一种5-溴代双去甲基汉防己甲素双甲酸乙酯晶型及其制备方法与流程

一种5
‑
溴代双去甲基汉防己甲素双甲酸乙酯晶型及其制备方法
技术领域
1.本发明属于医药技术领域，具体涉及一种5
‑
溴代双去甲基汉防己甲素双甲酸乙酯的新晶型及制备方法。


背景技术：

2.双苄基异喹啉生物碱汉防己甲素(tetrandrine)是防己科汉防己根部的主要活性成分(如下结构式)。自上世纪50年代起在临床中用于治疗高血压、心律失常和心绞痛等。汉防己甲素是钙离子通道抑制剂，能够与l型、t型钙离子通道和延迟型门控k(ca)通道有不同程度的相互作用(wang g等，life sci,1995,56(5):295～06)。
[0003][0004]
早期研究发现汉防己甲素及其溴代衍生物在体外研究中能逆转pgp过表达和凋亡缺陷介导的肿瘤多药耐药，并且在体内裸鼠耐药肿瘤移植瘤模型中具有良好的多药耐药逆转和增敏活性(tian h等，yao xue xue bao,1997,32:245
–
50；liu xd等，cancer lett,2010，292(1):24～31.)。通过对汉防己甲素的结构进行进一步的改造和修饰，获得新型汉防己甲素衍生物即5
‑
溴代双去甲基汉防己甲素双甲酸乙酯(见下化学结构式w8)，并在体外研究中有良好的多药耐药逆转活性和化疗增敏作用。文献(ping he等，j asian natprod res,2012,14(6):564～576)报道了该化合物的合成方法，获得无定型样品，但未研究化合物的晶型情况，也无其他文献报道。而药物的晶型对药物的理化性质、稳定性、制剂的质量和工艺等有重要意义，尤其是对药物生物利用度的影响关系到药物体内的药代动力学性质。因此，需要对其晶型进行研究。
[0005]


技术实现要素：

[0006]
本发明的目的在于提供一种5
‑
溴代双去甲基汉防己甲素双甲酸乙酯的新晶型。
[0007]
本发明的另一目的在于提供一种5
‑
溴代双去甲基汉防己甲素双甲酸乙酯新晶型
的制备方法。
[0008]
本发明的5
‑
溴代双去甲基汉防己甲素双甲酸乙酯的新晶型在本文中被称为“晶型i”。
[0009]
在一实施方案中，本发明的一种5
‑
溴代双去甲基汉防己甲素双甲酸乙酯的晶型i，使用cu
‑
ka辐射，以2θ角度表示的x射线粉末衍射在7.99
±
0.2、8.64
±
0.2、11.90
±
0.2、14.92
±
0.2、16.64
±
0.2、22.06
±
0.2、22.70
±
0.2处有特征峰。
[0010]
优选的，在上述实施方案中，本发明的5
‑
溴代双去甲基汉防己甲素双甲酸乙酯的晶型i，使用cu
‑
ka辐射，以2θ角度表示的x射线粉末衍射在7.99
±
0.2、8.64
±
0.2、10.24
±
0.2、11.12
±
0.2、11.90
±
0.2、12.32
±
0.2、14.92
±
0.2、15.56
±
0.2、16.42
±
0.2、17.10
±
0.2、19.86
±
0.2、22.06
±
0.2、22.70
±
0.2、25.04
±
0.2处有特征峰。
[0011]
在另一实施方案中，本发明的一种5
‑
溴代双去甲基汉防己甲素双甲酸乙酯的晶型i的制备方法，包括如下步骤：
[0012]
a.将5
‑
溴代双去甲基汉防己甲素双甲酸乙酯加入到含水的低级醇溶剂中；
[0013]
b.加热至30～120℃、搅拌，滴加二氯甲烷；
[0014]
c.降温至
‑
5～25℃，析晶，过滤，滤饼用二氯甲烷洗涤；
[0015]
d.将步骤c所得的滤饼干燥，即得5
‑
溴代双去甲基汉防己甲素双甲酸乙酯晶型i。
[0016]
在上述另一实施方案中，本发明的晶型i的制备方法，优选的，步骤a中，5
‑
溴代双去甲基汉防己甲素双甲酸乙酯与溶剂的质量体积比(g/ml)为1：(5～50)，所述溶剂，其低级醇溶剂与水的体积比为(1～5):1，优选为(2.5～5):1。
[0017]
上述本发明的晶型i的制备方法，优选的，步骤a中,所述低级醇选自甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、正丁醇、叔丁醇和乙二醇中的一种或多种。
[0018]
上述本发明的晶型i的制备方法，优选的，步骤b中，以质量体积比(g/ml)计，5
‑
溴代双去甲基汉防己甲素双甲酸乙酯与二氯甲烷的比例为1：(5～20)，优选1：(8
‑
10)，搅拌时间3～8小时。
[0019]
上述本发明的晶型i的制备方法，优选的，步骤b中，优选的，加热温度为60～80℃。
[0020]
上述本发明的晶型i的制备方法，优选的，步骤c中，降温温度为
‑
5～10℃。
[0021]
上述本发明的晶型i的制备方法，优选的，步骤c中，滤饼以1～10倍(质量体积比(g:ml)，以5
‑
溴代双去甲基汉防己甲素双甲酸乙酯质量计)二氯甲烷洗涤。
[0022]
上述本发明的晶型i的制备方法，优选的，步骤d中,干燥温度为25～55℃，优选为40～55℃,干燥时间为2～8小时，优选为3～5小时。
[0023]
本发明还提供了一种药物组合物，含有上述本发明的5
‑
溴代双去甲基汉防己甲素双甲酸乙酯晶型i和药用辅料。
[0024]
本发明还提供了一种本发明的5
‑
溴代双去甲基汉防己甲素双甲酸乙酯晶型i在制备治疗肿瘤、肿瘤逆转剂和肿瘤增敏剂药物中的用途。
[0025]
在一些优选实施中，本发明的一种5
‑
溴代双去甲基汉防己甲素双甲酸乙酯的晶型i，使用cu
‑
ka辐射，以2θ角度表示的x射线粉末衍射在具有如图1所示的特征峰。
[0026]
在一些优选实施中，本发明的5
‑
溴代双去甲基汉防己甲素双甲酸乙酯i晶型的制备方法，包括以下步骤：
[0027]
a.将5
‑
溴代双去甲基汉防己甲素双甲酸乙酯无定型态加入到5～50倍(质量体积
比(g/ml))的含水低级醇溶剂中；
[0028]
b.加热至30～120℃搅拌3～8小时，滴加5～10倍(质量体积比(g/ml)，以5
‑
溴代双去甲基汉防己甲素双甲酸乙酯质量计)二氯甲烷；
[0029]
c.降温至
‑
5～10℃，析晶，过滤，滤饼以1～10倍(质量体积比(g:ml)，以5
‑
溴代双去甲基汉防己甲素双甲酸乙酯质量计)二氯甲烷洗涤；
[0030]
d.将步骤c所得滤饼在干燥温度为25～55℃的条件下干燥2～8小时，即得5
‑
溴代双去甲基汉防己甲素双甲酸乙酯i晶型。
[0031]
在上述优选实施中，本发明的5
‑
溴代双去甲基汉防己甲素双甲酸乙酯i晶型的制备方法，优选地，步骤a)所述低级醇水溶剂，低级醇溶剂与水的体积比为(1～5):1所述低级醇溶剂选自甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、正丁醇、叔丁醇和乙二醇中的一种或多种，最优选地，为甲醇、乙醇、异丙醇、叔丁醇中的一种或多种。
[0032]
在上述优选实施中，本发明的5
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溴代双去甲基汉防己甲素双甲酸乙酯i晶型的制备方法，优选地，步骤a)中，5
‑
溴代双去甲基汉防己甲素双甲酸乙酯与低级醇水溶剂的质量体积比(g/ml)为1：(5～50)，最优选的，为1:(5～20)；所述溶剂，其低级醇溶剂与水的体积比为(2.5～5):1。
[0033]
在上述优选实施中，本发明的5
‑
溴代双去甲基汉防己甲素双甲酸乙酯i晶型的制备方法，优选地，步骤b)所述的加热温度为60～80℃，所述的滴加二氯甲烷的体积量是5
‑
溴代双去甲基汉防己甲素双甲酸乙酯质量的8～10倍(体积质量比ml/g)。
[0034]
在上述优选实施中，本发明的5
‑
溴代双去甲基汉防己甲素双甲酸乙酯i晶型的制备方法，优选地，步骤c)所述的析晶温度为
‑
5～5℃，滤饼以5～10倍(质量g体积ml倍)，以5
‑
溴代双去甲基汉防己甲素双甲酸乙酯质量计)二氯甲烷洗涤。
[0035]
在上述优选实施中，本发明的5
‑
溴代双去甲基汉防己甲素双甲酸乙酯i晶型的制备方法，优选地，步骤d)中，干燥温度为40～55℃，干燥时间为3～5小时。
[0036]
在上述一些优选实施方案中，本发明的5
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溴代双去甲基汉防己甲素双甲酸乙酯i晶型的制备方法，更优选的，步骤a)所述的5
‑
溴代双去甲基汉防己甲素双甲酸乙酯无定型加入到10～20倍(质量/体积g/ml)低级醇的水溶液中，所述低级醇溶剂与水的体积比为2.5～5:1，所述低级醇溶剂选自甲醇、乙醇、异丙醇和叔丁醇中的一种或几种；步骤b)所述的加热温度为60～80℃，所述的滴加二氯甲烷的量为8～10倍(以5
‑
溴代双去甲基汉防己甲素双甲酸乙酯质量计ml/g)；步骤c)所述的析晶温度为
‑
5～5℃，步骤d)干燥温度为50～55℃，干燥时间为4小时。
[0037]
本发明还提供一种药物组合物，包含本发明的5
‑
溴代双去甲基汉防己甲素双甲酸乙酯新晶型i和药用辅料。所述药物组合物为片剂、胶囊、颗粒剂、注射剂等，药用辅料选自本领域常规的药用辅料，如乳糖、微晶纤维素、交联聚维酮、低取代羟丙甲纤维素、淀粉、羧甲基纤维素钠、聚维酮、硬脂酸镁、滑石粉等。所述剂型均为本领域熟知的辅料和制备技术。
[0038]
本发明提供的5
‑
溴代双去甲基汉防己甲素双甲酸乙酯晶型i在制备用于肿瘤、肿瘤耐药、肿瘤增敏(如增强肿瘤化疗的敏感性)的治疗药物中的用途。
[0039]
本发明提供的5
‑
溴代双去甲基汉防己甲素双甲酸乙酯的新晶型i，具有稳定性高、生物利用度好、适合药用的要求和工业化生产的优势。
附图说明
[0040]
图1、实施例1制得的5
‑
溴代双去甲基汉防己甲素双甲酸乙酯的晶型i的x～射线粉末衍射图。
具体实施方式
[0041]
以下结合实施例对本发明作进一步说明，但不以此来限制本发明的范围。
[0042]
实施例1
[0043]
称取5
‑
溴代双去甲基汉防己甲素双甲酸乙酯的无定型500mg(参照文献ping he等，j asian nat prod res,2012,14(6):564～576.得到，下同)将其加入到25ml圆底烧瓶中，加入乙醇水溶液(乙醇5ml:水5ml)10ml。加热至75℃,搅拌3h，滴加二氯甲烷5ml，搅拌1h，后冷却降温至
‑
5～5℃，析晶，过滤，以5ml二氯甲烷洗涤滤饼，真空50～55℃干燥4小时，得5
‑
溴代双去甲基汉防己甲素双甲酸乙酯i晶型431mg，收率86.2％，纯度98.5％。室温下，取50mg晶型i样品进行x
‑
ray粉末衍射(rint 2100ultima x
‑
射线衍射仪，cu靶，石墨晶体单色器滤波，工作电压：40kv，电流：150ma，接收狭缝：0.3nm，2θ角为3
°
～60
°
，步长：0.02
°
)测试，获得的晶型i的xrpd数据，结果见图1。
[0044]
实施例2
[0045]
称取5
‑
溴代双去甲基汉防己甲素双甲酸乙酯无定型500mg，将其加入到25ml圆底烧瓶中，加入乙醇水溶液(乙醇5ml:水2ml)7ml。加热至80℃,搅拌4h，滴加二氯甲烷5ml，搅拌1h，后冷却降温至
‑
5～5℃，析晶，过滤，以5ml二氯甲烷洗涤滤饼，真空50～55℃干燥4小时，得5
‑
溴代双去甲基汉防己甲素双甲酸乙酯i晶型462mg，收率92.4％，纯度99.8％。
[0046]
实施例3
[0047]
称取5
‑
溴代双去甲基汉防己甲素双甲酸乙酯无定型500mg，将其加入到25ml圆底烧瓶中，加入叔丁醇水溶液(叔丁醇7.5ml:水2.5ml)10ml。加热至75～80℃,搅拌5小时，滴加二氯甲烷5ml，搅拌1h，后冷却降温至
‑
5～5℃，析晶，过滤，以5ml二氯甲烷洗涤滤饼，真空50～55℃干燥4小时，得5
‑
溴代双去甲基汉防己甲素双甲酸乙酯i晶型455mg，收率91.0％，纯度99.3％。
[0048]
实施例4
[0049]
称取5
‑
溴代双去甲基汉防己甲素双甲酸乙酯无定型500mg，将其加入到25ml圆底烧瓶中，加入甲醇水溶液(甲醇5ml:水1ml)6ml。加热至65℃,搅拌4小时，滴加二氯甲烷4ml，搅拌1h，后冷却降温至～5～5℃，析晶，过滤，以2.5ml二氯甲烷洗涤滤饼，真空50～55℃干燥4小时，得5
‑
溴代双去甲基汉防己甲素双甲酸乙酯i晶型418mg，收率83.6％，纯度96.3％。
[0050]
实施例5
[0051]
称取5
‑
溴代双去甲基汉防己甲素双甲酸乙酯无定型500mg，将其加入到25ml圆底烧瓶中，加入乙醇/异丙醇水溶液(乙醇5ml:异丙醇2.5ml：水2.5ml)10ml。加热至75℃,搅拌4小时，滴加二氯甲烷5ml，搅拌1h，后冷却降温至
‑
5～5℃，析晶，过滤，以5ml二氯甲烷洗涤滤饼，真空50～55℃干燥4小时，得5
‑
溴代双去甲基汉防己甲素双甲酸乙酯i晶型467mg，收率93.4％，纯度99.7％。
[0052]
实施例6
[0053]5‑
溴代双去甲基汉防己甲素双甲酸乙酯ⅰ晶型的稳定性研究：
[0054]
以无定型和ⅰ晶型为样本，分别放置于40℃，湿度为75％的恒温恒湿箱内进行加速实验，1、3、6个月后分别进行杂质含量测定，计算总杂质增长量(杂质量
时间
～杂质量
0月
)，结果见表1，晶型i在1个月、3个月和6个月总杂质增长量均显著小于无定型样品(p＜0.05，p＜0.01)，且未发现有转晶和吸湿的现象产生，表明ⅰ晶型具有更好的稳定性。
[0055]
表15
‑
溴代双去甲基汉防己甲素双甲酸乙酯ⅰ晶型的稳定性研究
[0056][0057]
注：与无定型1个月总杂质增长量相比，
*
p＜0.05；与无定型3个月总杂质增长量相比，
#
p＜0.05，
##
p＜0.01；与无定型6个月总杂质增长量相比，
△
p＜0.05，
△△
p＜0.01。
[0058]
实施例7
[0059]5‑
溴代双去甲基汉防己甲素双甲酸乙酯(w8)晶型ⅰ口服生物利用度药代学研究：
[0060]
18只sd雄性大鼠随机分为三组，每组6只，禁食2h，按75mg/kg，第一组尾静脉注射给药(iv.)w8溶液，第二组口服(灌胃，ig.)给药w8无定型，第三组灌胃给药w8的ⅰ晶型，于给药后在1min，2min，5min，10min，15min，30min，45min，1h，2h，4h，6h，8h，24h，48h时间点眼球内眦取血，置于肝素化离心塑料管中试，离心取上清液120μl，反相高效液相色谱(rp～hplc)法检测不同时间大鼠血药浓度，利用利用药动学处理分析软件(das 3.0.7)，采用非房室模型计算测得的血药浓度数据药动学参数(mean
±
sd)。结果见表2所示。
[0061]
表2sd大鼠分别静脉注射w8溶液、灌胃给药w8无定型和ⅰ晶型后的药动学参数
[0062][0063][0064]
表2的数据表明，ⅰ晶型样品的口服生物利用度为70.1％(f＝auc
po。
/f＝auc
iv.
×
100％)，无定型样品生口服物利用度为33.5％，ⅰ晶型样品的口服物利用度显著高于无定型(p＜0.01)，上述结果表明ⅰ晶型具有更好的口服生物利用度和稳定性，可用于制剂制造和储存，合适的药物制剂包含片剂、胶囊、口崩片、分散片等。