检测1型、3型鸭甲型肝炎病毒和鸭坦布苏病毒的引物及应用的制作方法

文档序号:26705243发布日期:2021-09-18 03:37阅读:来源:国知局

技术特征:
1.一种检测1型、3型鸭甲型肝炎病毒和鸭坦布苏病毒的引物,其特征在于,引物序列为:dhav

1 f ggtgcaagggaccagaag,seq id no.1;dhav

1 r gtacctgcggaccaacag,seq id no.2;dhav

3 f aaggaagttcttgaaggcaa,seq id no.3;dhav

3 r cgaaagtggagattaggtgt,eq id no.4;dtmuv f ttgctgccattttcataggc,seq id no.5;dtmuv r acccctgtccacaaaatctt,seq id no.6。2.一种基于权利要求1所述检测1型、3型鸭甲型肝炎病毒和鸭坦布苏病毒引物的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括:pcr反应液含10
×
pcr buffer、10mm dntps、rtaq dna聚合酶、反应引物:dhav

1 f、dhav

1 r、dhav

3 f、dhav

3 r、dtmuv f、dtmuv r;dhav

1+dhav

3+dtmuv模板;ddh2o。3.一种基于权利要求2所述试剂盒的检测方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)用dhav

1 f、dhav

1 r、dhav

3 f、dhav

3 r、dtmuv f、dtmuv r引物对步骤(1)中反转录的cdna模板进行扩增,以dhav

1+dhav

3+dtmuv阳性模板扩增作为阳性对照,以ddh2o模板作为阴性对照;(2)pcr产物经过电泳后,通过特异性扩增条带来判断样品携带病毒情况。4.根据权利要求3所述试剂盒的检测方法,其特征在于,所述反应体系为:50μl,10
×
pcr buffer4μl,dntps 3.5μl(10mm),rtaq dna聚合酶0.8μl(200u/μl),反应引物dhav

1 f、dhav

1 r、dhav

3 f、dhav

3 r、dtmuv f、dtmuv r终浓度均为1μm/ml,模板各1μl(10ng/μl)。5.根据权利要求3所述试剂盒的检测方法,其特征在于,所述扩增反应条件为:94℃预变性4min;94℃变性40s,54
‑‑
56℃退火40s,72℃延伸60s,35个循环;72℃最终延伸10min,4℃保存。

技术总结
本发明公开了一种检测1型鸭甲型肝炎病毒(DHAV


技术研发人员:韦天超 兰奉瑜 秦桂清 唐华丽 韦平 磨美兰 黄腾 杨飞燕 刘颖 张廉
受保护的技术使用者:柳州市柳北区动物疫病预防控制中心
技术研发日:2021.07.20
技术公布日:2021/9/17
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