一种联合A群链球菌制剂和TLR8激动剂共刺激扩增CIK细胞的方法及其应用与流程

文档序号:24622500发布日期:2021-04-09 20:28阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种联合a群链球菌制剂和tlr8激动剂共刺激扩增cik细胞的方法,其特征在于,通过a群链球菌制剂和tlr8激动剂的组合来刺激扩增cik细胞。

2.根据权利要求1所述的联合a群链球菌制剂和tlr8激动剂共刺激扩增cik细胞的方法,其特征在于,包括如下步骤:

(1)采集血液,分离获得单个核细胞;

(2)向混悬后的单个核细胞悬液中加入350~500u/mlifn-γ,0.02~2ke/mla群链球菌制剂和10~30μmtlr8激动剂培养;

(3)培养2天后加入cd3、il-1α和il-2激活细胞,进行cik细胞的诱导培养,即可收获大量、高细胞活性的cik细胞。

3.根据权利要求2所述的联合a群链球菌制剂和tlr8激动剂共刺激扩增cik细胞的方法,其特征在于,

步骤(1)中所述的血液为脐血和外周血中的至少一种;

步骤(1)中所述的分离为聚蔗糖-泛影葡糖胺密度梯度离心法分离。

4.根据权利要求2所述的联合a群链球菌制剂和tlr8激动剂共刺激扩增cik细胞的方法,其特征在于,

步骤(1)中所述的分离获得单个核细胞的方法,具体为:采集新鲜抗凝血50ml,采用聚蔗糖-泛影葡糖胺密度梯度离心法,600g离心30min,吸取中间乳白色单个核细胞层,并用生理盐水洗涤2次,600g低速离心10min后获得单个核细胞。

5.根据权利要求2所述的联合a群链球菌制剂和tlr8激动剂共刺激扩增cik细胞的方法,其特征在于,步骤(2)中所述的单个核细胞悬液的浓度为1.8×106~2×106个/ml;

步骤(2)中所述的培养用培养箱培养;

步骤(2)中所述的培养的条件为37℃,5%co2和饱和湿度的培养箱。

6.根据权利要求2所述的联合a群链球菌制剂和tlr8激动剂共刺激扩增cik细胞的方法,其特征在于,

步骤(3)中所述的cd3的加入量为100~300ng/ml。

7.根据权利要求2所述的联合a群链球菌制剂和tlr8激动剂共刺激扩增cik细胞的方法,其特征在于,

步骤(3)中所述的il-1α的加入量为100~300u/ml。

8.根据权利要求2所述的联合a群链球菌制剂和tlr8激动剂共刺激扩增cik细胞的方法,其特征在于,步骤(3)中所述的il-2的加入量为40~80u/ml。

9.根据权利要求2所述的联合a群链球菌制剂和tlr8激动剂共刺激扩增cik细胞的方法,其特征在于,

步骤(3)中所述的诱导培养的条件为:于37℃,5%co2和饱和湿度的培养箱内培养13~15天。

10.权利要求1~9任一所述的联合a群链球菌制剂和tlr8激动剂共刺激扩增cik细胞的方法在扩增cik细胞中的应用。


技术总结
本发明公开了一种联合A群链球菌制剂和TLR8激动剂共刺激扩增CIK细胞的方法及其应用,属于细胞培养技术领域。所述的联合A群链球菌制剂和TLR8激动剂共刺激扩增CIK细胞的方法,通过A群链球菌制剂和TLR8激动剂的组合来刺激扩增CIK细胞。本发明所述方法培养的CIK细胞与常规方法培养制备的CIK细胞相比,利用A群链球菌制剂和TLR8激动剂作为刺激剂,直接激活CIK细胞,使获得的CIK细胞具有数量大、纯度高、细胞毒性强等特点,从而能够满足临床的需要。

技术研发人员:魏伟;嵐山芮;刘松
受保护的技术使用者:广州瑞铂茵健康科技有限公司
技术研发日:2020.12.30
技术公布日:2021.04.09
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