一种适用于同时检测十一种病原菌的试剂盒及其检测方法与流程

文档序号:30420976发布日期:2022-06-15 13:13阅读:来源:国知局

技术特征:
1.一种适用于同时检测十一种病原菌的检测试剂,所述试剂包括金黄色葡萄球菌检测引物对、化脓性链球菌检测引物对、铜绿假单胞菌检测引物对、粪产碱杆菌检测引物对、表皮葡萄球菌检测引物对、屎肠球菌检测引物对、普通变形杆菌检测引物对、嗜麦芽窄食单胞菌检测引物对、无乳链球菌检测引物对、肺炎克雷伯菌检测引物对、鲍曼不动杆菌检测引物对。2.根据权利要求1所述的检测试剂,其特征在于,还包括以下特征中的任一项或多项:(1)所述金黄色葡萄球菌检测引物对包括核苷酸序列如seq id no.1所示的上游引物和核苷酸序列如seq id no.2所示的下游引物;(2)所述化脓性链球菌检测引物对包括核苷酸序列如seq id no.3所示的上游引物和核苷酸序列如seq id no.4所示的下游引物;(3)所述铜绿假单胞菌检测引物对包括核苷酸序列如seq id no.5所示的上游引物和核苷酸序列如seq id no.6所示的下游引物;(4)所述粪产碱杆菌检测引物对包括核苷酸序列如seq id no.7所示的上游引物和核苷酸序列如seq id no.8所示的下游引物;(5)所述表皮葡萄球菌检测引物对包括核苷酸序列如seq id no.9所示的上游引物和核苷酸序列如seq id no.10所示的下游引物;(6)所述屎肠球菌检测引物对包括核苷酸序列如seq id no.11所示的上游引物和核苷酸序列如seq id no.12所示的下游引物;(7)所述普通变形杆菌检测引物对包括核苷酸序列如seq id no.13所示的上游引物和核苷酸序列如seq id no.14所示的下游引物;(8)所述嗜麦芽窄食单胞菌检测引物对包括核苷酸序列如seq id no.15所示的上游引物和核苷酸序列如seq id no.16所示的下游引物;(9)所述无乳链球菌检测引物对包括核苷酸序列如seq id no.17所示的上游引物和核苷酸序列如seq id no.18所示的下游引物;(10)所述肺炎克雷伯菌检测引物对包括核苷酸序列如seq id no.19所示的上游引物和核苷酸序列如seq id no.20所示的下游引物;(11)所述鲍曼不动杆菌检测引物对包括核苷酸序列如seq id no.21所示的上游引物和核苷酸序列如seq id no.22所示的下游引物。3.根据权利要求1或2所述检测试剂用于制备同时检测十一种病原菌的检测试剂盒中的用途。4.一种同时检测十一种病原菌的检测试剂盒,所述试剂盒中包括如权利要求1或2所述检测试剂。5.根据权利要求4所述的检测试剂盒,其特征在于,所述试剂盒还包括人dna内参扩增引物对。6.根据权利要求5所述的检测试剂盒,其特征在于,所述人dna内参扩增引物对包括核苷酸序列如seq id no.23所示的上游引物和核苷酸序列如seq id no.24所示的下游引物。7.根据权利要求4所述的检测试剂盒,其特征在于,所述试剂盒还包括有阳性质控品、阴性质控品、通用pcr反应液、样品基因组提取试剂中的任一种或多种。8.根据权利要求7所述的检测试剂盒,其特征在于,包括以下特征中的任一项或多项:(1)所述阳性质控品为含目标病原体特异核酸片段和人内参特异核酸片段的puc57质粒dna;(2)所述阴性质控品为te缓冲液。9.如权利要求1~8任一权利要求所述检测试剂盒的使用方法,包括如下步骤:(1)提取样品基因组dna;(2)将样品基因组dna、阳性质控品或阴性质控品分别加入装有pcr反应体系的pcr管中,获得对应的样品反应管、阳性反应管或阴性反应管,所述pcr反应体系中含有权利要求
1-8之任一项中的检测引物对;(3)pcr反应:反应管置于pcr仪上,设置循环参数,进行pcr反应;(4)pcr反应结束后,分析结果。10.如权利要求1~8任一所述的检测试剂盒在制备病原菌检测产品中的用途。

技术总结
本发明属于生物技术领域,具体涉及一种适用于同时检测十一种病原菌的试剂盒及其检测方法。采用本发明的技术方案,可以检测并鉴定十一种病原菌,该方法操作简单、检测准确、灵敏高,特异性高,显著缩短检测时间,可以实现2-3小时内可出检测结果。人DNA内参可以确保在检测过程中对核酸质量进行质控,避免因核酸样本不合格导致假阴性的问题。多重PCR和片段分析法相结合,保证检测的通量且成本较低,适合疾控中心、医院及其它医疗机构使用。医院及其它医疗机构使用。


技术研发人员:张祥林 张劲松 黄华生 魏鹏
受保护的技术使用者:张祥林
技术研发日:2020.12.11
技术公布日:2022/6/14
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