本发明涉及灵芝多糖分离领域，具体来说，涉及一种灵芝多糖的分离纯化方法。
背景技术：
灵芝多糖是由葡萄糖、阿拉伯糖、木糖、岩藻糖、鼠李糖、半乳糖等其他单糖组成的多聚糖，是运用现代生物工程技术从灵芝发酵滤液中提取精制的具有生理活性的蛋白多糖物质，是灵芝的最有效成分之一。实验证明，灵芝多糖有多方面的药理活性：能提高机体免疫力，加速血液微循环，提高血液供氧能力，降低机体静止状态下的无效耗氧量，消除体内自由基，提高机体细胞膜的封闭度，抗放射，提高肝脏、骨髓、血液合成dna,rna，蛋白质的能力，延长寿命等。灵芝的多种药理活性大多和灵芝多糖有关。
目前，传统的灵芝多糖分离纯化方法步骤较为简单，纯化纯度不够，无法对灵芝进行多层分离纯化，浪费了大量的灵芝资源，已渐渐无法满足人们的需求。
针对相关技术中的问题，目前尚未提出有效的解决方案。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种灵芝多糖的分离纯化方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明为一种灵芝多糖的分离纯化方法，该方法包括下述步骤：
步骤一：将清洗后的灵芝进行切片,清水中破碎，过滤得到滤出液1和灵芝余渣1；
步骤二：将步骤一中得到的灵芝余渣1进行热水翻动提取，温度为70-80℃，时间为3小时，过滤得到滤出液2和灵芝余渣2；
步骤三：将步骤二中得到的灵芝余渣2进行乙醇翻动提取，乙醇浓度为80vol％，温度为70-80℃，时间为3-4小时，过滤得到滤出液3和灵芝余渣3；
步骤四：将步骤三中得到的灵芝余渣3进行酶化反应，先加6-8倍的去离子水，0.5小时后升温至90℃，加热时间为1小时；然后降温到45℃-50℃，加入纤维酶反应0.5小时，再加入木聚糖酶反应0.5小时；接着升温消灭酶，温度为100℃，时间1-5分钟；最后加10倍水反应2小时，过滤得到滤出液4；
步骤五：将得到的滤出液1、滤出液2、滤出液3、滤出液4进行合并浓缩处理，浓缩至热侧比1:1.04，过滤得到上纯清液和灵芝余渣4；
步骤六：将步骤五中的上纯清液进行超滤膜过滤，得到超滤液，将超滤液进行降温处理，得到活化超滤液；
步骤七：将步骤六中的活化超滤液进行复原处理，得到复原超滤液；
步骤八：将步骤七中的复原超滤液进一步真空烘干处理，烘干至干燥物水分含量为2～5wt%，即得。
进一步的，所述步骤四中滤出液4的过滤目数为80目。
进一步的，所述步骤五中的温度为逐渐降温至0℃，静置沉淀时间为12小时。
进一步的，所述步骤六中的超滤膜选择截留分子量为800-1000da的超滤膜。
进一步的，所述步骤六中超滤膜过滤采用的操作温度为40-45℃，工作压力：进压为6～8bar，出压为1～3bar；接着急降温至10℃，时间为1小时。
进一步的，所述步骤七中复原温度为常温，时间为1小时。
进一步的，所述步骤八中复原超滤液在60-80℃，真空度0.08mpa以上的条件下进行烘干。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本发明一种灵芝多糖的分离纯化方法中，采用传统的纯化方法结合多层分离酶化提取，使灵芝得到充分利用，提高了灵芝多糖的含量，较之传统的纯化方法具有分离效率高、能耗低、可连续生产、无污染等优点，适合推广使用。
具体实施方式
本发明的一种灵芝多糖的分离纯化方法，按下述步骤进行：
1、多方法多层过滤：将清洗后的灵芝进行切片，清水中破碎处理，过滤得到滤出液1和灵芝余渣1，将得到的灵芝余渣1进行热水翻动提取，温度为70-80℃，时间为3小时，过滤得到滤出液2和灵芝余渣2，将得到的灵芝余渣2进行乙醇翻动提取，乙醇浓度为80％，温度为70-80℃，时间为3-4小时，过滤得到滤出液3和灵芝余渣3，将得到的灵芝余渣3进行酶化反应，先加6-8倍的去离子水，0.5小时后升温至90℃，加热时间为1小时；然后降温到45℃-50℃，加入纤维酶反应0.5小时，再加入木聚糖酶反应0.5小时；接着升温消灭酶，温度为100℃，时间1-5分钟；最后加10倍水反应2小时，过滤得到滤出液4，滤出液4的过滤目数为80目。
2、混合浓缩处理：将得到的滤出液1、滤出液2、滤出液3、滤出液4进行合并浓缩处理，浓缩至热侧比1:1.04，温度为逐渐降温至0℃，静置沉淀时间为12小时，过滤得到上纯清液和灵芝余渣4。
3、超滤过滤：将上纯清液进行超滤膜过滤，得到超滤液，超滤膜选择截留分子量为800-1000da的超滤膜，超滤膜过滤采用的操作温度为40-45℃，工作压力：进压为6～8bar，出压为1～3bar，压力差为5bar，将超滤液进行降温处理，急降温至10℃，时间为1小时，得到活化超滤液。
4、常温复原：将活化超滤液进行复原处理，复原温度为常温，时间为1小时，得到复原超滤液。
5、低温真空干燥：将步骤七中的复原超滤液进一步低温真空烘干处理，烘干至干燥物水分含量为2～5%，复原超滤液在60-80℃，真空度-0.08mpa以上的条件下进行烘干，时间为24-36小时，得到灵芝多糖。灵芝多糖的纯度得到99%。本方法提取率40%,比单纯的乙醇提取提高16%。
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限定本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
1.一种灵芝多糖的分离纯化方法，其特征是该方法包括下述步骤：
步骤一：将清洗后的灵芝进行切片,清水中破碎，过滤得到滤出液1和灵芝余渣1；
步骤二：将步骤一中得到的灵芝余渣1进行热水翻动提取，温度为70-80℃，时间为3小时，过滤得到滤出液2和灵芝余渣2；
步骤三：将步骤二中得到的灵芝余渣2进行乙醇翻动提取，乙醇浓度为80vol％，温度为70-80℃，时间为3-4小时，过滤得到滤出液3和灵芝余渣3；
步骤四：将步骤三中得到的灵芝余渣3进行酶化反应：先加6-8倍的去离子水，0.5小时后升温至90℃，加热时间为1小时；然后降温到45℃-50℃，加入纤维酶反应0.5小时，再加入木聚糖酶反应0.5小时；接着升温消灭酶，温度为100℃，时间1-5分钟；最后加10倍体积水反应2小时，过滤得到滤出液4；
步骤五：将得到的滤出液1、滤出液2、滤出液3、滤出液4进行合并浓缩处理，浓缩至热侧比1:1.04，过滤得到上纯清液和灵芝余渣4；
步骤六：将步骤五中的上纯清液进行超滤膜过滤，得到超滤液，将超滤液进行降温处理，得到活化超滤液；
步骤七：将步骤六中的活化超滤液进行复原处理，得到复原超滤液；
步骤八：将步骤七中的复原超滤液进一步真空烘干处理，烘干至干燥物水分含量为2～5wt%，即得。
2.根据权利要求1所述的一种灵芝多糖的分离纯化方法，其特征在于，所述步骤四中滤出液4的过滤目数为80目。
3.根据权利要求1所述的一种灵芝多糖的分离纯化方法，其特征在于，所述步骤五中的温度为逐渐降温至0℃，静置沉淀时间为12小时。
4.根据权利要求1所述的一种灵芝多糖的分离纯化方法，其特征在于，所述步骤六中的超滤膜选择截留分子量为800-1000da的超滤膜。
5.根据权利要求1所述的一种灵芝多糖的分离纯化方法，其特征在于，所述步骤六中超滤膜过滤采用的操作温度为40-45℃，工作压力：进压为6～8bar，出压为1～3bar；接着急降温至10℃，时间为1小时。
6.根据权利要求1所述的一种灵芝多糖的分离纯化方法，其特征在于，所述步骤七中复原温度为常温，时间为1小时。
7.根据权利要求1所述的一种灵芝多糖的分离纯化方法，其特征在于，所述步骤八中复原超滤液在60-80℃，真空度-0.08mpa以上的条件下进行烘干。