一种全自动细胞分离系统的制作方法

1.本发明涉及医疗器械技术领域，特别涉及一种全自动细胞分离系统。


背景技术：

2.目前，细胞的分离的方法主要分为两个类别：1)基于细胞表面特异性抗原特性，通过抗原
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抗体结合分离。这类方法稳定性较好，但依赖于针对细胞表面抗原的抗体的特异性；2)针对细胞物理特性，包括细胞大小，力学性质，电学性质等，分别通过过滤、离心、介电电泳等物理方法分离。相对于基于细胞表面标记物的方法，物理分选的方法相对要求不高，操作更简单，通量更高。但如何提升灵敏度是该类方法的关键，因为细胞与细胞间的这些物理性质的差异性很小。
3.通过一定大小的微孔滤膜结合细胞大小的差异进行过滤的方法在细胞分选中比较常用。例如，可以通过滤膜过滤分选血液中循环肿瘤细胞(ctc)。ctc直径大约为14
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26μm，红细胞直径大约为6
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8μm，白细胞直径大约为8
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20μm。用直径为8μm的微孔滤膜进行过滤时，由于细胞大小和细胞的流变性不同，ctc可被截留，而血细胞则可随缓冲液一起流走，从而达到富集目的。rarecell、screencell等公司采用直径为8μm柱形微孔滤膜、证明了这种方法的可行性。这种方法虽然简便、快捷，但使用过程中，未能充分考虑分选过程中，细胞堵孔产生的压差影响。虽然流速保持一致，但由于有效孔的数量减少，瞬间负压可能远远高于正常范围，容易造成细胞的丢失并破坏细胞结构，造成细胞活性降低，细胞分选的效率以及灵敏度较差。


技术实现要素：

4.本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提供一种全自动细胞分离系统，其能够更精确的控制实时压差，使细胞分选效率更高，灵敏度更好，对细胞活性影响更小。
5.具体而言，本发明所采取的技术方案如下。
6.本发明的一个方面的目的在于提供一种全自动细胞分离系统，包括：
7.细胞分离模块，包括微流控芯片，所述微流控芯片包括上盖板、滤膜和下盖板；所述上盖板设置有：抽吸通孔、泄气通孔和进样通孔；所述下盖板设置有：与所述进样通孔相对应腔室，第一微流体通道和第二微流体通道；其中，所述第一微流体通道的一端与所述泄气通孔连通，另一端与所述腔室连通；所述第二微流体通道的一端与所述抽吸通孔连通，另一端与所述腔室连通；所述滤膜设置在所述进样通孔和所述腔室之间；
8.进样模块，包括进样针，所述进样针可沿x轴及z轴方向移动，用于将样品或试剂注入所述细胞分离模块；
9.气压控制模块，通过所述泄气通孔与所述细胞分离模块连通，用于监测和控制所述滤膜两侧的压差；
10.负压抽吸模块，通过所述抽吸通孔与所述细胞分离模块连通，用于抽吸样品经过
所述滤膜后的滤液；
11.电路控制模块，与所述进样模块、所述气压控制模块和所述负压抽吸模块连接，并控制其工作。
12.在该全自动细胞分离系统工作时，通过自动或手动将含有待分离细胞的样品加入细胞分离模块，启动气压控制模块，启动负压抽吸模块，使得微流控芯片的腔室、第一微流体通道和第二微流体通道处于负压状态，此时滤膜两侧存在压差，样品在压差作用下快速过滤，目的细胞因为体积大而无法通过滤膜，滤液则经由第二微流体通道被负压抽吸模块抽出，实现了目的细胞的快速分离。
13.根据本发明的一些实施方式，所述进样模块还包括柱塞泵，所述柱塞泵与所述进样针连接。优选地，所述进样模块还包括第一液管，所述柱塞泵通过所述第一液管与所述进样针连接。柱塞泵和进样针配合，可以将样品或试剂抽入进样针内，也可以将样品或试剂从进样针内推出。
14.根据本发明的一些实施方式，所述进样针带有液面检测功能。
15.根据本发明的一些实施方式，所述进样模块还包括大通量试剂模块，所述大通量试剂模块与所述柱塞泵连接。所述大通量试剂模块与所述柱塞泵之间还设置有阀门。优选地，所述柱塞泵通过第二液管与所述大通量试剂模块连接。大通量试剂模块用来存放缓冲液、清洗液等用量较大的试剂，通过阀门的切换和柱塞泵的抽拉实现大通量试剂模块中试剂的抽取和进样。
16.根据本发明的一些实施方式，所述进样模块还包括第二清洗槽，所述第二清洗槽通过第二液管与所述柱塞泵连接。第二清洗槽用来清洗管路。
17.根据本发明的一些实施方式，所述大通量试剂模块包括缓冲液、清洗液等试剂。
18.根据本发明的一些实施方式，所述进样模块还包括微量试剂模块，通过柱塞泵的驱动实现所述进样针对所述微量试剂模块中试剂的抽取。柱塞泵通过阀门的切换和柱塞泵的抽拉来实现泵体内和进样针内都充满缓冲液，然后进样针检测到微量试剂模块中试剂的液面后，再通过柱塞泵来抽取微量试剂，此时由于进样针和柱塞泵中都充满了缓冲液，因此抽取微量试剂的精度极高。
19.根据本发明的一些实施方式，所述微量试剂模块包括微量试剂容器和第一清洗槽，所述第一清洗槽与废液桶连接。优选地，所述第一清洗槽通过隔膜泵与所述废液桶连接。第一清洗槽用来洗进样针。
20.根据本发明的一些实施方式，所述微量试剂模块包括预处理液、封闭液、抗体、染核试剂等试剂。
21.根据本发明的一些实施方式，所述气压控制模块包括气压传感器和泄气阀，所述气压传感器有两个通气口，一个通气口连通大气，另一个通气口通过三通鲁尔接头连接所述泄气阀和所述泄气通孔。气压传感器可以监测滤膜下方的气压，当气压高于预先设定的阈值的时候，泄气口开阀泄气，确保滤膜下方的负压在一定的范围内，不会因为负压过大抽走目的细胞，确保目的细胞的高富集率。
22.气压控制模块中的气压传感器可以监测样本分离过程的实时压差，同时可以用来判断流程的时间节点。泄气阀用于保护目的细胞不会因为压差过大而漏选以及损伤，当压差超过某阈值时，泄气阀自动开启，从而提高目的细胞捕获效率以及活性率。例如，当上腔
滤液几乎过滤完全时，上下腔压差将持续上升，截获的细胞还固定在滤膜的上。如果负压抽吸模块继续提供负压，腔室内滤液因为无法突破液体表面张力，将会导致腔室内压差急剧上升，直到突破张力。此时巨大的压差就会导致捕获的目的细胞非常严重的丢失率和活性。因此需要及时打开泄气阀，使微流控芯片内部与空气直接连通，腔室内多余滤液将随气体从第一微流体通道、腔室、第二微流体通道流出微流体芯片，期间腔室无任何超出细胞承受范围的压差。
23.根据本发明的一些实施方式，所述负压抽吸模块包括注射泵，所述注射泵与所述抽吸通孔连接。
24.根据本发明的一些实施方式，所述负压抽吸模块包括注射泵，所述注射泵包括注射器和三通y型旋转阀头，三通旋转阀头的y型入口端与注射器连接在一起，两个出口端的一端与所述抽吸通孔连接，另一端连接有废液桶。出口端切换到与抽吸通孔连接时，可以抽废液；出口端切换到与废液桶连接时，可以将废液打到废液桶中。
25.根据本发明的一些实施方式，所述细胞分离模块还包括夹持装置(例如使用专利cn208177479u的夹持装置)，所述夹持装置可以使所述上盖板和所述下盖板紧紧贴合。
26.根据本发明的一些实施方式，所述上盖板的下表面和所述下盖板的上表面还设置有相互键合的硅胶膜。进一步地，所述键合可以是化学键合或热键合。通过硅胶膜之间的键合作用可以更大程度上保证上盖板和下盖板紧密贴合时的密封性。
27.根据本发明的一些实施方式，所述细胞分离模块还包括样品容器，所述样品容器与所述进样通孔连接。
28.根据本发明的一些实施方式，所述电路控制系统包括控制电路板，以及与所述控制电路板连接的显示屏。
29.本发明另一方面还提供了一种上述全自动细胞分离系统分离细胞的方法，包括如下步骤：
30.s1、启动所述电路控制系统的控制程序；
31.s2、手动向所述微流控芯片的样本容器中注入样品或者驱动所述进样针向所述微流控芯片的样本容器中注入试剂；
32.s3、启动所述负压抽吸模块，抽出所述微流控芯片中的滤液；
33.s4、所述气压控制模块监测所述微流控芯片的滤膜下方的气压，当气压高于预先设定的阈值时，开泄气阀降压，负压抽吸模块继续抽取一段时间后，关泄气阀。
34.根据本发明的一些实施方式，在过滤完成后，还包括用缓冲液冲洗目的细胞的步骤。
35.根据本发明的一些实施方式，当气压值陡升或超过
‑
1kpa时，开泄气阀降压。
36.根据本发明的一些实施方式，在用缓冲液冲洗过程中，当气压值超过
‑
1kpa时，开泄气阀降压。
37.本发明另一方面的目的在于提供一种如上所述的全自动细胞分离系统用于细胞分离的用途。
38.本发明另一方面的目的在于提供一种如上所述的全自动细胞分离系统在细胞检测中的应用。
39.本发明另一方面的目的在于提供一种如上所述的全自动细胞分离系统在细胞计
数中的应用。
40.本发明至少具有如下有益效果：
41.本发明提供的全自动细胞分离系统可以实现目的细胞的全自动分离，并且可以实时监控微流控芯片内部压差，避免压差过大造成的细胞漏选或损伤，能够快速、高效的实现目的细胞的分离，提高了物理过滤的效率，增加了目的细胞分离的纯度，并且本发明的全自动细胞分离系统还可以用来实现细胞的计数和检测，方法简单，成本低廉。本发明的全自动细胞分离系统控制精度高，富集率高，简单、高效，为生物医学研究带来便利，具有十分重要的作用。
附图说明
42.本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：
43.图1为本发明一个实施例的全自动细胞分离系统结构示意图；
44.图2为本发明一个实施例的进样模块的结构示意图；
45.图3为本发明一个实施例的细胞分离模块、负压抽吸模块和气压控制模块的连接关系示意图；
46.图4为本发明一个实施例的微流体芯片的结构示意图；
47.图5为本发明一个实施例的上盖板和下盖板的结构示意图；
48.图6为本发明一个实施例的全自动细胞分离系统结构示意图；
49.其中，图中附图标记与部件名称之间的对应关系为：
50.细胞分离模块110，微流控芯片111，样品容器112，上盖板1101，滤膜1102，下盖板1103，抽吸通孔1104，泄气通孔1105，进样通孔1106，腔室1107，第一微流体通道1108，第二微流体通道1109；
51.进样模块120，进样针121，柱塞泵122，第一液管1221，第二液管1222，大通量试剂模块123，微量试剂模块124，微量试剂容器1241，第一清洗槽1242，第二清洗槽125，废液桶126，阀门5～11，隔膜泵31；
52.气压控制模块130，气压传感器131，泄气阀13～20；
53.负压抽吸模块140，注射泵21
‑
28；
54.电路控制模块150，控制电路板151，显示屏152。
具体实施方式
55.下面详细描述本发明的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。
56.在本发明的描述中，需要理解的是，涉及到方位描述，例如上、下、前、后、左、右等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明的限制。
57.在本发明的描述中，若干的含义是一个或者多个，多个的含义是两个以上，大于、
小于、超过等理解为不包括本数，以上、以下、以内等理解为包括本数。如果有描述到第一、第二只是用于区分技术特征为目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量或者隐含指明所指示的技术特征的先后关系。
58.本发明的描述中，除非另有明确的限定，设置、安装、连接等词语应做广义理解，所属技术领域技术人员可以结合技术方案的具体内容合理确定上述词语在本发明中的具体含义。
59.实施例1
60.下面参考图1至图6描述根据本发明实施例的全自动细胞分离系统100，全自动细胞分离系统100可以包括：细胞分离模块110，包括微流控芯片111，微流控芯片111包括上盖板1101、滤膜1102和下盖板1103；上盖板1101设置有：抽吸通孔1104、泄气通孔1105和进样通孔1106；下盖板1103设置有：与进样通孔1106相对应腔室1107，第一微流体通道1108和第二微流体通道1109；其中，第一微流体通道1108的一端与泄气通孔1105连通，另一端与腔室1107连通；第二微流体通道1109的一端与抽吸通孔1104连通，另一端与腔室1107连通；滤膜1102设置在进样通孔1106和腔室1107之间；进样模块120，包括进样针121，进样针121可沿x轴及z轴方向移动，用于将样品或试剂注入细胞分离模块110；气压控制模块130，通过泄气通孔1105与细胞分离模块110连通，用于监测和控制滤膜1102两侧的压差；负压抽吸模块140，通过抽吸通孔1104与细胞分离模块110连通，用于抽吸样品经过滤膜1102后的滤液；电路控制模块150，与进样模块120、气压控制模块130和负压抽吸模块140连接，并控制其工作。
61.在该全自动细胞分离系统100工作时，通过进样模块120将含有待分离细胞的样品或试剂加入细胞分离模块110，启动气压控制模块130，启动负压抽吸模块140，使得微流控芯片111的腔室1107、第一微流体通道1108和第二微流体通道1109处于负压状态，此时滤膜1102两侧存在压差，样品在压差作用下快速过滤，目的细胞因为体积大而无法通过滤膜1102，滤液则经由第二微流体通道1109被负压抽吸模块140抽出，实现了目的细胞的快速分离。
62.进一步地，进样模块120还包括柱塞泵122，柱塞泵122与进样针121连接。进一步地，进样模块120还包括第一液管1221，柱塞泵122通过第一液管1221与进样针121连接。柱塞泵122和进样针121配合，可以将样品或试剂抽入进样针121内，也可以将样品或试剂从进样针121内推出。进一步地，进样针121带有液面检测功能。
63.进一步地，进样模块120还包括大通量试剂模块123，大通量试剂模块123与柱塞泵122连接。大通量试剂模块123与柱塞泵122之间还设置有阀门5。进一步地，柱塞泵122通过第二液管1222与大通量试剂模块123连接。大通量试剂模块123用来存放缓冲液、清洗液等试剂，通过阀门5的切换和柱塞泵122的抽拉实现大通量试剂模块123中试剂的抽取和进样。
64.进一步地，进样模块120还包括第二清洗槽125，第二清洗槽125通过第二液管1222与柱塞泵122连接。第二清洗槽125用来清洗管路及相应的鲁尔接头。进一步地，柱塞泵122与第二清洗槽125之间设置有阀门7，用来控制控制第二液管1222与第二清洗槽125的连通。
65.进一步地，进样模块120还包括微量试剂模块124，通过柱塞泵122的驱动实现进样针121对微量试剂模块124中试剂的抽取。柱塞泵122通过阀门6的切换和柱塞泵122的抽拉来实现柱塞泵122内部和进样针121内都充满缓冲液，然后进样针121检测到微量试剂模块
124中试剂的液面后，再通过柱塞泵122来抽取微量试剂，此时由于进样针121和柱塞泵122中都充满了缓冲液，因此抽取微量试剂的精度极高。进一步地，微量试剂模块124包括微量试剂容器1241和第一清洗槽1242，第一清洗槽1242与废液桶126连接。进一步地，第一清洗槽1242与废液桶126之间还设置有隔膜泵31。，第一清洗槽1242用于洗针。进一步地，微量试剂模块124包括待处理样品、预处理试剂、封闭试剂、抗体、染核试剂等试剂。
66.进一步地，气压控制模块130包括气压传感器131和泄气阀13～20(泄气阀的数量可以根据实际情况进行选择，可以为一个或多个)，气压传感器131有两个通气口，一个通气口连通大气，另一个通气口通过三通鲁尔接头连接泄气阀13～20和泄气通孔1105。气压传感器131可以监测滤膜1102下方的气压，当气压高于预先设定的阈值的时候，泄气口开阀泄气，确保滤膜1102下方的负压在一定的范围内，不会因为负压过大抽走目的细胞，确保目的细胞的高富集率。气压控制模块130中的气压传感器131可以监测样本分离过程的实时压差，同时可以用来判断流程的时间节点。泄气阀13～20用于保护目的细胞不会因为压差过大而漏选以及损伤，当压差超过某阈值时，泄气阀13～20自动开启，从而提高目的细胞捕获效率以及活性率。例如，当气压陡升时，此时样品几乎过滤完全，而腔室1107中滤液在表面张力的作用下，依然无法抽动。如果负压抽吸模块140继续提供负压，腔室1107内滤液因为无法突破液体表面张力，将会导致腔室内压差急剧上升，直到突破张力。此时巨大的压差就会导致捕获的目的细胞非常严重的丢失率和活性。因此需要及时打开泄气阀13～20，使微流控芯片111内部与空气直接连通，腔室1107内多余滤液将随气体从第一微流体通道1108、腔室1107、第二微流体通道1109流出微流体芯片111，期间腔室1107无任何超出细胞承受范围的压差。
67.进一步地，负压抽吸模块140包括注射泵21～28(注射泵的数量可以根据实际情况进行选择，可以为一个或多个)，注射泵21～28的与抽吸通孔1104连接。进一步地，注射泵21～28包括注射器和三通y型旋转阀头，三通旋转阀头的y型入口端与注射器连接在一起，两个出口端的一端与抽吸通孔1104连接，另一端连接有废液桶126。出口端切换到与抽吸通孔1104连接时，可以抽废液；出口端切换到与废液桶126连接时，可以将废液打到废液桶126中。注射泵21～28用来将滤膜1102下方的滤液抽吸到废液桶中。
68.进一步地，细胞分离模块110还包括夹持装置(例如使用专利cn208177479u的夹持装置)，夹持装置可以使微流控芯片111的上盖板1101和下盖板1103紧紧贴合。
69.进一步地，上盖板1101的下表面和下盖板1103的上表面还设置有相互键合的硅胶膜。进一步地，键合可以是化学键合或热键合。通过硅胶膜之间的键合作用可以更大程度上保证上盖板1101和下盖板1103紧密贴合时的密封性。
70.进一步地，细胞分离模块110还包括样品容器112，样品容器112与进样通孔1106连接。
71.进一步地，电路控制系统150包括控制电路板151，以及与控制电路板151连接的显示屏152。
72.实施例2
73.全自动细胞分离系统100分离细胞的方法，包括如下步骤：
74.s1、启动电路控制系统150的控制程序；
75.s2、驱动进样针121向微流控芯片111中注入样品；
76.s3、启动负压抽吸模块140，抽出微流控芯片111中的滤液；
77.s4、气压控制模块130监测微流控芯片111的滤膜1102下方的气压，当气压高于预先设定的阈值时，泄气降压。
78.进一步地，在过滤完成后，还包括用缓冲液冲洗目的细胞的步骤。
79.根据本发明的一些实施方式，在用缓冲液冲洗过程中，当气压值超过
‑
1kpa时，打开泄气阀。
80.实施例3
81.全自动细胞分离系统的一些工作过程：
82.1、初始化过程：x轴、z轴复位，开阀门7、11，注射泵21～28复位，x轴移动到清洗槽，z轴移动到清洗槽底部，开阀门6，柱塞泵122复位，等待3s，关阀门6。
83.2、管路填充：开阀5、10，注射泵21～28抽20ml pbs，等待3s，关阀5，10，开阀门6，柱塞泵122打7ml pbs到清洗槽，开隔膜泵31，抽5s废液，关隔膜泵31，关阀门6，z轴上升到避障高度，关泄气阀13～20。
84.3、浸润过程：x轴移动到选择对应的通道位置，z轴下降到样品容器112的3ml处，开阀门6，柱塞泵122往样品容器112中加入2mlpbs，等待3s，关阀门6，z轴上升到避障高度，x轴移动到清洗槽，等待1s；注射泵21～28启动抽液(速度1ml/min)，抽液1min后强停注射泵21～28，开泄气阀13～20，等待30s，关泄气阀13～20。
85.4、捕获过程：确认加入样本(5ml全血+5ml iset)，注射泵21～28通过抽吸通孔1104抽液(500μl/min)，记录18min时间内每个通道泄气阀13～20端最高压力值pmax，判断泄气阀13～20端压力值小于
‑
1kpa的通道，开对应的泄气阀13～20，等待30s，注射泵21～28强停，关泄气阀13～20。
86.5、捕获清洗过程：x轴移动到进样通孔1106通道，z轴下降到样品容器112内3ml处，开阀门6，柱塞泵122推2ml pbs到样品容器112，关阀门6，z轴上升到避障高度，x轴回到清洗槽，注射泵21～28通过抽吸通孔1104抽液(500μl/min)，判断泄气阀13～20端压力值小于
‑
1kpa的通道，开对应的泄气阀13～20，等待5s，注射泵21～28强停，关泄气阀13～20，重复清洗2次，第2次清洗结束后注射泵21～28复位，等待10s，注射泵21～28强停。
87.6、预处理过程：x轴移动到预处理试剂位置，z轴下降到试剂管底部，开阀门6，等待1s，柱塞泵122抽150μl预处理液，等待3s，关阀门6，z轴上升到避障高度，x轴移动到样品容器112的位置，z轴下降到滤膜1102上方5mm处，开阀门6，等待1s，柱塞泵122推150μl预处理液，等待3s，关阀门6，z轴上升到避障高度，x轴移动到清洗槽，预处理液孵育10min，注射泵21～28通过抽吸通孔1104抽液(200μl/min)，判断泄气阀13～20端压力值小于
‑
1kpa的通道，开对应的泄气阀13～20，等待5s，注射泵21～28强停，关阀13～20。
88.7、预处理清洗过程：x轴移动到样品容器112的，z轴下降到滤膜1102上方5mm处，开阀门6，柱塞泵122推300μl pbs到样品容器112，关阀门6，z轴上升到避障高度，x轴回到清洗槽，注射泵21～28通过抽吸通孔1104抽液(200μl/min)，判断泄气阀13～20端压力值小于
‑
1kpa的通道，开对应的泄气阀13～20，等待5s，注射泵21～28强停，关泄气阀13～20，孵育时，同步进行洗针。
89.8、封闭过程：x轴移动到封闭试剂位置，z轴下降到试剂管底部，开阀门6，等待1s，柱塞泵122抽150μl封闭液，等待3s，关阀门6，z轴上升到避障高度，x轴移动到样品容器112
的位置，z轴下降到滤膜1102上方5mm处，开阀门6，等待1s，柱塞泵122推150μl封闭液样品容器112，等待3s，关阀门6，z轴上升到避障高度，x轴移动到清洗槽，封闭孵育30min，注射泵21～28通过抽吸通孔1104抽液(200μl/min)，判断泄气阀13～20端压力值小于
‑
1kpa的通道，开对应的泄气阀13～20，等待5s，注射泵21～28强停，关泄气阀13～20。
90.9、抗体过程：z轴上升到避障高度，x轴移动到抗体试剂位置，开阀门6，柱塞泵122先抽300μl空气(保证抗体不被稀释)，等待3s，关阀门6，z轴下降到试剂管底部，开阀门6，柱塞泵122抽170μl抗体，等待3s，z轴上升到避障高度，关阀门6，x轴移动到样品容器112，z轴下降到滤膜1102上方5mm处，开阀门6，等待1s，柱塞泵122打入170μl抗体，等待3s，关阀门6，z轴上升到避障高度，x轴移动到清洗槽，z轴下降到洗针高度，开阀门6，柱塞泵122打500μl液体到清洗槽，等待3s，关阀门6，z轴上升到避障高度，抗体孵育60min，注射泵21～28通过抽吸通孔1104抽液(200μl/min)，判断泄气阀13～20端压力值小于
‑
1kpa的通道，开对应的泄气阀13～20，等待5s，注射泵21～28强停，关泄气阀13～20。
91.10、抗体清洗过程：x轴移动到样品容器112的位置，z轴下降到滤膜1102上方5mm处，开阀门6，柱塞泵122推300μlpbs到样品容器112，关阀门6，z轴上升到避障高度，x轴回到清洗槽，浸洗5min，注射泵21～28通过抽吸通孔1104抽液(200μl/min)，判断泄气阀13～20端压力值小于
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1kpa的通道，开对应的泄气阀13～20，等待5s，注射泵21～28强停，关泄气阀13～20，孵育时，同步进行洗针。
92.11、染核过程：x轴移动到染核试剂位置，z轴下降到试剂管底部，开阀门6，等待1s，柱塞泵122抽150μl染核试剂，等待3s，关阀门6，z轴上升到避障高度，x轴移动到样品容器112的位置，z轴下降到滤膜1102上方5mm处，开阀门6，等待1s，柱塞泵122推150μl染核试剂到样品容器112，等待3s，关阀门6，z轴上升到避障高度，x轴移动到清洗槽，染核孵育5min，注射泵21～28通过抽吸通孔1104抽液(200μl/min)，判断泄气阀13～20端压力值小于
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1kpa的通道，开对应的泄气阀13～20，等待5s，注射泵21～28强停，关泄气阀13～20，孵育时，同步进行洗针。
93.12、染核清洗过程：x轴移动到样品容器112的位置，z轴下降到滤膜1102上方5mm处，开阀门6，柱塞泵122推300μl pbs到样品容器112，关阀门6，z轴上升到避障高度，x轴回到清洗槽，注射泵21～28通过抽吸通孔1104抽液(200μl/min)，判断泄气阀13～20端压力值小于
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1kpa的通道，开对应的泄气阀13～20，等待5s，注射泵21～28强停，关泄气阀13～20。
94.13、管路清洗过程：x轴移动到清洗槽，z轴下降到清洗槽底部，开阀门6，柱塞泵122推液10ml，等待3s，关阀门6，开泵31，等待5s，关泵31，柱塞泵122排空废液，等待3s气压平衡，开阀门6、7、9，注射泵21～28转到泵头2号位，抽10ml液体，等待3s，转到泵头3号位，将液体推出，等待3s，关阀门9，开阀门11，注射泵21～28转到泵头2号位，抽10ml液体，等待3s，转到泵头3号位，将液体推出，等待3s，关阀门11，开阀门8，注射泵21
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28转到泵头2号位，抽10ml液体，等待3s，转到泵头3号位，将液体推出，等待3s，关阀门8，开阀门10，注射泵21～28转到泵头2号位，抽10ml液体，等待3s，转到泵头3号位，将液体推出，等待3s，关阀门10，关阀门6。
95.上面结合附图对本发明的实施例作了详细说明，但是本发明不限于上述实施例，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。