一种二苯酮类衍生物及其制备方法和应用

1.本发明属于医药技术领域，具体涉及一种二苯酮类衍生物及其制备方法和应用。


背景技术：

2.磷酸二酯酶(pdes)是一个多基因的大家族，包括11型共30余种不同特征的磷酸二酯酶同功酶。磷酸二酯酶(pdes)具有水解细胞内第二信使(camp，环磷酸腺苷或cgmp，环磷酸鸟苷)的功能，进而调节多种重要的生理活动过程。开发选择性的磷酸二酯酶抑制剂将为多种疾病的治疗开辟新的思路。
3.5型磷酸二酯酶(pde5)能够特异性水解cgmp并调节细胞内cgmp的水平，参与体内多种重要的生物生理学过程。pde5广泛分布于人体肺部、阴茎海绵体平滑肌内，以及血管、内脏及气道平滑肌、骨骼肌、血小板等组织。选择性的pde5抑制剂主要作用于一氧化氮(no)-可溶性鸟苷环化酶(sgc)-环磷酸鸟苷(cgmp)通路，能够通过抑制pde5对cgmp的水解过程，进而维持细胞内高浓度的cgmp。因此pde5是治疗与cgmp水平相关的如男性勃起功能障碍、肺动脉高压等疾病的理想药物靶点，肺动脉高压即肺循环压力高于正常的病理状态，是仅次于冠心病和高血压的心血管疾病。此外，长期的临床治疗过程发现多种pde5抑制剂对于阿尔兹海默症患者的认知功能具有显著的改善作用，这可能与pde5抑制剂舒张血管并改善血流量的作用相关。
4.pde4则主要分布于各种炎症细胞内，肥大细胞、巨噬细胞、嗜酸粒细胞、淋巴细胞和上皮细胞等，可通过抑制酶的活性来提高细胞内浓度，将有助于减轻炎症反应对机体的伤害。在对于过敏炎症很重要的细胞中(淋巴细胞、肥大细胞、嗜酸性粒细胞、巨噬细胞)，主要的pde同工酶也是4型。因此，用合适的抑制剂抑制pde4视为治疗多种变态反应引起的疾病的重要开始。目前，pde4抑制剂已被开发成抗炎的药物，如罗氟司特主要用于肺部的炎症治疗，尤其是哮喘和慢性阻塞性肺疾病；difamilast被用于特异性皮炎的治疗；而阿普斯特被用于银屑病关节炎的治疗。同时pde1、pde2、pde3的抑制剂也已应用于临床心脑血管疾病的治疗，如长春西汀、双嘧达莫、西洛他唑、米力农等；同时pde10抑制剂也被报道具有良好的降压和治疗中枢神经系统疾病的作用。而开发新的具有靶向抑制作用的药物或制剂对多种疾病的治疗和发展具有重要的意义。


技术实现要素：

5.本发明提供了一种二苯酮类衍生物及其制备方法和应用。所述二苯酮类衍生具体有良好的磷酸二酯酶抑制活性，特别是pde5的选择性最高，且经药理学实验证明，上述衍生物还具有保护神经细胞、心肌细胞和血管内皮细胞的作用。
6.为实现上述发明目的，本发明的技术方案如下：
7.本发明提供了一种二苯酮类衍生物，所述二苯酮类衍生物的结构通式如式i、式ii、式iii或者式iv所示：
[0008][0009]
式中，r1选自氢、羟基或1-3个碳原子组成的烷氧基；r2选自氢、羟基或1-3个碳原子组成的烷氧基；r3选自氢或者羟基；r4选自2-6个碳原子组成的烷烯基或者1-5个碳原子组成的烷基；r5选自1-3个碳原子组成的烷基；x选自氧或者氮。
[0010]
进一步的：所述二苯酮类衍生物的结构通式如式i、式ii、式iii或者式iv所示：
[0011][0012]
式中，r1选自-h、-oh或者-och3；r2选自-h、-oh或者-och3；r3选自-h或者-oh；r4选自或者r5选自-ch3或者-c2h5；x选自n或者o。
[0013]
进一步的：所述二苯酮类衍生物具体为h001、h001.2、h001.3、h001.4、h001.5、h001.6、h001.7、h002、h003、h003.1、h004、h004.2、h005、h005.2、h005.3、h005.4、h005.5、h005.6、h005.8、h006、h006.2、h006.3、h006.4、h006.5、h008、h007、h008.2、h008.3、h009、h009.2，其结构式分别如下：
[0014][0015]
进一步的：所述二苯酮类衍生物能够抑制磷酸二酯酶pdes的活性、抑制tnf-α的释放。
[0016]
进一步的：所述二苯酮类衍生物能够抑制中性白细胞的增多、抑制嗜酸粒细胞的增多。
[0017]
进一步的：所述二苯酮类衍生物能够减轻神经细胞损伤、心肌细胞损伤或血管内皮细胞损伤。
[0018]
本发明还提供了所述的二苯酮类衍生物的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
[0019]
将对哌嗪磺酰基-乙基氧苯基酰氯衍生物x1或x2与二甲氨基酮衍生物y1或者y2在四氢呋喃溶液中溶解均匀，加入特殊催化剂双(三甲基硅基)胺基锂，在低温冷阱条件下缩合反应后，或者进一步加入醋酸铵和醋酸反应，待反应完全，产物经真空减压浓缩后，通过柱层析，得到二苯酮类衍生物h001、h001.2、h001.3、h001.4、h001.5、h001.6、h001.7、h002、h003、h003.1、h004、h004.2、h005、h005.2、h005.3、h005.4、h005.5、h005.6、h005.8、h006、h006.2、h006.3、h006.4、h006.5、h008、h007、h008.2、h008.3、h009、h009.2；
[0020]
所述对哌嗪磺酰基-乙基氧苯基酰氯衍生物x1的结构式为：
[0021][0022]
所述对哌嗪磺酰基-乙基氧苯基酰氯衍生物x2的结构式为：
[0023][0024]
所述二甲氨基苯酮衍生物y1的的结构式为：
[0025][0026]
所述二甲氨基苯酮衍生物y2的的结构式为：
[0027][0028]
其中，r1选自-h、-oh或者-och3；r2选自-h、-oh或者-och3；r4选自或者r5选自-ch3或者-ch2ch3。
[0029]
进一步的：所述的二苯酮类衍生物还包括其药学上可接受的盐。
[0030]
进一步的：所述的二苯酮类衍生物还包括其r-、s-型或其混合物。
[0031]
进一步的：所述的二苯酮类衍生物还包括二苯酮类衍生物非对映异构体。
[0032]
本发明还提供了所述的二苯酮类衍生物在用于制备磷酸二酯酶pdes抑制剂中的应用。
[0033]
进一步的：所述二苯酮类衍生物能够有效抑制磷酸二酯酶pdes活性。
[0034]
进一步的：所述磷酸二酯酶pdes包括pde5、pde4、pde10、pde2、pde3和pde1。
[0035]
优选的：所述磷酸二酯酶为pde5、pde4、pde10。
[0036]
最优的，所述磷酸二酯酶为pde5。
[0037]
本发明还提供了所述的二苯酮类衍生物在用于制备抗嗜酸粒细胞和/或中性白细胞的制剂中的应用。
[0038]
进一步的：所述二苯酮类衍生物能够有效抑制中性白细胞增多和嗜酸粒细胞的增
多。
[0039]
本发明还提供了所述的二苯酮类衍生物在用于制备防治炎症和/或过敏性疾病、肺动脉高压、性功能障碍性疾病、心血管疾病或神经系统疾病的药物中的应用。
[0040]
进一步的：所述二苯酮类衍生物能够通过抑制pdes的活性、抑制tnf-α的释放、抑制中性白细胞或嗜酸粒细胞的增多、或者修复神经细胞损伤、心肌细胞损伤、血管内皮细胞损伤达到减轻疾病症状的作用。
[0041]
进一步的：所述炎症和/或过敏性疾病包括由tnf-α的释放、嗜酸粒细胞增多和/或磷酸二酯酶pdes的激活引起的肺纤维化、慢阻肺、关节炎、脓毒症、胃炎、免疫性炎症、过敏性炎症、湿疹、皮炎、哮喘、肺浸润；所述心血管疾病包括由心肌细胞或血管内皮细胞损伤引起的动脉硬化、心力衰竭、心绞痛、缺血性损伤；所述神经系统疾病包括由神经细胞损伤引起的阿尔茨海默氏症、失忆、痴呆、中风、精神分裂症、抑郁症、焦虑症、帕金森氏病。
[0042]
进一步的：所述炎症性疾病还包括类风湿性关节炎、类风湿性脊椎炎、骨关节炎、痛风性关节炎、胃溃疡、骨质疏松、脓毒性休克、格兰氏阴性脓毒症、中毒性休克综合征、呼吸窘迫综合征、慢性肺病、骨吸收疾病或移植排斥反应、红斑狼疮、多发性硬化、肾小球性肾炎和眼色素层炎、胰岛素依赖性糖尿病和慢性脱髓鞘。
[0043]
进一步的：所述过敏性疾病还包括支气管哮喘、过敏性鼻炎、过敏性结膜炎、特应性皮炎、银屑病、过敏性脉管炎、嗜酸细胞性筋膜炎、嗜酸细胞性肺炎和pie综合征(嗜酸粒细胞增多的肺浸润)、荨麻疹、溃疡性结膜炎、局限性回肠炎、牛皮癣和角化病。
[0044]
进一步的：本发明化合物还可用于治疗与tnf-α相关的感染，包括病毒感染和寄生虫感染、疟疾、利什曼病、感染引起的发烧、感染引起的肌肉疼痛、aids和恶病质。
[0045]
进一步的：所述神经系统和/或心血管系统疾病还包括间歇性跛行、心血管损伤、高血脂高血糖、良性前列腺增生、频尿、夜尿症，失禁、尿石引起的纹痛。
[0046]
进一步的：所述药物的使用剂量为0.05-500mg，使用方法为每天施用一次的单一剂量给药，或者每天分成两次或更多次剂量给药。
[0047]
进一步的：所述的药物为片剂、口服液、气雾剂、丸剂、胶囊剂、颗粒剂、膏剂、滴丸剂、糖浆剂、散剂、冲剂、酊剂、粉针剂、注射液、皮肤用乳膏或凝胶制剂。
[0048]
进一步的：所述的药物通过口服、非胃肠道、静脉内、透皮、局部、吸入和鼻内给药。
[0049]
进一步的：所述的药物中还包括辅助剂、载体和添加剂中的至少一种。
[0050]
进一步的：所述载体包括碳酸钙、磷酸钙、磷酸钠、乳糖、淀粉、甘露醇、藻酸盐、明胶、瓜尔胶、硬脂酸镁、硬脂酸铝、甲基纤维素、滑石粉、高度分散的二氧化硅、硅油、硬脂酸、明胶、琼脂、植物或动物脂肪和油、聚乙二醇中的至少一种。
[0051]
进一步的：所述辅助剂包括甜味剂、调味剂、防腐剂、稳定剂、润湿剂、渗透剂、乳化剂、涂布剂、助溶剂，用于控制渗透压或用于起缓冲作用的盐、糖或糖醇和/或粘度调节剂中的至少一种。
[0052]
进一步的：所述添加剂包括酒石酸盐和柠檬酸盐缓冲剂、乙醇、络合剂中的至少一种。
[0053]
进一步的：为了控制粘度，所述添加剂还能够使用液体聚氧化乙烯、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、葡聚糖或明胶。
[0054]
进一步的：用于非胃肠道或局部施用的油悬浮液可含有植物的合成或半合成油，
包括其在脂肪酸链中具有8-22个碳原子的液体脂肪酸酯，所述脂肪酸包括棕榈酸、月桂酸、十三烷酸、十七烷酸、硬脂酸、二十烷酸、肉豆蔻酸、二十二烷酸、十五烷酸、亚油酸、反油酸、巴西勒酸、芥酸或油酸，这些脂肪酸被具有1-6个碳原子的一元一三元醇酯化，所述醇包括甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、戊醇或其异构体，乙二醇或甘油；所述脂肪酸酣包括miglyole、肉豆蔻酸异丙酯、棕桐酸异丙酯、硬脂酸异丙酯、peg-6癸酸、饱和脂肪醇的辛酸/癸酸酯、聚氧化乙烯甘油三油酸酯、油酸乙酯、蜡状脂肪酸酯例如合成的鸭尾腺脂肪、椰油脂肪酸的异丙酯、油酸油酯、油酸癸酯、乳酸乙醋、邻苯二甲酸二丁酯、己二酸二异丙酯、多元醇的脂肪酸酯；还能够使用硅油或脂肪醇包括异十三烷醇,2一辛基十二烷醇、鲸蜡基硬脂醇或油醇、油酸以及植物油包括蓖麻油、杏仁油、橄榄油、芝麻油、棉子油、花生油或豆油。
[0055]
进一步的：作为溶剂、凝胶形成剂和助溶剂，使用水或醇包括乙醇或异丙醇、苯甲醇、2一辛基十二烷醇、聚乙二醇、邻苯二甲酸酯、己二酸酯、丙二醇、甘油、一缩二丙二醇、三丙二醇、蜡、甲基溶纤剂、溶纤剂、酯、呜琳、二氧杂环己烷、二甲亚砜、二甲基甲酰胺、四氢吠喃、环己酮。
[0056]
进一步的：作为成膜剂，使用可溶解在或膨胀在水和有机溶剂中的纤维素醚，包括羟丙基甲基纤维素、甲基纤维素、乙基纤维素或可溶性淀粉、羧甲基纤维素钠、聚丙烯酸、聚异丁烯酸和其盐、支链淀粉半羟乙酸钠、藻酸或作为钠盐的丙二醇藻酸醋、阿拉伯胶、黄原胶、瓜尔胶或角叉菜胶。
[0057]
进一步的：作为其它制剂辅料，还能够使用甘油、不同粘度的石蜡、三乙醇胺、胶原或尿囊素。
[0058]
进一步的：所述药物中还能够包括表面活性剂、乳化剂或润湿剂，包括月桂基硫酸钠、脂肪醇醚硫酸盐、n-月桂基-β-亚氨基二丙酸二钠、聚乙氧基化蓖麻油或脱水山梨醇油酸醋、脱水山梨醇硬脂酸酯、聚山梨醇酯、鲸蜡醇、卵磷脂、甘油-硬脂酸酯、聚氧乙烯硬脂酸酯、烷基苯酚聚乙二醇醚、氛化鲸蜡基三甲基铵或烷基或二烷基聚乙二醇醚正磷酸乙醇胺盐；稳定剂包括蒙脱石或胶态二氧化硅；抗氧化剂包括生育酚或丁基羟基茴香醚；防腐剂包括对羟基苯甲酸酯。
[0059]
与现有技术相比，本发明的优点和有益效果为：
[0060]
本发明基于海洋来源苯哌酮和中药来源黄酮原始结构，通过计算机从头合成的方法进行了整合和改造，并合成得到了新的二苯酮类衍生物，其结构新颖，并通过药理学实验证明，二苯酮类衍生物具有很好的抑制pdes，特别是pde5的活性的作用，并且该衍生物还能够抑制tnf-α的释放、中性白细胞增多和嗜酸粒细胞增多的作用，进而减轻肺动脉高压、慢阻肺和肺纤维化等多种疾病的病症。另外，所述二苯酮类衍生物还能够抑制aβ聚集体诱导的神经细胞损伤，或者抑制cocl2诱导的神经细胞或心肌细胞缺氧性损伤，并有效逆转ox-ldl诱导的血管内皮细胞损伤，进而增加神经细胞或心肌细胞的活力，避免血管内皮细胞受氧化低密度脂蛋白损伤、达到保护神经细胞或心血管细胞的作用。本发明的二苯酮类衍生物能够对多种疾病具有良好的治疗效果，并且该衍生物具有良好的安全性，具有进一步开发的价值。
具体实施方式
[0061]
以下结合具体实施例对本发明的技术方案做进一步详细的说明。
[0062]
本发明的二苯酮类衍生物具有如下通式的结构：
[0063]
或者或者
[0064]
其中，r1选自-h、-oh或者-och3；r2选自-h、-oh或者-och3；r3选自-h或者-oh；r4选自或者r5选自-ch3或者-c2h5；对乙基氧和甲基哌嗪磺酰基可对位置换；x选自n或者o。
[0065]
实施例1：二苯酮类衍生物的合成
[0066]
1、合成通式结构中r1＝-och3、r2＝-och3、r3＝-h、r5＝-ch3、x＝c、y＝n的代表化合物：2-(2-乙基氧-5-(4-甲基哌嗪并磺酰苯基))-5,7-二甲氧基-8-(3-异戊烯基)喹啉-4-酮(h005.2)
[0067][0068]
在室温条件下，将0.85-1.15mol的2-乙基氧-5-(4-甲基哌嗪磺酰苯基)酰氯以1:1.5的摩尔比与1-(2-(二甲氨基)-4,6-二甲氧基-3-(3-异戊烯)苯基)乙酰-1-酮在四氢呋喃中溶解均匀，然后加入催化剂双(三甲基硅基)胺基锂，在-80℃低温冷阱条件下可缩合反应，进一步将混合物中加入适量的冰醋酸和醋酸胺，在60℃下反应30-50分钟，产物经真空减压浓缩，通过柱层析纯化可得所述新型二苯酮类衍生物：2-(2-乙基氧-5-(4-甲基哌嗪并磺酰苯基))-5,7-二甲氧基-8-(3-异戊烯基)喹啉-4-酮(h005.2)。
[0069]
h005.2的核磁共振氢谱和碳谱的数据如下：
[0070]
化合物h005.2氢谱：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.03(s,78h),7.81(s,80h),7.32(s,80h),6.20(s,77h),5.73(s,46h),5.51(s,77h),3.97(d,j＝64.8hz,390h),3.90
–
3.89(m,5h),3.71(s,231h),3.32(s,160h),3.05(s,218h),2.33(s,220h),2.17(s,231h),1.81(s,232h),1.70(s,232h),1.34(s,128h).
[0071]
化合物h005.2碳谱：
13
c nmr(101mhz,dmso-d6)δ176.30(s),161.89(s),161.53(s),159.50(s),142.72(s),140.72(s),136.47(s),132.42(s),131.65(s),129.86(s),123.90(s),123.17(s),114.60(s),113.46(s),107.03(s),105.57(s),94.11(s),64.46(s),56.83(s),54.07(s),47.17(s),46.06(s),27.91(s),25.15(s),18.07(s),13.80(s).
[0072]
使用上述低温溶剂四氢呋喃中加入双(三甲基硅基)胺基锂催化的酰氯与氨基酮缩合，或者再进一步加入醋酸铵和醋酸的经典反应，可合成其它化合物h001、h001.2、h001.3、h001.4、h001.5、h001.6、h001.7、h002、h003、h003.1、h004、h004.2、h005、h005.3、h005.4、h005.5、h005.6、h005.8、h006、h006.2、h006.3、h006.4、h006.5、h007、h008、h008.2、h008.3、h009、h009.2，它们的结构和核磁共振氢谱和碳谱的数据具体如下：
[0073][0074]
化合物氢谱：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.05(s,5h),7.83(s,5h),7.34(s,5h),6.02(s,5h),5.75(s,3h),5.42(s,5h),4.66(s,5h),4.05(s,10h),3.33(s,10h),3.06(s,14h),2.34(s,14h),2.18(s,15h),1.82(s,15h),1.70(s,15h),1.34(s,8h).
[0075]
化合物碳谱：
13
c nmr(101mhz,dmso-d6)δ176.56(s),162.38(s),162.10(s),157.86(s),155.87(s),146.98(s),136.86(s),133.42(s),131.65(s),130.79(s),130.33(s),129.07(s),123.17(s),118.61(s),106.50(s),102.14(s),98.31(s),64.46(s),54.07(s),47.17(s),46.06(s),25.15(s),23.54(s),18.07(s),13.80(s).
[0076][0077]
化合物氢谱：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.05(s,26h),7.83(s,27h),7.34(s,27h),6.32(s,26h),5.80(s,27h),5.75(s,16h),3.98(d,j＝65.0hz,131h),3.91
–
3.90(m,2h),3.72(s,78h),3.33(s,54h),3.06(s,75h),2.34(s,75h),2.18(s,78h),1.82(s,78h),1.70(s,78h),1.34(s,43h).
[0078]
化合物碳谱：
13
c nmr(101mhz,dmso-d6)δ171.74(s),162.82(s),162.38(s),156.58(s),154.90(s),146.98(s),136.86(s),133.42(s),131.65(s),130.79(s),130.33(s),129.07(s),123.17(s),118.61(s),111.59(s),109.97(s),95.11(s),64.46(s),56.83(s),54.07(s),47.17(s),46.06(s),25.15(s),24.47(s),18.07(s),13.80(s).
[0079][0080]
化合物氢谱：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.05(s,1h),7.83(s,1h),7.34(s,1h),6.32(s,1h),5.57(s,1h),3.98(d,j＝65.0hz,5h),3.72(s,3h),3.06(s,3h),2.63(s,1h),2.34(s,3h),2.18(s,3h),1.64(s,1h),1.34(s,2h),0.94(s,2h).
[0081]
化合物碳谱：
13
c nmr(101mhz,dmso-d6)δ171.74(s),164.06(s),162.38(s),
160.99(s),155.17(s),146.98(s),136.86(s),133.42(s),130.79(s),130.33(s),129.07(s),118.61(s),112.24(s),108.08(s),97.20(s),64.46(s),56.83(s),54.07(s),47.17(s),46.06(s),27.66(s),24.71(s),13.80(s),12.96(s).
[0082][0083]
化合物氢谱：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.05(s,56h),7.83(s,57h),7.34(s,57h),6.32(s,55h),6.18(s,55h),3.98(d,j＝65.0hz,278h),3.91
–
3.90(m,4h),3.72(s,165h),3.06(s,155h),2.63(s,57h),2.34(s,161h),2.18(s,165h),1.64(s,64h),1.34(s,91h),0.94(s,87h).
[0084]
化合物碳谱：
13
c nmr(101mhz,dmso-d6)δ178.44(s),166.25(s),162.32(s),162.07(s),158.95(s),156.49(s),136.58(s),131.37(s),130.83(s),126.07(s),117.96(s),112.73(s),110.48(s),105.52(s),96.52(s),64.46(s),56.83(s),54.07(s),47.17(s),46.06(s),27.66(s),24.71(s),13.80(s),12.96(s).
[0085][0086]
化合物氢谱：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.05(s,5h),7.83(s,5h),7.34(s,5h),6.32(s,5h),6.14(s,5h),5.75(s,3h),3.99(d,j＝65.0hz,25h),3.72(s,15h),3.33(s,10h),3.06(s,14h),2.34(s,14h),2.18(s,15h),1.82(s,15h),1.70(s,15h),1.34(s,8h).
[0087]
化合物碳谱：
13
c nmr(101mhz,dmso-d6)δ178.44(s),163.83(s),162.32(s),160.00(s),158.95(s),155.20(s),136.58(s),131.65(s),131.37(s),130.83(s),126.07(s),123.17(s),117.96(s),113.79(s),109.04(s),105.52(s),96.74(s),64.46(s),56.83(s),54.07(s),47.17(s),46.06(s),25.15(s),24.47(s),18.07(s),13.80(s).
[0088][0089]
化合物氢谱：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.05(s,5h),7.83(s,5h),7.34(s,5h),6.32(s,5h),6.14(s,5h),3.98(d,j＝65.0hz,25h),3.72(s,15h),3.06(s,14h),2.63(s,5h),2.34(s,14h),2.18(s,15h),1.64(s,6h),1.34(s,8h),0.94(s,8h).
[0090]
化合物碳谱：
13
c nmr(101mhz,dmso-d6)δ178.44(s),166.25(s),162.32(s),162.07(s),158.95(s),156.49(s),136.58(s),131.37(s),130.83(s),126.07(s),117.96(s),112.73(s),110.48(s),105.52(s),96.52(s),64.46(s),56.83(s),54.07(s),47.17
(s),46.06(s),27.66(s),24.71(s),13.80(s),12.96(s).
[0091][0092]
化合物氢谱：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.00(s,59h),7.78(s,60h),7.29(s,60h),6.28(s,58h),6.18(s,58h),5.71(s,35h),3.96(d,j＝64.6hz,294h),3.89
–
3.88(m,4h),3.70(s,174h),3.31(s,121h),3.04(s,170h),2.33(s,167h),2.17(s,174h),1.81(s,175h),1.69(s,175h),1.33(s,96h).
[0093]
化合物碳谱：
13
c nmr(101mhz,dmso-d6)δ178.44(s),163.83(s),162.32(s),160.00(s),158.95(s),155.20(s),136.58(s),131.65(s),131.37(s),130.83(s),126.07(s),123.17(s),117.96(s),113.79(s),109.04(s),105.52(s),96.74(s),64.46(s),56.83(s),54.07(s),47.17(s),46.06(s),25.15(s),24.47(s),18.07(s),13.80(s).
[0094][0095]
化合物氢谱：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.05(s,5h),7.83(s,5h),7.34(s,5h),5.92(s,5h),5.75(s,3h),5.01(s,5h),4.63(s,5h),4.05(s,10h),3.33(s,10h),3.06(s,14h),2.34(s,14h),2.18(s,15h),1.82(s,15h),1.70(s,15h),1.34(s,8h).
[0096]
化合物碳谱：
13
c nmr(101mhz,dmso-d6)δ177.66(s),160.42(s),159.84(s),159.29(s),144.45(s),140.38(s),137.29(s),137.03(s),132.85(s),131.85(s),131.65(s),124.00(s),123.17(s),115.26(s),105.05(s),102.86(s),96.23(s),64.46(s),54.07(s),47.17(s),46.06(s),26.86(s),25.15(s),18.07(s),13.80(s).
[0097][0098]
化合物氢谱：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.01(s,5h),7.79(s,5h),7.30(s,5h),6.19(s,5h),5.72(s,3h),4.81(s,5h),3.97(d,j＝64.7hz,25h),3.90
–
3.88(m,1h),3.70(s,15h),3.31(s,10h),3.04(s,14h),2.33(s,14h),2.17(s,15h),1.81(s,15h),1.69(s,15h),1.33(s,8h).
[0099]
化合物碳谱：
13
c nmr(101mhz,dmso-d6)δ173.04(s),161.18(s),160.42(s),158.42(s),144.45(s),140.81(s),137.29(s),137.03(s),132.85(s),131.85(s),131.65(s),124.00(s),123.17(s),115.26(s),113.29(s),107.29(s),91.62(s),64.46(s),56.83(s),54.07(s),47.17(s),46.06(s),27.91(s),25.15(s),18.07(s),13.80(s).
[0100][0101]
化合物氢谱：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.05(s,5h),7.83(s,5h),7.34(s,10h),6.58(s,5h),5.56(s,5h),3.98(d,j＝65.0hz,25h),3.91
–
3.90(m,1h),3.06(s,14h),2.63(s,5h),2.36(d,j＝20.0hz,31h),2.32(s,4h),1.64(s,6h),1.34(s,8h),1.03(s,8h),0.94(s,8h).
[0102]
化合物碳谱：
13
c nmr(101mhz,dmso-d6)δ176.30(s),161.53(s),161.07(s),144.56(s),142.72(s),137.05(s),136.47(s),132.42(s),129.86(s),123.90(s),122.46(s),118.52(s),114.60(s),107.03(s),106.45(s),64.46(s),56.83(s),53.42(s),50.14(s),47.02(s),34.87(s),24.45(s),13.80(s),12.96(s),12.32(s).
[0103][0104]
化合物氢谱：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.05(s,53h),7.83(s,54h),7.34(s,54h),6.22(s,52h),4.37(s,52h),3.98(d,j＝65.0hz,262h),3.91
–
3.90(m,4h),3.72(s,156h),3.06(s,145h),2.63(s,54h),2.34(s,151h),2.18(s,156h),1.64(s,62h),1.34(s,86h),0.94(s,82h).
[0105]
化合物碳谱：
13
c nmr(101mhz,dmso-d6)δ173.04(s),162.78(s),162.13(s),160.42(s),144.45(s),140.01(s),137.29(s),137.03(s),132.85(s),131.85(s),124.00(s),115.26(s),110.16(s),108.79(s),94.02(s),64.46(s),56.83(s),54.07(s),47.17(s),46.06(s),29.57(s),24.71(s),13.80(s),12.96(s).
[0106][0107]
化合物氢谱：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.01(s,46h),7.79(s,47h),7.30(s,47h),6.19(s,45h),4.85(s,45h),3.96(d,j＝64.7hz,229h),3.89
–
3.88(m,3h),3.70(s,136h),3.04(s,142h),2.62(s,52h),2.35(d,j＝19.9hz,256h),1.63(s,55h),1.33(s,75h),1.02(s,73h),0.93(s,72h).
[0108]
化合物碳谱：
13
c nmr(101mhz,dmso-d6)δ173.04(s),162.78(s),162.13(s),160.42(s),144.45(s),140.01(s),137.29(s),137.03(s),132.85(s),131.85(s),124.00(s),115.26(s),110.16(s),108.79(s),94.02(s),64.46(s),56.83(s),53.42(s),50.14(s),47.02(s),29.57(s),24.71(s),13.80(s),12.96(s),12.32(s).
[0109][0110]
化合物氢谱：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.05(s,5h),7.83(s,5h),7.34(s,5h),6.22(s,5h),5.54(s,5h),3.98(d,j＝65.0hz,25h),3.72(s,15h),3.06(s,14h),2.63(s,5h),2.34(s,14h),2.18(s,15h),1.64(s,6h),1.34(s,8h),0.94(s,8h).
[0111]
化合物碳谱：
13
c nmr(101mhz,dmso-d6)δ176.30(s),164.33(s),162.43(s),161.53(s),142.72(s),140.48(s),136.47(s),132.42(s),129.86(s),123.90(s),114.60(s),110.45(s),109.80(s),107.03(s),94.24(s),64.46(s),56.83(s),54.07(s),47.17(s),46.06(s),29.57(s),24.71(s),13.80(s),12.96(s).
[0112][0113]
化合物氢谱：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.05(s,52h),7.83(s,53h),7.34(s,53h),6.07(s,51h),5.49(s,51h),4.75(s,51h),3.99(d,j＝65.0hz,257h),3.91
–
3.90(m,4h),3.06(s,144h),2.63(s,59h),2.34(s,148h),2.18(s,153h),1.64(s,62h),1.34(s,84h),0.94(s,81h).
[0114]
化合物碳谱：
13
c nmr(101mhz,dmso-d6)δ176.30(s),163.68(s),161.75(s),161.53(s),142.72(s),140.90(s),136.47(s),132.42(s),129.86(s),123.90(s),114.60(s),109.50(s),109.10(s),107.03(s),95.81(s),64.46(s),56.83(s),54.07(s),47.17(s),46.06(s),28.82(s),24.71(s),13.80(s),12.96(s).
[0115][0116]
化合物氢谱：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.05(s,13h),7.83(s,13h),7.34(s,26h),6.58(s,13h),5.56(s,13h),3.98(d,j＝65.0hz,64h),3.91
–
3.90(m,1h),3.06(s,36h),2.63(s,13h),2.34(s,37h),2.18(s,38h),1.64(s,15h),1.34(s,21h),0.94(s,20h).
[0117]
化合物碳谱：
13
c nmr(101mhz,dmso-d6))δ176.30(s),161.53(s),161.07(s),144.56(s),142.72(s),137.05(s),136.47(s),132.42(s),129.86(s),123.90(s),122.46(s),118.52(s),114.60(s),107.03(s),106.45(s),64.46(s),56.83(s),54.07(s),47.17(s),46.06(s),34.87(s),24.45(s),13.80(s),12.96(s).
[0118][0119]
化合物氢谱：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.05(s,1h),7.83(s,1h),7.34(s,1h),6.22(s,1h),5.75(s,1h),5.44(s,1h),3.99(d,j＝65.0hz,5h),3.72(s,3h),3.33(s,2h),3.06(s,3h),2.34(s,3h),2.18(s,3h),1.82(s,3h),1.70(s,3h),1.34(s,2h).
[0120]
化合物碳谱：
13
c nmr(101mhz,dmso-d6)δ176.30(s),161.89(s),161.53(s),159.50(s),142.72(s),140.72(s),136.47(s),132.42(s),131.65(s),129.86(s),123.90(s),123.17(s),114.60(s),113.46(s),107.03(s),105.57(s),94.11(s),64.46(s),56.83(s),54.07(s),47.17(s),46.06(s),27.91(s),25.15(s),18.07(s),13.80(s).
[0121][0122]
化合物氢谱：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.05(s,2h),7.83(s,2h),7.34(s,2h),6.22(s,2h),5.41(s,2h),3.98(d,j＝65.0hz,10h),3.72(s,6h),3.06(s,6h),2.63(s,2h),2.34(s,6h),2.18(s,6h),1.64(s,2h),1.34(s,3h),0.94(s,3h).
[0123]
化合物碳谱：
13
c nmr(101mhz,dmso-d6)δ176.30(s),164.33(s),162.43(s),161.53(s),142.72(s),140.48(s),136.47(s),132.42(s),129.86(s),123.90(s),114.60(s),110.45(s),109.80(s),107.03(s),94.24(s),64.46(s),56.83(s),54.07(s),47.17(s),46.06(s),29.57(s),24.71(s),13.80(s),12.96(s).
[0124][0125]
化合物氢谱：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.05(s,5h),7.83(s,5h),7.34(s,5h),7.05(s,5h),6.58(s,5h),5.75(s,3h),5.42(s,5h),3.98(d,j＝65.0hz,24h),3.92
–
3.90(m,1h),3.33(s,10h),3.06(s,14h),2.34(s,14h),2.18(s,15h),1.82(s,15h),1.70(s,15h),1.34(s,8h)..
[0126]
化合物碳谱：
13
c nmr(101mhz,dmso-d6)δ176.30(s),161.53(s),159.20(s),145.73(s),142.72(s),136.47(s),136.00(s),132.42(s),131.70(s),129.86(s),123.90
(s),122.46(s),120.05(s),119.05(s),114.60(s),106.98(d,j＝12.8hz),64.46(s),56.83(s),54.07(s),47.17(s),46.06(s),29.40(s),25.15(s),18.07(s),13.80(s)..
[0127][0128]
化合物氢谱：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ7.98(s,5h),7.70(s,5h),7.18(s,5h),6.22(s,5h),5.17(s,5h),4.16(s,10h),4.07(s,9h),3.92(s,15h),3.72(s,15h),3.06(s,14h),2.63(s,5h),2.34(s,14h),2.18(s,15h),1.64(s,6h),1.34(s,8h),0.94(s,8h).
[0129]
化合物碳谱：
13
c nmr(101mhz,dmso-d6)δ175.71(s),163.48(s),163.24(s),161.96(s),157.76(s),141.43(s),136.67(s),128.99(s),128.11(s),120.71(s),117.64(s),116.18(s),113.65(s),111.73(s),95.07(s),64.46(s),56.83(s),54.07(s),47.17(s),46.06(s),40.31(s),29.57(s),24.71(s),13.80(s),12.96(s).
[0130][0131]
化合物氢谱：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.45(s,5h),8.02(s,5h),7.51(s,5h),7.32(s,5h),7.06(s,5h),3.98(d,j＝65.0hz,24h),3.91
–
3.90(m,1h),3.06(s,14h),2.63(s,5h),2.34(s,14h),2.18(s,15h),1.64(s,6h),1.34(s,8h),0.94(s,8h).
[0132]
化合物碳谱：
13
c nmr(101mhz,dmso-d6)δ160.74(s),159.84(d,j＝1.8hz),150.00(s),142.58(s),133.61(s),132.63(s),132.39(s),130.94(s),128.71(s),121.43(d,j＝9.8hz),112.57(s),106.63(s),64.46(s),56.83(s),54.07(s),47.17(s),46.06(s),34.71(s),24.45(s),13.80(s),12.96(s).
[0133][0134]
化合物氢谱：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.43(s,10h),8.02(s,10h),7.75(s,10h),7.32(s,10h),7.06(s,10h),5.75(s,6h),3.98(d,j＝65.0hz,49h),3.91
–
3.90(m,1h),3.33(s,20h),3.06(s,27h),2.34(s,28h),2.18(s,29h),1.82(s,29h),1.70(s,29h),1.34(s,16h).
[0135]
化合物碳谱：
13
c nmr(101mhz,dmso-d6)δ160.09(s),159.84(d,j＝1.8hz),150.00(s),147.73(s),133.61(s),132.63(s),132.39(s),131.70(s),130.45(s),123.45(s),122.46(s),121.43(d,j＝9.8hz),114.70(s),104.16(s),64.46(s),56.83(s),54.07(s),47.17(s),46.06(s),29.41(s),25.15(s),18.07(s),13.80(s).
[0136][0137]
化合物氢谱：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.44(s,35h),8.02(s,36h),7.51(s,37h),7.32(s,35h),7.06(s,36h),3.98(d,j＝65.0hz,175h),3.91
–
3.90(m,3h),3.06(s,97h),2.63(s,38h),2.36(d,j＝20.0hz,216h),2.32(s,24h),1.64(s,42h),1.34(s,57h),1.03(s,56h),0.94(s,55h).
[0138]
化合物碳谱：
13
c nmr(101mhz,dmso-d6)δ160.74(s),159.84(d,j＝1.8hz),150.00(s),142.58(s),133.61(s),132.63(s),132.39(s),130.94(s),128.71(s),121.43(d,j＝9.8hz),112.57(s),106.63(s),64.46(s),56.83(s),53.42(s),50.14(s),47.02(s),34.71(s),24.45(s),13.80(s),12.96(s),12.32(s).
[0139][0140]
化合物氢谱：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.45(s,28h),8.02(s,29h),7.75(s,29h),7.32(s,29h),7.06(s,29h),5.75(s,17h),3.98(d,j＝65.0hz,141h),3.91
–
3.90(m,2h),3.33(s,58h),3.06(s,78h),2.34(s,81h),2.18(s,84h),1.82(s,84h),1.70(s,84h),1.34(s,46h).
[0141]
化合物碳谱：
13
c nmr(101mhz,dmso-d6)δ160.09(s),159.84(d,j＝1.8hz),150.00(s),147.73(s),133.61(s),132.63(s),132.39(s),131.70(s),130.45(s),123.45(s),122.46(s),121.43(d,j＝9.8hz),114.70(s),104.16(s),64.46(s),56.83(s),54.07(s),47.17(s),46.06(s),29.41(s),25.15(s),18.07(s),13.80(s).
[0142][0143]
化合物氢谱：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.44(s,35h),8.02(s,36h),7.51(s,37h),7.32(s,35h),7.06(s,36h),3.98(d,j＝65.0hz,175h),3.91
–
3.90(m,3h),3.06(s,100h),2.63(s,36h),2.34(s,101h),2.18(s,104h),1.64(s,40h),1.34(s,57h),0.94(s,55h).
[0144]
化合物碳谱：
13
c nmr(101mhz,dmso-d6)δ160.74(s),159.84(d,j＝1.8hz),150.00(s),142.58(s),133.61(s),132.63(s),132.39(s),130.94(s),128.71(s),121.43(d,j＝
9.8hz),112.57(s),106.63(s),64.46(s),56.83(s),54.07(s),47.17(s),46.06(s),34.71(s),24.45(s),13.80(s),12.96(s).
[0145][0146]
化合物氢谱：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.05(s,13h),7.83(s,13h),7.34(s,26h),6.58(s,13h),5.18(s,13h),3.99(d,j＝65.0hz,64h),3.91
–
3.90(m,1h),3.06(s,35h),2.63(s,13h),2.34(s,36h),2.18(s,38h),1.64(s,15h),1.34(s,21h),0.94(s,20h).
[0147]
化合物碳谱：
13
c nmr(101mhz,dmso-d6)δ173.04(s),160.93(s),160.42(s),144.45(s),140.50(s),137.29(s),137.03(s),133.82(s),132.85(s),131.85(s),124.00(s),122.41(s),116.13(s),115.26(s),106.44(s),64.46(s),56.83(s),54.07(s),47.17(s),46.06(s),34.87(s),24.45(s),13.80(s),12.96(s).
[0148][0149]
化合物氢谱：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.05(s,23h),7.83(s,23h),7.34(s,46h),6.58(s,23h),5.25(s,22h),3.98(d,j＝65.0hz,112h),3.91
–
3.90(m,2h),3.06(s,63h),2.63(s,23h),2.36(d,j＝20.0hz,138h),2.32(s,16h),1.64(s,26h),1.34(s,37h),1.03(s,36h),0.94(s,35h).
[0150]
化合物碳谱：
13
c nmr(101mhz,dmso-d6)δ173.04(s),160.93(s),160.42(s),144.45(s),140.50(s),137.29(s),137.03(s),133.82(s),132.85(s),131.85(s),124.00(s),122.41(s),116.13(s),115.26(s),106.44(s),64.46(s),56.83(s),53.42(s),50.14(s),47.02(s),34.87(s),24.45(s),13.80(s),12.96(s),12.32(s).
[0151][0152]
化合物氢谱：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.05(s,2h),7.83(s,2h),7.61(s,2h),7.34(s,2h),6.68(s,2h),6.27(s,2h),5.75(s,1h),4.05(s,4h),3.92(s,6h),3.33(s,4h),3.06(s,6h),2.34(s,6h),2.18(s,6h),1.82(s,6h),1.70(s,6h),1.34(s,3h).
[0153]
化合物碳谱：
13
c nmr(101mhz,dmso-d6)δ178.44(s),162.32(s),159.76(s),158.95(s),154.38(s),137.08(s),136.58(s),131.70(s),131.37(s),130.83(s),126.07(s),122.46(s),121.11(s),120.04(s),117.96(s),110.13(s),105.52(s),64.46(s),56.83(s),54.07(s),47.17(s),46.06(s),28.33(s),25.15(s),18.07(s),13.80(s).
[0154][0155]
化合物氢谱：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.05(s,28h),7.83(s,29h),7.34(s,29h),7.05(s,29h),6.58(s,29h),5.75(s,17h),5.40(s,28h),3.98(d,j＝65.0hz,141h),3.91
–
3.90(m,2h),3.33(s,58h),3.06(s,78h),2.34(s,81h),2.18(s,84h),1.82(s,84h),1.70(s,84h),1.34(s,46h).
[0156]
化合物碳谱：
13
c nmr(101mhz,dmso-d6)δ176.30(s),161.53(s),159.20(s),145.73(s),142.72(s),136.47(s),136.00(s),132.42(s),131.70(s),129.86(s),123.90(s),122.46(s),120.05(s),119.05(s),114.60(s),106.98(d,j＝12.8hz),64.46(s),56.83(s),54.07(s),47.17(s),46.06(s),29.40(s),25.15(s),18.07(s),13.80(s).
[0157][0158]
化合物氢谱：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.05(s,13h),7.83(s,13h),7.34(s,26h),6.58(s,13h),5.59(s,13h),3.98(d,j＝65.0hz,64h),3.91
–
3.90(m,1h),3.06(s,36h),2.63(s,13h),2.34(s,37h),2.18(s,38h),1.64(s,15h),1.34(s,21h),0.94(s,20h).
[0159]
化合物碳谱：
13
c nmr(101mhz,dmso-d6)δ176.30(s),161.53(s),161.07(s),144.56(s),142.72(s),137.05(s),136.47(s),132.42(s),129.86(s),123.90(s),122.46(s),118.52(s),114.60(s),107.03(s),106.45(s),64.46(s),56.83(s),54.07(s),47.17(s),46.06(s),34.87(s),24.45(s),13.80(s),12.96(s).
[0160]
实施例2：二苯酮类衍生物抑制磷酸二酯酶(pdes)
[0161]
在大鼠多形核淋巴细胞(pmnl)的酶制备物中测定pdes活性，用分离的血小板测定pde2、pde3、pde4、pde5、pde10的活性。用柠檬酸盐防止提取的大鼠血液凝结；通过在室温离心的方法将上清液中的富含血小板的血浆与红细胞和白细胞分离开；再通过超声将血小板裂解，预留在pde3和pde5测定中使用。为了测定pde2活性，在阴离子交换柱上通过nacl梯度纯化胞质血小板级分，获得了用于测定的pde2峰；再通过葡聚糖沉降后，用ficoll梯度离心分离出用于pde4测定的pmnl细胞。将pmnl细胞洗涤2次后，通过加入10ml低渗裂解缓冲液于4℃裂解6分钟以去除残留的红细胞。将仍然完整的pmnl细胞再用pbs洗涤两次，并通过超声裂解，于4℃以高速离心1h，获得的上清液含有pde4的胞质级分，通过上述方法以用于下述测定中pde4、pde2、pde3、pde5、pde10测定中酶的原料。
[0162]
使用磷酸二酯酶活性测定试剂盒(购自abcam公司，货号ab13940，pde activity assay kit,colorimetric)来测定各种pde酶的活性：将操作方法适当修改，把试剂盒提供
的蛋白酶替换为如上述方法分离制备的蛋白酶即可，其它的按照操作说明书进行严格检测：先加入20微升camp底物，再加入15微升测定缓冲液，然后加入10微升5’核苷酸酶，混合均匀后加入适当浓度的测试化合物，然后加入已提取纯化准备好的pde酶，30℃孵育30分钟后，最后加入green assay孔雀绿试剂检测分解出的磷酸根离子，混合20分钟后达到颜色均匀，通过测定od620nm来计算化合物对pde酶的抑制活性。
[0163]
结果如表1所示，实施例1制备得到的各个化合物测定的抑制pde5的ic
50
值为10-11-10-6
m；抑制pde4的ic
50
值为10-8-10-4
m，对pde4的选择性为5-100；对10型和2、3型pde的选择性为5-1000的因数，说明二苯酮类衍生物具有选择性抑制pde5活性的作用，可作为pde5强抑制剂，同时其对pde4和pde10同样具有较好的抑制活性作用，可作为pde4抑制剂或pde10抑制剂。
[0164]
表1：二苯酮类衍生物的抑制pde5、pde4和pde10的ic
50
值
[0165]
[0166][0167]
实施例3：二苯酮类衍生物抑制从鼻息肉细胞释放tnf-α
[0168]
将实验室储存的鼻息肉组织用rpmi 1640洗涤，然后用蛋白酶(2.5mg/ml)、胶原酶(1.0mg/ml)、透明质酸酶(0.5mg/ml)和dna酶(0.1mg/ml)于37℃溶解150分钟(1g组织和4ml含有酶的rpmi 1640)。将所得细胞(上皮细胞、单核细胞、巨噬细胞、淋巴细胞、成纤维细胞和粒细胞)的混合物过滤，通过在培养溶液中反复离心来洗涤，加入人源ige来被动致敏，将细胞悬浮液在rpmi 1640(补充抗生素、10％胎牛血清、2mm谷氨酸胺和25mm hepes)中稀释至2百万个细胞/ml的浓度。将悬浮液分配在6孔细胞培养平板上(1ml/孔)。将细胞与不同浓
度的测试化合物预培养30分钟，然后通过加入抗ige进行刺激以释放tnf-α，约16小时后发生了向培养基内的最大释放。在该期间，将细胞在37℃、含5％二氧化碳的培养箱中培养。通过离心来收集培养基(上清液)，并在-80℃保持，直至测定细胞因子。用elisa试剂盒测定上清液中的tnf-α。
[0169]
未用抗ige刺激的细胞几乎不产生任何tnf-α，而刺激的细胞分泌大量tnf-α，可通过pde4抑制剂减少tnf-α的量，且减少程度与剂量有关。由不同浓度的化合物的抑制百分比(用抗ige刺激的细胞tnf-α释放＝100％)计算ic
50
(达到50％抑制的浓度)。结果如表2所示，实施例1制备的化合物的抑制tnf-α释放的抑制率为37％-91％，其中h006的抑制效果最好，表明二苯酮类衍生物具有抑制tnf-α释放的作用，可作为tnf-α抑制剂。
[0170]
表2：二苯酮类衍生物的抑制tnf-α释放的结果
[0171]
[0172][0173]
实施例4：二苯酮类衍生物抑制大鼠过敏模型的嗜酸粒细胞增多
[0174]
将v级卵清蛋白50mg，氢氧化铝100mg和灭活百日咳杆菌6
×
109个溶于生理盐水1ml中，配制成混悬液凝胶，并按此比例扩大配成12ml作为致敏液备用(为防止分10次注射使用时挂壁残留损耗，多配制出2ml)。实验老鼠分组后，第1天致敏：空白组大鼠给予腹腔注射1ml生理盐水，而模型组给予腹腔注射1ml致敏液致敏；第15天开始激发：将两组大鼠分别置于相同大小的雾化箱内，空白组给予生理盐水6ml雾化激发，模型组给予5％v级卵清蛋白溶液6ml雾化激发，每天激发一次，每次激发30min，连续激发10天。测试化合物是在变应原攻击前2小时，作为在10％聚乙二醇300和0.5％5-羟基乙基纤维素中的悬浮液腹膜内或口服施用的。对照组是依据测试化合物的施用形式用载体治疗。实验结束时固定大鼠四肢，使用75％酒精对颈部消毒，充分暴露气管，在喉部附近插入气管插管针(针头稍磨平)，针头插入一定位置，切勿超过气管分叉处；用2ml预冷的pbs反复灌洗3次，收集肺泡灌洗液到ep管中，1000rpm、4℃离心，收集细胞，经瑞氏-吉姆萨染色，在显微镜下进行细胞分类计数。
[0175]
白细胞是免疫进程中至关重要的一类细胞，细胞分类计数可以有效分析肺泡灌洗液balf中白细胞比例的变化。在发病过程中，浸润大鼠支气管的炎症细胞主要是淋巴细胞和嗜酸粒细胞。淋巴细胞能够扩大支气管粘膜上嗜酸粒细胞的炎症反应，并且随着嗜酸性粒细胞的增多，会增加其在肺内聚集、活化以及与其它炎性细胞、炎性介质、细胞因子的相互作用，进而加重过敏。
[0176]
结果如表3所示，将各化合物以1-50mg/kg剂量腹膜内施用后，化合物将嗜酸粒细胞增多症状有效抑制了50％-91％；以10-500mg/kg的剂量口服施用后，各化合物将嗜酸粒细胞增多症状抑制了36％-89％，其中以化合物h008.2的效果最好。因此，本发明的二苯酮类衍生物能够有效抑制嗜酸粒细胞的增多，进而减轻炎性细胞等聚集及其与其他细胞的相互作用，最终减轻过敏反应，进而适合用于防治由嗜酸粒细胞增多诱导的相关疾病。
[0177]
表3：二苯酮类衍生物抑制嗜酸粒细胞增多的结果
[0178]
[0179][0180]
实施例5：二苯酮类衍生物抑制脂多糖(lps)引起的中性白细胞增多
[0181]
在雄性wistar大鼠(200
±
20g)中测试实施例1制备的化合物对肺中性白细胞浸润的抑制作用。在实验的当天，将动物单独置于开口的1l有机玻璃盒子中，该盒子与头鼻暴露
装置连接。将动物暴露于脂多糖悬浮液(100μg/ml的lps溶解于含有0.1％羟基胺的pbs溶液中)的气雾剂中(lps攻击)，暴露时间是45分钟，标准对照是用含有0.1％羟基胺的pbs溶液的气雾剂喷雾45分钟。lps攻击6小时后，有大量中性粒细胞迁移到动物的肺内。测试各化合物是在lps攻击前2小时，作为在10％聚乙二醇300和0.5％5-羟基乙基纤维素中的悬浮液口服施用的。对照组是依据测试物的施用形式用载体治疗。实验结束时固定大鼠四肢，使用75％酒精对颈部消毒，充分暴露气管，在喉部附近插入气管插管针(针头稍磨平)，针头插入一定位置，切勿超过气管分叉处；用2ml预冷的pbs反复灌洗3次，收集肺泡灌洗液到ep管中，1000rpm、4℃离心，收集细胞，经瑞氏-吉姆萨染色，在显微镜下进行细胞分类计数。
[0182]
结果如表4所示，以10-100mg/kg的剂量口服施用后，本发明的化合物将中性白细胞增多症状抑制了51％-93％，其中以化合物h009.2的效果最好。因此，本发明的二苯酮类衍生物能够有效抑制中性白细胞的增多，进而缓解由中性白细胞增多引起的病症，因此其适用于防治与中性白细胞增多相关的疾病。
[0183]
表4：二苯酮类衍生物抑制中性白细胞增多的结果
[0184]
[0185][0186]
实施例6：二苯酮类衍生物对aβ聚集体诱导神经细胞损伤的保护作用
[0187]
以未加aβ1-42的细胞活力为阴性对照，观察实施例1制备的化合物对aβ诱导产生的神经细胞毒的抑制作用，具体实施步骤如下：将pc12细胞接种于mem完全培养液中，置入96孔板中培养，放入恒温细胞培养箱孵育24小时后，加入提前聚集的aβ蛋白寡聚体，2h后，各化合物组在每孔加入本化合物溶液，浓度为50μmol/l，模型组加入等量的无菌水，培养箱中继续孵育24h。结束后，采用mtt法测定细胞存活率。每次三个平行，实验重复三次。
[0188]
结果如表5所示，以50μmol/l的给药浓度处理后，各化合物的细胞存活率均较模型组显著提高，尤其是以h005.2的保护效果最好，说明本发明的二苯酮类衍生物均具有明显的保护神经细胞的作用，对aβ聚集体诱导神经细胞损伤具有明显的缓解作用。因此，本发明的二苯酮类衍生物适用于防治由aβ聚集引发的神经类疾病。
[0189]
表5：二苯酮类衍生物保护神经细胞的结果
[0190]
[0191][0192]
实施例7：二苯酮类衍生物对cocl2诱导神经细胞和心肌细胞缺氧损伤的保护作用
[0193]
以未加cocl2诱导的神经细胞pc12和心肌细胞h9c2的细胞活力为阴性对照，观察实施例1制备的化合物对诱导cocl2产生的神经细胞和心肌细胞缺氧损伤的抑制作用，具体实施步骤如下：将pc12和h9c2细胞接种于mem或者dmem完全培养液中，置入96孔板中培养，放入恒温细胞培养箱孵育24小时后，加入提前溶解好的含cocl2的损伤液，2h后，各化合物组每孔加入各化合物溶液，浓度为100μmol/l，模型组加入等量的无菌水，培养箱中继续孵育48小时。结束后，采用mtt法测定细胞存活率。每次三个平行，实验重复三次。
[0194]
结果如表6和7所示，以100μmol/l的给药浓度处理后，各化合物的神经细胞和心肌细胞的细胞存活率均较模型组均得到显著提高，其中以h006.3对神经细胞的保护作用最
好，以h006.5和h006.2对心肌细胞的保护作用最好，由此说明本发明的二苯酮类衍生物具有显著的保护神经细胞和心肌细胞缺氧的作用，能够使这两种细胞减轻和避免受到刺激所带来的损伤。因此，本发明的新型二苯酮类衍生物适用于防治由缺氧或cocl2诱导引起的神经系统或心血管系统疾病。
[0195]
表6：二苯酮类衍生物对缺氧导致的神经损伤的作用
[0196][0197]
[0198]
表7：二苯酮类衍生物缺氧导致的心血管细胞的保护作用
[0199]
[0200][0201]
实施例8：二苯酮类衍生物对氧化性低密度脂蛋白(ox-ldl)诱导的血管内皮细胞损伤的抑制作用
[0202]
将血管内皮细胞huvec接种于mem完全培养液，以未加氧化性低密度脂蛋白ox-ldl组为阴性对照，观察化合物对ox-ldl诱导产生血管内皮类粥样损伤的保护作用。具体如下：将huvec细胞接种于mem或者dmem完全培养液中，置入96孔板中培养，放入恒温细胞培养箱孵育24小时后，加入提前溶解好的含ox-ldl的诱导液，2h后，每孔加入50μm二苯酮类衍生物，以未加ox-ldl组为阴性对照。结束后，采用并采用elisa检测il-6炎症因子的含量。
[0203]
结果如表8表明，与模型组相比，二苯酮类衍生物能够有效抑制氧化性低密度脂蛋白ox-ldl所刺激的血管内皮细胞中il-6的增加，表明本发明的二苯酮类衍生物能够有效的起到保护血管内皮细胞的作用，减轻和避免由ox-ldl诱导产生的血管内皮损伤，其中以h006的保护内皮细胞的作用最好，因此说明二苯酮类衍生物适用于防治血管内皮细胞损伤相关的疾病。
[0204]
表8：二苯酮类衍生物对ox-ldl诱导内皮细胞粥样损伤的抑制结果
[0205]
[0206][0207]
实施例9：二苯酮类衍生物在野百合碱诱导的肺动脉高压中的治疗作用
[0208]
我们采用野百合碱构建肺动脉高压动物模型：健康sd雄性大鼠70只(体重160-200克)按照体重均衡原则随机分为7个组，包括空白组、模型组、阳性药物组、化合物h005.3和h006.2的低剂量组和高剂量组，大鼠都在标准无菌饲养环境中饲养。模型组、药物组和化合物组的大鼠腹腔注射野百合碱70mg/kg一次，空白组大鼠腹腔注射等体积的生理盐水，21天后，阳性药物组以80mg/kg/天灌胃伐地那非，低剂量组分别以20mg/kg/天灌胃h005.3或h006.2，高剂量组分别以100mg/kg/天灌胃h005.3或h006.2，模型组以等体积的生理盐水灌胃，治疗周期为2周。治疗后，检测大鼠模型右心室压力。
[0209]
结果如表9所示，野百合碱诱发的肺动脉高压动物模型，即模型组，与空白组相比，其右心室压力显著增高；阳性药物组和化合物组的右心室压力均得到有效的减轻，尤其是h005.3和h006.2的高剂量组，效果优于伐地那非，说明本发明的二苯酮类衍生物h005.3和h006.2具有很好的减轻由野百合碱诱导的右心室压力增高的症状的作用，进而能够用于防治肺动脉高压。
[0210]
表9：药物处理对肺动脉高压大鼠右心室压力的影响
[0211]
[0212][0213]
注：与模型组相比较：**p《0.01；与空白组相比较：##p《0.01。
[0214]
以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其进行限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的普通技术人员来说，依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明所要求保护的技术方案的精神和范围。