一种人参特有化合物精氨酸糖苷AF的分离纯化新方法

一种人参特有化合物精氨酸糖苷af的分离纯化新方法
技术领域
1.本发明涉及一种从人参相关加工品中提取化合物的方法，具体说是一种从红参中高效提取精氨酸单糖苷af的方法及应用。


背景技术：

2.人参为传统名贵药材，在《神农本草经》中被列为上品。af是鲜人参在加工蒸制成为红参的过程中，发生的梅拉德反应产物，郑毅男首次发现并鉴定了其结构,研究发现在人参加工成生晒参、红参时af含量较高，可达2.51％
[1,2]
。鲜人参在加工为红参过程中，葡萄糖与精氨酸发生羰醛缩和反应，经amadori重排而生成af。人参精氨酸单糖苷(af)含量在红参中最高可达2.51％以上，并且在人参根、西洋参根及其非药用部位(如：茎叶、果实)，以及相关加工品中均有所发现
[3,4]
。其后实验研究表明,af具有增强免疫、抑制脂质过氧化，对于预防动脉粥样硬化有一定的调节作用。kyoung
‑
soo
[5]
和lee kh等
[6]
研究af对sd大鼠饮食摄食蔗糖/淀粉后血糖的影响，发现af能够明显降低小鼠饮食蔗糖/淀粉后血糖的水平，同时,af
[7]
对2型糖尿病大鼠具有很好的降血糖活性。这一研究大大提高了人参非皂苷类物质得的地位。
[0003]
目前，af主要提取方法为红参粉末用高浓度乙醇萃取，去上清，沉淀水提醇沉，然后过阳离子树脂柱分离得。但此方法杂质偏多，且后续过阳离子树脂需要用到氨水溶液洗脱，氨水溶液味道较为刺激,对人体和环境有一定得危害。
[0004]
而本发明使用水饱和正丁醇作为萃取液不仅能把皂苷除去，还能除糖除色素等各种杂质弥补了现有分离方法的不足，且后续用醋酸水溶液混合一定量的三氯化铁代替乙醇溶液制备af简化了步骤并提高了提取率，同时抑制了af的分解，安全环保，无刺激气味，通过多次试验结果表明以此方法提取af纯度增加，其操作简单，且节约成本，安全环保。
[0005]
本

技术实现要素：

[0006]
本发明公开一种从红参中高效提取af的方法，为一种新的提取方法：红参粉末用水饱和正丁醇萃取除去杂质，沉淀用有机酸(醋酸)水溶液混合一定量的三氯化铁超声提取，滤液醇沉过硅胶和聚丙烯酰胺凝胶柱得af，具有操作简易，安全环保，提取率高，产物刺激性小和稳定性高等特点。
[0007]
本发明通过以下技术方案来实现：
[0008]
一种高效提取精氨酸单糖苷(af)的方法，具体包括如下步骤：人参相关加工品粉末用水饱和正丁醇萃取，得沉淀，再用含有一定量的三氯化铁的ph为4.5～5的醋酸水溶液去超声提取，过滤，从滤液中获得精氨酸单糖苷。
[0009]
作为本发明的一种优选技术方案：所述人参相关加工品包括但不限于红参，人参根、西洋参根及其非药用部位(如：茎叶、果实)，优选红参。
[0010]
作为本发明的一种优选技术方案：人参相关加工品粉末重量与醋酸水溶液体积的比，按g/ml为1：10。
[0011]
作为本发明的一种优选技术方案：人参相关加工品粉末重量与三氯化铁质量的
比，按照g/g为1：0.3。
[0012]
作为本发明的一种优选技术方案：前述方法进一步包括：滤液用无水乙醇沉淀，抽滤去除上清液，沉淀过硅胶柱，用70％乙醇水溶液洗脱，收集各部分洗脱液，合并富含af成分的洗脱液，浓缩后继续过聚丙烯酰胺凝胶柱，用0.2％醋酸水溶液洗脱，收集富含af的洗脱液，浓缩冷冻干燥即得af。
[0013]
作为本发明的一种优选技术方案：人参相关加工品粉末用水饱和正丁醇萃取包括：人参相关加工品粉末过80目筛，粉末加入到水饱和正丁醇中，萃取3次，离心，过滤，去除上清液，人参相关加工品粉末重量与水饱和正丁醇体积的比，按g/ml为1：100。
[0014]
通过大量的实验研究发现，af在酸性条件下比较稳定，优选ph值为4.0
‑
6.0的酸性水溶液，酸浓度太高或太低均会影响红参中af的提取与分离，优选醋酸的酸性溶液。更为重要的是，与一定量的三氯化铁组合能提高af的提取率并增加物质的稳定性，可使af的提取率提高20
‑
40％。
[0015]
本发明提取物通过hplc分析法测试计算出af的纯度可达98％以上，从红参中提取af的得率可达1.2％
‑
2.1％。
[0016]
作为本发明的一种优选技术方案：本发明精氨酸单糖苷的提取方法，包括以下步骤：
[0017]
将人参相关加工品粉末(80目)用水饱和正丁醇搅拌过夜，离心，过滤，去除上清液，得沉淀，再用ph为4.5的醋酸水溶液混合一定量的三氯化铁去超声提取，过滤，去除不溶部分，滤液用无水乙醇沉淀，抽滤去除上清液，沉淀过200
‑
300硅胶柱，用70％乙醇水溶液洗脱，收集各部分洗脱液，合并富含af成分的洗脱液，浓缩后继续过聚丙烯酰胺凝胶柱，用0.2％醋酸水溶液洗脱，收集富含af的洗脱液，浓缩冷冻干燥即得af。
[0018]
作为本发明的一种优选技术方案：1g红参粉末，置入100ml的水饱和正丁醇萃取三次，沉淀置于10ml的ph为4.5的醋酸水溶液混合0.3g的三氯化铁中，超声提取60min，提取液经乙醇醇沉洗脱，抽滤得粗提取物，过200
‑
300硅胶和聚丙烯酰胺凝胶柱得af。作为其优选技术方案：提取液用无水乙醇沉淀，抽滤去除上清液，沉淀过硅胶柱，用70％乙醇水溶液洗脱，收集各部分洗脱液，合并富含af成分的洗脱液，浓缩后继续过聚丙烯酰胺凝胶柱，用0.2％醋酸水溶液洗脱，收集富含af的洗脱液，浓缩冷冻干燥即得af。
[0019]
本发明相对于现有技术的积极效果在于：
[0020]
本发明中，首次使用水饱和正丁醇作为萃取媒介，醋酸水溶液混合一定量的三氯化铁作为提取溶剂提取af，提取率可以达到1.9％以上，同时降低了提取成本，且安全环保，提取率高。
[0021]
以水饱和正丁醇为萃取媒介，沉淀中皂苷、多糖和色素残留量少，易于后续分离提纯；以ph为4.5的醋酸水溶液混合一定量的三氯化铁提取af，抑制了af的水解，提高了af提取率，简化了提取步骤，节约了成本。
[0022]
最为重要的是，醋酸作为易挥发的成分，不会对后续分离纯化产生影响，且对人体无伤害，三氯化铁也易过滤除去，增加了af的稳定性，使提取率得以增加。
附图说明：
[0023]
附图1：最终产物中af含量测定示意图。
[0024]
参考文献
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具体实施方式
[0032]
以下结合实施例对本发明作进一步详细的举例描述，但发明的实施方式不限于此。
[0033]
除另有说明外：
[0034]
本实施例硅胶和聚丙烯酰胺凝胶柱洗脱条件为：沉淀过200
‑
300硅胶柱，用70％乙醇水溶液洗脱，收集各部分洗脱液，合并富含af成分的洗脱液，浓缩后继续过聚丙烯酰胺凝胶柱，用0.2％醋酸水溶液洗脱，收集富含af的洗脱液，浓缩冷冻干燥即得af。
[0035]
本发明实验用红参粉末(af含量约为2.5％)，生晒参粉末(af含量约为1.6％)，人参果粉末(af含量约为0.23％)，西洋参粉末(af含量约为0.76％)。
[0036]
所述过硅胶和聚丙烯酰胺凝胶柱是指：沉淀过200
‑
300硅胶柱，用70％乙醇水溶液洗脱，收集各部分洗脱液，合并富含af成分的洗脱液，浓缩后继续过聚丙烯酰胺凝胶柱，用0.2％醋酸水溶液洗脱，收集富含af的洗脱液，浓缩冷冻干燥即得af。
[0037]
实验例一 不同原料提取af
[0038]
1.1按人参相关加工品粉末(80目)1.0g置入100ml的水饱和正丁醇萃取三次，所得沉淀置入10倍量ph为4.5的醋酸水溶液混合0.3g的三氯化铁进行超声提取，提取液醇沉后，过硅胶和聚丙烯酰胺凝胶柱得af，称量计算得率并检测纯度。
[0039]
1.1.1按上述条件使用1g红参粉末(af含量约为2.5％)提取af，置入100ml的水饱和正丁醇萃取三次，沉淀置于10ml的ph为4.5的醋酸水溶液混合0.3g的三氯化铁中，超声提取60min，提取液经乙醇醇沉洗脱，抽滤得粗提取物，过200
‑
300硅胶和聚丙烯酰胺凝胶柱得af，称量计算得率并检测纯度。
[0040]
1.1.2使用1g生晒参粉末(af含量约为1.6％)提取af，置入100ml的水饱和正丁醇萃取三次，沉淀置于10ml的ph为4.5的醋酸水溶液混合0.3g的三氯化铁中，超声提取60min，提取液经乙醇醇沉洗脱，抽滤得粗提取物，过200
‑
300硅胶和聚丙烯酰胺凝胶柱得af，称量计算得率并检测纯度。
[0041]
1.1.3沉使用1g人参果粉末(af含量约为0.23％)提取af，置入100ml的水饱和正丁醇萃取三次，沉淀置于10ml的ph为4.5的醋酸水溶液混合0.3g的三氯化铁中，超声提取60min，提取液经乙醇醇沉洗脱，抽滤得粗提取物，过200
‑
300硅胶和聚丙烯酰胺凝胶柱得af，称量计算得率并检测纯度。
[0042]
1.1.4使用1g西洋参粉末(af含量约为0.76％)提取af，置入100ml的水饱和正丁醇萃取三次，沉淀置于10ml的ph为4.5的醋酸水溶液混合0.3g的三氯化铁中，超声提取60min，提取液经乙醇醇沉洗脱，抽滤得粗提取物，过200
‑
300硅胶和聚丙烯酰胺凝胶柱得af，称量计算得率并检测纯度。
[0043]
1.2 af提取物中精氨酸的检测
[0044]
1.2.1检测方法：运用柱前衍生高效液相色谱法进行检测，检测1.1粗提取物和最终af中精氨酸残留量。
[0045]
1.2.2精氨酸标准品制备：精密称取分析级精氨酸10.0mg，加色谱级甲醇定容至10ml，即浓度为1mg/ml；备用。
[0046]
1.2.3样品制备：每组分别精密称取50.0mg，按照氨基酸衍生法进行衍生检测。
[0047]
1.2.4色谱条件：venusil
‑‑
aa氨基酸分析专用柱(5μm，4.6mm
×
250mm)。流动相a:乙酸钠缓冲溶液
‑
乙腈溶液(ph＝6.5)；流动相b:乙腈水溶液v(乙腈):v(水)＝4：1。0min，0％b；4min，3％b；16min，10％b；17min，20％b；32min，34％b；30min；流速1.0ml/min；检测波长254nm；柱温40℃；进样量20μl。
[0048]
结果见表1，红参组与其他组相比，af提取率较高。
[0049]
表1：不同原料提取af对比
[0050][0051]
由表1可以总结出，从红参中提取af，最终af得率高。
[0052]
实验例二 不同溶剂提取红参中的af
[0053]
2.1按红参粉末(80目)1.0g置入100ml的水饱和正丁醇萃取三次，所得沉淀置入10倍量以下溶剂进行超声提取，提取液醇沉后，过硅胶和聚丙烯酰胺凝胶柱得af，称量计算得率并检测纯度。
[0054]
2.1.1按上述条件萃取完后，沉淀置于10ml的ph为4.5的醋酸水溶液中，超声提取60min，提取液经乙醇醇沉洗脱，抽滤得粗提取物，过200
‑
300硅胶和聚丙烯酰胺凝胶柱得af，称量计算得率并检测纯度。
[0055]
2.1.2按上述条件萃取完后，沉淀置于10ml水溶液中，超声提取60min，提取液经乙醇醇沉洗脱，抽滤得粗提取物，过200
‑
300硅胶和聚丙烯酰胺凝胶柱得af，称量计算得率并检测纯度。
[0056]
2.1.3按上述条件萃取完后，沉淀置于10ml的ph为9的氨水溶液中，超声提取60min，提取液经乙醇醇沉洗脱，抽滤得粗提取物，过200
‑
300硅胶和聚丙烯酰胺凝胶柱得af，称量计算得率并检测纯度。
[0057]
检测方法如1.2所示。
[0058]
结果见表2，醋酸水溶液组与蒸馏水组和氨水溶液组比，af提取率较高并且纯度最高。
[0059]
表2：不同溶剂提取红参中的af对比
[0060][0061]
由表2可以总结出，以醋酸水溶液从红参中提取af，最终af得率较大提升，纯度也是最高，酸性条件抑制了af的分解，增加其稳定性。
[0062]
实验例三 不同酸性溶剂提取红参中的af
[0063]
3.1按红参粉末(80目)1.0g置入100ml的水饱和正丁醇萃取三次，所得沉淀置入10倍量以下溶剂进行超声提取，提取液醇沉后，过硅胶和聚丙烯酰胺凝胶柱得af，称量计算得
率并检测纯度。
[0064]
3.1.1按上述条件萃取完后，沉淀置于10ml的ph为5的醋酸水溶液中，超声提取60min，提取液经乙醇醇沉洗脱，抽滤得粗提取物，过200
‑
300硅胶和聚丙烯酰胺凝胶柱得af，称量计算得率并检测纯度。
[0065]
3.1.2按上述条件萃取完后，沉淀置于10ml的ph为5的柠檬酸水溶液中，超声提取60min，提取液经乙醇醇沉洗脱，抽滤得粗提取物，过200
‑
300硅胶和聚丙烯酰胺凝胶柱得af，称量计算得率并检测纯度。
[0066]
3.1.3按上述条件萃取完后，沉淀置于10ml的ph为5的苹果酸水溶液中，超声提取60min，提取液经乙醇醇沉洗脱，抽滤得粗提取物，过200
‑
300硅胶和聚丙烯酰胺凝胶柱得af，称量计算得率并检测纯度。
[0067]
检测方法如1.2所示。
[0068]
结果见表3；醋酸水溶液组与柠檬酸水溶液组和苹果酸水溶液组比，提取率较高。
[0069]
表3：不同酸性溶剂提取红参中的af对比
[0070][0071]
由表3可以总结出，三种酸性溶剂均能提高af得率，但醋酸水溶液组与柠檬酸水溶液组和苹果酸水溶液组比，提取率和af得率更高。
[0072]
实验例四 不同ph的醋酸水溶液提取红参中的af
[0073]
4.1按红参粉末(80目)1.0g置入100ml的水饱和正丁醇萃取三次，所得沉淀置入10倍量以下溶剂进行超声提取，提取液醇沉后，过硅胶和聚丙烯酰胺凝胶柱得af，称量计算得率并检测纯度。
[0074]
4.1.1按上述条件萃取完后，沉淀置于10ml的ph为4的醋酸水溶液中，超声提取60min，提取液经乙醇醇沉洗脱，抽滤得粗提取物，过200
‑
300硅胶和聚丙烯酰胺凝胶柱得af，称量计算得率并检测纯度。
[0075]
4.1.2按上述条件萃取完后，沉淀置于10ml的ph为4.5的醋酸水溶液中，超声提取60min，提取液经乙醇醇沉洗脱，抽滤得粗提取物，过200
‑
300硅胶和聚丙烯酰胺凝胶柱得af，称量计算得率并检测纯度。
[0076]
4.1.3按上述条件萃取完后，沉淀置于10ml的ph为5的醋酸水溶液中，超声提取60min，提取液经乙醇醇沉洗脱，抽滤得粗提取物，过200
‑
300硅胶和聚丙烯酰胺凝胶柱得af，称量计算得率并检测纯度。
[0077]
4.1.4按上述条件萃取完后，沉淀置于10ml的ph为5.5的醋酸水溶液中，超声提取60min，提取液经乙醇醇沉洗脱，抽滤得粗提取物，过200
‑
300硅胶和聚丙烯酰胺凝胶柱得af，称量计算得率并检测纯度。
[0078]
4.1.5按上述条件萃取完后，沉淀置于10ml的ph为6的醋酸水溶液中，超声提取
60min，提取液经乙醇醇沉洗脱，抽滤得粗提取物，过200
‑
300硅胶和聚丙烯酰胺凝胶柱得af，称量计算得率并检测纯度。
[0079]
检测方法如1.2所示。
[0080]
结果见表4，ph为4.5的醋酸水溶液组与其他组比，提取率较高。
[0081]
表4：不同ph的醋酸水溶液提取红参中的af对比
[0082][0083]
由表4可以总结出，ph为4.5的醋酸水溶液为最佳提取溶剂，提取率和af得率最高。
[0084]
实验例五 不同量的三氯化铁混合ph为4.5的醋酸水溶液提取红参中的af
[0085]
5.1按红参粉末(80目)1.0g置入100ml的水饱和正丁醇萃取三次，所得沉淀置入10倍量以下溶剂进行超声提取，提取液醇沉后，过硅胶和聚丙烯酰胺凝胶柱得af，称量计算得率并检测纯度。
[0086]
5.1.1按上述条件萃取完后，沉淀置于10ml的ph为4.5的醋酸水溶液中，超声提取60min，提取液经乙醇醇沉洗脱，抽滤得粗提取物，过200
‑
300硅胶和聚丙烯酰胺凝胶柱得af，称量计算得率并检测纯度。
[0087]
5.1.2按上述条件萃取完后，沉淀置于10ml的ph为4.5的醋酸水溶液中并混合0.1g的三氯化铁固体，超声提取60min，提取液经乙醇醇沉洗脱，抽滤得粗提取物，过200
‑
300硅胶和聚丙烯酰胺凝胶柱得af，称量计算得率并检测纯度。
[0088]
5.1.3按上述条件萃取完后，沉淀置于10ml的ph为4.5的醋酸水溶液中并混合0.3g的三氯化铁固体，超声提取60min，提取液经乙醇醇沉洗脱，抽滤得粗提取物，过200
‑
300硅胶和聚丙烯酰胺凝胶柱得af，称量计算得率并检测纯度。
[0089]
5.1.4按上述条件萃取完后，沉淀置于10ml的ph为4.5的醋酸水溶液中并混合0.5g的三氯化铁固体，超声提取60min，提取液经乙醇醇沉洗脱，抽滤得粗提取物，过200
‑
300硅胶和聚丙烯酰胺凝胶柱得af，称量计算得率并检测纯度。
[0090]
检测方法如1.2所示。
[0091]
结果见表5，ph为4.5的醋酸水溶液中混合0.3g的三氯化铁组与其他组比，提取率较高。
[0092]
表5：不同量的三氯化铁混合对红参中的af提取的比较结果
[0093][0094]
由表5可以总结出，ph为4.5的醋酸水溶液中混合0.3g的三氯化铁为最佳比例，提取率和af得率最高。
[0095]
实施例1
[0096]
精确称量红参粉末(80目)1.0g置入100ml的水饱和正丁醇萃取三次，所得沉淀置于10ml的ph为4.5的冰醋酸水溶液中并混合0.3g的三氯化铁固体，超声提取60min，提取液经乙醇醇沉洗脱，抽滤得粗提取物，过200
‑
300硅胶和聚丙烯酰胺凝胶柱收集含af洗脱液，浓缩冻干计算af得率为2.05％，最终af纯度大于98.5％。
[0097]
实施例2
[0098]
精确称量生晒参粉末(80目)1.0g置入100ml的水饱和正丁醇萃取三次，所得沉淀置于10ml的ph为4.5的冰醋酸水溶液中并混合0.3g的三氯化铁固体，超声提取60min，提取液经乙醇醇沉洗脱，抽滤得粗提取物，过200
‑
300硅胶和聚丙烯酰胺凝胶柱收集含af洗脱液，浓缩冻干计算af得率为1.2％，最终af纯度大于98.5％。
[0099]
实施例3
[0100]
精确称量人参果粉末(80目)1.0g置入100ml的水饱和正丁醇萃取三次，所得沉淀置于10ml的ph为4.5的冰醋酸水溶液中并混合0.3g的三氯化铁固体，超声提取60min，提取液经乙醇醇沉洗脱，抽滤得粗提取物，过200
‑
300硅胶和聚丙烯酰胺凝胶柱收集含af洗脱液，浓缩冻干计算af得率为0.19％，最终af纯度大于98.5％。
[0101]
实施例4
[0102]
精确称量西洋参粉末(80目)1.0g置入100ml的水饱和正丁醇萃取三次，所得沉淀置于10ml的ph为4.5的冰醋酸水溶液中并混合0.3g的三氯化铁固体，超声提取60min，提取液经乙醇醇沉洗脱，抽滤得粗提取物，过200
‑
300硅胶和聚丙烯酰胺凝胶柱收集含af洗脱液，浓缩冻干计算af得率为0.57％，最终af纯度大于98.5％。
[0103]
实施例5
[0104]
精确称量红参粉末(80目)1.0g置入100ml的水饱和正丁醇萃取三次，所得沉淀置于10ml的ph为4.5的醋酸水溶液中，超声提取60min，提取液经乙醇醇沉洗脱，抽滤得粗提取物，过200
‑
300硅胶和聚丙烯酰胺凝胶柱收集含af洗脱液，浓缩冻干计算af得率为1.47％，最终af纯度大于98.5％。
[0105]
实施例6
[0106]
精确称量红参粉末(80目)1.0g置入100ml的水饱和正丁醇萃取三次，所得沉淀置于10ml的水溶液中，超声提取60min，提取液经乙醇醇沉洗脱，抽滤得粗提取物，过200
‑
300
硅胶和聚丙烯酰胺凝胶柱收集含af洗脱液，浓缩冻干计算af得率为0.74％，最终af纯度为96.3％。
[0107]
实施例7
[0108]
精确称量红参粉末(80目)1.0g置入100ml的水饱和正丁醇萃取三次，所得沉淀置于10ml的ph为9的氨水溶液中，超声提取60min，提取液经乙醇醇沉洗脱，抽滤得粗提取物，粗提率为6.4％过200
‑
300硅胶和聚丙烯酰胺凝胶柱收集含af洗脱液，浓缩冻干计算af得率为0.19％，最终af纯度为94.9％。
[0109]
实施例8
[0110]
精确称量红参粉末(80目)1.0g置入100ml的水饱和正丁醇萃取三次，所得沉淀置于10ml的ph为5的醋酸水溶液中，超声提取60min，提取液经乙醇醇沉洗脱，抽滤得粗提取物，过200
‑
300硅胶和聚丙烯酰胺凝胶柱收集含af洗脱液，浓缩冻干计算af得率为1.34％，最终af纯度大于98.5％。
[0111]
实施例9
[0112]
精确称量红参粉末(80目)1.0g置入100ml的水饱和正丁醇萃取三次，所得沉淀置于10ml的ph为5的柠檬酸水溶液中，超声提取60min，提取液经乙醇醇沉洗脱，抽滤得粗提取物，过200
‑
300硅胶和聚丙烯酰胺凝胶柱收集含af洗脱液，浓缩冻干计算af得率为1.25％，最终af纯度大于98.5％。
[0113]
实施例10
[0114]
精确称量红参粉末(80目)1.0g置入100ml的水饱和正丁醇萃取三次，所得沉淀置于10ml的ph为5的苹果酸水溶液中，超声提取60min，提取液经乙醇醇沉洗脱，抽滤得粗提取物，过200
‑
300硅胶和聚丙烯酰胺凝胶柱收集含af洗脱液，浓缩冻干计算af得率为1.12％，最终af纯度大于98.5％。
[0115]
实施例11
[0116]
精确称量红参粉末(80目)1.0g置入100ml的水饱和正丁醇萃取三次，所得沉淀置于10ml的ph为4的醋酸水溶液中，超声提取60min，提取液经乙醇醇沉洗脱，抽滤得粗提取物，过200
‑
300硅胶和聚丙烯酰胺凝胶柱收集含af洗脱液，浓缩冻干计算af得率为1.29％，最终af纯度大于98.5％。
[0117]
实施例12
[0118]
精确称量红参粉末(80目)1.0g置入100ml的水饱和正丁醇萃取三次，所得沉淀置于10ml的ph为4.5的醋酸水溶液中，超声提取60min，提取液经乙醇醇沉洗脱，抽滤得粗提取物，过200
‑
300硅胶和聚丙烯酰胺凝胶柱收集含af洗脱液，浓缩冻干计算af得率为1.47％，最终af纯度大于98.5％。
[0119]
实施例13
[0120]
精确称量红参粉末(80目)1.0g置入100ml的水饱和正丁醇萃取三次，所得沉淀置于10ml的ph为5的醋酸水溶液中，超声提取60min，提取液经乙醇醇沉洗脱，抽滤得粗提取物，过200
‑
300硅胶和聚丙烯酰胺凝胶柱收集含af洗脱液，浓缩冻干计算af得率为1.34％，最终af纯度大于98.5％。
[0121]
实施例14
[0122]
精确称量红参粉末(80目)1.0g置入100ml的水饱和正丁醇萃取三次，所得沉淀置
于10ml的ph为5.5的醋酸水溶液中，超声提取60min，提取液经乙醇醇沉洗脱，抽滤得粗提取物，过200
‑
300硅胶和聚丙烯酰胺凝胶柱收集含af洗脱液，浓缩冻干计算af得率为1.19％，最终af纯度大于98.5％。
[0123]
实施例15
[0124]
精确称量红参粉末(80目)1.0g置入100ml的水饱和正丁醇萃取三次，所得沉淀置于10ml的ph为6的醋酸水溶液中，超声提取60min，提取液经乙醇醇沉洗脱，抽滤得粗提取物，过200
‑
300硅胶和聚丙烯酰胺凝胶柱收集含af洗脱液，浓缩冻干计算af得率为1.03％，最终af纯度大于98.5％。
[0125]
实施例16
[0126]
精确称量红参粉末(80目)1.0g置入100ml的水饱和正丁醇萃取三次，所得沉淀置于10ml的ph为4.5的冰醋酸水溶液中，超声提取60min，提取液经乙醇醇沉洗脱，抽滤得粗提取物，过200
‑
300硅胶和聚丙烯酰胺凝胶柱收集含af洗脱液，浓缩冻干计算af得率为1.47％，最终af纯度大于98.5％。
[0127]
实施例17
[0128]
精确称量红参粉末(80目)1.0g置入100ml的水饱和正丁醇萃取三次，所得沉淀置于10ml的ph为4.5的冰醋酸水溶液中并混合0.1g的三氯化铁固体，超声提取60min，提取液经乙醇醇沉洗脱，抽滤得粗提取物，过200
‑
300硅胶和聚丙烯酰胺凝胶柱收集含af洗脱液，浓缩冻干计算af得率为1.79％，最终af纯度大于98.5％。
[0129]
实施例18
[0130]
精确称量红参粉末(80目)1.0g置入100ml的水饱和正丁醇萃取三次，所得沉淀置于10ml的ph为4.5的冰醋酸水溶液中并混合0.3g的三氯化铁固体，超声提取60min，提取液经乙醇醇沉洗脱，抽滤得粗提取物，过200
‑
300硅胶和聚丙烯酰胺凝胶柱收集含af洗脱液，浓缩冻干计算af得率为2.05％，最终af纯度大于98.5％。
[0131]
实施例19
[0132]
精确称量红参粉末(80目)1.0g置入100ml的水饱和正丁醇萃取三次，所得沉淀置于10ml的ph为4.5的冰醋酸水溶液中并混合0.5g的三氯化铁固体，超声提取60min，提取液经乙醇醇沉洗脱，抽滤得粗提取物，过200
‑
300硅胶和聚丙烯酰胺凝胶柱收集含af洗脱液，浓缩冻干计算af得率为1.83％，最终af纯度大于98.5％。
[0133]
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。