siRNA的制备方法

文档序号:24622913发布日期:2021-04-09 20:28阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种sirna的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:

体外转录获得目的基因的dsrna;

用rnaseⅲ对所述目的基因的dsrna进行消化处理,得到消化产物;

将所述消化产物凝胶电泳后,切割核酸片段<30bp的胶块;

将所述胶块研磨冻融后,获得sirna。

2.如权利要求1所述的sirna的制备方法,其特征在于,所述消化处理中,rnaseⅲ浓度为0.5-1.5u/μl。

3.如权利要求1所述的sirna的制备方法,其特征在于,所述凝胶电泳是浓度为3%的琼脂糖凝胶电泳。

4.如权利要求1所述的sirna的制备方法,其特征在于,所述研磨冻融的步骤包括:将所述胶块切碎后,依次冰冻和解冻融化,然后加水研磨。

5.如权利要求4所述的sirna的制备方法,其特征在于,所述冰冻的温度为-80℃~0℃;和/或,

所述解冻融化的温度为20℃-27℃。

6.如权利要求4所述的sirna的制备方法,其特征在于,所述研磨冻融的步骤重复2-4次。

7.如权利要求4所述的sirna的制备方法,其特征在于,所述加水研磨后,还包括离心取上清。

8.如权利要求1所述的sirna的制备方法,其特征在于,所述体外转录获得目的基因的dsrna的步骤包括:将总rna反转录得到cdna,用含有t7启动子的引物扩增所述cdna,然后进行体外转录,并用核酸酶消化。

9.如权利要求1-8任一项所述的sirna的制备方法,其特征在于,所述目的基因为unigene12835,得到的所述sirna为unigene12835sirna;或者,

所述目的基因为unigene13423,得到的所述sirna为unigene13423sirna;或者,

所述目的基因为unigene19308,得到的所述sirna为unigene19308sirna;或者,

所述目的基因为unigene7122,得到的所述sirna为unigene7122sirna;或者,

所述目的基因为cl1989.contig1,得到的所述sirna为cl1989.contig1sirna;或者,

所述目的基因为cl3290.contig2,得到的所述sirna为cl3290.contig2sirna;或者,

所述目的基因为cl3871.contig1,得到的所述sirna为cl3871.contig1sirna;或者,

所述目的基因为cl51.contig3,得到的所述sirna为cl51.contig3sirna。

10.如权利要求1-8任一项所述的sirna的制备方法,其特征在于,所述获得sirna之后,还包括配制成浓度为0.1nmol/l-0.5nmol/l的所述sirna用于转染。


技术总结
本申请涉及核酸提取技术领域,尤其涉及一种siRNA的制备方法,该制备方法包括如下步骤:体外转录获得目的基因的dsRNA;用RNase Ⅲ对所述目的基因的dsRNA进行消化处理,得到消化产物;将所述消化产物凝胶电泳后,切割核酸片段<30bp的胶块;将所述胶块研磨冻融后,获得siRNA。该制备方法具有准确有效、操作简便、成本低廉的特点,为纯化siRNA以及RNAi研究带来极大的方便,具有很好的应用前景。

技术研发人员:邓利;谭景云;香凤;兰文升
受保护的技术使用者:深圳大学;深圳市检验检疫科学研究院
技术研发日:2020.12.18
技术公布日:2021.04.09
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