一种水中病毒的富集及检测方法

文档序号:24622961发布日期:2021-04-09 20:28阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种水中病毒的富集方法,其特征是,包括首先测定或/和调节水的ph,接着加入絮凝剂进行絮凝处理;然后进行过滤处理,获得富集病毒。

2.如权利要求1所述的方法,其特征是,所述调节水的ph值为4-9,优选为6。

3.如权利要求1或2所述的方法,其特征是,所述絮凝剂为铝盐絮凝剂。

4.一种水中病毒的检测方法,其特征是,包括如下顺序进行的步骤:

1)向水中加入絮凝剂,接着加入ph调节剂,调整水的ph值为4-9,絮凝剂对水体中的病毒进行絮凝处理,获得絮凝混合液;

2)对絮凝混合液进行过滤处理,并将过滤后的固体重新悬浮于缓冲溶液中,制得重悬混合液;

3)对重悬混合液进行研磨处理,制得研磨液;

4)对研磨液进行核酸提取,并进行核酸定量pcr测定。

5.如权利要求4所述的方法,其特征是,所述水选择农村或城市生活污水、医院污水、畜禽养殖厂污水、屠宰污水、农贸市场污水、河,湖等自然水体或饮用水。

6.如权利要求4或5所述的方法,其特征是,步骤1)中所述絮凝剂选择铝盐絮凝剂,优选为氯化铝、硫酸铝、聚合氯化铝或聚合硫酸铝铁。

7.如权利要求4或5所述的方法,其特征是,步骤2)中所述的缓冲溶液选择pbs缓冲溶液、tris-hcl缓冲液或hepes缓冲液。

8.如权利要求4或5所述的方法,其特征是,步骤3)中所述研磨处理的研磨频率为20-30hz;研磨时间为3-15min,优选为5-15min,进一步优选为5min。

9.如权利要求4或5所述的方法,其特征是,步骤4)中所述核酸提取方法为酚/氯仿抽提法、离心柱法或磁珠法,优选为磁珠法。

10.如权利要求4或5所述的方法,其特征是,步骤4)中所述定量pcr测定选择逆转录定量pcr或数字pcr进行。


技术总结
本发明公开了一种水中病毒的富集及检测方法,包括向水中加入絮凝剂,同时调节水样pH值,混合、静置、过滤,将所获得胶体用磷酸盐缓冲液重悬,部分重悬液在组织研磨后进行核酸提取及定量PCR检测。本发明方法在富集过程中避免了二次加入有机或无机洗脱物质对后续操作过程的干扰,同时能够及时、高效地获得检测结果,不受水质水量的影响。而且本发明方法操作简单,不需要进行预处理,减少了预过滤过程造成的病毒损失;设备易得,试剂成本低,一次性投入少,处理时间短,具有广泛的适应性,适合推广应用。

技术研发人员:杨敏;于丽娜;田哲;张昱
受保护的技术使用者:中国科学院生态环境研究中心
技术研发日:2020.12.18
技术公布日:2021.04.09
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