一种高产唾液酸乳糖的重组宿主菌及其构建方法和应用

文档序号:26013933发布日期:2021-07-23 21:35阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种高产唾液酸乳糖的重组宿主菌,其特征在于,所述重组宿主菌过表达pyrg基因和/或串联过表达一个或多个拷贝数的cmk和ppk基因。

2.如权利要求1所述的重组宿主菌,其特征在于,所述重组宿主菌包括(1)、(2)、(3)、(4)和(5)中的至少一种,其中:

(1)过表达pyrg基因;

(2)以petduet为载体串联表达cmk基因和ppk基因;

(3)以pacycduet为载体串联表达cmk基因和ppk基因;

(4)以pcdfduet为载体串联表达cmk基因和ppk基因;

(5)以prsfduet为载体串联表达cmk基因和ppk基因。

3.如权利要求1或2所述的重组宿主菌,其特征在于,所述cmk基因和ppk基因拷贝数≤2。

4.如权利要求2所述的重组宿主菌,其特征在于,所述重组宿主菌以pacycduet为载体过表达一个pyrg基因和串联过表达一个cmk基因和一个ppk基因。

5.如权利要求1或2所述的重组宿主菌的构建方法,包括以下步骤:

s1.在宿主菌中降低或消除基因nane、基因nant、基因nank、基因nana的活性;

s2.在宿主菌中降低或消除基因lacz的活性。

6.如权利要求5所述的构建方法,其特征在于,还包括以下步骤:

s1.在宿主菌中降低或消除基因naga和基因nagb的活性;

s2.在宿主菌中过表达pyrg基因和/或过表达cmk基因和ppk基因。

7.如权利要求5所述的构建方法,其特征在于,所述基因nane、nant、nank、nana的敲除和鉴定引物的核苷酸序列如seqidno.1-seqidno.4所示,所述基因lacz的敲除和鉴定引物的核苷酸序列如seqidno.9-seqidno.12所示。

8.如权利要求6所述的构建方法,其特征在于,所述基因nagb的敲除和鉴定引物的核苷酸序列如seqidno.5-seqidno.8所示。

9.如权利要求5或6所述的构建方法,其特征在于,所述宿主菌为含有t7rna聚合酶的大肠杆菌。

10.如权利要求1或2所述的重组宿主菌或如权利要求6所述的构建方法在生产唾液酸乳糖中的应用。


技术总结
本发明涉及代谢工程技术领域,具体涉及一种高产唾液酸乳糖的重组宿主菌及其构建方法和应用。本发明构建的高产唾液酸乳糖的重组宿主菌过表达pyrG基因和/或串联过表达一个或多个拷贝数的cmk和ppk基因。本发明通过辅因子CTP的再生或者过表达CTP合成酶基因提高细胞内的底物辅因子的供应,无需外源性的添加辅因子,降低生产成本,并且还可以利用不同拷贝数的表达载体串联表达cmk和ppk基因,优化底物CTP含量,实现唾液酸乳糖产量的提高。

技术研发人员:吴金勇;李忠奎;陈祥松;袁丽霞;王纪;王煜;王刚;孙立洁;李翔宇;姚建铭
受保护的技术使用者:中国科学院合肥物质科学研究院;武汉中科光谷绿色生物技术有限公司
技术研发日:2021.04.19
技术公布日:2021.07.23
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