作为激酶抑制剂的杂环化合物的制作方法

作为激酶抑制剂的杂环化合物
相关申请的交叉引用
1.本技术要求2019年8月14日提交的美国临时申请号62/886,792的优先权，将其内容通过引用以其整体并入本文。
技术领域
2.本公开大体上涉及在控制细胞周期方面起到关键作用的治疗剂，且更具体地涉及抑制周期蛋白依赖性激酶(cdk)的化合物。本发明还提供包含本发明化合物的药学上可接受的组合物以及使用所述组合物治疗与这些通路相关的疾病的方法。


背景技术：

3.所述细胞周期为细胞的逐次分裂之间的时间段。在这个时间段期间，必须准确地复制细胞的内容。允许细胞分裂的过程完全由多个酶促反应准确控制，其中蛋白激酶触发的蛋白质磷酸化起到主要作用。在真核细胞中，存在细胞周期的四个主要阶段/时期，即gap-1(g1)期、合成(s)期、gap-2(g2)期和有丝分裂(m)期。gap-1期的延长期被称为gap-0(g0)期或静息期(癌症(cancers)2014,6,2224-2242)。
4.不受控增殖是癌症和其他增生性病症的标志，因此，这些疾病中常见异常细胞周期调控。周期蛋白依赖性激酶(cdk)构成参与细胞周期和转录的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶的异二聚体家族。其包含两个主要群组：细胞周期cdk和转录cdk。cdk的功能性取决于与称为周期蛋白的调控蛋白的特异性相互作用，所述周期蛋白与其搭配物形成异二聚体复合物。这些复合物是重要的细胞过程调控因子，尤其是在细胞周期进程中。
5.人类蛋白质组含有20个cdk以及29个周期蛋白。cdk1、cdk2、cdk4和cdk6一般被视为细胞周期cdk，而cdk7、cdk8、cdk9和cdk11主要参与转录调控(基因组生物学(genome biol)2014；15(6):122、自然细胞生物学(nat cell biol)2009；11(11):1275-6)。cdk5为非典型cdk的原型：其由非周期蛋白p35(或cdk5r1)和p39(或cdk5r2)活化并且在神经元生物学、血管新生和细胞分化中具有独特的有丝分裂后功能。增生信号通过活化结构上相关的cdk4和cdk6来诱导g0或g1期到s期的转变[发育(development),2013；140(15):3079-93、生物化学药理学(biochem pharmacol)2012；84(8):985-93、自然(nature)2014；510(7505):393-6]。周期蛋白d与cdk4和cdk6的结合促进转录抑制因子成视网膜细胞瘤蛋白(rb1)的磷酸化。
[0006]
常常在癌症中观测到cdk过度活性，反映了其在细胞周期和转录调控中的显著作用。在癌细胞中，细胞分裂过程变得不受调控，导致引起肿瘤发展的不受控生长。多种机制有助于恶性细胞中细胞周期的失调，包含cdk4/6的扩增和过度活性或其基因组不稳定性，这可能导致cdk4/6变成细胞复制的致癌驱动因子。夺取这些机制，癌细胞可通过触发g1至s期转变而继续复制。这个过程看来是通过缩短g1期来促进的。在癌细胞中，cdk4/6拮抗包含细胞衰老和细胞凋亡的内源性肿瘤抑制机制，这进一步增进肿瘤的生长。癌细胞还上调其他cdk和周期蛋白，并且减少抑制机制，例如内源性抑制剂和肿瘤抑制蛋白。这种类型的细
胞周期失调的总体影响是恶性细胞增殖和癌症的发展(临床乳腺癌(clinical breast cancer),2016,1526-8209)。
[0007]
已报告(例如在wo 2011101409和wo 2011101417中)并且已临床开发数种cdk抑制剂。夫拉平度(flavopiridol)和r-罗斯维汀(r-roscovitine)(塞利昔布，seliciclib)是第一代归因于下调cdk9介导的抗细胞凋亡蛋白(尤其mcl-1)而具有抗肿瘤活性的pan-cdk抑制剂。最近，已开发了新一代cdk抑制剂，对其进行了临床试验，并且经批准用于某些类型的癌症。一种cdk1、cdk2、cdk5和cdk9的选择性抑制剂戴那昔布(dinaciclib)针对难治性慢性淋巴细胞性白血病，同时针对晚期雌激素受体(er)阳性乳腺癌对帕泊昔布(palbociclib)进行了测试以作为cdk4和cdk6的选择性抑制剂。更具选择性的第二代和第三代cdk抑制剂(包含特异性cdk4/6抑制剂)的开发重燃了在癌症治疗中操控周期蛋白d1-cdk4/6轴的热情。目前存在三种经fda批准的cdk4/6抑制剂：帕泊昔布、瑞博西尼(ribociclib)和玻玛西尼(abemaciclib)。
[0008]
因此，可能极其需要开发用于使用目标大体在于cdk或尤其在于cdk4和cdk6的双重抑制的治疗剂来治疗增生性病症的疗法(包含单一疗法)。
[0009]
仍需要新型cdk4/6抑制剂。用于治疗过度增生性疾病的化合物优选地具有至少一个选自以下的有利特性：选择性、效力、稳定性、药效性和安全特征。在这方面，本文提供一种新型类别的cdk4/6抑制剂。


技术实现要素：

[0010]
在一个实施方案中，提供了一种式(i)的化合物：或其盐，其中x、z、a、b、l、r1、r2、r4、r5、r6、m、n、p和q是如本文详述的。
[0011]
在另一方面，提供了一种治疗有需要的个体的癌症的方法，所述方法包括向个体施用治疗有效量的如本文详述的化合物，例如式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)至(i-c45)的化合物，或其药学上可接受的盐。还提供一种调节个体中的cdk4/6的方法，其包括向个体施用本文中详述的化合物或其盐。还提供一种调节个体的cdk4/6以及cdk1、cdk2和cdk9中的一或多个的方法，其包括向个体施用本文中详述的化合物或其盐。还提供一种抑制细胞中的cdk4/6的方法，其包括向细胞施用本文中详述的化合物或其盐。还提供一种抑制细胞中的cdk4/6以及cdk1、cdk2和cdk9中的一或多个的方法，其包括向细胞施用本文中详述的化合物或其盐。在本文中详述的方法的一些实施例中，所述方法包括作为单一疗法施用本文中详述的化合物或其盐。
[0012]
在另一方面，提供一种药物组合物，其包括本文中详述的化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载剂或赋形剂。还提供试剂盒，其包括本文中详述的化合物或
其盐。试剂盒可任选地包含使用说明书，例如本文中详述的任一种方法中的使用说明书，例如用于治疗癌症。还提供了如本文详述的化合物或其盐，其用于制造用于治疗癌症的药剂。
具体实施方式
定义
[0013]“烷基”是指并且包括具有指定的碳原子数(即，c
1-c
10
意指1至10个碳)的饱和的直链和支链的单价烃结构及其组合。具体的烷基是具有1至20个碳原子的那些(“c
1-c
20
烷基”)。更具体的烷基是具有1至8个碳原子(“c
1-c8烷基”)、3至8个碳原子(“c
3-c8烷基”)、1至6个碳原子(“c
1-c6烷基”)、1至5个碳原子(“c
1-c5烷基”)、或1至4个碳原子(“c
1-c4烷基”)的那些。烷基的例子包括但不限于诸如以下的基团：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、仲丁基，例如正戊基、正己基、正庚基、正辛基的同系物和异构体等。
[0014]
如本文所用，“烯基”是指具有至少一个烯属不饱和位点(即，具有至少一个式c＝c的部分)并且具有指定的碳原子数(即，c
2-c
10
意指2至10个碳原子)的不饱和的直链或支链的单价烃链或其组合。烯基可以呈“顺式”或“反式”构型，或可替代地呈“e”或“z”构型。具体的烯基是具有2至20个碳原子(“c
2-c
20
烯基”)、具有2至8个碳原子(“c
2-c8烯基”)、具有2至6个碳原子(“c
2-c6烯基”)、或具有2至4个碳原子(“c
2-c4烯基”)的那些。烯基的例子包括但不限于诸如以下的基团：乙烯基(ethenyl)(或乙烯基(vinyl))、丙-1-烯基、丙-2-烯基(或烯丙基)、2-甲基丙-1-烯基、丁-1-烯基、丁-2-烯基、丁-3-烯基、丁-1,3-二烯基、2-甲基丁-1,3-二烯基、其同系物和异构体等。
[0015]
如本文所用，“亚烷基”是指与烷基相同但是具有二价的残基。具体的亚烷基是具有1至6个碳原子(“c
1-c6亚烷基”)、1至5个碳原子(“c
1-c5亚烷基”)、1至4个碳原子(“c
1-c4亚烷基”)或1至3个碳原子(“c
1-c3亚烷基”)的那些。亚烷基的例子包括但不限于诸如以下的基团：亚甲基(-ch
2-)、亚乙基(-ch2ch
2-)、亚丙基(-ch2ch2ch
2-)、亚丁基(-ch2ch2ch2ch
2-)等。
[0016]
如本文所用，“炔基”是指具有至少一个炔属不饱和位点(即，具有至少一个式c≡c的部分)并且具有指定的碳原子数(即，c
2-c
10
意指2至10个碳原子)的不饱和的直链或支链的单价烃链或其组合。具体的炔基是具有2至20个碳原子(“c
2-c
20
炔基”)、具有2至8个碳原子(“c
2-c8炔基”)、具有2至6个碳原子(“c
2-c6炔基”)、或具有2至4个碳原子(“c
2-c4炔基”)的那些。炔基的例子包括但不限于诸如以下的基团：乙炔基(ethynyl)(或乙炔基(acetylenyl))、丙-1-炔基、丙-2-炔基(或炔丙基)、丁-1-炔基、丁-2-炔基、丁-3-炔基、其同系物或异构体等。
[0017]“芳基”是指并且包括多不饱和的芳族烃基团。芳基可以含有另外的稠环(例如1至3个环)，包括另外稠合的芳基、杂芳基、环烷基、和/或杂环基环。在一种变型中，芳基含有6至14个环形碳原子。芳基的例子包括但不限于苯基、萘基、联苯基等。
[0018]“羰基”是指基团c＝o。
[0019]“环烷基”是指并且包括环状烃结构，所述结构可以是完全饱和的、单不饱和的或多不饱和的，但是非芳族的，具有指定的碳原子数(例如，c
1-c
10
意指1至10个碳)。环烷基可以由一个环(诸如环己基)或多个环(诸如金刚烷基)组成，但是不包括芳基。包含多于一个环的环烷基可以是稠合、螺环或桥接的、或其组合。优选的环烷基是具有3至13个环状碳原子的环状烃。更优选的环烷基是具有3至8个环状碳原子的环状烃(“c
3-c8环烷基”)。环烷基
的例子包括但不限于：环丙基、环丁基、环戊基、环己基、1-环己烯基、3-环己烯基、环庚基、降冰片基等。
[0020]“卤基”或“卤素”是指具有原子数9至85的17族系列的元素。优选的卤代基团包括氟、氯、溴和碘。在残基被多于一个卤素取代的情况下，它可以通过使用对应于所附接的卤素部分的数量的前缀来提及，例如，二卤代芳基、二卤代烷基、三卤代芳基等是指被两个(“二”)或三个(“三”)卤代基团(可能是但不必须是相同的卤基)取代的芳基和烷基；因此，4-氯-3-氟苯基在二卤代芳基的范围内。其中每个氢被卤代基团替代的烷基称为“全卤代烷基”。优选的全卤代烷基是三氟烷基(-cf3)。类似地，“全卤代烷氧基”是指在构成烷氧基的烷基部分的烃中卤素替代每个h的烷氧基。全卤代烷氧基的例子是三氟甲氧基(-ocf3)。
[0021]“杂芳基”是指并且包括具有1至10个环碳原子和至少一个环杂原子(包括但不限于诸如氮、氧和硫的杂原子)的不饱和芳族环基团，其中所述氮和硫原子任选地被氧化，并且一个或多个氮原子任选地被季铵化。杂芳基可以在环碳处或在环杂原子处与分子的其余部分附接。杂芳基可以含有另外的稠环(例如，1至3个环)，包括另外稠合的芳基、杂芳基、环烷基、和/或杂环基环。杂芳基的例子包括但不限于吡啶基、嘧啶基、噻吩基、呋喃基、噻唑基、吡唑基、噁唑基、异噁唑基、咪唑基、喹啉基、异喹啉基、苯并咪唑基、苯并吡唑基、苯并三唑基、吲哚、苯并噻唑基、苯并噁唑基、苯并异噁唑基、咪唑并吡啶基等。
[0022]“杂环”或“杂环基”是指具有1至10个环碳原子和1至4个环杂原子(诸如氮、硫或氧等)的饱和或不饱和非芳族基团，其中所述氮和硫原子任选地被氧化，并且一个或多个氮原子任选地被季铵化。杂环基可以具有单环或多个缩合环，但是不包括杂芳基。包含多于一个环的杂环可以是稠合、螺环或桥接的、或其任何组合。杂环基的例子包括但不限于四氢吡喃基、二氢吡喃基、哌啶基、哌嗪基、吡咯烷基、噻唑啉基、噻唑烷基、四氢呋喃基、二氢噁唑基、二氢异噁唑基、二氧戊环基、吗啉基、二噁烷基、四氢噻吩基等。
[0023]“氧代基”是指部分＝o。
[0024]
除非另外说明，否则“任选地被取代的”是指基团可能未被针对所述基团所列举的取代基中的一或多个(例如，1、2、3、4或5个)取代或被取代，其中所述取代基可相同或不同，其限制条件为不超过基团的正常价。在一个实施方案中，任选地被取代的基团具有一个取代基。在另一个实施方案中，任选地被取代的基团具有两个取代基。在另一个实施方案中，任选地被取代的基团具有三个取代基。在另一个实施方案中，任选地被取代的基团具有四个取代基。在一些实施方案中，任选地被取代的基团具有1至2个、2至5个、3至5个、2至3个、2至4个、3至4个、1至3个、1至4个或1至5个取代基。
[0025]
如本文所用，“cdk”是指一或多种周期蛋白依赖性激酶。cdk4/6是指cdk4和cdk6两者。因此，cdk4/6的抑制剂抑制cdk4和cdk6两者。
[0026]“药学上可接受的载体”是指药物配制品中除了活性成分之外对受试者无毒的成分。药学上可接受的载体包括但不限于缓冲液、赋形剂、稳定剂或防腐剂。
[0027]
如本文所用，“治疗”(“treatment”或“treating”)是用于获得有益或希望的结果(包括临床结果)的方法。例如，有益或希望的结果包括但不限于以下一种或多种：减少由疾病引起的症状、提高患有疾病的患者的生活质量、减少治疗疾病所需的其他药物的剂量、延迟疾病的进展和/或延长个体的生存。关于癌症或其他不需要的细胞增殖，有益或希望的结果包括缩小肿瘤(减小肿瘤大小)；降低肿瘤的生长速率(诸如抑制肿瘤生长)；减少癌细胞
的数量；在一定程度上抑制、减缓或减慢并且优选停止癌细胞向外周器官的浸润；抑制(在一定程度上减慢并且优选停止)肿瘤转移；抑制肿瘤生长；防止或延迟肿瘤的发生和/或复发；和/或在一定程度上缓解与癌症相关的一种或多种症状。在一些实施方案中，有益或希望的结果包括预防或延迟发生和/或复发，诸如不需要的细胞增殖的发生和/或复发。
[0028]
如本文所用，“延迟疾病的发展”意指推迟、阻碍、减慢、延缓、稳定和/或延期疾病(诸如癌症)的发展。此延迟可以具有不同的时间长度，这取决于病史和/或所治疗的个体。如对于本领域技术人员清楚的是，足够或显著的延迟实际上可以涵盖预防，因为个体不会患上疾病。例如，可能延迟晚期癌症，诸如转移的发展。
[0029]
如本文所用，化合物或其盐或药物组合物的“有效剂量”或“有效量”是足以实现有益或希望的结果的量。对于预防性用途，有益或希望的结果包括诸如以下的结果：消除或降低风险、减轻疾病的严重程度或延迟疾病的发作，所述疾病包括所述疾病的生化、组织学和/或行为症状、其并发症和在所述疾病发展期间呈现出的中间病理表型。对于治疗性用途，有益或希望的结果包括以下的结果：改善、缓解、减轻、延迟或减少由疾病引起的一种或多种症状；提高患有所述疾病的那些的生活质量；减少治疗所述疾病所需的其他药物的剂量；诸如经由靶向、延迟疾病的进展和/或延长生存来增强另一种药物的作用。关于癌症或其他不需要的细胞增殖，有效量包含这样的量，其足以引起肿瘤缩小和/或降低肿瘤的生长速率(诸如抑制肿瘤生长)，或者预防或延迟其他不需要的细胞增殖。在一些实施方案中，有效量是足以延迟发展的量。在一些实施方案中，有效量是足以预防或延迟发生和/或复发的量。可以在一次或多次施用中施用有效量，在癌症的情况下，药物或组合物的有效量可以：(i)减少癌细胞的数量；(ii)减小肿瘤大小；(iii)在一定程度上抑制、延缓、减慢并且优选阻止癌细胞向外周器官的浸润；(iv)抑制(即，在一定程度上减慢并且优选停止)肿瘤转移；(v)抑制肿瘤生长；(vi)防止或延迟肿瘤的发生和/或复发；和/或(vii)在一定程度上缓解与癌症相关的一种或多种症状。可以在一次或多次施用中施用有效剂量。出于本公开文本的目的，化合物或其盐或药物组合物的有效剂量是足以直接或间接地完成预防性或治疗性治疗的量。预期并且理解的是，有效剂量的化合物或其盐或药物组合物可以实现或不实现与另一种药物、化合物或药物组合物的结合。因此，可以在施用一种或多种治疗剂的情况下考虑“有效剂量”，并且如果与一种或多种其他药剂结合可以实现或实现所希望的结果，则可以考虑以有效量给予单一药剂。
[0030]
如本文所用，术语“个体”是哺乳动物，包括人。个体包括但不限于人、牛、马、猫、犬、啮齿动物或灵长类动物。在一些实施方案中，所述个体是人。所述个体(诸如人)可能患有晚期疾病或较小程度的疾病，诸如低肿瘤负荷。在一些实施方案中，所述个体处于增殖性疾病(诸如癌症)的早期阶段。在一些实施方案中，所述个体处于增殖性疾病(诸如晚期癌症)的晚期阶段。
[0031]
本文对“约”某一值或参数的提及包括(并且描述)针对所述值或参数本身的实施方案。例如，涉及“约x”的描述包括“x”的描述。
[0032]
应理解，本文所描述的实施方案、方面和变化形式还包含“由实施方案、方面和变型组成”和/或“基本上由其组成”。化合物
[0033]
在一方面，提供了一种式(i)的化合物：
c3亚烷基)nr
13r14
、-(c
1-c3亚烷基)c(o)r
13
、c
3-c8环烷基或任选地被氧代基、-oh或卤素取代的c
1-c6烷基；每个r6独立地为氧代基、卤素或r7,r7独立地为氢、c
1-c6烷基、c
2-c6烯基、c
2-c6炔基、c
3-c6环烷基、3至6元杂环基、-or
10
、-nr
11r12
、-nr
10
c(o)r
11
、-nr
10
c(o)nr
11r12
、-s(o)2r
10
、-nr
10
s(o)2r
11
、-s(o)2nr
11r12
、-c(o)r
10
、-c(o)nr
11r12
、-(c
1-c3亚烷基)cn、-(c
1-c3亚烷基)or
10
、-(c
1-c3亚烷基)sr
10
、-(c
1-c3亚烷基)nr
11r12
、-(c
1-c3亚烷基)cf3、-(c
1-c3亚烷基)c(o)r
10
、-(c
1-c3亚烷基)c(o)nr
11r12
、-(c
1-c3亚烷基)nr
10
c(o)r
11
、-(c
1-c3亚烷基)nr
10
c(o)nr
11r12
、-(c
1-c3亚烷基)s(o)2r
10
、-(c
1-c3亚烷基)nr
10
s(o)2r
11
、-(c
1-c3亚烷基)s(o)2nr
11r12
、(c
1-c3亚烷基)(c
3-c6环烷基)或-(c
1-c3亚烷基)(3至6元杂环基)，其中r7的所述c
1-c6烷基、c
2-c6烯基、c
2-c6炔基、c
3-c6环烷基、3至6元杂环基、-or
10
、-nr
11r12
、-nr
10
c(o)r
11
、-nr
10
c(o)nr
11r12
、-s(o)2r
10
、-nr
10
s(o)2r
11
、-s(o)2nr
11r12
、-c(o)r
10
、-c(o)nr
11r12
、-(c
1-c3亚烷基)cn、-(c
1-c3亚烷基)or
10
、-(c
1-c3亚烷基)sr
10
、-(c
1-c3亚烷基)nr
11r12
、-(c
1-c3亚烷基)cf3、-(c
1-c3亚烷基)c(o)r
10
、-(c
1-c3亚烷基)c(o)nr
11r12
、-(c
1-c3亚烷基)nr
10
c(o)r
11
、-(c
1-c3亚烷基)nr
10
c(o)nr
11r12
、-(c
1-c3亚烷基)s(o)2r
10
、-(c
1-c3亚烷基)nr
10
s(o)2r
11
、-(c
1-c3亚烷基)s(o)2nr
11r12
、(c
1-c3亚烷基)(c
3-c6环烷基)和-(c
1-c3亚烷基)(3至6元杂环基)各自独立地任选地被以下取代：卤素、氧代基、-or
13
、-nr
13r14
、-c(o)r
13
、-cn、-(c
1-c3亚烷基)or
13
、-(c
1-c3亚烷基)nr
13r14
、-(c
1-c3亚烷基)c(o)r
13
、c
3-c8环烷基或任选地被氧代基、-oh或卤素取代的c
1-c6烷基；r
10
独立地为氢、c
1-c6烷基、c
3-c6环烷基、-(c
1-c3亚烷基)(c
3-c6环烷基)、c
6-c
14
芳基、5至6元杂芳基或3至6元杂环基，其中r
10
的所述c
1-c6烷基、c
3-c6环烷基、-(c
1-c3亚烷基)(c
3-c6环烷基)、c
6-c
14
芳基、5至6元杂芳基和3至6元杂环基各自独立地任选地被以下取代：卤素、氧代基、-cn、-or
15
、-nr
15r16
或任选地被卤素、-oh或氧代基取代的c
1-c6烷基；r
11
和r
12
各自独立地为氢、c
1-c6烷基、c
3-c6环烷基、-(c
1-c3亚烷基)(c
3-c6环烷基)、c
6-c
14
芳基、5至6元杂芳基或3至6元杂环基，其中r
11
和r
12
的所述c
1-c6烷基、c
3-c6环烷基、-(c
1-c3亚烷基)(c
3-c6环烷基)、c
6-c
14
芳基、5至6元杂芳基和3至6元杂环基各自独立地任选地被以下取代：卤素、氧代基、-cn、-or
15
、-nr
15r16
或任选地被卤素、-oh或氧代基取代的c
1-c6烷基；r
13
和r
14
各自独立地为氢或c
1-c6烷基，其中r
13
和r
14
的所述c
1-c6烷基任选地被卤素、-or
15
、-nr
15r16
或氧代基取代；或r
13
和r
14
与它们附接的原子一起形成任选地被以下取代的3至6元杂环基：卤素、氧代基或任选地被卤素或氧代基取代的c
1-c6烷基；并且r
15
和r
16
各自独立地为氢、任选地被卤素或氧代基取代的c
1-c6烷基、任选地被卤素或氧代基取代的c
2-c6烯基、或任选地被卤素或氧代基取代的c
2-c6炔基；或r
15
和r
16
与它们附接的原子一起形成任选地被以下取代的3至6元杂环基：卤素、氧代基或任选地被氧代基或卤素取代的c
1-c6烷基；p和q各自独立地为0、1、2或3；m为0或1；并且n为0、1、2、3或4。
[0034]
在式(i)的化合物的一些实施方案中，所述化合物不是表1x中的化合物、或其互变
异构体或异构体、或前述任一种的盐。表1x
[0035]
下文列举的具体值为式(i)以及所有相关式(例如，式(i-a)、(i-b1)至(i-b20)和(i-c1)至(i-c45))的化合物或其盐的值。应理解，两个或更多个值可以组合。因此，应理解，式(i)以及所有相关式的化合物的任何变量可以与式(i)以及所有相关式的化合物的任何其他变量组合，就好像每一种变量组合被具体且单独地列出一样。例如，应理解，本文中关于式(i)以及所有相关式的化合物所详述的r1的任何具体值可与用于变量a、l、b、x、z、r1、r2、r4、r5、r6、m、n、p和q中的一个或多个的任何其他具体值组合，就好像每一种组合被具体且单独地列出一样。
[0036]
在式(i)的化合物或其变型的一些实施方案中，所述化合物具有一个或多个以下特征：(1)当所述化合物具有式(x-1)时并且
当n为0、1、2、3或4；r1为未取代的c
1-c4烷基、未取代的c
3-c6环烷基或环己胺；r2为甲基、氧代基或氟；r4为甲基、氟、氯、-och3、-cf3、-ocf3或环丙基；x是ch或n；并且a为苯基、氟苯基、氰基苯基、吡唑基、咪唑基、噁唑基、噻唑基、吡咯烷基、哌啶基、环己基、吡啶基、氟吡啶基或嘧啶基时，那么b不是选自以下的部分：b不是选自以下的部分：和/或(2)当所述化合物具有式(x-1)时
并且当b为并且当b为时，那么a不是选自以下的部分：取代的苯基、未取代的吡啶基和被氟、甲氧基、甲基、正丙基、异丙基、环丙基、环戊基或异丙氧基取代的吡啶基；和/或(3)当所述化合物具有式(x-2)时并且当b为时，那么r1不是选自以下的部分：不是选自以下的部分：和/或(4)当所述化合物具有式(x-3)时：并且当r1为未取代的c
3-c4烷基；r2为甲基；n是0或2；m是0或1；l为-ch
2-、-o-、-s-、-nh-、-n(ch3)-、-c(o)-或-s(o)
2-；并且b为
那么a不是选自以下的部分：其中和
‑‑‑
分别是与-nh-和l的附接点；和/或(5)当所述化合物具有式(x-4)时并且当a为其中和
‑‑‑
分别是与-nh-和b的附接点；并且b为其中和
‑‑‑
分别是与a和r6的附接点，那么r6不是选自以下的部分：
[0037]
在式(i)的化合物或其变型的一些实施方案中，(1)、(2)、(3)、(4)和(5)适用。在一些实施方案中，(1)适用。在一些实施方案中，(2)适用。在一些实施方案中，(3)适用。在一些实施方案中，(4)适用。在一些实施方案中，(5)适用。
[0038]
在式(i)的化合物或其变型的一些实施方案中，z为-nh-。在一些实施方案中，z为-c(o)nh-。在一些实施方案中，z为-nh(co)-。在一些实施方案中，z为-nhs(o)
2-。在一些实施方案中，z为-s(o)2nh-。在一些实施方案中，z为
–
nh-、-nh(co)-或-c(o)nh-。在一些实施方案中，z为-nh-。
[0039]
在式(i)的化合物或其变型的一些实施方案中，a为c
3-c6环烷基、4至7元杂环基、5至7元杂芳基或c6芳基，其各自为未被取代的。在一些实施方案中，a为c
3-c6环烷基、4至7元杂环基、5至7元杂芳基或c6芳基，其各自任选地被r5取代。在一些实施方案中，a为任选地被r5取代的苯基。在一些实施方案中，a为任选地被r5取代的5至7元杂芳基。在一些实施方案中，a为任选地被r5取代的5元杂芳基。在一些实施方案中，a为任选地被r5取代的6元杂芳基。在一些实施方案中，a为任选地被r5取代的7元杂芳基。在一些实施方案中，a为吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、吡唑基、噻唑基、噁唑基、异噁唑基或咪唑基，其各自任选地被r5取代。在一些实施方案中，a为任选地被r5取代的4至7元杂环基。在一些实施方案中，a为任选地被r5取代的5至7元杂环基。在一些实施方案中，a为任选地被r5取代的5至6元杂环基。在一些实施方案中，a为任选地被r5取代的4元杂环基。在一些实施方案中，a为任选地被r5取代的5元杂环基。在一些实施方案中，a为任选地被r5取代的6元杂环基。在一些实施方案中，a为任选地被r5取代的7元杂环基。在一些实施方案中，a为哌啶基、吡咯烷基、氮杂环丁烷基、二氢吡啶或吡啶酮基，其各自任选地被r5取代。在一些实施方案中，a为任选地被r5取代的c
3-c6环烷基。在一些实施方案中，a为被r5取代的c
3-c6环烷基。在一些实施方案中，a为环己基或环戊基，其各自任选地被r5取代。在一些实施方案中，a为苯基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、吡唑基、噻唑基、噁唑基、异噁唑基、咪唑基、哌啶基、吡咯烷基、氮杂环丁烷基、吡啶酮基、环己基或环戊基，其各自是未被取代的。在式(i)的化合物的一些实施方案中，a为苯基、吡啶基、嘧啶基、吡唑基、噻唑基、噁唑基、异噁唑基、咪唑基、哌啶基、吡咯烷基、氮杂环丁烷基、二氢吡啶基、吡啶酮基、环己基或环戊基，其各自任选地被r5取代。在一些实施方案中，a为苯基、吡啶基、吡嗪基、哌啶基、吡唑基或环己基，其各自任选地被r5取代。在一些实施方案中，a为任选地被r5取代的苯基。在一些实施方案中，a为任选地被r5取代的吡啶基。在一些实施方案中，a为任选地被r5取代的哌啶基。在一些实施方案中，a为任选地被r5取代的吡唑基。在一些实施方案中，a为任选地被r5取代的环己基。在一些实施方案中，a为任选地被r5取代的吡嗪基。
[0040]
在式(i)的化合物或其变型的一些实施方案中，m为0。在一些实施方案中，m为1。
[0041]
在式(i)的化合物或其变型的一些实施方案中，b为氢、c
3-c
12
环烷基或3至12元杂环基，其中b的所述c
3-c
12
环烷基和3至12元杂环基各自独立地任选地被r6取代。在一些实施方案中，b为c
3-c
12
环烷基或3至12元杂环基，其各自是未被取代的。在一些实施方案中，b为氢。在一些实施方案中，b为任选地被r6取代的5至12元杂环基。在一些实施方案中，b为任选地被r6取代的5至12元杂环基，其中所述5至12元杂环基为螺环、稠合或桥接的杂环基。在一些实施方案中，b为任选地被r6取代的5至12元杂环基，其中所述5至12元杂环基为螺环杂环基。在一些实施方案中，b为任选地被r6取代的5至12元杂环基，其中所述5至12元杂环基为稠合的杂环基。在一些实施方案中，b为任选地被r6取代的5至12元杂环基，其中所述5至12元杂环基为桥接的杂环基。在式(i)的化合物的一些实施方案中，b为
其各自任选地被r6取代。在一些实施方案中，b为任选地被r6取代的c
3-c6环烷基。在一些实施方案中，b为任选地被r6取代的c
3-c
12
环烷基。在一些实施方案中，b为环戊基、环己基或环庚基，其各自任选地被r6取代。
[0042]
在式(i)的化合物的一些实施方案中，l为键、-(cr
11r12
)
r-、-cr
11r12-o-、-o-、-s-、-s(o)
2-、-c(o)-、-nr
10-、-s(o)2nr
10-或-nr
10
s(o)
2-。在式(i)的化合物的一些实施方案中，l为键、-ch
2-、-nh-、-o-、-s-、-s(o)
2-、-c(o)-、-nch
3-、-s(o)2nh-或-nhs(o)
2-。在式(i)化合物的一些实施例中，l为键、-ch
2-、-nh-、-o-或-s-。在一些实施方案中，l是键。在一些实施例中，l为-ch
2-。在一些实施例中，l为-nh-。在一些实施例中，l为-s-。在一些实施例中，l为-o-。在一些实施方案中，l为-s(o)
2-。在一些实施方案中，l为-c(o)-。在一些实施例中，l为-nch
3-。在一些实施方案中，l为-nhs(o)
2-。在一些实施例中，l为-cr
11r12-。在一些实施例中，l为-nr
10-。在一些实施方案中，l为-nr
10
s(o)
2-。在一些实施方案中，l为-nhs(o)
2-。在一些实施方案中，l为-s(o)2nr
10-。在一些实施方案中，l为-s(o)2nh-。
[0043]
应理解，式(i)的a的任何描述可以与式(i)的b和l的任何描述组合，就如同具体且个别地列举每一个组合一样。
[0044]
在一些实施例中，提供一种式(i-a)化合物，或其盐，其中a、b、x、z、r1、r2、r4、r5、r6、n、p和q如本文对于式(i)详述的。
[0045]
在一些实施例中，提供式(i-b1)至(i-b20)中任一者的化合物或其盐：
其中x、z、a、b、l、r1、r2、r4、r5、r6、r7、n、p和q如本文对于式(i)所述，并且t为0、1、2或3。在一些实施方案中，t是0。在一些实施例中，t为0或1。在一些实施例中，t为0、1或2。
[0046]
在一些实施例中，提供式(i-c1)至(i-c45)中任一者的化合物：
(c
1-c3亚烷基)or
10
、-(c
1-c3亚烷基)nr
11r12
、-(c
1-c3亚烷基)c(o)r
10
、-(c
1-c3亚烷基)(c
3-c6环烷基)和-(c
1-c3亚烷基)(3至12元杂环基)各自独立地任选地被以下取代：卤素、氧代基、-or
13
、-nr
13r14
、-c(o)r
13
、-cn、-(c
1-c3亚烷基)or
13
、-(c
1-c3亚烷基)nr
13r14
、-(c
1-c3亚烷基)c(o)r
13
、c
3-c8环烷基或任选地被氧代基、-oh或卤素取代的c
1-c6烷基。在一些实施方案中，每个r5独立地为c
1-c6烷基、卤素、-cn、-or
10
、-nr
11r12
、-s(o)2r
10
、-nr
10
s(o)2r
11
、-c(o)r
10
、-nr
10
c(o)r
11
或-c(o)nr
11r12
，其中r5的所述c
1-c6烷基、-or
10
、-nr
11r12
、-s(o)2r
10
、-nr
10
s(o)2r
11
、-c(o)r
10
、-nr
10
c(o)r
11
和-c(o)nr
11r12
各自独立地任选地被以下取代：卤素、-or
13
或-nr
13r14
。在一些实施方案中，每个r5独立地为-ch3、-s(o)2ch3、-ch2ch2och3、-ch2ch2n(ch3)2、-nh2、-nhs(o)2ch3、-n(ch3)2、-nhc(o)ch2oh、-c(o)ch2oh、cl、-cf3、-cn、-ch2oh或-c(o)nh2。
[0049]
在式(i)的化合物或其变型的一些实施方案中，q为0。在一些实施方案中，q为1。在一些实施方案中，q为2。在一些实施方案中，q为3。在式(i)的化合物的一些实施方案中，q为0或1。在一些实施方案中，q为0、1或2。
[0050]
在式(i)的化合物或其变型的一些实施方案中，每个r6独立地为c
1-c6烷基、卤素、氧代基、-nr
11r12
、-c(o)r
10
、c
3-c6环烷基、3至6元杂环基、-(c
1-c3亚烷基)or
10
或-(c
1-c3亚烷基)nr
11r12
，其中r6的所述c
1-c6烷基、-nr
11r12
、-c(o)r
10
、c
3-c6环烷基、3至6元杂环基、-(c
1-c3亚烷基)or
10
和-(c
1-c3亚烷基)nr
11r12
各自独立地任选地被以下取代：卤素、氧代基、-or
13
、-nr
13r14
、-c(o)r
13
、-cn、-(c
1-c3亚烷基)or
13
、-(c
1-c3亚烷基)nr
13r14
、-(c
1-c3亚烷基)c(o)r
13
、c
3-c8环烷基或任选地被氧代基、-oh或卤素取代的c
1-c6烷基。在一些实施方案中，每个r6独立地为c
1-c6烷基、-or
10
、3至6元杂环基或-nr
11r12
，其中r6的所述c
1-c6烷基、-or
10
、3至6元杂环基和-nr
11r12
各自独立地任选地被以下取代：-or
13
。在一些实施方案中，每个r6独立地为-ch3、-ch2ch3、-ch2oh、-oh、-nh2、氧杂环丁烷基或-n(ch3)2。
[0051]
在式(i)的化合物或其变型的一些实施方案中，a、l和b与r5和r6一起形成选自以下的部分：
烷基。在一些实施方案中，r7是甲基。
[0053]
在式(i)的化合物或其变型的一些实施方案中，x为n。在一些实施方案中，x为cra。在一些实施方案中，x为cra，其中ra为氢。在一些实施方案中，x为cra，其中ra为-cn。
[0054]
在式(i)的化合物或其变型的一些实施方案中，r1为c
1-c6烷基、c
2-c6烯基、c
2-c6炔基、c
3-c6环烷基、3至12元杂环基、-(c
1-c3亚烷基)(c
3-c6环烷基)或-(c
1-c3亚烷基)(3至12元杂环基)，其各自任选地被以下取代：卤素、-or
13
、-c(o)nr
13r14
、-nr
13r14
、-c(o)r
13
、-cn、c
3-c8环烷基或任选地被氧代基、-oh或卤素取代的c
1-c6烷基。在一些实施方案中，r1为c
1-c6烷基、c
3-c6环烷基、3至12元杂环基、-(c
1-c3亚烷基)(c
3-c6环烷基)、-(c
1-c3亚烷基)(3至12元杂环基)，其各自是未被取代的。在一些实施方案中，r1为c
1-c6烷基、c
3-c6环烷基、3至12元杂环基或-(c
1-c3亚烷基)(c
3-c6环烷基)，其各自独立地任选地被以下取代：卤素、-or
13
、-nr
13r14
、-c(o)r
13
、-cn、c
3-c8环烷基或任选地被氧代基、-oh或卤素取代的c
1-c6烷基。在一些实施方案中，r1为c
1-c6烷基或c
3-c6环烷基，其各自独立地任选地被以下取代：卤素、-or
13
或c
1-c6烷基。在一些实施方案中，r1为c
1-c6烷基或c
3-c6环烷基，其各自独立地任选地被以下取代：卤素、-oh或c
1-c6烷基。在一些实施方案中，r1为任选地被卤素或-or
13
取代的c
1-c6烷基。在一些实施方案中，r1为任选地被卤素、-or
13
或c
1-c6烷基取代的c
3-c6环烷基。
[0055]
在式(i)的化合物或其变型的一些实施方案中，r1选自：其中所述波浪线表示与母体分子的附接点。在一些实施方案中，r1为为在一些实施方案中，r1为
[0056]
在式(i)的化合物或其变型的一些实施方案中，n为0。在一些实施方案中，n是1。在一些实施方案中，n是2。在一些实施方案中，n是0或1。在一些实施方案中，n为0、1或2。在一些实施方案中，n是0、1、2、或3。
[0057]
在式(i)的化合物或其变型的一些实施方案中，每个r2独立地为c
1-c6烷基、氧代基、-nr
11r12
、-cn或卤素。在一些实施方案中，每个r2独立地为c
1-c6烷基、氧代基或卤素。在一些实施方案中，每个r2独立地为c
1-c6烷基或卤素。在一些实施方案中，r2为氧代基。在一些实施方案中，每个r2独立地为-nr
11r12
。在一些实施方案中，r2为-cn。在一些实施方案中，每个r2独立地为-c(o)r
10
。在一些实施方案中，每个r2独立地为-c(o)nr
11r12
。在一些实施方案中，每个r2独立地为卤素，例如氟或氯。在一些实施方案中，每个r2独立地为c
1-c6烷基，例如附接至同一碳的甲基或二甲基。在一些实施方案中，r2的基团(例如当存在多于一个r2时)为氧代基和甲基，独立地附接至两个不同碳。在一些实施方案中，r2的基团为氧代基和二甲基，独立地附接至两个不同碳。在一些实施方案中，r2的基团为氧代基和-cn，独立地附接至两个不同碳。在一些实施方案中，r2的基团为氧代基和-nr
11r12
，独立地附接至两个不同碳。在一些实施方案中，r2的基团为氧代基和-c(o)r
10
，独立地附接至两个不同碳。在一些实施方案中，r2的基团为氧代基和-c(o)nr
11r12
，独立地附接至两个不同碳。在一些实施方案中，r2的基团为附接至同一碳的二氟。在一些实施方案中，r2的基团为附接至同一碳的二氯。在一些实施方案中，r2的基团为氧代基和氟或二氟，各自独立地附接至两个不同碳。在一些实施方案中，n为0、1或2；并且每个r2独立地为c
1-c6烷基或卤素。
[0058]
在式(i)的化合物或其变型的一些实施方案中，r4为氢、c
1-c6烷基、c
3-c6环烷基、c
1-c6卤代烷基、c
1-c6烷氧基、c
1-c6卤代烷氧基、卤素、-cn或-oh。在一些实施方案中，r4为氢。在一些实施方案中，r4为c
1-c6烷基。在一些实施方案中，r4为c
3-c6环烷基。在一些实施方案中，r4为c
1-c6卤代烷基。在一些实施方案中，r4为c
1-c6烷氧基。在一些实施方案中，r4为c
1-c6卤代烷氧基。在一些实施方案中，r4为卤素。在一些实施方案中，r4为-cn。在一些实施方案中，r4为-oh。在一些实施方案中，r4独立地为c
1-c6烷基、c
3-c6环烷基、c
1-c6卤代烷基、c
1-c6烷氧基、c
1-c6卤代烷氧基或卤素。在一些实施方案中，r4为氟、氯、甲基、三氟甲基、三氟甲氧基、甲氧基或环丙基。在一些实施方案中，r4为卤素。在一些实施方案中，r4为氟。
[0059]
在式(i)的化合物或其变型的一些实施方案中，x为cra，其中ra为氢；并且r4为氢、c
1-c6烷基、c
3-c6环烷基、c
1-c6卤代烷基、c
1-c6烷氧基、c
1-c6卤代烷氧基、卤素、-cn或-oh。在一些实施方案中，x为n；并且r4为氢、c
1-c6烷基、c
3-c6环烷基、c
1-c6卤代烷基、c
1-c6烷氧基、c
1-c6卤代烷氧基、卤素、-cn或-oh。在一些实施方案中，x为cra，其中ra为-cn；并且r4为氢、c
1-c6烷基、c
3-c6环烷基、c
1-c6卤代烷基、c
1-c6烷氧基、c
1-c6卤代烷氧基、卤素、-cn或-oh。在一些实施方案中，x为cra，其中ra为氢；并且r4为卤素。在一些实施方案中，x为n；并且r4为卤素。在一些实施方案中，x为cra，其中ra为-cn；并且r4为卤素。
[0060]
在式(i)的化合物或其变型的一些实施方案中，x为cra，其中ra为氢；并且r4为f。在一些实施方案中，x为cra，其中ra为-cn；并且r4为f。在一些实施方案中，x为n；并且r4为f。在一些实施方案中，x为n；并且r4为cl。在式(i)的化合物的一些实施方案中，x为cra，其中ra为氢；并且r4为cl。在式(i)的化合物的一些实施方案中，x为cra，其中ra为-cn；并且r4为cl。
[0061]
在式(i)的化合物或其变型的一些实施方案中，x为cra，其中ra为氢；r4为f；并且每个r2独立地为氢、c
1-c6烷基、氧代基、-nr
11r12
、-cn、-c(o)r
10
、-c(o)nr
11r12
或卤素。在一些实施方案中，x为n；r4为f；并且每个r2独立地为c
1-c6烷基、氧代基、-nr
11r12
、-cn、-c(o)r
10
、-c(o)nr
11r12
或卤素。在一些实施方案中，x为n；r4为f；并且每个r2为f，其中r2的每个f附接到同一碳或两个不同的碳。在一些实施方案中，x为n；r4为f；并且每个r2为卤素，其中每个卤素
附接到同一碳或两个不同的碳。在一些实施方案中，x为n；r4为f；并且每个r2独立地为c
1-c6烷基。在一些实施方案中，x为n；r4为f；并且每个r2为附接至两个不同碳的氧代基或甲基。在一些实施方案中，x为n；r4为f；并且每个r2为附接至两个不同碳的氧代基或f。在一些实施方案中，x为n；r4为f；r2为氧代基。在一些实施方案中，x为n；r4为f；并且n为0。在一些实施方案中，x为n；r4为f；并且每个r2独立地为c
1-c6烷基或卤素。
[0062]
在式(i)的化合物或其变型的一些实施方案中，x为n；r4为氢、c
1-c6烷基、c
3-c6环烷基、c
1-c6卤代烷基、c
1-c6烷氧基、c
1-c6卤代烷氧基、卤素、-cn或oh；每个r2独立地为c
1-c6烷基、氧代基、-nr
11r12
、-cn、-c(o)r
10
、-c(o)nr
11r12
或卤素，任何两个r2基团独立地附接到同一碳或两个不同的碳；并且r1为c
1-c6烷基、c
2-c6烯基、c
2-c6炔基、c
1-c8烷氧基、c
3-c6环烷基、3至12元杂环基、-(c
1-c3亚烷基)(c
3-c6环烷基)或-(c
1-c3亚烷基)(3至12元杂环基)，其各自任选地被以下取代：卤素、-or
13
、-c(o)nr
13r14
、-nr
13r14
、-c(o)r
13
、-cn、c
3-c8环烷基或任选地被氧代基、-oh或卤素取代的c
1-c6烷基。
[0063]
在式(i)的化合物或其变型的一些实施方案中，x为ch；r4为c
1-c6烷基、c
3-c6环烷基、c
1-c6卤代烷基、c
1-c6烷氧基、c
1-c6卤代烷氧基、卤素或-oh；每个r2独立地为c
1-c6烷基、氧代基、-nr
11r12
、-cn、-c(o)r
10
、-c(o)nr
11r12
或卤素，任何两个r2基团独立地附接到同一碳或两个不同的碳；r1为c
1-c6烷基、c
3-c6环烷基、3至12元杂环基、-(c
1-c3亚烷基)(c
3-c6环烷基)、-(c
1-c3亚烷基)(3至12元杂环基)，其各自任选地被以下取代：卤素、-or
13
、-c(o)nr
13r14
、-nr
13r14
、-c(o)r
13
、-cn、c
3-c8环烷基或任选地被氧代基、-oh或卤素取代的c
1-c6烷基。
[0064]
在式(i)的化合物或其变型的一些实施方案中，x为n；r4为f；每个r2独立地为c
1-c6烷基、氧代基、-nr
11r12
、-cn、-c(o)r
10
、-c(o)nr
11r12
或卤素，任何两个r2基团独立地附接到同一碳或两个不同的碳；r1为c
1-c6烷基、c
3-c6环烷基、3至12元杂环基、-(c
1-c3亚烷基)(c
3-c6环烷基)、-(c
1-c3亚烷基)(3至12元杂环基)，其各自任选地被以下取代：卤素、-or
13
、-c(o)nr
13r14
、-nr
13r14
、-c(o)r
13
、-cn、c
3-c8环烷基或任选地被氧代基、-oh或卤素取代的c
1-c6烷基。在一些实施方案中，x为n；r4为f；每个r2独立地为c
1-c6烷基或卤素，任何两个r2基团独立地附接到同一碳或两个不同的碳；r1为c
1-c6烷基或c
3-c6环烷基，其各自独立地任选地被卤素、-oh或c
1-c6烷基取代。
[0065]
在式(i)的化合物或其变型的一些实施方案中，x为n；r4为f；每个r2独立地为c
1-c6烷基，任何两个r2基团独立地附接到同一碳或两个不同的碳；并且r1为c
1-c6烷基、c
3-c6环烷基、3至12元杂环基、-(c
1-c3亚烷基)(c
3-c6环烷基)、-(c
1-c3亚烷基)(3至12元杂环基)，其各自任选地被以下取代：卤素、-or
13
、-c(o)nr
13r14
、-nr
13r14
、-c(o)r
13
、-cn、c
3-c8环烷基或任选地被氧代基、-oh或卤素取代的c
1-c6烷基。在一些实施方案中，x为n；r4为f；每个r2为c
1-c6烷基，任何两个r2基团独立地附接到同一碳或两个不同的碳；r1为c
1-c6烷基或c
3-c6环烷基，其各自独立地任选地被卤素、-oh或c
1-c6烷基取代。
[0066]
在式(i)的化合物或其变型的一些实施方案中，x为n，r4为f；n为0；并且r1为c
1-c6烷基或c
3-c6环烷基，其中r1独立地任选地被以下取代：卤素、-or
13
、-nr
13r14
或任选地被氧代基、-oh或卤素取代的c
1-c6烷基。在一些实施方案中，x为n；r4为f；n为0；并且r1为c
1-c6烷基或c
3-c6环烷基，其各自独立地任选地被以下取代：卤素、-oh或c
1-c6烷基。在一些实施方案中，x为n；r4为f；n为0；r1选自以下：
其中所述波浪线表示与母体分子的附接点。在式(i)的化合物的一些实施方案中，x为n，r4为f；n为0；r1为c
1-c6烷基。
[0067]
在本文的描述中，应理解，某一部分的每个描述、变型、实施方案或方面可以与其他部分的每个描述、变型、实施方案或方面组合，就如同具体地且个别地列出每个描述组合一般。例如，本文提供的关于式(i)的a的每种描述、变型、实施方案或方面可以与b、x、z、r2、r4、r5、r6、m、n、p和q的每种描述、变型、实施方案或方面组合，就好像每一种组合被具体且单独地列出一样。还应理解，在适用的情况下，式(i)的所有描述、变型、实施方案或方面同样适用于本文详述的其他式，并且被同等描述，就好像每一个描述、变型、实施方案或方面是对于所有式单独且独立地列出的。例如，应理解，在适用的情况下，式(i)的所有描述、变型、实施方案或方面同等地适用于如本文详述的任何相关式(诸如式(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)至(i-c45))，并且同等地描述，就好像每种描述、变型、实施方案或方面针对所有式被分开且单独地列出一样。
[0068]
还提供了本文所提及的化合物的盐，诸如药学上可接受的盐。本发明还包含所描述化合物的任一种或全部立体化学形式，包含任何对映异构或非对映异构形式，以及任何互变异构体或其他形式。应理解，本文提供个别对映异构体和非对映异构体，且可容易地确定其对应结构。
[0069]
在一方面，如本文详述的化合物可以呈纯化的形式，并且在本文中详述了包含呈纯化的形式的化合物的组合物。提供了包含如本文详述的化合物或其盐的组合物，诸如基本上纯的化合物的组合物。在一些实施方案中，含有如本文详述的化合物或其盐的组合物是基本上纯的形式。除非另外规定，否则“基本上纯的”意图指组合物含有不超过35％的杂质，其中杂质表示除构成大部分所述组合物的化合物或其盐外的化合物。在一些实施例中，提供含基本上纯的化合物或其盐的组合物，其中所述组合物含有不超过25％、20％、15％、10％或5％的杂质。在一些实施例中，提供含基本上纯的化合物或其盐的组合物，其中所述组合物含有或不超过3％、2％、1％或0.5％的杂质。
[0070]
代表性化合物在表1中列出。表1
[0071]
在一些实施例中，本文提供表1中所描述的化合物、或其互变异构体、或前述任一种的盐，以及其用途。
[0072]
在适用的情况下，本文所描述的实施方案和变型适用于本文详述的任何式的化合
物。
[0073]
本文描绘了本文详述的化合物的代表性例子，包括根据本公开文本的中间体和最终化合物。应理解，在一方面，所述化合物中的任一种可以用于本文详述的方法中，包括(在适用的情况下)可以分离并且向个体施用的中间体化合物。
[0074]
即使未描绘盐，本文所描绘的化合物也可以作为盐存在，并且应理解，本公开文本包括此处描绘的化合物的所有盐和溶剂化物以及所述化合物的非盐和非溶剂化物形式，正如熟练技术人员充分理解的。在一些实施方案中，本文提供的化合物的盐是药学上可接受的盐。在一个或多个叔胺部分存在于所述化合物中的情况下，还提供并且描述了n-氧化物。
[0075]
在本文所述的任一种化合物可能存在互变异构形式的情况下，即使仅可以明确地描绘一种或一些互变异构形式，也预期了每一种互变异构形式。具体描绘的互变异构形式在溶液中或当根据本文所述的方法使用时可以是或可以不是主要形式。
[0076]
本公开文本还包括所描述的化合物的任何或所有立体化学形式，包括任何对映异构体或非对映异构体形式。结构或名称意图包括所描绘的化合物的所有可能的立体异构体。本发明还包括所述化合物的所有形式，如所述化合物的结晶或非结晶形式。还预期包含本发明化合物的组合物，诸如基本上纯的化合物(包括其特定的立体化学形式)的组合物，或包含任何比率的本发明化合物的混合物的组合物(包括两种或更多种立体化学形式，诸如在外消旋或非外消旋混合物中)。
[0077]
本发明还涉及本文所述的化合物的同位素标记形式和/或同位素富集形式。本文的化合物可以在构成此类化合物的一个或多个原子处含有非天然比例的原子同位素。在一些实施方案中，所述化合物被同位素标记，如同位素标记的本文所描述的式(i)化合物或其变化形式，其中一个或多个原子中有一部分被相同元素的同位素替代。可以掺入本发明化合物中的示例性同位素包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氯的同位素，如2h、3h、
11
c、
13
c、
14
c、
13
n、
15
o、
17
o、
32
p、
35
s、
18
f、
36
cl。某些同位素标记的化合物(例如3h和
14
c)可用于化合物或底物组织分布研究。较重的同位素(诸如氘(2h))的掺入可以赋予由更大的代谢稳定性引起的某些治疗优势(例如，增加的体内半衰期或降低的剂量需求)，并且因此在一些情况下可能是优选的。
[0078]
本发明的同位素标记的化合物总体上可以通过本领域技术人员已知的标准方法和技术或通过与所附实施例中所述的那些类似的程序，使用适当的同位素标记的试剂代替相应的未标记的试剂来制备。
[0079]
本发明还包括所描述的任一种化合物的任何或所有代谢物。代谢物可以包括通过所描述的任一种化合物的生物转化产生的任何化学物质，诸如所述化合物的中间体和代谢产物，诸如将在向人施用后在体内产生。
[0080]
提供了在合适的容器中包含本文所述的化合物或其盐或溶剂化物的制品。所述容器可以是小瓶、广口瓶、安瓿、预装载注射器、静脉内袋等。
[0081]
优选地，本文详述的化合物是口服可生物利用的。然而，所述化合物也可以被配制用于肠胃外(例如，静脉内)施用。
[0082]
本文所述的一种或几种化合物可以通过将作为活性成分的一种或多种化合物与本领域已知的药理学上可接受的载体组合而用于药剂的制备。取决于药物的治疗形式，所述载体可以呈各种形式。在一种变型中，药剂的制造用于本文公开的任一种方法中，例如用于治疗癌症。
通用合成方法
[0083]
本发明的化合物可以通过如以下总体描述的并且在下文实施例(诸如在以下实施例中提供的方案)中更具体地描述的多种方法来制备。在以下的方法描述中，当在所描绘的式中使用时，符号应被理解为代表以上关于本文的式的以上所述的那些基团。
[0084]
在希望获得化合物的特定对映异构体的情况下，这可以从相应的对映异构体的混合物中使用用于分离或拆分对映异构体的任何合适的常规程序来实现。因此，例如，非对映异构体衍生物可以通过对映异构体的混合物(例如，外消旋体)与适当的手性化合物的反应来产生。然后可以通过任何便利的手段(例如，通过结晶)分离非对映异构体并且回收所希望的对映异构体。在另一种拆分方法中，可以使用手性高效液相色谱法分离外消旋体。可替代地，如果希望，可以通过在所述方法之一中使用适当的手性中间体来获得特定的对映异构体。
[0085]
色谱法、重结晶和其他常规分离程序也可以与中间体或最终产物一起使用，其中希望获得化合物的特定异构体或以其他方式纯化反应产物。
[0086]
还考虑了本文提供的化合物或其盐的溶剂化物和/或多晶型物。溶剂化物含有化学计量量或非化学计量量的溶剂，并且通常是在结晶过程期间形成的。当溶剂是水时形成水合物，或当溶剂是醇时形成醇化物。
[0087]
在一些实施方案中，式(i)的化合物可以根据方案1至9合成。方案1其中a、b、l、x、z、r1、r2、r4、r5、r6、n、p和q如对于式(i)所述。方案2
其中a、b、l、x、r1、r5、r6、p和q如对于式(i)所述。方案3其中a、b、l、x、r1、r5、r6、p和q如对于式(i)所述。方案4
其中a、b、l、x、r1、r2、r5、r6、p和q如对于式(i)所述。方案5其中a、b、l、x；r1、r2、r5、r6、p和q如对于式(i)所述。方案6
其中a、b、l、x、r1、r2、r5、r6、p和q如对于式(i)所述。方案7其中a、b、l、x、r1、r2、r5、r6、p和q如对于式(i)所述。在以下实施例部分中提供了具体的例子。方案8
其中a、b、l、x、r1、r2、r4、r5、r6、p和q如对于式(i)所述。方案9其中a、b、l、x、r1、r2、r4、r5、r6、p和q如对于式(i)所述。药物组合物和制剂
[0088]
本公开文本包括本文详述的任一种化合物的药物组合物。因此，本公开文本包括包含如本文详述的化合物或其盐和药学上可接受的载体或赋形剂的药物组合物。在一方面，所述药学上可接受的盐是酸加成盐，诸如与无机酸或有机酸形成的盐。药物组合物可以采用适合口服、颊、肠胃外、鼻、局部或直肠施用的形式或适合通过吸入施用的形式。
[0089]
在一方面，如本文详述的化合物可以呈纯化的形式，并且在本文中详述了包含呈纯化的形式的化合物的组合物。提供了包含如本文详述的化合物或其盐的组合物，诸如基本上纯的化合物的组合物。在一些实施方案中，含有如本文详述的化合物或其盐的组合物是基本上纯的形式。
[0090]
在一个变型中，本文的化合物是制备用于向个体施用的合成化合物。在另一个变型中，提供了含有呈基本上纯的形式的化合物的组合物。在另一个变型中，本公开文本包括含有本文详述的化合物和药学上可接受的载体的药物组合物。在另一个变型中，提供了施用化合物的方法。纯化形式、药物组合物和施用化合物的方法适用于本文详述的任何化合物或其形式。
[0091]
本文详述的化合物或其盐可以被配制用于任何可用的递送途径，包括口腔、粘膜(例如，鼻、舌下、阴道、颊或直肠)、肠胃外(例如，肌内、皮下或静脉内)、局部或透皮递送形式。可以将化合物或其盐与合适的载体一起配制以提供递送形式，所述递送形式包括但不
限于片剂、囊片、胶囊(诸如硬明胶胶囊或软弹性明胶胶囊)、扁囊剂、糖锭、锭剂、胶姆剂、分散体、栓剂、软膏剂、巴布剂(泥罨剂)、糊剂、粉末、敷料、乳膏、溶液、贴剂、气雾剂(例如，鼻喷雾剂或吸入剂)、凝胶、悬浮液(例如，水性液体悬浮液或非水性液体悬浮液、水包油乳液或油包水液体乳液)、溶液和酏剂。
[0092]
本文所述的一种或几种化合物或其盐可以用于通过将作为活性成分的一种或多种化合物或其盐与药学上可接受的载体(诸如以上提到的那些)组合制备配制品，诸如药物配制品。取决于系统的治疗形式(例如，透皮贴剂与口服片剂)，载体可以是各种形式的。此外，药物配制品可以含有防腐剂、增溶剂、稳定剂、再润湿剂、乳化剂、甜味剂、染料、调节剂和用于调节渗透压的盐、缓冲剂、包衣剂或抗氧化剂。包含所述化合物的配制品还可以含有具有有价值的治疗特性的其他物质。药物配制品可以通过已知制药方法来制备。合适的配制品可以例如在remington’s pharmaceutical sciences,mack publishing company,宾夕法尼亚州费城,第20版.(2000)中找到，将其通过引用并入本文。
[0093]
如本文所述的化合物可以以通常接受的口服组合物的形式(诸如片剂、包衣片剂和在硬壳或软壳中的凝胶胶囊、乳液或悬浮液)向个体施用。可用于制备此类组合物的载体的例子是乳糖、玉米淀粉或其衍生物、滑石、硬脂酸酯或其盐等。对于具有软壳的凝胶胶囊可接受的载体是，例如，植物油、蜡、脂肪、半固体和液体多元醇等。此外，药物配制品可以含有防腐剂、增溶剂、稳定剂、再润湿剂、乳化剂、甜味剂、染料、调节剂和用于调节渗透压的盐、缓冲剂、包衣剂或抗氧化剂。
[0094]
可以将本文所述的任何化合物配制成呈所描述的任何剂型的片剂，例如，如本文所述的化合物或其盐可以配制成10mg片剂。
[0095]
还描述了包含本文提供的化合物的组合物。在一个变型中，所述组合物包含化合物或其盐和药学上可接受的载体或赋形剂。在另一个变型中，提供了一种基本上纯的化合物的组合物。使用方法
[0096]
本文详述的化合物和组合物(诸如含有本文提供的任何式的化合物或其盐和药学上可接受的载体或赋形剂的药物组合物)可以用于如本文提供的施用和治疗方法。所述化合物和组合物还可以用于体外方法，诸如出于筛选目的和/或为了进行质量控制测定而向细胞施用化合物或组合物的体外方法中。在本文中详述的方法的一些实施例中，所述方法包括作为单一疗法施用本文中详述的化合物或其盐。
[0097]
本文提供了一种治疗个体的疾病的方法，所述方法包括向所述个体施用有效量的式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)的化合物或其任何实施方案、变型或方面(统称为，式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)的化合物或本发明化合物或本文详述或描述的化合物)或其药学上可接受的盐。本文进一步提供了一种疗个体的增殖性疾病的方法，所述方法包括向所述个体施用有效量的式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)的化合物或其药学上可接受的盐。本文还提供了一种治疗个体的癌症的方法，所述方法包括向所述个体施用有效量的式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)的化合物或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，根据本文所述的施用剂量和/或方法向个体施用所述化合物。
[0098]
在一些实施例中，个体的癌症具有编码周期蛋白的基因或编码cdk的基因的一或
多个突变或扩增或过度表达，或由于基因缺失、突变或启动子超甲基化而产生的内源性ink4抑制剂的损失，或导致cdk1、cdk2、cdk4、cdk6和cdk9中的一或多个过度活性的其他遗传事件。在一些实施例中，个体的癌症具有编码周期蛋白的基因或编码cdk的基因的一或多个突变或扩增或过度表达，或由于基因缺失、突变或启动子超甲基化而产生的内源性ink4抑制剂的损失，或导致cdk4/6以及cdk1、cdk2和cdk9中的一或多个过度活性的其他遗传事件。
[0099]
在一些实施方案中，本文提供了一种治疗个体的癌症的方法，所述方法包括(a)基于以下选择用于治疗的个体：(i)癌症中成视网膜细胞瘤(rb)蛋白磷酸化的存在，或(ii)癌症中cdk4或cdk6的突变或扩增或过度表达，以及向所述个体施用有效量的式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)的化合物或其药学上可接受的盐。在一些实施例中，测定所述癌症的磷酸化rb的表达。在一些实施例中，测定所述癌症的cdk4或cdk6的表达。在一些实施例中，对癌症的cdk4或cdk6基因进行测序以检测一或多个突变或扩增。在一些实施例中，通过对癌症进行活组织检查并对来自活组织检查癌症的cdk4或cdk6基因进行测序来对cdk4或cdk6基因进行测序。在一些实施例中，通过对来自个体的循环肿瘤dna(ctdna)进行测序来对cdk4《/21182或cdk6基因进行测序。
[0100]
在一些实施方案中，本文提供一种使用式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)的化合物或任何实施方案在制造用于治疗疾病的药剂中的方法。在一些实施方案中，本文提供了一种使用式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)的化合物或任何实施方案在制造用于治疗癌症的药剂中的方法。
[0101]
在一些实施方案中，式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)的化合物或其盐用于治疗具有增殖性疾病(诸如本文所述的癌症)的个体。在一些实施方案中，所述个体有风险患上增殖性疾病，诸如癌症。在这些实施方案中的一些中，基于一个或多个风险因素确定个体有风险患上癌症。在这些实施方案中的一些中，所述风险因素是与癌症相关的家族史和/或基因。
[0102]
本发明化合物或其盐被认为对于治疗多种疾病和障碍是有效的。例如，在一些实施方案中，本发明组合物可以用于治疗增殖性疾病，诸如癌症。在一些实施方案中，所述癌症是实体瘤。在一些实施方案中，所述癌症是以下中的任一种：成人肿瘤学和儿科肿瘤学、粘液样细胞癌和圆形细胞癌、局部晚期肿瘤、转移性癌症、人软组织肉瘤(包括尤因氏肉瘤)、癌症转移(包括淋巴转移)、鳞状细胞癌(特别是头颈鳞状细胞癌)、食管鳞状细胞癌、口腔癌、血细胞恶性肿瘤(包括多发性骨髓瘤)、白血病(包括急性淋巴细胞白血病、急性非淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、慢性髓细胞白血病、和毛细胞白血病)、积液性淋巴瘤(基于体腔的淋巴瘤)、胸腺淋巴瘤、皮肤t细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、肾上腺皮质癌、产生acth的肿瘤、肺癌(包括小细胞癌和非小细胞癌)、乳腺癌(包括小细胞癌和导管癌)、胃肠癌(包括胃癌、结肠癌、结直肠癌、与结直肠肿瘤相关的息肉)、胰腺癌、肝癌、泌尿癌(包括膀胱癌，包括原发性浅表性膀胱肿瘤、膀胱侵袭性移行细胞癌和肌肉浸润性膀胱癌)、前列腺癌、女性生殖道恶性肿瘤(包括卵巢癌、原发性腹膜上皮性肿瘤、宫颈癌、子宫内膜癌、阴道癌、外阴癌、子宫癌和卵巢滤泡实体瘤)、男性生殖道恶性肿瘤(包括睾丸癌和阴茎癌)、肾癌(包括肾细胞癌)、脑癌(包括内源性脑肿瘤、神经母细胞瘤、星形细胞脑肿瘤、神经胶质瘤、中枢神经系统中的转移性肿瘤细胞侵入)、骨癌(包括骨瘤和骨肉瘤)、皮
肤癌(包括黑素瘤、人皮肤角质形成细胞的肿瘤进展、鳞状细胞癌)、甲状腺癌、成视网膜细胞瘤、神经母细胞瘤、腹腔积液、恶性胸腔积液、间皮瘤、威尔姆氏肿瘤、胆囊癌、滋养层细胞肿瘤、血管外皮细胞瘤和卡波西肉瘤。
[0103]
在一些实施例中，癌症通过分子特性定义。在一些实施例中，所述癌症为雌激素受体阳性乳腺癌。在一些实施方案中，所述乳腺癌为三阴性乳腺癌。在一些实施例中，癌症为kras突变非小细胞肺癌。在一些实施例中，癌症为套细胞淋巴瘤，其由导致周期蛋白d1过度表达的涉及ccnd1的易位定义。
[0104]
在一些实施例中，本文所描述的化合物及组合物引起细胞(例如癌细胞)的g
1-s细胞周期阻滞。在一些实施方案中，癌细胞是来自本文所述的任何癌症类型的癌细胞。在一些实施例中，被阻滞的细胞进入细胞凋亡状态。在一些实施例中，被阻滞的细胞进入衰老状态。在一些实施方案中，本文提供了一种在细胞中引起g1-s检查点阻滞的方法，所述方法包括向所述细胞施用有效量的式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)的化合物或其药学上可接受的盐。在一些实施例中，g
1-s细胞周期阻滞发生在细胞群体中的约40％或更多、约50％或更多、约60％或更多、约70％或更多、约80％或更多、约85％或更多、约90％或更多、约95％或更多、约96％或更多、约97％或更多、约98％或更多、或约99％或更多细胞中。在一些实施例中，g
1-s细胞周期阻滞发生在细胞群体中的最多约99％、最多约98％、最多约97％、最多约96％、最多约95％、最多约90％、最多约85％或最多约80％细胞中。
[0105]
在一些实施方案中，本文提供了一种在细胞中诱导衰老的方法，所述方法包括向所述细胞施用有效量的式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)的化合物或其药学上可接受的盐。在一些实施例中，在细胞群体中的约40％或更多、约50％或更多、约60％或更多、约70％或更多、约80％或更多、约85％或更多、约90％或更多、约95％或更多、约96％或更多、约97％或更多、约98％或更多、或约99％或更多细胞中诱导衰老。在一些实施例中，在细胞群体中的最多约99％、最多约98％、最多约97％、最多约96％、最多约95％、最多约90％、最多约85％或最多约80％细胞中诱导衰老。
[0106]
在一些实施方案中，本文提供了一种在细胞中诱导细胞凋亡的方法，所述方法包括向所述细胞施用有效量的式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)的化合物或其药学上可接受的盐。在一些实施例中，在细胞群体中的约40％或更多、约50％或更多、约60％或更多、约70％或更多、约80％或更多、约85％或更多、约90％或更多、约95％或更多、约96％或更多、约97％或更多、约98％或更多、或约99％或更多细胞中诱导细胞凋亡。在一些实施例中，在细胞群体中的最多约99％、最多约98％、最多约97％、最多约96％、最多约95％、最多约90％、最多约85％或最多约80％细胞中诱导细胞凋亡。
[0107]
在一些实施方案中，本文提供了一种在细胞中抑制cdk4或cdk6的方法，所述方法包括向所述细胞施用有效量的式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)的化合物或其药学上可接受的盐。在一些实施例中，cdk4或cdk6被抑制约10％或更多、约20％或更多、约30％或更多、约40％或更多、约50％或更多、约60％或更多、约70％或更多、约75％或更多、约80％或更多、约90％或更多、约95％或更多、约96％或更多、约97％或更多、约98％或更多、或约99％或更多。在一些实施例中，cdk4或cdk6被抑制最多约99％、最多约98％、最多约97％、最多约96％、最多约95％、最多约90％、最多约85％、最多约80％、最多约70％或最多约60％。在一些实施例中，根据激酶测定来测量cdk4或cdk6的活性。
[0108]
在一些实施方案中，本文提供了一种在细胞中抑制cdk1、cdk2、cdk4、cdk6和cdk9中的任一个的方法，所述方法包括向所述细胞施用有效量的式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)的化合物或其药学上可接受的盐。在一些实施例中，cdk1、cdk2、cdk4、cdk6和cdk9中的一或多个被抑制约10％或更多、约20％或更多、约30％或更多、约40％或更多、约50％或更多、约60％或更多、约70％或更多、约75％或更多、约80％或更多、约90％或更多、约95％或更多、约96％或更多、约97％或更多、约98％或更多、或约99％或更多。在一些实施例中，cdk1、cdk2、cdk4、cdk6和cdk9中的一或多个被抑制最多约99％、最多约98％、最多约97％、最多约96％、最多约95％、最多约90％、最多约85％、最多约80％、最多约70％或最多约60％。在一些实施例中，根据激酶测定来测量cdk1、cdk2、cdk4、cdk6和cdk9中的一或多个的活性。
[0109]
在一些实施方案中，本文提供了一种抑制cdk4或cdk6的方法，所述方法包括使cdk4或cdk6与有效量的式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)的化合物或其药学上可接受的盐接触。在一些实施方案中，式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)的化合物或其药学上可接受的盐以以下的ic
50
与cdk4或cdk6结合：小于1μm、小于900nm、小于800nm、小于700nm、小于600nm、小于500nm、小于400nm、小于300nm、小于200nm、小于100nm、小于50nm、小于10nm、小于5nm、小于1nm或小于0.5nm。在一些实施方案中，式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)的化合物或其药学上可接受的盐以以下的ic
50
与cdk4或cdk6结合：在0.1nm与1nm之间、1nm与5nm之间、在5nm与10nm之间、在10nm与50nm之间、在50nm与100nm之间、在100nm与200nm之间、在200nm与300nm之间、在300nm与400nm之间、在400nm与500nm之间、在500nm与600nm之间、在600nm与700nm之间、在700nm与800nm之间、在800nm与900nm或在900nm与1μm之间。在一些实施方案中，根据激酶测定测量ic
50
。在一些实施方案中，根据细胞增殖测定测量ic
50
。
[0110]
在一些实施方案中，本文提供了一种抑制cdk1、cdk2、cdk4、cdk6和cdk9中的一个或多个的方法，所述方法包括使cdk1、cdk2、cdk4、cdk6和cdk9中的一个或多个与有效量的式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)的化合物或其药学上可接受的盐接触。在一些实施方案中，式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)的化合物或其药学上可接受的盐以以下的ic
50
与cdk1、cdk2、cdk4、cdk6和cdk9中的一个或多个结合：小于1μm、小于900nm、小于800nm、小于700nm、小于600nm、小于500nm、小于400nm、小于300nm、小于200nm、小于100nm、小于50nm、小于10nm、小于5nm、小于1nm或小于0.5nm。在一些实施方案中，式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)的化合物或其药学上可接受的盐以以下的ic
50
与cdk1、cdk2、cdk4、cdk6和cdk9中的一个或多个结合：在0.1nm与1nm之间、1nm与5nm之间、在5nm与10nm之间、在10nm与50nm之间、在50nm与100nm之间、在100nm与200nm之间、在200nm与300nm之间、在300nm与400nm之间、在400nm与500nm之间、在500nm与600nm之间、在600nm与700nm之间、在700nm与800nm之间、在800nm与900nm或在900nm与1μm之间。在一些实施方案中，根据激酶测定测量ic
50
。在一些实施方案中，根据细胞增殖测定测量ic
50
。
[0111]
在一些实施方案中，本文提供了一种调节个体的cdk4/6的方法，所述方法包括向所述个体施用有效量的式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)的化合物或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，本文提供了一种调节个体的cdk4或cdk6的方法，所述方法包括向所述个体施用有效量的式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)的化
合物或其药学上可接受的盐。在一些实施例中，本文提供一种调节个体的cdk4/6以及cdk1、cdk2和cdk9中的一或多个的方法，其包括向个体施用本文中详述的化合物或其盐。在一些实施例中，本文提供一种调节个体的cdk4和cdk 6以及cdk1、cdk2和cdk9中的一或多个的方法，其包括向个体施用本文中详述的化合物或其盐。在一些实施方案中，式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)的化合物或其药学上可接受的盐以以下的ic
50
与cdk4/6中的一个或多个结合：小于1μm、小于900nm、小于800nm、小于700nm、小于600nm、小于500nm、小于400nm、小于300nm、小于200nm、小于100nm、小于50nm、小于10nm、小于5nm、小于1nm或小于0.5nm。在一些实施方案中，式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)的化合物或其药学上可接受的盐以以下的ic
50
与cdk4和cdk6中的一个或多个结合：小于1μm、小于900nm、小于800nm、小于700nm、小于600nm、小于500nm、小于400nm、小于300nm、小于200nm、小于100nm、小于50nm、小于10nm、小于5nm、小于1nm或小于0.5nm。在一些实施方案中，式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)的化合物或其药学上可接受的盐以以下的ic
50
与cdk1、cdk2、cdk4、cdk6和cdk9中的一个或多个结合：在0.1nm与1nm之间、1nm与5nm之间、在5nm与10nm之间、在10nm与50nm之间、在50nm与100nm之间、在100nm与200nm之间、在200nm与300nm之间、在300nm与400nm之间、在400nm与500nm之间、在500nm与600nm之间、在600nm与700nm之间、在700nm与800nm之间、在800nm与900nm或在900nm与1μm之间。在一些实施方案中，根据激酶测定测量ic
50
。在一些实施方案中，根据细胞增殖测定测量ic
50
。
[0112]
在一个实施例中，化合物或其盐可通过增加肿瘤细胞呈递抗原的功能性能力或通过借助抑制其增殖来减少免疫抑制t
reg
群体来增强抗肿瘤免疫性。
[0113]
在一些实施方案中，本文提供了一种抑制细胞增殖的方法，所述方法包括使所述细胞与有效量的式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)的化合物或其药学上可接受的盐接触。在一些实施方案中，式(i)、(ia)、(i-b20)至(i-b12)、(i-c1)
–
(i-c45)的化合物或其药学上可接受的盐以以下的ec
50
有效抑制细胞增殖：小于5μm、小于2μm、小于1μm、小于900nm、小于800nm、小于700nm、小于600nm、小于500nm、小于400nm、小于300nm、小于200nm、小于100nm、或小于50nm。在一些实施方案中，式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)的化合物或药学上可接受的盐以以下的ec
50
有效抑制细胞增殖：在10nm与20nm之间、在20nm与50nm之间、在50nm与100nm之间、在100nm与500nm之间、在500nm与1μm之间、在1μm与2μm、或在2μm与5μm之间。在一些实施方案中，根据细胞增殖测定测量ec
50
。组合疗法
[0114]
如本文所提供，本发明所公开的化合物或其盐可影响免疫系统。因此，本发明化合物或其盐可与其他抗癌剂或免疫疗法组合使用。在一些实施方案中，本文提供了一种治疗个体的疾病的方法，所述方法包括向所述个体施用有效量的式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)的化合物或其任何实施方案、变型或方面(统称为，式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)的化合物或本发明化合物或本文详述或描述的化合物)或其药学上可接受的盐、以及另外的治疗剂。在一些实施例中，第二治疗剂为癌症免疫治疗剂或内分泌治疗剂或化学治疗剂。在一些实施方案中，所述疾病是增殖性疾病，诸如癌症。
[0115]
在一些实施方案中，所述另外的治疗剂是癌症免疫疗法药剂。在一些实施方案中，所述另外的治疗剂是免疫刺激剂。在一些实施方案中，所述另外的治疗剂靶向检查点蛋白(例如免疫检查点抑制剂)。在一些实施方案中，所述另外的治疗剂有效刺激、增强或改善针
对肿瘤的免疫反应。
[0116]
在另一方面，本文提供了一种用于治疗疾病(诸如癌症)的组合疗法。在一些实施方案中，提供了一种治疗个体的疾病的方法，所述方法包括与放射疗法组合，施用有效量的式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)或其任何实施方案、变型或方面(统称为，式(i)、(ia-)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)的化合物或本发明化合物或本文详述或描述的化合物)或其药学上可接受的盐、以及另外的治疗剂。
[0117]
在一些实施方案中，提供了一种治疗个体的疾病的方法，所述方法包括(a)施用有效量的式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)或其任何实施方案、变型或方面(统称为，式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45))或其药学上可接受的盐，以及(b)施用有效量的内分泌治疗剂。在一些实施方案中，所述内分泌疗法是抗雌激素疗法。在一些实施方案中，所述内分泌疗法是选择性雌激素受体降解剂(serd，诸如氟维司群)。在一些实施方案中，所述内分泌疗法是选择性雌激素受体调节剂(serm，诸如它莫西芬)。在一些实施方案中，所述内分泌疗法是芳香化酶抑制剂(诸如来曲唑)。在一些实施例中，cdk4/6抑制剂与内分泌疗法的组合致使增强g1-s细胞周期阻滞。在一些实施例中，cdk4/6抑制剂与内分泌疗法的组合致使增强进入衰老状态。在一些实施方案中，在共施用内分泌治疗剂之前、之后或同时施用式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，在内分泌治疗剂之前或之后1或更多个小时(诸如2或更多个小时、4或更多个小时、8或更多个小时、12或更多个小时、24或更多个小时、或48或更多个小时)施用式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)或其药学上可接受的盐。
[0118]
在一些实施方案中，提供了一种治疗个体的疾病的方法，所述方法包括(a)施用有效量的式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)或其任何实施方案、变型或方面(统称为，式(i)、(ia-)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45))或其药学上可接受的盐，以及(b)施用有效量的第二化学治疗剂。在一些实施方案中，所述化学治疗剂是另一种激酶抑制剂。在一些实施方案中，在共施用第二化学治疗剂之前、之后或同时施用式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，在第二化学治疗剂之前或之后1或更多个小时(诸如2或更多个小时、4或更多个小时、8或更多个小时、12或更多个小时、24或更多个小时、或48或更多个小时)施用式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)或其药学上可接受的盐。
[0119]
可以与式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)的化合物或其药学上可接受的盐组合使用的化学治疗剂的例子包括dna-靶向剂、dna烷基化剂(诸如环磷酰胺、氮芥、苯丁酸氮芥、美法仑、达卡巴嗪或亚硝基脲)、拓扑异构酶抑制剂(诸如拓扑异构酶i抑制剂(例如，伊立替康或拓扑替康)或拓扑异构酶ii抑制剂(例如，依托泊苷或替尼泊苷))、蒽环类药物(诸如道诺霉素、多柔比星、表柔比星、伊达比星、米托蒽醌或戊柔比星)、组蛋白脱乙酰化酶抑制剂(诸如伏立诺他或罗米地辛)、布罗莫结构域抑制剂、其他表观遗传抑制剂、紫杉烷(诸如紫杉醇或多西紫杉醇)、激酶抑制剂(诸如硼替佐米、埃罗替尼、吉非替尼、伊马替尼、维莫非尼、维莫德吉、依鲁替尼)、抗血管生成抑制剂、核苷酸类似物或前体类似物(诸如阿扎胞苷、硫唑嘌呤、卡培他滨、阿糖胞苷、去氧氟尿苷、5-氟尿嘧啶、吉西他滨、羟基脲、巯嘌呤、甲氨蝶呤或硫鸟嘌呤)或基于铂的化学治疗剂(诸如顺铂、卡铂或奥沙利铂)、培美曲塞或其组合。在一些实施方案中，提供了一种治疗个体的疾病的方法，所述方法包括(a)
施用有效量的式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)或其任何实施方案、变型或方面(统称为，式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45))或其药学上可接受的盐，以及(b)施用有效量的激酶抑制剂(诸如硼替佐米、埃罗替尼、吉非替尼、伊马替尼、维莫非尼、维莫德吉或依鲁替尼)。在一些实施方案中，在共施用激酶抑制剂之前、之后或同时施用式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，在激酶抑制剂之前或之后1或更多个小时(诸如2或更多个小时、4或更多个小时、8或更多个小时、12或更多个小时、24或更多个小时、或48或更多个小时)施用式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)或其药学上可接受的盐。
[0120]
在一些实施方案中，提供了一种治疗个体的疾病的方法，所述方法包括(a)施用有效量的式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)或其任何实施方案、变型或方面(统称为，式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45))或其药学上可接受的盐，以及(b)施用有效量的dna损伤剂。在一些实施方案中，在共施用dna损伤剂之前、之后或同时施用式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，在dna损伤剂之前或之后1或更多个小时(诸如2或更多个小时、4或更多个小时、8或更多个小时、12或更多个小时、24或更多个小时、或48或更多个小时)施用式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)或其药学上可接受的盐。
[0121]
在一些实施方案中，本文提供了一种治疗个体的疾病的方法，所述方法包括(a)施用有效量的式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)的化合物或其任何实施方案、变型或方面(统称为式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45))或其药学上可接受的盐，以及(b)施用有效量的dna烷基化剂(诸如环磷酰胺、氮芥、苯丁酸氮芥、美法仑、达卡巴嗪或亚硝基脲)。在一些实施方案中，在共施用dna烷基化剂之前、之后或同时施用式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，在dna烷基化剂之前或之后1或更多个小时(诸如2或更多个小时、4或更多个小时、8或更多个小时、12或更多个小时、24或更多个小时、或48或更多个小时)施用式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)或其药学上可接受的盐。
[0122]
在一些实施方案中，提供了一种治疗个体的疾病的方法，所述方法包括(a)施用有效量的式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)的化合物或其任何实施方案、变型或方面(统称为式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45))或其药学上可接受的盐，以及(b)施用有效量的拓扑异构酶抑制剂(诸如拓扑异构酶i抑制剂(例如，伊立替康或拓扑替康)或拓扑异构酶ii抑制剂(例如，依托泊苷或替尼泊苷))。在一些实施方案中，在共施用拓扑异构酶抑制剂之前、之后或同时施用式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，在拓扑异构酶抑制剂之前或之后1或更多个小时(诸如2或更多个小时、4或更多个小时、8或更多个小时、12或更多个小时、24或更多个小时、或48或更多个小时)施用式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)或其药学上可接受的盐。
[0123]
在一些实施方案中，本文提供了一种治疗个体的疾病的方法，所述方法包括(a)施用有效量的式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)的化合物或其任何实施方案、变型或方面(统称为式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45))或其药学上可接受的盐，以及(b)施用有效量的蒽环类药物(诸如道诺霉素、多柔比星、表柔比星、伊达比星、米
c45)或其药学上可接受的盐。
[0128]
在一些实施方案中，提供了一种治疗个体的疾病的方法，所述方法包括(a)施用有效量的式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)或其任何实施方案、变型或方面(统称为，式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45))或其药学上可接受的盐，以及(b)施用有效量的培美曲塞。在一些实施方案中，在共施用培美曲塞之前、之后或同时施用式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，在培美曲塞之前或之后1或更多个小时(诸如2或更多个小时、4或更多个小时、8或更多个小时、12或更多个小时、24或更多个小时、或48或更多个小时)施用式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)或其药学上可接受的盐。
[0129]
在一些实施方案中，提供了一种治疗个体的疾病的方法，所述方法包括(a)施用有效量的式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)或其任何实施方案、变型或方面(统称为，式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45))或其药学上可接受的盐，以及(b)施用有效量的布鲁顿酪氨酸激酶(btk)抑制剂。在一些实施方案中，在共施用btk抑制剂之前、之后或同时施用式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，在btk抑制剂之前或之后1或更多个小时(诸如2或更多个小时、4或更多个小时、8或更多个小时、12或更多个小时、24或更多个小时、或48或更多个小时)施用式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)或其药学上可接受的盐。
[0130]
在一些实施方案中，提供了一种治疗个体的疾病的方法，所述方法包括(a)施用有效量的式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)或其任何实施方案、变型或方面(统称为，式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45))或其药学上可接受的盐，以及(b)施用有效量的pi3k或akt抑制剂。在一些实施方案中，在共施用pi3k或akt抑制剂之前、之后或同时施用式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，在pi3k或akt抑制剂之前或之后1或更多个小时(诸如2或更多个小时、4或更多个小时、8或更多个小时、12或更多个小时、24或更多个小时、或48或更多个小时)施用式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)或其药学上可接受的盐。
[0131]
在一些实施方案中，提供了一种治疗个体的疾病的方法，所述方法包括(a)施用有效量的式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)或其任何实施方案、变型或方面(统称为，式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45))或其药学上可接受的盐，以及(b)施用有效量的dna损伤修复(ddr)通路抑制剂。在一些实施方案中，在共施用ddr通路抑制剂之前、之后或同时施用式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，在ddr通路抑制剂之前或之后1或更多个小时(诸如2或更多个小时、4或更多个小时、8或更多个小时、12或更多个小时、24或更多个小时、或48或更多个小时)施用式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)或其药学上可接受的盐。所述ddr通路抑制剂的例子包括聚(adp-核糖)聚合酶(parp)抑制剂(诸如奥拉帕尼、卢卡帕尼、尼拉帕尼、或他拉佐帕尼)、共济失调毛细血管扩张突变(atm)蛋白抑制剂、共济失调毛细血管扩张和rad3相关(atr)蛋白抑制剂、检查点激酶1(chk1)抑制剂、或其组合。
[0132]
在一些实施方案中，提供了一种治疗个体的疾病的方法，所述方法包括(a)施用有效量的式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)或其任何实施方案、变型或方面(统称为，式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45))或其药学上可接受的盐，以及
(b)施用有效量的parp抑制剂(诸如奥拉帕尼、卢卡帕尼、尼拉帕尼或他拉佐帕尼)。在一些实施方案中，在共施用parp抑制剂之前、之后或同时施用式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，在parp抑制剂之前或之后1或更多个小时(诸如2或更多个小时、4或更多个小时、8或更多个小时、12或更多个小时、24或更多个小时、或48或更多个小时)施用式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)或其药学上可接受的盐。
[0133]
在一些实施方案中，提供了一种治疗个体的疾病的方法，所述方法包括(a)施用有效量的式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)或其任何实施方案、变型或方面(统称为，式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45))或其药学上可接受的盐，以及(b)施用有效量的atm蛋白抑制剂。在一些实施方案中，在共施用atm蛋白抑制剂之前、之后或同时施用式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，在atm蛋白抑制剂之前或之后1或更多个小时(诸如2或更多个小时、4或更多个小时、8或更多个小时、12或更多个小时、24或更多个小时、或48或更多个小时)施用式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)或其药学上可接受的盐。
[0134]
在一些实施方案中，提供了一种治疗个体的疾病的方法，所述方法包括(a)施用有效量的式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)或其任何实施方案、变型或方面(统称为，式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45))或其药学上可接受的盐，以及(b)施用有效量的atr蛋白抑制剂。在一些实施方案中，在共施用atr蛋白抑制剂之前、之后或同时施用式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，在atr蛋白抑制剂之前或之后1或更多个小时(诸如2或更多个小时、4或更多个小时、8或更多个小时、12或更多个小时、24或更多个小时、或48或更多个小时)施用式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)或其药学上可接受的盐。
[0135]
在一些实施方案中，提供了一种治疗个体的疾病的方法，所述方法包括(a)施用有效量的式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)或其任何实施方案、变型或方面(统称为，式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45))或其药学上可接受的盐，以及(b)施用有效量的chk1抑制剂。在一些实施方案中，在共施用chk1抑制剂之前、之后或同时施用式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，在chk1抑制剂之前或之后1或更多个小时(诸如2或更多个小时、4或更多个小时、8或更多个小时、12或更多个小时、24或更多个小时、或48或更多个小时)施用式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)或其药学上可接受的盐。
[0136]
在一些实施方案中，提供了一种治疗个体的疾病的方法，所述方法包括(a)施用有效量的式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)或其任何实施方案、变型或方面(统称为，式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45))或其药学上可接受的盐，以及(b)施用有效量的另外的cdk4/6抑制剂。在一些实施方案中，在共施用另外的cdk4/6抑制剂之前、之后或同时施用式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，在另外的cdk4/6抑制剂之前或之后1或更多个小时(诸如2或更多个小时、4或更多个小时、8或更多个小时、12或更多个小时、24或更多个小时、或48或更多个小时)施用式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)或其药学上可接受的盐。
[0137]
在另一方面，本文提供了一种组合疗法，其中将式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、
a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)的化合物或其盐，并且其次施用抗pd-1抗体。另外或可替代地，可以顺序施用抗pd-l1抗体和式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)的化合物或其盐，诸如首先施用抗pd-l1抗体，并且其次施用式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)的化合物或其盐；或首先施用式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)的化合物或其盐，并且其次施用抗pd-l1抗体。
[0141]
此外，如果顺序施用组合疗法的多于一个剂量，则在施用的每个时间点，顺序施用的顺序可以被颠倒或保持相同的顺序、顺序施用可以与同时施用组合、或其任何组合。
[0142]
任选地，式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)的化合物或其盐的组合可以进一步与免疫原性剂(诸如癌细胞、纯化的肿瘤抗原(包括重组蛋白、肽和碳水化合物分子)、细胞和用编码免疫刺激细胞因子的基因转染的细胞)组合。
[0143]
式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)的化合物或其盐还可以进一步与标准的癌症治疗组合。例如，式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)的化合物或其盐可以有效地与化学治疗方案组合。在这些情况下，可能减少与本公开文本的组合一起施用的其他化学治疗剂的剂量。具有式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)的化合物或其盐的其他组合疗法包括辐射、手术、或激素剥夺(deprivation)。血管生成抑制剂也可以与式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)的化合物或其盐组合。抑制血管生成导致肿瘤细胞死亡，其可以将肿瘤抗原的来源供给宿主抗原呈递通路。
[0144]
在其他例子中，式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)的化合物或其盐可以用于与抗瘤抗体结合。举例来说并且不希望受理论束缚，用抗癌抗体或与毒素缀合的抗癌抗体治疗可以导致癌细胞死亡(例如，肿瘤细胞)，这将增强由ctla-4、pd-1、pd-l1、或式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)的化合物或其盐介导的免疫反应。在一个示例性实施方案中，过度增殖性疾病(例如，癌症肿瘤)的治疗可以包括同时或顺序或其任何组合的抗癌抗体与式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)的化合物或其盐以及抗ctla-4和/或抗pd-1和/或抗pd-l1抗体的组合，这可以增强宿主的抗肿瘤免疫反应。可以用于激活宿主免疫反应性的其他抗体可以进一步与式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)的化合物或其盐组合使用。
[0145]
在一些实施方案中，式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)的化合物或其盐可以与抗cd73疗法(诸如抗cd73抗体)组合。
[0146]
在又进一步的实施方案中，将式(i)、(i-a)、(i-b1)至(i-b20)、(i-c1)
–
(i-c45)的化合物或其盐与另一种cdk4或cdk6抑制剂或其他cdk抑制剂组合施用。施用剂量和方法
[0147]
向个体(诸如人)施用的化合物的剂量可以随具体的化合物或其盐、施用方法和正在治疗的具体的疾病(诸如癌症的类型和阶段)而变化。在一些实施方案中，所述化合物或其盐的量是治疗有效量。
[0148]
在一个方面，化合物的有效量可为约0.01与约100mg/kg之间的剂量。本发明化合物的有效量或剂量可以考虑常规因素(例如，施用或药物递送的模式或途径、药剂的药代动力学、待治疗疾病的严重程度和病程、受试者的健康状况、病症和体重)通过常规方法(如建模、剂量递增或临床试验)来确定。示例性剂量是约0.7mg/天至7g/天、或约7mg/天至350mg/天、或约350mg/天至1.75g/天、或约1.75至7g/天的范围。
[0149]
在一方面，本文提供的任何方法可以包括向个体施用药物组合物，所述药物组合物含有有效量的本文提供的化合物或其盐和药学上可接受的赋形剂。
[0150]
本发明的化合物或组合物可以根据有效给药方案施用给个体，持续所需时间段或持续时间，如至少约一个月、至少约2个月、至少约3个月、至少约6个月或至少约12个月或更长时间，在一些变型中，施用可以持续个体生命的持续时间。在一个变型中，所述化合物以每天或间歇时间表施用。所述化合物可以在一段时间内连续(例如，每天至少一次)向个体施用。给药频率也可以少于每天一次，例如，约每周一次给药。给药频率可以多于每天一次，例如每天两次或三次。给药频率也可以是间歇性的，包括“禁药期”(例如，每天一次给药持续7天，然后不给药持续7天，重复任何14天的时间段，诸如约2个月、约4个月、约6个月或更长时间)。任何给药频率可以采用本文所述的任何化合物以及本文所述的任何剂量。
[0151]
本文提供的化合物或其盐可以经由各种途径向个体施用，所述途径包括例如静脉内、肌内、皮下、口服和透皮。本文提供的化合物可以以低剂量频繁地施用，称为“节律性疗法”，或作为使用单独的或与一种或多种另外的药物组合的化合物的维持疗法的一部分施用。节律性疗法或维持疗法可以包括循环施用本文提供的化合物。节律性疗法或维持疗法可以包括肿瘤内施用本文提供的化合物。
[0152]
在一方面，本发明提供了一种治疗个体的癌症的方法，所述方法通过向个体(例如人类)肠胃外施用有效量的化合物或其盐。在一些实施方案中，施用途径是静脉内、动脉内、肌内、或皮下。在一些实施方案中，施用途径是口服。在仍其他实施方案中，施用途径是透皮。
[0153]
本发明还提供了如本文所述用于治疗、预防和/或延迟癌症的开始和/或发展的组合物(包括药物组合物)和本文所述的其他方法。在某些实施方案中，所述组合物包含以单位剂型存在的药物配制品。
[0154]
还提供了用于本文所述的方法的在合适包装中的包含本文所述的本公开文本的化合物或其盐、组合物和单位剂量的制品。合适的包装是本领域已知的，并且包括例如小瓶、器皿、安瓿、瓶子、罐子、软包装等。制品可以进一步被灭菌和/或密封。试剂盒
[0155]
本公开文本进一步提供了用于进行本发明方法的试剂盒，所述试剂盒包含本文所述的一种或多种化合物或包含本文所述的化合物的组合物。所述试剂盒可以采用本文公开的任何化合物。在一个变型中，所述试剂盒使用本文所述的化合物或其盐。所述试剂盒可以用于本文所述的任何一种或多种用途，并且相应地可以含有用于治疗癌症的说明书。
[0156]
试剂盒通常包括合适的包装。试剂盒可以包含含有本文所述的任何化合物的一个或多个容器。每种组分(如果存在多于一种组分)可以被包装在单独的容器中，或一些组分可以在交叉反应性和保质期允许的情况下组合在一个容器中。
[0157]
所述试剂盒可以是单位剂型、大包装(例如，多剂量包装)或亚单位剂量。例如，可以提供这样的试剂盒，其含有足够剂量的本文所公开的化合物和/或可用于本文所详述的疾病的第二药物活性化合物，以向个体提供有效的治疗，持续延长的时间段，诸如一周、2周、3周、4周、6周、8周、3个月、4个月、5个月、7个月、8个月、9个月中或更长时间的任一个。试剂盒还可以包括多个单位剂量的化合物和使用说明书，并且以足以在药房(例如，医院药房和复合药房)中储存和使用的量包装。
[0158]
试剂盒可以任选地包括涉及本发明方法的一种或多种组分的使用的一组说明书，通常是书面说明书，尽管含有说明书的电子存储介质(例如，磁碟或光盘)也是可接受的。试剂盒中包括的说明书通常包括关于组分及其对个体的施用的信息。
[0159]
通过参考以下实施例可以进一步理解本发明，所述实施例是通过说明的方式提供的并且不旨在限制。实施例合成实施例实施例1：n-(3-(1,4-二氮杂环庚-1-基)苯基)-5-氟-4-(8-氟-4-异丙基-3,4-二氢-2h-苯并[b][1,4]噁嗪-6-基)嘧啶-2-胺的合成。(1号化合物)
[0160]
步骤-1 2-氨基-4-溴-6-氟苯酚的合成：向4-溴-2-氟-6-硝基苯酚(15g，0.072mol，1.0当量)在乙醇(750ml)中的溶液中一次性添加氯化锡(ii)水合物(68.25g，0.36mol，5.0当量)。将混合物在80℃搅拌2h，并且通过tlc监测反应。使反应混合物达到环境温度并且倒入冰中。将ph值使用naoh水溶液(5n)调节至7-8。在乙酸乙酯(600ml
×
2)中萃取水层。将合并的有机相经无水na2so4干燥并减压浓缩，得到粗品，将其不经任何进一步纯化而用于下一步骤。lcms:206[m+h]
+
,208[m+h]
+
[0161]
步骤-2：4-溴-2-氟-6-(异丙基氨基)苯酚的合成：在0℃向2-氨基-4-溴-6-氟苯酚(19.5g，94.6mmol，1.0当量)在dcm(400ml)中的搅拌溶液中添加丙酮(8.24g，141.9mmol，1.5当量)，接着添加乙酸(28.42g，473.3mmol，5.0当量)。将反应混合物在相同温度搅拌10分钟。在0℃向其中添加三乙酰氧基硼氢化钠(40.13g，189.3mmol，2.0当量)。将反应混合物在相同温度搅拌1h。通过tlc和lcms监测反应。反应完成后，将反应混合物用冰冷的水(100ml)骤冷并且萃取有机相。将有机相用水(3x100ml)洗涤，接着用盐水(100ml)洗涤。将有机相经无水硫酸钠干燥，过滤且减压浓缩以获得粗品，将其不经任何进一步纯化而用于下一步骤。lcms:248[m+h]
+
,250[m+h]
+
[0162]
步骤-3：6-溴-8-氟-4-异丙基-2h-苯并[b][1,4]噁嗪-3(4h)-酮的合成：在0℃向4-溴-2-氟-6-(异丙基氨基)苯酚(24.5g，99.59mmol，1.0当量)在氯仿(500ml)中的搅拌溶液中添加nahco3(41.5g，497.9mmol，5.0当量)，接着在相同温度添加苄基三乙基氯化铵(22.4g，99.9mmol，1.0当量)。将反应混合物在0℃搅拌5min。在0℃向其中添加氯乙酰氯(11.2g，99.6mmol，1.0当量)。将反应混合物在环境温度搅拌1h。通过tlc和lcms监测反应。反应完成后，将反应混合物用冰冷的水(100ml)骤冷，并且将有机相用dcm(500ml
×
2)萃取。将合并的有机相用水(3
×
100ml)和盐水溶液(110ml)洗涤。将有机相经无水硫酸钠干燥，过滤并且减压浓缩，得到粗品。将来自两个批次(批次大小#23g和24.5g)的粗材料通过柱色谱硅胶(100-200目)使用乙酸乙酯:己烷0-40％作为洗脱液纯化，得到所希望的产物。lcms:288[m+h]
+
,290[m+h]
+
[0163]
步骤-4：6-溴-8-氟-4-异丙基-3,4-二氢-2h-苯并[b][1,4]噁嗪的合成：在0℃向6-溴-8-氟-4-异丙基-2h-苯并[b][1,4]噁嗪-3(4h)-酮(30g，104.5mmol，1.0当量)在thf(600ml)中的搅拌溶液中逐滴添加bh3·
dms(2m于thf中)(209ml，418.1mmol，4.0当量)。将反应混合物在80℃搅拌1h。通过tlc和lcms监测反应。完成后，将溶剂减压浓缩。将反应混合物用在0℃的饱和碳酸氢钠溶液(100ml)骤冷并且用乙酸乙酯(200ml
×
2)萃取。将合并的有机相用水(200ml)和盐水溶液(200ml)洗涤。将有机相经无水硫酸钠干燥，过滤并且减压浓缩，得到所希望的产物。粗品不经任何进一步纯化而用于下一步骤。lcms:274[m+h]
+
,276[m+h]
+
[0164]
步骤-5：8-氟-4-异丙基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-3,4-二氢-2h-苯并[b][1,4]噁嗪的合成：在环境温度向6-溴-8-氟-4-异丙基-3,4-二氢-2h-苯并[b][1,4]噁嗪(17g，62.2mmol，1.0当量)在二噁烷(170ml)中的搅拌溶液中添加4,4,5,5-四甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1,3,2-二氧杂环戊硼烷(20.5g，80.9mmol，1.1当量)和乙酸钾(18.3g，186.8mmol，3.0当量)。将反应混合物在氮气下吹扫15分钟，接着添加pdcl2(dppf)dcm(2.54g，3.11mmol，0.05当量)。将混合物再次用氮气吹扫5min。将反应混合物在80℃加热16h并且通过tlc和lcms监测。反应完成后，在减压下
除去二噁烷。将反应混合物用水(200ml)稀释并且用乙酸乙酯(1000ml
×
2)萃取。将合并的有机层用水(200ml
×
3)洗涤。将有机相经无水硫酸钠干燥，过滤并且减压浓缩，得到粗品。将来自两个批次(批次大小#17g)的粗材料通过柱色谱硅胶(#100-200目)使用乙酸乙酯:己烷0-20％作为洗脱液纯化，得到所希望的产物。lcms:323[m+h]
+
[0165]
步骤-6：6-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-8-氟-4-异丙基-3,4-二氢-2h-苯并[b][1,4]噁嗪的合成：在环境温度向2,4-二氯-5-氟嘧啶(7.6g，46.7mmol，1当量)和8-氟-4-异丙基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-3,4-二氢-2h-苯并[b][1,4]噁嗪(15g，46.7mmol，1.0当量)在thf:水(240ml:160ml，20ml)中的搅拌溶液中添加碳酸钾(12.91g，93.4mmol，2.0当量)。将反应混合物在氮气下吹扫15分钟，接着添加pd(pph3)4(0.530g，0.46mmol，0.01当量)。将混合物再次在氮气下吹扫5min。将反应混合物在80℃加热6h。通过tlc和lcms监测反应。反应完成后，在减压下除去thf。将反应混合物用水(200ml)稀释并且用乙酸乙酯(1000ml
×
2)萃取。将合并的有机相用水(200ml
×
3)洗涤。将有机相经无水硫酸钠干燥，过滤并且减压浓缩，得到粗品。将来自两个批次(批次大小各自15g)的粗材料通过柱色谱硅胶(#100-200)使用0-30％乙酸乙酯:己烷作为洗脱液纯化，得到所希望的产物。lcms:326[m+h]
+
,1h nmr(400mhz,氯仿-d)δppm 8.43(d,j＝3.5hz,1h)7.42(s,1h)7.30(s,1h)4.28-4.42(m,2h)4.11-4.21(m,1h)3.23-3.37(m,2h)1.23(d,j＝6.6hz,6h)。
[0166]
步骤-7：4-(3-硝基苯基)-1,4-二氮杂环庚烷-1-甲酸叔丁酯的合成：向1-溴-3-硝基苯(300mg，1.49mmol，1.0当量)在二噁烷(10ml)中的溶液中添加1,4-二氮杂环庚烷-1-甲酸叔丁酯(597mg，2.98mmol，2.0当量)和碳酸铯(972mg，2.98mmol，2当量)。将反应混合物用氮气吹扫15min，接着添加pd2(dba)3(55mg，0.059mmol，0.04当量)和xantphos(52mg，0.089mmol，0.06当量)。将所得反应混合物在100℃搅拌过夜。通过tlc和lcms监测反应进程。反应完成后，将反应混合物用水(50ml)稀释并且用乙酸乙酯(150ml)萃取。将有机层用水(100ml)和盐水(100ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥且减压浓缩以获得粗化合物，将其通过正相combi-flash纯化以获得所希望的产物。lcms:322[m+h]
+
[0167]
步骤-8：4-(3-氨基苯基)-1,4-二氮杂环庚烷-1-甲酸叔丁酯的合成：在h2下向4-(3-硝基苯基)-1,4-二氮杂环庚烷-1-甲酸叔丁酯(200mg，0.62mmol，1.0当量)在甲醇(10ml)中的搅拌溶液中添加pd/c(20％w/w)(40mg)。将所得反应混合物在室温搅拌4h。通过lcms监测反应进程。反应完成后，使混合物通过硅藻土床，并且将滤液减压浓缩以获得粗品，将其不经任何进一步纯化而用于下一步骤。lcms:292[m+h]
+
[0168]
步骤-9：4-(3-((5-氟-4-(8-氟-4-异丙基-3,4-二氢-2h-苯并[b][1,4]噁嗪-6-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)-1,4-二氮杂环庚烷-1-甲酸叔丁酯的合成：向6-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-8-氟-4-异丙基-3,4-二氢-2h-苯并[b][1,4]噁嗪(100mg，0.3mmol，1.0当量)在二噁烷(10ml)中的溶液中添加4-(3-氨基苯基)-1,4-二氮杂环庚烷-1-甲酸叔丁酯(96mg，0.33mmol，1.1当量)和碳酸铯(147mg，0.47mmol，1.5当量)。将反应混合物用氮气吹扫30min，接着添加乙酸钯(2mg，0.006mmol，0.02当量)和binap(8mg，0.012mmol，0.04当量)。将所得反应混合物在100℃搅拌过夜。通过tlc和lcms监测反应进程。反应完成后，将反应混合物用水(30ml)稀释并且用乙酸乙酯(100ml)萃取。将有机层用水(50ml)和盐水(50ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥且减压浓缩以获得粗化合物，将其通过正相combi-flash纯化以获得所希望的产物。lcms:581[m+h]
+
基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-4-基)-1,4-二氮杂环庚烷-1-甲酸叔丁酯的合成：向6-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-8-氟-4-异丙基-3,4-二氢-2h-苯并[b][1,4]噁嗪(100mg，0.3mmol，1.0当量)在二噁烷(10ml)中的溶液中添加4-(2-氨基吡啶-4-基)-1,4-二氮杂环庚烷-1-甲酸叔丁酯(96mg，0.33mmol，1.1当量)和碳酸铯(147mg，0.47mmol，1.5当量)。将反应混合物用氮气吹扫30min，接着添加乙酸钯(2mg，0.006mmol，0.02当量)和binap(8mg，0.012mmol，0.04当量)。将所得反应混合物在100℃搅拌过夜。通过tlc和lcms监测反应进程。反应完成后，将反应混合物用水(30ml)稀释并且用乙酸乙酯(100ml)萃取。将有机层用水(50ml)和盐水(50ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥且减压浓缩以获得粗化合物，将其通过正相combi-flash纯化以获得所希望的产物。lcms:582[m+h]
+
[0172]
步骤-4：n-(4-(1,4-二氮杂环庚-1-基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(8-氟-4-异丙基-3,4-二氢-2h-苯并[b][1,4]噁嗪-6-基)嘧啶-2-胺的合成：将4-(2-((5-氟-4-(8-氟-4-异丙基-3,4-二氢-2h-苯并[b][1,4]噁嗪-6-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-4-基)-1,4-二氮杂环庚烷-1-甲酸叔丁酯(120mg，0.2mmol，1当量)溶于乙醇中的1.25m hcl(5ml)中，并且将所得反应混合物在50℃搅拌1h。通过lcms监测反应进程。反应完成后，在减压下除去溶剂以获得粗品，将其通过反相hplc纯化以获得所希望的产物。lcms:482[m+h]
+
,1h nmr(dmso-d6,400mhz):δ10.21(br s,1h),8.65(br s,1h),7.94(d,j＝8.3hz,2h),7.71(d,j＝7.9hz,2h),7.60(br s,1h),7.44(br s,1h),7.18(d,j＝12.3hz,1h),4.31(br s,2h),4.16(br s,1h),3.39(m,2h),3.17(br s,1h),2.99(br s,2h),2.92(br s,2h),2.09(br s,1h),1.54(br s,2h),1.36(br s,2h),1.20(d,j＝6.1hz,6h)。实施例3：n-(5-((1-乙基哌啶-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(8-氟-4-异丙基-3,4-二氢-2h-苯并[b][1,4]噁嗪-6-基)嘧啶-2-胺的合成。(3号化合物)
[0173]
步骤-1：4-(((甲基磺酰基)氧基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成：向4-(羟基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(5000mg，23.2mmol，1.0当量)在thf(50ml)中的搅拌溶液中添加tea(6.5ml，46.4mmol，2.0当量)。将反应混合物冷却至0℃，然后添加甲磺酰氯(2.2ml，27.9mmol，1.2当量)。将温度升高至室温，并且将所得反应混合物搅拌1h。通过hnmr监测反
应进程。反应完成后，用水(100ml)稀释并且用etoac(150ml)萃取。将有机层用水(100ml)和盐水溶液(100ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥且减压浓缩以获得粗品，将其不经任何进一步纯化而用于下一步骤。1h nmr(氯仿-d,400mhz):δ4.15(br s,1h),4.06(s,1h),3.01(s,3h),2.71(t,j＝12.5hz,2h),1.80-2.00(m,1h),1.74(d,j＝12.3hz,1h),1.50-1.61(m,2h),1.35-1.50(m,9h),1.07-1.31(m,2h),0.83(br s,1h)。
[0174]
步骤-2：4-(((6-溴吡啶-3-基)氧基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成：向4-(((甲基磺酰基)氧基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1000mg，5.7mmol，1当量)在dmf(10ml)中的搅拌溶液中添加k2co3(1573mg，11.4mmol，2当量)和6-溴吡啶-3-醇(2032mg，6.9mmol，1.2当量)。将所得反应混合物在80℃搅拌过夜。通过lcms监测反应进程。反应完成后，用水(100ml)稀释，将观察到的固体过滤并且真空干燥得到粗品，将其不经任何进一步纯化而用于下一步骤。lcms:371[m+h]
+
,373[m+h]
+
[0175]
步骤-3：2-溴-5-(哌啶-4-基甲氧基)吡啶的合成：将4-(((6-溴吡啶-3-基)氧基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(2000mg，5.4mmol，1.0当量)溶于乙醇中的1.25m hcl(10ml)中，并且将所得反应混合物在50℃搅拌1h。通过lcms监测反应进程。反应完成后，在减压下除去溶剂，得到作为盐酸盐的粗品，将其不经任何进一步纯化而用于下一步骤。lcms:271[m+h]
+
,273[m+h]
+
[0176]
步骤-4：2-溴-5-((1-乙基哌啶-4-基)甲氧基)吡啶的合成：向2-溴-5-(哌啶-4-基甲氧基)吡啶(500mg，1.6mmol，1.0当量)在dce(5ml)中的搅拌溶液中添加乙醛(40％于水中)(0.3ml，4.9mmol，3.0当量)和乙酸(0.5ml，8.0mmol，5.0当量)。将反应混合物在室温搅拌1h。将反应混合物冷却至0℃。将nacnbh3(309mg，4.9mmol，3.0当量)添加到上述混合物中并且将温度升高至室温。将反应混合物在室温搅拌1h。通过lcms监测反应进程。反应完成后，将反应混合物用水(50ml)稀释并且用dcm(100ml)萃取。将有机层用水(50ml)和盐水溶液(50ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥且减压浓缩以获得粗品，将其不经任何进一步纯化而用于下一步骤。lcms:299[m+h]
+
,301[m+h]
+
[0177]
步骤-5：5-((1-乙基哌啶-4-基)甲氧基)吡啶-2-胺的合成：向2-溴-5-((1-乙基哌啶-4-基)甲氧基)吡啶(200mg，0.67mmol，1.0当量)在dmso(5ml)中的搅拌溶液中添加cu2o(10mg，0.067mmol，0.1当量)和nh4oh(40％)(0.5ml)。将所得反应混合物在80℃搅拌过夜。通过lcms监测反应进程。反应完成后，将其用naoh饱和溶液(20ml)稀释并且用etoac(100ml)萃取。将有机层用水(50ml)和盐水溶液(50ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥且减压浓缩以获得粗品，将其不经任何进一步纯化而用于下一步骤。lcms:236[m+h]
+
[0178]
步骤-6：n-(5-((1-乙基哌啶-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(8-氟-4-异丙基-3,4-二氢-2h-苯并[b][1,4]噁嗪-6-基)嘧啶-2-胺的合成：向6-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-8-氟-4-异丙基-3,4-二氢-2h-苯并[b][1,4]噁嗪(100mg，0.3mmol，1.0当量)在二噁烷(5ml)中的溶液中添加5-((1-乙基哌啶-4-基)甲氧基)吡啶-2-胺(78mg，0.33mmol，1.1当量)和碳酸铯(147mg，0.47mmol，1.5当量)。将反应混合物用氮气吹扫10min，接着添加乙酸钯(2mg，0.006mmol，0.02当量)和binap(8mg，0.0012mmol，0.04当量)。将所得反应混合物在100℃搅拌过夜。通过tlc和lcms监测反应进程。反应完成后，将其用水(30ml)稀释并且用乙酸乙酯(100ml)萃取。将有机层用水(50ml)和盐水溶液(50ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥且减压浓缩以获得粗品，将其通过正相combi-flash纯化以获得所希望的产物。lcms:
525[m+h]
+
,1h nmr(meoh-d4,400mhz):δ8.40(d,j＝4.4hz,1h),8.18(d,j＝9.2hz,1h),7.98(d,j＝2.6hz,1h),7.50(s,1h),7.40(dd,j＝9.0,2.9hz,1h),7.24(d,j＝11.0hz,1h),4.60(br s,2h),4.27-4.37(m,2h),4.06-4.25(m,1h),3.94(d,j＝5.7hz,2h),3.25(br s,2h),2.74(d,j＝7.5hz,2h),2.42(br s,2h),1.83-2.08(m,3h),1.56(d,j＝12.3hz,2h),1.23-1.29(m,6h),1.19(br s,3h)。实施例4：n-(5-((1-乙基哌啶-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(8-氟-4-异丙基-3,4-二氢-2h-苯并[b][1,4]噁嗪-6-基)吡啶-2-胺的合成。(4号化合物)
[0179]
步骤-1：6-(2-氯-5-氟吡啶-4-基)-8-氟-4-异丙基-3,4-二氢-2h-苯并[b][1,4]噁嗪的合成：向2-氯-5-氟-4-氟代吡啶(600mg，2.33mmol，1.0当量)在thf:水(1:1，10ml)中的搅拌溶液中添加8-氟-4-异丙基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-3,4-二氢-2h-苯并[b][1,4]噁嗪(749mg，2.33mmol，1.0当量)、碳酸钾(644mg，4.66mmol，2.0当量)和pd(pph3)4(135mg，0.11mmol，0.05当量)。将反应混合物在80℃搅拌过夜。通过tlc和lcms监测反应进程。反应完成后，将反应混合物用水(50ml)稀释并且用乙酸乙酯(150ml)萃取。将有机层用水(50ml)和盐水(50ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥且减压浓缩以获得粗化合物，将其通过正相combi-flash纯化以获得所希望的产物。lcms:325[m+h]
+
[0180]
步骤-2：4-(((6-氨基吡啶-3-基)氧基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成：向4-(((6-溴吡啶-3-基)氧基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(300mg，0.81mmol，1.0当量)在dmso(5ml)中的搅拌溶液中添加cu2o(12mg，0.08mmol，0.1当量)和nh4oh(40％)(3ml)。将所得反应混合物在80℃搅拌过夜。通过lcms监测反应进程。反应完成后，用naoh饱和溶液(20ml)稀释并且用etoac(100ml)萃取。将有机层用水(50ml)和盐水溶液(50ml)洗涤。将有机层经无
水硫酸钠干燥且减压浓缩以获得粗品，将其不经任何进一步纯化而用于下一步骤。lcms:308[m+h]
+
[0181]
步骤-3：4-(((6-((5-氟-4-(8-氟-4-异丙基-3,4-二氢-2h-苯并[b][1,4]噁嗪-6-基)吡啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)氧基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成：向6-(2-氯-5-氟吡啶-4-基)-8-氟-4-异丙基-3,4-二氢-2h-苯并[b][1,4]噁嗪(50mg，0.15mmol，1.0当量)在二噁烷(5ml)中的溶液中添加4-(((6-氨基吡啶-3-基)氧基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(52mg，0.17mmol，1.1当量)和碳酸铯(73mg，0.23mmol，1.5当量)。将反应混合物用氮气吹扫10min，接着添加pd2(dba)3(4mg，0.008mmol，0.05当量)和xantphos(9mg，0.015mmol，0.1当量)。将所得反应混合物在100℃搅拌过夜。通过tlc和lcms监测反应进程。反应完成后，将反应混合物用水(30ml)稀释并且用乙酸乙酯(100ml)萃取。将有机层用水(50ml)和盐水(50ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥且减压浓缩以获得粗化合物，将其通过柱色谱法纯化以获得所希望的产物。lcms:596[m+h]
+
[0182]
步骤-4：5-氟-4-(8-氟-4-异丙基-3,4-二氢-2h-苯并[b][1,4]噁嗪-6-基)-n-(5-(哌啶-4-基甲氧基)吡啶-2-基)吡啶-2-胺的合成：将4-(((6-((5-氟-4-(8-氟-4-异丙基-3,4-二氢-2h-苯并[b][1,4]噁嗪-6-基)吡啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)氧基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(70mg，0.12mmol，1.0当量)溶于乙醇中的1.25m hcl(5ml)中，并且将所得反应混合物在50℃搅拌1h。通过lcms监测反应进程。反应完成后，在减压下除去溶剂，并且将残余物在冻干机下干燥获得粗品，将其不经任何进一步纯化而用于下一步骤。lcms:496[m+h]
+
[0183]
步骤-5：n-(5-((1-乙基哌啶-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(8-氟-4-异丙基-3,4-二氢-2h-苯并[b][1,4]噁嗪-6-基)吡啶-2-胺的合成：向5-氟-4-(8-氟-4-异丙基-3,4-二氢-2h-苯并[b][1,4]噁嗪-6-基)-n-(5-(哌啶-4-基甲氧基)吡啶-2-基)吡啶-2-胺(50mg，0.1mmol，1.0当量)在dce(5ml)中的搅拌溶液中添加乙醛(40％于水中)(0.02ml，0.3mmol，3.0当量)、乙酸(0.03ml，0.5mmol，5.0当量)。将反应混合物在室温搅拌1h。将反应混合物冷却至0℃。将nacnbh3(19mg，0.3mmol，3.0当量)添加到上述混合物中并且将温度升高至室温。将反应混合物在室温搅拌1h。通过lcms监测反应进程。反应完成后，将反应混合物用水(25ml)稀释并且用乙酸乙酯(100ml)萃取。将有机层用水(50ml)和盐水溶液(50ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥且减压浓缩以获得粗品，将其通过反相hplc纯化以获得所希望的产物。lcms:524[m+h]
+
,1h nmr(meoh-d4,400mhz):δ7.97-8.13(m,1h),7.91(br s,1h),7.62(d,j＝5.7hz,1h),7.53(d,j＝8.8hz,1h),7.35(d,j＝6.6hz,1h),6.87(s,1h),6.70(d,j＝11.0hz,1h),4.23-4.35(m,2h),4.03-4.18(m,1h),3.94(d,j＝5.3hz,2h),3.53(d,j＝11.8hz,2h),3.25(br s,2h),2.98-3.16(m,2h),2.78-2.96(m,2h),2.66(br s,1h),2.09(d,j＝11.8hz,2h),1.68(d,j＝12.3hz,2h),1.26-1.40(m,3h),1.02-1.26(m,6h)。实施例5：5-氟-4-(8-氟-4-异丙基-3,4-二氢-2h-苯并[b][1,4]噁嗪-6-基)-n-(1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基)嘧啶-2-胺的合成。(5号化合物)
[0184]
步骤-1：5-氟-4-(8-氟-4-异丙基-3,4-二氢-2h-苯并[b][1,4]噁嗪-6-基)-n-(1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基)嘧啶-2-胺的合成：向6-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-8-氟-4-异丙基-3,4-二氢-2h-苯并[b][1,4]噁嗪(100mg，0.3mmol，1.0当量)在二噁烷(10ml)中的溶液中添加1-(甲基磺酰基)哌啶-4-胺(59mg，0.33mmol，1.1当量)和碳酸铯(147mg，0.47mmol，1.5当量)。将反应混合物用氮气脱气30min，接着添加乙酸钯(2mg，0.006mmol，0.02当量)和binap(8mg，0.012mmol，0.04当量)。将所得反应混合物在100℃搅拌过夜。通过tlc和lcms监测反应进程。反应完成后，用水(30ml)稀释并且用乙酸乙酯(100ml)萃取。将有机层用水(50ml)和盐水溶液(50ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥且减压浓缩以获得粗品，将其通过反相hplc纯化以获得所希望的产物。lcms:468[m+h]
+
,1h nmr(dmso-d6,400mhz):δ8.37(d,j＝4.4hz,1h),7.33(br s,1h),7.27(d,j＝7.5hz,1h),7.10(d,j＝11.4hz,1h),4.21-4.33(m,2h),4.00-4.17(m,1h),3.82(d,j＝7.0hz,1h),3.55(d,j＝11.8hz,2h),3.15-3.31(m,2h),2.75-2.94(m,5h),2.00(d,j＝11.0hz,2h),1.41-1.67(m,2h),1.17(d,j＝6.6hz,6h)。实施例6：5-氟-4-(8-氟-4-异丙基-3,4-二氢-2h-苯并[b][1,4]噁嗪-6-基)-n-(3-甲基-1-(哌啶-4-基)-1h-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺的合成。(67号化合物)
[0185]
步骤-1：4-(4-((5-氟-4-(8-氟-4-异丙基-3,4-二氢-2h-苯并[b][1,4]噁嗪-6-基)嘧啶-2-基)氨基)-3-甲基-1h-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成：向4-(4-氨基-3-甲基-1h-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(200mg，0.714mmol，1.0当量)在二噁烷(5ml)中的溶液中添加6-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-8-氟-4-异丙基-3,4-二氢-2h-苯并[b][1,4]噁嗪(230mg，0.714mmol，1.0当量)和碳酸铯(340mg，1.07mmol，1.5当量)。将反应混合物用氮气吹扫15min，接着添加pd(oac)2(8mg，0.036mmol，0.05当量)和binap(44mg，0.071mmol，0.1
当量)，并且再次用氮气吹扫15min。将所得反应混合物在100℃搅拌过夜。通过tlc和lcms监测反应进程。反应完成后，将反应混合物通过硅藻土床过滤并且用乙酸乙酯洗涤。在真空下除去挥发物并且将粗品原样用于下一步反应。lcms:570[m+h]
+
[0186]
步骤-2：5-氟-4-(8-氟-4-异丙基-3,4-二氢-2h-苯并[b][1,4]噁嗪-6-基)-n-(3-甲基-1-(哌啶-4-基)-1h-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺的合成：将4-(4-((5-氟-4-(8-氟-4-异丙基-3,4-二氢-2h-苯并[b][1,4]噁嗪-6-基)嘧啶-2-基)氨基)-3-甲基-1h-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(150mg，0.26mmol，1当量)溶于乙醇中的1.25m hcl(5ml)中，并且将所得反应混合物在50℃搅拌1h。通过lcms监测反应进程。反应完成后，在减压下除去溶剂，并且将残余物通过反相hplc纯化以获得所希望的产物。lcms:470[m+h]
+
；1h nmr(400mhz,meoh-d4)δ8.42-8.66(m,1h)8.15-8.28(m,1h)7.69-7.89(m,1h)7.41(d,j＝15.3hz,1h)7.16(d,j＝11.4hz,1h),4.28-4.53(m,4h)4.12(dt,j＝12.6,6.2hz,1h)3.43-3.63(m,2h)3.03-3.28(m,3h)2.27(s,4h)1.99-2.27(m,4h)1.21(d,j＝6.6hz,6h)。实施例7：4-(6-((5-氟-4-(8-氟-4-异丙基-3,4-二氢-2h-苯并[b][1,4]噁嗪-6-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)哌嗪-2-酮的合成。(85号化合物)
[0187]
步骤-1：4-(6-硝基吡啶-3-基)哌嗪-2-酮的合成：向5-溴-2-硝基吡啶(6.0g，29.55mmol，1.0当量)和哌嗪-2-酮(3.55g，35.46mmol，1.2当量)在dmso(36ml)中的搅拌溶液中添加dipea(18.40ml，106.38mmol，3.6当量)。将所得反应混合物在120℃搅拌12h。反应完成后，通过过滤收集所形成的沉淀以获得所希望的产物。lcms:223.3[m+h]
+
[0188]
步骤-2：4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-2-酮的合成：向4-(6-硝基吡啶-3-基)哌嗪-2-酮(4.8g，21.60mmol，1.0当量)在乙醇(60ml):水(60ml)中的搅拌溶液中添加铁(9.65g，172.81mmol，8.0当量)和nh4cl(11.55g，216.0mmol，10.0当量)。将所得反应混合物在80℃搅拌2h。反应完成后，将反应混合物经硅藻土过滤，浓缩，并且通过硅胶柱色谱法纯化以获得所希望的产物。lcms:193.5[m+h]
+
[0189]
步骤-3：4-(6-((5-氟-4-(8-氟-4-异丙基-3,4-二氢-2h-苯并[b][1,4]噁嗪-6-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)哌嗪-2-酮的合成：在室温向4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-2-酮(389mg，2.02mmol，1.0当量)和6-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-8-氟-4-异丙基-3,4-二氢-2h-苯并[b][1,4]噁嗪(659mg，2.02mmol，1.0当量)在二噁烷(12ml)中的搅拌溶液中添加
cs2co3(987mg，3.03mmol，1.5当量)。将所得反应混合物用氮气吹扫10min，接着添加pd(oac)2(9mg，0.040mmol，0.02当量)和binap(50mg，0.080mmol，0.04当量)，并且再次用氮气吹扫10min。将反应混合物在微波辐射下在100℃加热1h。通过lcms监测反应进程。将反应混合物通过硅藻土过滤；将残余物用etoac(10ml)洗涤。将滤液浓缩并且通过硅胶柱色谱法纯化，接着在ipa中重结晶，得到所希望的化合物。lcms:482.5[m+h]
+
；1h nmr(400mhz,dmso-d6):δppm 9.71(br s,1h)8.57(br s,1h)8.04(d,j＝9.2hz,2h)7.33-7.58(m,2h)7.17(d,j＝13.1hz,1h)4.30(br s,2h)4.15(br s,1h)3.71(s,2h),3.33(m,6h)1.19(d,j＝6.1hz,6h)。实施例8：4-(6-((5-氟-4-(8-氟-4-异丙基-3,4-二氢-2h-苯并[b][1,4]噁嗪-6-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)-1-甲基哌嗪-2-酮的合成。(86号化合物)
[0190]
步骤-1：1-甲基-4-(6-硝基吡啶-3-基)哌嗪-2-酮的合成：+向5-溴-2-硝基吡啶(1.48g，7.30mmol，1.0当量)和1-甲基哌嗪-2-酮(1.0g，8.76mmol，1.2当量)在dmso(9ml)中的搅拌溶液中添加dipea(4.54ml，26.28mmol，3.6当量)。将所得反应混合物在120℃搅拌12h。反应完成后，通过过滤收集所形成的沉淀以获得所希望的产物。lcms:237.4[m+h]
+
[0191]
步骤-2：4-(6-氨基吡啶-3-基)-1-甲基哌嗪-2-酮的合成：向1-甲基-4-(6-硝基吡啶-3-基)哌嗪-2-酮(1.0g，4.23mmol，1.0当量)在乙醇:水(24ml；1:1)中的搅拌溶液中添加铁(1.89g，33.86mmol，8.0当量)和nh4cl(2.26g，42.3mmol，10.0当量)。将所得反应混合物在80℃搅拌2h。反应完成后，将反应混合物经硅藻土过滤，浓缩以获得所希望的产物。lcms:193.6[m+h]
+
[0192]
步骤-3：4-(6-((5-氟-4-(8-氟-4-异丙基-3,4-二氢-2h-苯并[b][1,4]噁嗪-6-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)-1-甲基哌嗪-2-酮的合成：在室温向4-(6-氨基吡啶-3-基)-1-甲基哌嗪-2-酮(1.0g，4.84mmol，1.0当量)和6-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-8-氟-4-异丙基-3,4-二氢-2h-苯并[b][1,4]噁嗪(1.57g，4.84mmol，1.0当量)在二噁烷(24ml)中的搅拌溶液中添加cs2co3(2.36mg，7.26mmol，1.5当量)。将所得反应混合物用氮气吹扫10min，接着添加pd(oac)2(22mg，0.096mmol，0.02当量)和binap(121mg，0.193mmol，0.04当量)，并且再次用氮气吹扫10min。将反应混合物在微波辐射下在100℃加热1h。通过lcms监测反应进
程。将反应混合物通过硅藻土过滤；将残余物用etoac(10ml)洗涤。将滤液浓缩并且通过硅胶色谱法纯化，接着在ipa中重结晶，得到所希望的化合物。lcms:496.6[m+h]
+
；1h nmr(400mhz,dmso-d6):δppm 9.72(s,1h)8.57(d,j＝3.9hz,1h)7.99-8.12(m,2h)7.33-7.56(m,2h)7.16(s,1h)4.30(t,j＝4.1hz,2h)4.06-4.18(m,1h)3.76(s,2h)3.45(d,j＝3.9hz,4h)2.90(s,3h)1.19(d,j＝6.6hz,6h)。实施例9：8-氟-6-(5-氟-2-{[5-(1-甲基哌啶-4-基)吡啶-2-基]氨基}嘧啶-4-基)-4-异丙基-2h-1,4-苯并噁嗪-3-酮的合成。(87号化合物)
[0193]
步骤-1：2-氨基-4-溴-6-氟苯酚的合成：向在室温搅拌的4-溴-2-氟-6-硝基苯酚(25g，105.9mmol，1.0当量)和zn(34.63g，529.5mmol，5.0当量)在etoh中的溶液中逐滴添加nh4cl(56.65g，1059mmol，10.0当量)在水中的溶液。将反应混合物在室温搅拌1h。将反应混合物过滤，收集滤液。在真空下除去etoh。将残余物用h2o(300ml)稀释并且用乙酸乙酯(500ml x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(300ml x 3)洗涤，然后经无水na2so4干燥。过滤后，将溶液在真空下浓缩，得到所希望的产物。lcms:206[m+h]
+
[0194]
步骤-2：4-溴-2-氟-6-(异丙基氨基)苯酚的合成：将2-氨基-4-溴-6-氟苯酚(10g，48.5mmol，1.0当量)、acoh(3ml)在丙酮(100ml)中的溶液在室温搅拌30min，然后将溶液真空浓缩，将残余物溶解于dce(100ml)中，并且添加三乙酰氧基硼氢化钠(30.84g，145.5mmol，3.0当量)，然后将反应混合物在室温搅拌2h。将反应混合物用h2o(200ml)稀释并且用dcm(300ml x 3)萃取。将合并的有机层经无水na2so4干燥。过滤后，将溶液在真空下
基)-8-氟-4-异丙基-2h-1,4-苯并噁嗪-3-酮(180mg，0.53mmol，1.0当量)、5-(1-甲基哌啶-4-基)吡啶-2-胺(122mg，0.64mmol，1.2当量)和碳酸铯(518mg，1.59mmol，3.0当量)在二噁烷(8ml)中的溶液中一次性添加2,2
’‑
双(二苯基膦基)-1,1
’‑
联萘基(33mg，0.053mmol，0.1当量)和乙酸钯(ii)(12mg，0.053mmol，0.1当量)。将反应混合物在95℃搅拌16h。通过tlc和lcms监测反应进程。反应完成后，将反应混合物通过硅藻土床过滤并且用乙酸乙酯(20ml)洗涤。将滤液真空浓缩，并且将粗残余物通过制备型hplc纯化(柱：gemini-c18 150x21.2mm，5um；流动项：acn-h2o(0.1％fa)；梯度：25-50)以获得所希望的产物。lcms:495[m+h]
+
；1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.50(s,1h),8.44(d,j＝3.6hz,1h),8.35-8.25(m,2h),8.19(d,j＝2.1hz,1h),7.87(s,1h),7.70(dd,j＝10.9,1.6hz,1h),7.61(dd,j＝8.7,2.3hz,1h),4.91(dt,j＝14.1,7.0hz,1h),4.66(s,2h),3.43(d,j＝12.2hz,2h),2.70-2.64(m,1h),2.62(s,3h),2.54(t,j＝11.5hz,2h),2.22-2.10(m,2h),1.95(d,j＝13.5hz,2h),1.61(d,j＝7.0hz,6h)。
[0201]
化合物6至66、68-84使用通用合成方案1-9或根据实施例1至9中例示的实验细节使用适当的起始物质和试剂来合成。生物学实施例实施例b1.体外激酶抑制ic
50
确定
[0202]
使用成视网膜细胞瘤作为底物通过荧光来确定化合物针对cdk4和cdk6的ic
50
值。在96孔半区白色板(#3693，科斯塔(costar))在激酶缓冲液(#pv6135，invitrogen，life technologies grand island，纽约)中执行激酶测定，其中总反应体积为30μl/孔。将特定浓度(例如，最终浓度范围：0.1nm至-200nm)的一微升25
×
测试化合物与10μl 2.5
×
激酶(5nm，cdk4#pr8064a和cdk6#pr8422b，invitrogen)溶液和14μl含成视网膜细胞瘤(1μm，#12-439，加利福利亚州海伍德市emd millipore)和atp(25μm，#v7038，威斯康星州麦迪逊promega)的4
×
混合溶液混合。覆盖这些板并在室温下孵育2h。在孵育结束时，添加25μl终止溶液adp glo试剂(#v7002，promega)。在室温孵育45min后，添加50μl检测试剂(##v7002，promega)。在340nm的单次激发下和分别在495nm和520nm的双重发射下在将检测试剂添加到synergy neo酶标仪(biotek，佛蒙特州威努斯基)之后，在孵育15min和45min时进行读取。以下方程式用于cdk4和cdk6测定数据分析。将抑制百分比(100-活性％)拟合于xlfit的“四参数逻辑斯谛模型”用于确定ic
50
值。方程式1：酶的转化百分比＝100-{(rlu
无药物-无酶
*100)/rlu
无药物+酶
}方程式2：各数据点的转化百分比＝100-{(rlu
平均
(
药物+酶)
*100)/rlu
无药物+酶
}方程式3：抑制百分比＝100*(转化％
各数据点
/转化％
酶
)
[0203]
通过z
′‑
lyte
tm
确定化合物针对cdk1(周期蛋白b)的ic
50
值。在invitrogen life technologies(纽约格兰德岛)在低体积nbs黑色384孔培养板(#4514，corning)上进行这些筛选测定。将0.1μl含100
×
测试化合物的100％dmso(以特定溶液)与2.4μl激酶缓冲液(50mm hepes ph 7.5、0.01％brij-35、10mm mgcl2、1mm egta)、5μl 2
×
激酶(3.5至46.4ng cdk1/周期蛋白b)/肽(2μm ser/thr 18)和2.5μl 4
×
atp溶液(34μm)混合。将板振荡30秒，并且在室温孵育60分钟。将显影剂溶液(5μl 1:1024稀释)添加到板中，接着再将培养板振荡30秒，并且在室温进一步将板孵育一小时。使用445nm和520nm的双重发射在荧光酶标仪上读取板。
[0204]
通过z
′‑
lyte
tm
确定化合物针对cdk2(周期蛋白a)的ic
50
值。在invitrogen life technologies(纽约格兰德岛)在低体积nbs黑色384孔培养板(#4514，corning)上进行这些筛选测定。将0.1μl含100
×
测试化合物的100％dmso(以特定溶液)与2.4μl激酶缓冲液(50mm hepes ph 7.5、0.01％brij-35、10mm mgcl2、1mm egta)、5μl 2
×
激酶(1.22至10.3ng cdk2/周期蛋白a)/肽(2μm ser/thr 12)和2.5μl 4
×
atp溶液(31μm)混合。将板振荡30秒，并且在室温孵育60分钟。将显影剂溶液(5μl 1:1024稀释)添加到培养板中，接着再将板振荡30秒，并且在室温进一步将板孵育一小时。使用445nm和520nm的双重发射在荧光酶标仪上读取板。
[0205]
通过z
′‑
lyte
tm
确定化合物针对cdk5(p25)的ic
50
值。在invitrogen life technologies(纽约格兰德岛)在低体积nbs黑色384孔培养板(#4514，corning)上进行这些筛选测定。将0.1μl含100
×
测试化合物的100％dmso(以特定溶液)与2.4μl激酶缓冲液(50mm hepes ph 7.5、0.01％brij-35、10mm mgcl2、1mm egta)、5μl 2
×
激酶(0.18-2ng cdk5/p25)/肽(2μm ser/thr 12)和2.5μl 4
×
atp溶液(17μm)混合。将板振荡30秒，并且在室温孵育60分钟。将显影剂溶液(5μl 1:4096稀释)添加到板中，接着再将板振荡30秒，并在室温进一步将板孵育一小时。使用445nm和520nm的双重发射在荧光酶标仪上读取板。
[0206]
以下方程式用于z
′‑
lyte
tm
筛选测定数据分析。将抑制百分比(100-活性％)拟合于xlfit的“四参数逻辑斯谛模型”用于确定ic
50
值。fi＝荧光强度c
100％
＝100％phos.对照的平均香豆素发射信号c
0％
＝0％phos.对照的平均香豆素发射信号f
100％
＝100％phos.对照的平均荧光素发射信号f
0％
＝0％phos.对照的平均荧光素发射信号dri＝显影反应干扰
tcfi＝测试化合物荧光干扰
[0207]
在invitrogen life technologies(纽约格兰德岛)通过adapta
tm
测定确定化合物针对cdk7(周期蛋白h)的ic
50
值，其中总反应体积在低体积白色384孔培养板(#4512，康宁)中为10μl/孔。将0.100μl含100
×
测试化合物的100％dmso(以特定溶液)与2.4μl hepes(30mm)、2.5μl 4
×
atp溶液(153μm)和5μl 2
×
底物/激酶混合物(于50mm hepes ph 7.5、0.01％brij-35、10mm mgcl2、1mm egta中制备2
×
cdk7/周期蛋白h/mnat1/cdk7/9tide混合物)混合。最终10ul激酶反应物由5-38.75ng cdk7/周期蛋白h/mnat1和含200μm cdk7/9tide的32.5mm hepes ph 7.5、0.005％brij-35、5mm mgcl2、0.5mm egta组成。将板振荡30秒，在1000
×
g下离心1min，并且在室温孵育60分钟。将5μl检测混合物(于tr-fret稀释缓冲液中制备；检测混合物由edta(30mm)、eu-抗-adp抗体(6nm)和adp示踪剂组成，并且含有ec
60
浓度的用于5-150μm atp的示踪剂)添加到板中，接着再振荡板30秒并在1000
×
g下离心1min，并在室温下进一步将板孵育一小时。使用615nm和665nm的双重发射在荧光酶标仪上读取板。
[0208]
以下方程式用于adapta
tm
测定数据分析。在xlfit中使atp/adp标准曲线与模型号205(s形剂量反应模型)拟合。还使剂量反应曲线与模型号205进行曲线拟合。
＊
sc＝标准曲线
[0209]
在invitrogen life technologies(纽约格兰德岛)通过lanthascreen
tm eu激酶结合测定来确定化合物针对cdk2(周期蛋白e1)的ic
50
值，其中总反应体积在低体积白色384孔培养板(#784207，greiner)中为16μl/孔。将0.16μl含100
×
测试化合物的100％dmso(以特定溶液)与3.84μl激酶缓冲液(50mm hepes ph 7.5、0.01％brij-35、10mm mgcl2、1mm egta)、8.0μl 2
×
激酶(2.5nm)/抗体(eu-anti-gst，2nm)混合物和4.0μl 4
×
示踪剂(示踪剂236，100nm)混合。将板振荡30秒，并且在室温孵育60分钟。使用615nm和665nm的双重发射在荧光酶标仪上读取板。
[0210]
在invitrogen life technologies(纽约格兰德岛)通过lanthascreen
tm eu激酶结合测定来确定化合物针对cdk9(周期蛋白k)的ic50值，其中总反应体积在低体积白色384孔板(#784207，greiner)中为16μl/孔。将0.16μl含100
×
测试化合物的100％dmso(以特定
溶液)与3.84ul激酶缓冲液(50mm hepes ph 7.5、0.01％brij-35、10mm mgcl2、1mm egta)、8.0μl 2
×
激酶(5nm)/抗体(eu-anti-his，2nm)混合物和4.0μl 4
×
示踪剂(示踪剂236，100nm)混合。将板振荡30秒，并且在室温孵育60分钟。使用615nm和665nm的双重发射在荧光酶标仪上读取板。
[0211]
在invitrogen life technologies(纽约格兰德岛)通过lanthascreen
tm eu激酶结合测定来确定化合物针对fms激酶的ic
50
值，其中总反应体积在低体积384孔板(#4511，康宁)中为10μl/孔。将连续稀释的化合物(3倍)与激酶(1.25nm)一起孵育10min，接着添加atp(10μm)(#a1852，密苏里州圣路易斯sigma)和荧光-polygt底物(200nm)(#pv3610，纽约格兰德岛invitrogen life technologies)的混合物并在暗处在室温孵育1h。1h后，添加在tr-fret稀释缓冲液(#pv3574，纽约格兰德岛invitrogen life technologies)中含有铽标记抗体(4nm)(#pv3529，纽约格兰德岛invitrogen life technologies)和edta(#e5134，密苏里州圣路易斯sigma)(20mm)的10μl终止溶液。在340nm的单次激发和分别在495nm和520nm的双重发射下在synergy neo酶标仪(biotek，佛蒙特州威努斯基)中进行读取。
[0212]
以下方程式用于lanthascreen eu激酶结合测定数据分析。将抑制百分比(100-活性％)拟合于xlfit的“四参数逻辑斯谛模型”用于确定ic
50
值。
[0213]
通过由reaction biology corporation(宾夕法尼亚州马尔文)进行的测定确定化合物针对pi3kδ激酶的ic
50
值。简单来说，这个测定在缓冲液(tris-hcl 40mm(ph 7.5)、原钒酸盐3mm、mgcl
2 20mm、dtt 2mm、chaps 0.05％、dmso 1％)中进行。将pi3kδ激酶添加到反应溶液中并轻轻混合。将含测试化合物的100％dmso(以特定溶液)与激酶反应混合物混合，从而以由acoustic technology(echo550；纳升范围)预定义的浓度(例如，范围0.5nm至100μm)获得最终化合物。在室温下孵育10min后，将atp添加到反应混合物中以引发反应，接着在30℃孵育30min。用adp-glo试剂淬灭反应后，将板孵育40min。添加检测混合物，并且再将板孵育30min。在孵育结束时，测量荧光。为了数据分析，基于adp标准曲线将荧光转化成μm adp产量。使用graphpad prism(graphpad software,inc.，加利福利亚州圣地亚哥)进行非线性回归以获得标准曲线和ic
50
值。
[0214]
通过eurofins pharma discovery(英国dundee)的kinaseprofiler
tm
辐射蛋白激
酶测定确定化合物针对cdk12(周期蛋白k)的ic
50
值。将化合物制备为在100％dmso中50
×
最终测定浓度。将该化合物的工作储备液作为每个反应中的第一组分添加到测定孔中。cdk12/周期蛋白k在添加到反应混合物中之前在缓冲液(20mm tris、0.2mm edta、0.1％β-巯基乙醇、0.01％brij-35、5％甘油、1mg/ml bsa)中稀释。将cdk12/周期蛋白k与20mm tris/hcl ph 8.5、0.2mm edta、300μm rsrsrsrsrsrsrsr、10mm乙酸镁和[γ-33
p-atp](根据需要的比活性和浓度)一起孵育。通过添加mg/atp混合物开始反应。在室温孵育120分钟后，通过添加浓度为0.5％的磷酸终止反应。在干燥和闪烁计数之前，将10μl停止的反应点在p30过滤垫上并且在0.425％磷酸中洗涤四次4分钟并然后在甲醇中洗涤一次。结果计算为阳性对照样品中平均激酶活性的百分比。将数据在xlfit中拟合以确定ic
50
值。
[0215]
下表2给出本文所公开的化合物针对上文所列的激酶ic
50
值。表2表2nd：未确定实施例b2.确定化合物作为单个药剂在癌细胞增生测定中的效力。
[0216]
在不同亚型的两种乳腺癌细胞系中研究测试化合物的作用。在对数生长周期期间采集癌细胞(表3)并计数。用相应的培养基将细胞浓度调节到适当数量，并且将90μl细胞悬浮液添加到96孔板中。接种细胞后，在第1天轻缓振荡板以均匀分布细胞，并在37℃、5％co2下孵育。表3：细胞培养条件编号细胞系组织病理学rb状态中1mcf-7乳腺腺癌阳性mem+10％fbs2du4475乳腺癌阴性rpmi1640+10％fbs
[0217]
在第2天通过用培养基连续稀释测试化合物储备溶液(10mm于dmso中)来以在所需浓度范围(例如1.1nm至10μm)内的7至9个浓度的测试化合物处理细胞。对于mcf-7和du4475细胞两者，处理持续时间为144小时(在72小时有中等变化)。处理后，通过由promega推荐的cell(目录号：g7572)或通过刃天青测定(sigma aldrich，目录号r7017)评估细胞活力。
[0218]
使用graphpad prism(graphpad software,inc.，加利福尼亚州圣地亚哥)绘制细
胞活力数据。此外，使用在graphpad prism内具有s形剂量响应和可变斜率的非线性回归模型来计算单个测试化合物的ic
50
值。ic
50
值在表4中给出。表4
[0219]
比较了测试化合物在帕博西尼耐药细胞系和亲本非耐药细胞系中的作用。帕博西尼耐药细胞系(“mcf-7-pr”)源自亲代非耐药细胞系(mcf-7乳腺癌细胞)，通过在帕博西尼浓度增加的情况下培养细胞超过三个月的时间段，所述浓度增加从大约350nm开始到大约850nm(它们在培养中维持的最终浓度)结束。使用细胞活力测定法检查mcf-7-pr细胞，以确认与亲代mcf-7细胞相比，它们对帕博西尼具有至少5倍的耐受性，如通过细胞活力ic
50
值的增加所测量的。根据以上对于mcf-7细胞所述的方法，进行用帕博西尼或测试化合物处理后的细胞活力的评估。结果在表5中示出。表5表5
[0220]
在多种组织类型的另外的细胞系(诸如a549肺腺癌、hct-116结直肠癌、zr-75-30乳腺导管癌、hs-578t乳腺上皮癌和bt-549乳腺导管癌细胞)中研究测试化合物的作用。在对数生长期收获癌细胞并且计数。用合适的培养基将细胞浓度调节到适当数量，并且将90μl细胞悬浮液添加到96孔板中。细胞接种后，将板轻轻摇动以使细胞均匀分布，并且在第1天在37℃、5％co2下孵育。在第2天将细胞用在所希望的浓度范围(例如，1.5nm-10μm)内的通常7-9个浓度(通过将测试化合物储备溶液(在dmso中的10mm)用培养基连续稀释)下的测试化合物处理。通常在处理后48-144h，必要时具有中等变化，通过promega推荐的cell(目录号：g7572，promega)评估细胞活力。使用graphpad prism(graphpad software,inc.，加利福尼亚州圣地亚哥)绘制细胞活力数据。此外，使用在graphpad prism内具有s形剂量响应和可变斜率的非线性回归模型来计算单个测试化合物的ic
50
值。
[0221]
将使用具有细胞接种密度和/或孵育持续时间的可能变量的类似增殖方法在相同和/或其他癌细胞系中研究其他测试化合物。使用流式细胞仪使用dapi染色来研究测试化合物处理后的细胞周期相位分布。在连续处理细胞较长时间(例如，14天)，接着针对衰老相关β-半乳糖苷酶(saβgal)对细胞系进行染色后评价细胞衰老。实施例b3.确定prb水平
[0222]
通过周期蛋白d：cdk4/6复合物过度磷酸化成视网膜细胞瘤蛋白(prb)，产生活性
prb，其为与cdk4或cdk6抑制相关的临床相关生物标记。作为cdk4/6的功能活性的验证性度量，评估rb1的ser780磷酸化状态。将mcf-7细胞以2.5
×
105至3.0
×
106个细胞/孔平板接种在6孔细胞培养板中，并在37℃在补充有10％fbs的mem培养基中孵育24h。用含有各种浓度(例如，0.01、0.1、1μm)的测试化合物的培养基或用dmso(≤1％)一式两份地处理细胞24h。孵育期后，去除培养基，用冰冷pbs冲洗细胞一次，并用含有1mm pmsf和蛋白酶抑制剂的0.2ml细胞溶解缓冲液进行溶解。遵循考马斯亮蓝法(bradford method)估计蛋白质浓度。遵循制造商的elisa试剂盒方案和缓冲液(cell signaling technology，目录号：13016c)进行溶解和prb测量。以媒剂对照百分比的形式计算测试化合物的prb抑制。
[0223]
使用elisa或蛋白质印迹法利用选择性抗体评估癌细胞系中，选定测试化合物对与cdk4或cdk6抑制相关的临床相关生物标记(例如，prb和胸苷激酶(tk))的作用。实施例b4.确定使用组合疗法的癌细胞增殖测定中的化合物的效力和组合作用。
[0224]
使用ctg、刃天青和/或brdu测定在其他癌细胞系(例如雌激素受体过表达癌细胞)中与另一抗癌疗法(例如，芳香酶抑制剂和/或用于乳腺癌的选择性雌激素受体降解剂)组合来研究测试化合物对细胞增殖的作用。用单个药剂处理接种在96孔培养板中的细胞，以获得各药剂的剂量反应曲线。还基于通过以剂量反应曲线中使用的剂量的所有不同组合来组合两种药物而产生的基质，用所述药物的组合处理细胞。代替组合基质法，还可使用其中药物以5或更高稀释度的固定比组合的固定药物比稀释法。使用中效原理(chou tc.癌症研究(cancer res)2010；70:440-6.)确定组合治疗作用，例如累加、协同或拮抗作用，其中组合指数(ci)值指示药物组合中的累加作用(ci＝1)、协同作用(ci《1)或拮抗作用(ci》1)。实施例b5.异种移植或同基因模型中的体内药理学研究
[0225]
在小鼠中(例如在乳癌肿瘤模型中)研究测试化合物针对各种人类肿瘤异种移植或同基因模型的抗肿瘤活性。对于乳癌肿瘤模型，通过评估处理组对比媒剂对照组之间的肿瘤体积差来确定测试化合物作为单个药剂或与另一抗癌疗法组合而对rb阳性或rb阴性肿瘤的作用。评价肿瘤组织中rb上丝氨酸-780的磷酸化状态并与一个或多个rb阳性异种移植模型中的抗肿瘤反应进行比较。在处理后的各个时间点收集的肿瘤组织中研究其他药效终点(例如，foxm1、e2f1、c-myc和周期蛋白d1)。通过测量saβgal在来自各个处理组的肿瘤样品中评价衰老的诱导。实施例b6.mc-38小鼠模型中的体内药理学研究
[0226]
与抗mpd-1抗体组合评价测试化合物在治疗mc-38鼠类结直肠癌模型中的疗效。采集培养过的mc-38细胞，并以1
×
107个细胞/ml的密度和大于90％的活力再悬浮于基础培养基中。在右侧腹用含1
×
106个细胞的0.1ml用于肿瘤发育的基础培养基对雌性c57bl/6小鼠进行皮下接种。将小鼠分层为治疗组，并且在肿瘤接种后当肿瘤尺寸达到例如45-72mm3(平均肿瘤尺寸56mm3)时开始治疗。使用卡尺测量肿瘤，并且使用以下公式计算肿瘤体积：肿瘤体积＝(a x b2/2)，其中“b”是最小直径并且“a”是最大直径。治疗组是，例如：媒剂对照、单独的测试化合物、单独的抗mpd-1和测试化合物+抗mpd-1，每组10只小鼠。根据标准实践特定地针对每项研究确定确切的治疗组、药物剂量和给药方案。监测肿瘤生长，并且定期记录肿瘤体积。当每只小鼠的单个肿瘤达到近似终点(例如，肿瘤体积》2,000mm3)时，将小鼠处死。一旦在对照组中达到预确定的终点，则通过将对照组的肿瘤测量值与其他研究组的肿瘤测量值比较来计算肿瘤生长抑制(tgi)。
[0227]
尽管为了理解清楚的目的，已经通过说明和举例的方式稍微详细地描述了前述发明，但是对于本领域技术人员清楚的是，鉴于以上教导可以实践某些微小的改变和修改。因此，描述和实施例不应被解释为限制本发明的范围。