自动质粒大提装置的制作方法

[0001]
本实用新型涉及质粒提取装置领域，特别涉及一种自动质粒大提装置。


背景技术：

[0002]
质粒是附加到细胞中的非细胞的染色体或核区dna原有的能够自主复制的较小的dna分子，它是把一个有用的目的dna片段通过重组dna技术，送进受体细胞中去进行繁殖和表达的常用载体。因而质粒提取是基因克隆过程中的一个常规操作。
[0003]
目前通常使用碱裂解法从大肠杆菌制备质粒。其原理为：将细菌悬浮液暴露于高ph值的强阴离子溶液中，使细胞壁破裂，质粒dna和染色体dna变性，同时沉淀蛋白质；再将ph值调至中性，质粒dna较小，很容易复性成双链，而染色体dna较大，不会复性，缠结成网状不溶物质，从而可以通过离心除去。大提的一般步骤为将细菌培养液离心获得菌体，加入重悬液，再加入新配制的细菌裂解溶液，最后加入用冰预冷的用于中和ph的中和溶液，然后抽滤，去除沉淀，将上清液加入dna吸附柱，重力沉降去除废液；加入大量的洗液1洗一遍，重力沉降去除废液；再加入洗液2洗一遍，重力沉降去除废液；最后用洗脱液洗脱得到纯的质粒dna。由于吸附柱洗脱过程中需要用到的溶液在1000ml左右，目前传统的实验过程中需要人工不停地添加溶液并等待吸附柱去除废液，该过程工作重复性高，工作量大，提取效率低，不利于大批量生产提取。


技术实现要素：

[0004]
本实用新型的目的在于提供一种高效提取质粒的自动质粒大提装置。
[0005]
为达到上述目的，本实用新型提供如下技术方案：一种自动质粒大提装置，包括溶液瓶、吸附柱和溶液收集器，所述溶液收集器用于收集所述吸附柱流出的液体，所述大提装置还包括控制器、分别与所述控制器电性连接的输送泵、高液位传感器和低液位传感器，所述输送泵的入口和出口分别与所述溶液瓶和所述吸附柱相连通，所述高液位传感器和所述低液位传感器设置在所述吸附柱上，所述高液位传感器和所述低液位传感器用于监测所述吸附柱的液位并将信号发送至所述控制器，所述控制器用于接收传感器信号并控制所述输送泵的启停。
[0006]
进一步地，所述高液位传感器设置在所述吸附柱靠近上端的外壁上，所述低液位传感器设置在所述吸附柱靠近下端的外壁上。
[0007]
进一步地，所述高液位传感器和所述低液位传感器为非接触式液位传感器。
[0008]
进一步地，所述输送泵为蠕动泵，所述输送泵包括用于输送液体的软管，所述软管的两端分别插设在所述溶液瓶和所述吸附柱中。
[0009]
进一步地，所述大提装置还包括铁架台，所述吸附柱安装在所述铁架台上，所述溶液收集器位于所述吸附柱下方。
[0010]
进一步地，所述铁架台包括架体和设置在所述架体上的固定环，所述吸附柱固定在所述固定环内。
[0011]
进一步地，所述架体包括连接套、穿设在所述连接套中的第一支撑杆和第二支撑杆，所述连接套可沿着所述第一支撑杆上下调节，所述第二支撑杆可沿着所述连接套上下调节并收容于所述第一支撑杆内。
[0012]
进一步地，所述第一支撑杆和所述第二支撑杆为同心设置的中空柱状结构，所述第二支撑杆的外径小于所述第一支撑杆的内径。
[0013]
进一步地，所述连接套包括插接所述第一支撑杆的第一套部以及插接所述第二支撑杆的第二套部，所述第一套部和所述第二套部上均开设有开口，所述开口上方设置有用于紧固所述第一支撑杆和所述第二支撑杆的锁紧耳。
[0014]
进一步地，所述锁紧耳包括对称所述开口两侧设置的连接半部，所述连接半部开设有螺纹孔。
[0015]
本实用新型的有益效果在于：本实用新型的吸附柱上设置有高液位传感器和低液位传感器，溶液瓶中的溶液通过控制器控制输送泵送入吸附柱内，当吸附柱内的溶液到达高液位时，高液位传感器能够将信号发送至控制器，控制器控制输送泵停止工作，当吸附柱内的液体经重力沉降流出至低液位时，低液位传感器能够将信号发送至控制器，控制器控制输送泵重新工作，从而无需人工重复对吸附柱内进行加液，减小工作量；同时，人工也无需等待吸附柱沉降，减少等待所占用的时间，质粒提取更为高效。
[0016]
上述说明仅是本实用新型技术方案的概述，为了能够更清楚了解本实用新型的技术手段，并可依照说明书的内容予以实施，以下以本实用新型的较佳实施例并配合附图详细说明如后。
附图说明
[0017]
图1是本实用新型自动质粒大提装置的结构示意图。
[0018]
图2是图1自动质粒大提装置的铁架台的结构示意图。
[0019]
图3是图2铁架台的剖视示意图。
具体实施方式
[0020]
下面将结合附图对本实用新型的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本实用新型一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本实用新型中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本实用新型保护的范围。
[0021]
在本实用新型的描述中，需要说明的是，术语“中心”、“上”、“下”、“左”、“右”、“竖直”、“水平”、“内”、“外”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本实用新型和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本实用新型的限制。此外，术语“第一”、“第二”、“第三”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性。
[0022]
在本实用新型的描述中，需要说明的是，除非另有明确的规定和限定，术语“安装”、“相连”、“连接”应做广义理解，例如，可以是固定连接，也可以是可拆卸连接，或一体地连接；可以是机械连接，也可以是电连接；可以是直接相连，也可以通过中间媒介间接相连，可以是两个元件内部的连通。对于本领域的普通技术人员而言，可以具体情况理解上述术
语在本实用新型中的具体含义。此外，下面所描述的本实用新型不同实施方式中所涉及的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互结合。
[0023]
如图1所示，对应于本实用新型一种较佳实施例的自动质粒大提装置，包括溶液瓶1、吸附柱2、溶液收集器3、输送泵4和控制器5，溶液收集器3位于吸附柱2下方并用于收集吸附柱2内的液体，输送泵4的入口与溶液瓶1相连通，输送泵4的出口与吸附柱2相连通，吸附柱2上设置有用于监测吸附柱2内液位情况的高液位传感器6和低液位传感器7，控制器5分别与输送泵4、高液位传感器6和低液位传感器7电性连接。
[0024]
高液位传感器6设置在吸附柱2靠近上端的外壁上，低液位传感器7设置在吸附柱2靠近下端的外壁上。高液位传感器6和低液位传感器7用于将监测到的液位信号发送至控制器5。在本实施例中，高液位传感器6和低液位传感器7为非接触式液位传感器，从而实现了对容器内液位高度的非接触检测，适应性更高，能够满足不同特性溶液液位的检测需求。非接触式液位传感器为现有技术，本实用新型在此不再赘述其结构和原理。
[0025]
输送泵4具体为蠕动泵，从而能够更为精确的控制流入吸附柱2内的液体。输送泵4包括用于输送液体的软管41，软管41的两端分别插设在溶液瓶1和吸附柱2中。软管41具体为硅胶管，吸附柱2具体为qiagen-tip柱。
[0026]
控制器5具体为plc控制器，控制器5与电源相接，电源可选择5-24v的电源。当吸附柱2内的液体流出而使其液位降低至低液位传感器7位置时，低液位传感器7能够监测并将信号发送至控制器5，控制器5控制输送泵4启动，并将溶液由溶液瓶1泵入吸附柱2内；当吸附柱2中溶液的液位升高至高液位传感器6位置时，高液位传感器6能够监测并将信号发送至控制器5，控制器5控制输送泵4停止工作。采用该种方式能够避免人工对吸附柱2内进行添加溶液，减小工作量。
[0027]
如图2和图3所示，自动质粒大提装置还包括铁架台8，吸附柱2固定在铁架台8上，溶液收集器3位于吸附柱2下方。铁架台8包括架体81和设置在架体81上的用于固定吸附柱2的固定环82。架体81包括连接套811、穿设在连接套811中的第一支撑杆812和第二支撑杆813，连接套811可沿着第一支撑杆812上下调节，第二支撑杆813可沿着连接套811上下调节并收容于第一支撑杆812内。
[0028]
第一支撑杆812和第二支撑杆813为同心设置的中空柱状结构，第二支撑杆813的外径小于第一支撑杆812的内径，从而确保第二支撑杆813能够收容于第一支撑杆812内。连接套811包括插接第一支撑杆812的第一套部8111和插接第二支撑杆813的第二套部8112，第一套部8111和第二套部8112上均开设有开口8113，开口8113上方设置锁紧耳814和穿设在锁紧耳814内的紧固件(图未示)，锁紧耳814包括对称开口8113两侧设置的两连接半部8141，连接半部8141开设有螺纹孔8142，紧固件与螺纹孔8142相配接从而控制开口8113收缩，以紧固第一支撑杆812和第二支撑杆813。
[0029]
连接套811和第二支撑杆813上均设置有连接杆815，连接杆815的端部用于安装固定环82。吸附柱2根据实际需要可选择固定在连接套811上的固定环82内或者第二支撑杆813上的固定环82内，以实现不同规格的吸附柱2高度的调节。通过设置第一支撑杆812、第二支撑杆813和连接二者的连接套811，在不影响固定环82高度上调节的同时，第二支撑杆813能够很方便的收容于第一支撑杆812内，从而有效减小铁架台8的高度，便于收纳。
[0030]
作为一种优选的实施例，大提装置还包括蜂鸣器9，蜂鸣器9与控制器5电性连接，
当溶液瓶1内的溶液流空时，控制器5能够检测输送泵4空转，此时，蜂鸣器9将发出警报，从而提醒作业人员换液。
[0031]
质粒提取过程如下：将enase a加入buffer p1中，以1:10000比例向buffer p1中加入lyseblue，2-8℃储存；将buffer p3在4℃预先冷却，检查buffer p2有没有sds沉淀；在试剂盒提供的endotoxin free water中加入40ml无水乙醇；打开制冰机制冰，打开超净台紫外灯照射30min。在超净工作台中分装菌液，以6000xg，4℃，18min的方式离心收集菌体；向菌体中加入125ml buffer p1，并充分震荡混匀，之后转移到1000ml的培养瓶中；加入125ml的buffer p2，轻柔的上下翻转4-6次，室温放置5min；在放置期间将qiafilter cartridge过滤器连接到500ml培养瓶上；向培养瓶中加入125ml buffer p3，剧烈地上下翻转混匀4-6次；将溶液倒入过滤器，静置10min，开始抽滤，直到所有液体滤完；然后向过滤器中加入50ml buffer fwb2，用无菌棒轻柔搅动。开始抽滤，液体流完时停止；向滤液中加入30ml buffer er，颠倒混匀10次左右，冰浴30min。
[0032]
在冰浴期间，将自动质粒大提装置用酒精擦拭后放入超净工作台中；其中，吸附柱2安装在铁架台8的固定环82上，溶液收集器3放置在吸附柱2下方；用75ml buffer qbt平衡吸附柱2，通过重力沉降流空；将冰浴后的溶液放入溶液瓶1中，将输送泵4的软管41的一端插入溶液瓶1中，另一端插入吸附柱2中；接通电源，控制器5控制输送泵4将溶液泵入吸附柱2中，当吸附柱2液位到达高液位时，输送泵4停止工作，吸附柱2通过重力沉降去除废液，当吸附柱2液位到达低液位时，输送泵继续工作将溶液瓶1中的液体泵入吸附柱2，重复上述动作，直至溶液瓶1中溶液全部流完；当溶液流完后，蜂鸣器9会提醒实验人员换液，此时实验人员只需将软管41移入用于存放洗脱的qc溶液的瓶中，继续上述泵入步骤，从而对吸附柱2中的质粒污染物进行洗脱；待buffer qc流完，用100ml buffer qn洗脱吸附柱2上的dna，并收集其含dna的洗脱液；向洗脱的dna中加入70ml室温下的异丙醇使dna沉淀，15000xg，4℃离心30min，仔细弃掉上清；用室温、无内毒的70％酒精冲洗dna沉淀，15000xg离心10min，仔细弃掉上清；室温晾干沉淀10-20min，用适量体积的无内毒buffer te溶解dna；测量dna浓度,纯度a260/a280，记录并将其保存于-20℃冰箱。
[0033]
综上所述：本实用新型通过采用上述自动质粒大提装置，在质粒提取过程中，能够节省实验人员将溶液倒入吸附柱中的时间和等待吸附柱沉降的时间，同时人工也无需手动对吸附柱进行溶液添加，极大减小了工作量，使质粒提取更为高效。
[0034]
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
[0035]
以上所述实施例仅表达了本实用新型的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对实用新型专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本实用新型构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本实用新型的保护范围。因此，本实用新型专利的保护范围应以所附权利要求为准。