黄酮的报道日渐增多，柑橘黄酮以其特有的生理活性逐渐引起人们的重视，目前市场上已有大量以天然黄酮物质作为膳食补充剂制成的各种保健品和食品，柑橘黄酮作为食品添加剂具有广阔的发展前景。
[0003]
而柑橘黄酮的提取方法主要包括有机溶剂提取法、超临界萃取法、超声波辅助提取法、酸碱性水提取法等，而纯化膜分离技术、柱层析法等。李瑶瑶等以柑橘皮渣为原料，研究柑橘皮渣黄酮类物质的提取工艺并对其进行优化。结果表明，将柑橘皮渣烘干后粉碎成粉末，用石油醚进行预处理后采用70％乙醇提取4h，浓缩、干燥，黄酮的提取率可高达80％以上。
[0004]
虽然上述方法能够得到一定纯度的柑橘黄酮，但是其纯度仍不能满足实际生产的需求，如何提高柑橘黄酮的纯度仍是目前亟待解决的技术问题。
技术实现要素：
[0005]
本发明要解决的技术问题是克服现有柑橘黄酮提纯的纯度不高的缺陷和不足，提供一种柑橘黄酮的纯化精制方法。
[0006]
本发明上述目的通过以下技术方案实现：
[0007]
一种柑橘黄酮的纯化精制方法，所述方法包括以下步骤：
[0008]
(1)将柑橘类果皮，洗涤、干燥至恒重，粉碎、过筛；
[0009]
(2)配置氢氧化钠和硼砂的缓冲溶液，
[0010]
(3)将步骤(1)得到的粉体添加到混合溶液中，在40～50℃，超声条件下，提取一定时间；然后采用150目滤布过滤去除残渣，然后通过采用醋酸调节ph为4～6，得到粗产物；
[0011]
(4)将步骤(3)得到的粗产物进行蒸发浓缩，得到一定浓度的混合物；
[0012]
(5)将步骤(4)得到的混合物采用大孔树脂进行纯化得到柑橘黄酮。
[0013]
优选的，在步骤(1)中，所述过筛为过100～150目筛。
[0014]
优选的，在步骤(1)中，所述柑橘类果皮为蜜桔果皮或柚子皮。
[0015]
优选的，在步骤(1)中，所述干燥温度为60～90℃。
[0016]
优选的，在步骤(2)中，所述氢氧化钠与碳酸钠的摩尔比为1:2～3。
[0017]
优选的，在步骤(2)中，所述缓冲溶液的ph＝10。
[0018]
优选的，在步骤(3)中，所述混合溶液与粉体的比例为10～15ml:1g，
[0019]
优选的，在步骤(5)中，所述大孔树脂为hdp100。
[0020]
优选的，在步骤(5)中，所述分离纯化条件为：调节上述混合的ph值为4～6；上样流速为1～3bv/h；洗脱液为naoh水溶液，浓度为0.05～0.1mol/l；解吸流速为1～3bv/h；经过6～8h后收集洗脱液，经真空冷冻干燥即得所述柑橘黄酮。
[0021]
优选的，所述真空冷冻条件为：-40～-60℃冷冻干燥14～18h。
[0022]
本发明具有以下有益效果：
[0023]
本发明通过采用氢氧化钠和硼砂的缓冲溶液作为碱液作为碱性提取液，能够充分提取柑橘类果皮中的柑橘黄酮，然后通过采用醋酸使柑橘黄酮析出，再通过大孔树脂为hdp100进行纯化净化得到高纯度的柑橘黄酮，纯度达到96.2～98.5％，本申请的制备方法简单，而且便于工业化生产。
具体实施方式
[0024]
以下结合具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。
[0025]
除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。
[0026]
实施例1
[0027]
一种柑橘黄酮的纯化精制方法，所述方法包括以下步骤：
[0028]
(1)将柑橘类果皮，洗涤、干燥至恒重，粉碎、过130目筛；所述柑橘类果皮为蜜桔果皮；所述干燥温度为70℃；
[0029]
(2)配置100ml氢氧化钠和硼砂的缓冲溶液，所述氢氧化钠与碳酸钠的摩尔比为1:2.5；所述缓冲溶液的ph＝10；
[0030]
(3)将步骤(1)得到的粉体添加到混合溶液中，在45℃，在400w超声条件下，提取45min；所述混合溶液与粉体的比例为12ml:1g；然后采用150目滤布过滤去除残渣，然后通过采用醋酸调节ph为5，得到粗产物；
[0031]
(4)将步骤(3)得到的粗产物进行蒸发浓缩，得到一定浓度的混合物；
[0032]
(5)将步骤(4)得到的混合物采用hdp100大孔树脂进行纯化得到柑橘黄酮；所述分离纯化条件为：调节上述混合的ph值为5；上样流速为2bv/h；洗脱液为naoh水溶液，浓度为0.07mol/l；解吸流速为2bv/h；经过7h后收集洗脱液，经真空冷冻干燥即得所述柑橘黄酮；所述真空冷冻条件为：-50℃真空冷冻干燥16h。
[0033]
实施例2
[0034]
一种柑橘黄酮的纯化精制方法，所述方法包括以下步骤：
[0035]
(1)将柑橘类果皮，洗涤、干燥至恒重，粉碎、过150目筛；所述柑橘类果皮为蜜桔果皮；所述干燥温度为90℃；
[0036]
(2)配置100ml氢氧化钠和硼砂的缓冲溶液，所述氢氧化钠与碳酸钠的摩尔比为1:2.5；所述缓冲溶液的ph＝10；
[0037]
(3)将步骤(1)得到的粉体添加到混合溶液中，在50℃，在500w超声条件下，提取60min；所述混合溶液与粉体的比例为15ml:1g；然后采用150目滤布过滤去除残渣，然后通过采用醋酸调节ph为6，得到粗产物；
[0038]
(4)将步骤(3)得到的粗产物进行蒸发浓缩，得到一定浓度的混合物；
[0039]
(5)将步骤(4)得到的混合物采用hdp100大孔树脂进行纯化得到柑橘黄酮；所述分离纯化条件为：调节上述混合的ph值为6；上样流速为3bv/h；洗脱液为naoh水溶液，浓度为0.1mol/l；解吸流速为3bv/h；经过6h后收集洗脱液，经真空冷冻干燥即得所述柑橘黄酮；所述真空冷冻条件为：-60℃真空冷冻干燥14h。
[0040]
实施例3
[0041]
一种柑橘黄酮的纯化精制方法，所述方法包括以下步骤：
[0042]
(1)将柑橘类果皮，洗涤、干燥至恒重，粉碎、过100目筛；所述柑橘类果皮为柚子皮；所述干燥温度为60℃；
[0043]
(2)配置100ml氢氧化钠和硼砂的缓冲溶液，所述氢氧化钠与碳酸钠的摩尔比为1:2.5；所述缓冲溶液的ph＝10；
[0044]
(3)将步骤(1)得到的粉体添加到混合溶液中，在40℃，在400w超声条件下，提取30min；所述混合溶液与粉体的比例为10ml:1g；然后采用150目滤布过滤去除残渣，然后通过采用醋酸调节ph为4，得到粗产物；
[0045]
(4)将步骤(3)得到的粗产物进行蒸发浓缩，得到一定浓度的混合物；
[0046]
(5)将步骤(4)得到的混合物采用hdp100大孔树脂进行纯化得到柑橘黄酮；所述分离纯化条件为：调节上述混合的ph值为4；上样流速为1bv/h；洗脱液为naoh水溶液，浓度为0.05mol/l；解吸流速为1bv/h；经过8h后收集洗脱液，经真空冷冻干燥即得所述柑橘黄酮；所述真空冷冻条件为：-40℃真空冷冻干燥18h。
[0047]
对比例1
[0048]
一种柑橘黄酮的纯化精制方法，所述方法包括以下步骤：
[0049]
(1)将柑橘类果皮，洗涤、干燥至恒重，粉碎、过130目筛；所述柑橘类果皮为蜜桔果皮；所述干燥温度为70℃；
[0050]
(2)配置100ml氢氧化钠和硼砂的缓冲溶液，所述氢氧化钠与碳酸钠的摩尔比为1:2.5；所述缓冲溶液的ph＝10；
[0051]
(3)将步骤(1)得到的粉体添加到混合溶液中，在45℃，在400w超声条件下，提取45min；所述混合溶液与粉体的比例为12ml:1g；然后采用150目滤布过滤去除残渣，然后通过采用盐酸调节ph为5，得到粗产物；
[0052]
(4)将步骤(3)得到的粗产物进行蒸发浓缩，得到一定浓度的混合物；
[0053]
(5)将步骤(4)得到的混合物采用hdp100大孔树脂进行纯化得到柑橘黄酮；所述分离纯化条件为：调节上述混合的ph值为5；上样流速为2bv/h；洗脱液为naoh水溶液，浓度为0.07mol/l；解吸流速为2bv/h；经过7h后收集洗脱液，经真空冷冻干燥即得所述柑橘黄酮；所述真空冷冻条件为：-50℃真空冷冻干燥16h。
[0054]
对比例2
[0055]
一种柑橘黄酮的纯化精制方法，所述方法包括以下步骤：
[0056]
(1)将柑橘类果皮，洗涤、干燥至恒重，粉碎、过130目筛；所述柑橘类果皮为蜜桔果皮；所述干燥温度为70℃；
[0057]
(2)配置100ml氢氧化钠溶液；所述氢氧化钠溶液的ph＝10；
[0058]
(3)将步骤(1)得到的粉体添加到混合溶液中，在45℃，在400w超声条件下，提取45min；所述混合溶液与粉体的比例为12ml:1g；然后采用150目滤布过滤去除残渣，然后通
过采用醋酸调节ph为5，得到粗产物；
[0059]
(4)将步骤(3)得到的粗产物进行蒸发浓缩，得到一定浓度的混合物；
[0060]
(5)将步骤(4)得到的混合物采用hdp100大孔树脂进行纯化得到柑橘黄酮；所述分离纯化条件为：调节上述混合的ph值为5；上样流速为2bv/h；洗脱液为naoh水溶液，浓度为0.07mol/l；解吸流速为2bv/h；经过7h后收集洗脱液，经真空冷冻干燥即得所述柑橘黄酮；所述真空冷冻条件为：-50℃真空冷冻干燥16h。
[0061]
将实施例1-3与对比例1-2得到的产物经过hplc检查柑橘黄酮的纯度，具体步骤如下：
[0062]
取柑橘黄酮以1：3：5比例加入超纯水和甲醇溶解，混匀，4000rmp/min离心15min，取上清，将甲醇吹干，再用5倍体积的乙酸乙酯萃取3次，将萃取液吹干后加入150μl乙腈，12000rmp/min离心20分钟取上清，通过hplc检测柑橘黄酮的纯度。具体结果见表1：
[0063] 实施例1实施例2实施例3对比例1对比例2纯度(％)98.596.297.492.590.3
[0064]
通过实施例1-3与对比例1-2的对比，可以看出采用氢氧化钠和硼砂的缓冲溶液作为碱液作为碱性提取液，能够充分提取柑橘类果皮中的柑橘黄酮，然后通过采用醋酸使柑橘黄酮析出，再通过大孔树脂为hdp100进行纯化净化得到高纯度的柑橘黄酮，纯度最高达到96.2～98.5％，本申请的制备方法简单，而且便于工业化生产
[0065]
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。